叉头框F2在宫腔粘连中的表达及意义

目的:建立稳定的宫腔粘连细胞模型,检测叉头框F2(Fox F2)表达。方法:原代培养人子宫内膜基质细胞(HESCs),免疫荧光法进行细胞鉴定。用0、2.5、5和10ng/ml转化生长因子β1(TGF-β1)作用于HESCs 48h,10ng/ml TGF-β1作用于HESCs 12、24、48h和72h,PCR及Western blot法检测α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、胶原I(COLI)及Fox F2 m RNA和蛋白表达。结果:与0ng/ml组比较,2.5、5ng/ml和10ng/ml组α-SMA、COLI及Fox F2的m RNA和蛋白表达均逐渐增加。随着10ng/ml TGF-β1作用时间的延长,与12h组相比,24、48和72h组α-SMA、COLI和Fox F2的m RNA和蛋白表达逐渐增加。结论:TGF-β1可诱导HESCs发生纤维化改变,建立宫腔粘连细胞模型。随着TGF-β1作用时间的延长,作用浓度的增加,Fox F2在宫腔粘连中表达增加。     

RNA干扰抑制EZH2基因表达对子宫内膜癌细胞上皮-间质转化的影响

目的:利用RNA干扰技术靶向沉默EZH2基因,检测其对子宫内膜癌细胞增殖、迁移能力及上皮-间质转化(EMT)的影响。方法:实时荧光定量PCR、Western blot检测EZH2在子宫内膜细胞ESC及子宫内膜癌细胞株ECC-1、RL95-2中的表达差异。利用化学技术合成小分子siRNA转染子宫内膜癌细胞,靶向抑制EZH2基因表达。CCK-8、Transwell小室检测干扰前后子宫内膜癌细胞株ECC-1、RL95-2增殖、迁移能力变化。Western blot检测干扰前后子宫内膜癌细胞株ECC-1、RL95-2中EMT相关蛋白E-cadherin、α-catenin、N-cadherin和Vimentin的表达变化。结果:(1)EZH2在子宫内膜癌细胞株ECC-1、RL95-2中的表达明显高于子宫内膜细胞ESC(P0.01)。(2)RNA干扰抑制EZH2基因表达后,ECC-1、RL95-2细胞增殖、迁移能力降低(P0.01)。(3)RNA干扰抑制EZH2基因表达后,ECC-1、RL95-2细胞中上皮标志物E-cadherin和α-catenin的蛋白表达水平上调(P0.05),间质标志物N-cadherin和Vimentin的蛋白表达水平下调(P0.01)。结论:EZH2在子宫内膜癌细胞中高表达,siRNA靶向沉默EZH2基因可抑制子宫内膜癌细胞的增殖、迁移和上皮-间质转化。     

过表达MicroRNA-195抑制子宫内膜癌细胞系Ishikawa的增殖、迁移与侵袭能力

目的:观察MicroRNA-195对子宫内膜癌细胞增殖、迁移与侵袭能力的影响。方法:取对数生长期人子宫内膜癌细胞系Ishikawa,分别转染MicroRNA-195模拟物(MicroRNA-195过表达组)、MicroRNA-195抑制物(MicroRNA-195低表达组)及阴性对照质粒MicroRNA-NC(空白质粒组)。转染48h后,qRT-PCR法检测细胞中MicroRNA-195表达,CCK-8法检测细胞增殖,Transwell小室实验检测细胞迁移与侵袭能力,Western blot法检测Akt、p-Akt蛋白表达。将转染MicroRNA-195模拟物、MicroRNA-195抑制物及阴性对照质粒MicroRNA-NC的人子宫内膜癌细胞系Ishikawa分别注射至裸鼠皮下,每天检测肿瘤体积,实验周期为3周。结果:MicroRNA-195过表达可抑制人子宫内膜癌细胞系Ishikawa的增殖、迁移与侵袭能力(P<0.05),提高p-Akt蛋白表达(P<0.05);MicroRNA-195低表达可促进人子宫内膜癌细胞Ishikawa的增殖、迁移与侵袭能力(P<0.05),降低p-Akt蛋白表达(P<0.05)。MicroRNA-195过表达可抑制裸鼠体内人子宫内膜癌细胞Ishikawa的增殖(P<0.05),MicroRNA-195低表达可促进裸鼠体内人子宫内膜癌细胞Ishikawa的增殖(P<0.05)。结论:MicroRNA-195可抑制子宫内膜癌细胞Ishikawa的增殖、迁移与侵袭能力,其作用机制可能与激活PI3K/Akt信号通路有关。     

子宫内膜癌中ATP结合盒基因超家族F2表达的临床意义

目的分析三磷酸腺苷（adenosine-triphosphate,ATP）结合盒基因超家族F2（ABCF2）与子宫内膜癌临床病理学特征的关系。方法选择北京大学人民医院2000年1月至2008年12月收治的资料完整的子宫内膜腺癌94例,正常子宫内膜20例,免疫组织化学方法检测ABCF2在这些组织中的表达,分析其与年龄、临床期别、病理学级别、肌层浸润深度、淋巴结转移状态及ER、PR、P53、PTEN表达的关系。结果ABCF2在子宫内膜癌Ⅲ期及以上,患者中的表达明显高于在Ⅱ期及以下患者中的表达（P〈0.05）。而ABCF2的表达与年龄、病理学分级、肌层浸润深度、淋巴结转移及ER、PR、P53、PTEN表达无明显相关性（P〉0.05）。结论ABCF2可能与子宫内膜癌的进展有关,其作用需进一步研究。     

不同雌激素受体表达状态的子宫内膜癌细胞中转录因子的活性分析

目的 分析并比较不同雌激素受体(ER)表达状态的子宫内膜癌细胞中转录因子的活 性.方法 采用实时荧光定量RT-PCR技术检测子宫内膜癌细胞系RL-952[Erα、Erβ表达均阳性(+)]、HEC-1A[Erα表达弱阳性(±)、Erβ表达阴性(-)]、HEC-1B[Erα、Erβ表达均(-)]细胞中Erα mRNA的表达.采用345通量转录因子芯片检测RL-952、HEC-1A、HEC-1B细胞中转录因子的活性,采用酶联免疫吸附试验(ELISA)方法检测不同转录活性的转录因子NFkKBp65、p38MAPK以验证芯片检测结果.结果 Erα mRNA在RL-952、HEC-1A、HEC-1B细胞中表达水平依次递减,分别为(6780±282)、(684±84)、(168±38)copy/ng.转录因子NFkBp65、p38MAPK的转录活性采用ELISA方法检测(分别为2.0±0.4、0.9±0.5,P=0.020)与芯片检测(分别为3003±530、882±538,P:0.017)结果一致.在345个转录因子中,筛选出与ER功能相关的差异表达的转录因子共28个,与ER(+)的RL-952细胞相比,ER(-)的HEC-1A、HEC-1B细胞中转录因子活性同时上调的有13种,同时下调的有15种.转录因子TTF(1)-1、NRF-1、TCE的活性与Erα mRNA表达水平呈明显线性正相关关系(r=0.523,P=0.037),而转录因子RFX123和Ikaros的活性与Erα mRNA表达水平呈明显非线性负相关关系(r=-0.312,P=0.041).结论转录因子芯片检测是筛选子宫内膜癌致病机制中主要转录因子的先进技术.转录因子TTF(1)-1、NRF-1、TCE可能与ER(+)子宫内膜癌中的信号传导通路相关;转录因子RFX123和Ikams可能与ER(-)子宫内膜癌中的信号传导通路相关.     

莪术油对人子宫内膜癌细胞株RL-95-2抑制作用的体外研究

目的研究莪术油注射液在体外对人子宫内膜癌细胞株RL-95-2细胞周期进程的干扰及其可能的机制。方法通过MTT法实验观察莪术油在体外对RL-95-2的抑制作用;流式细胞仪分析其细胞周期的改变;免疫细胞化学法观察部分细胞周期素的表达。结果莪术油注射液对RL-95-2的抑制作用呈时间-剂量依赖性,中效浓度(72h)为222.36μg/ml,1/2此剂量的莪术油作用于Rl-95-2细胞株24小时、48小时、72小时均可引起G0/G1期细胞比例增加,S期、G2/M期细胞比例减少,统计学表明这种改变差异有非常显著性(P<0.01)。免疫细胞化学法显示Cy-clinD1、CyclinE、P16表达增加,CyclinA、突变型P53表达减低。结论莪术油注射液在体外可抑制人子宫内膜癌细胞株RL-95-2增殖,可能系通过促进P16表达增加,而改变细胞周期进程,同时抑制突变型P53表达从而抑制细胞生长的。     

let-7g对子宫内膜癌RL-95-2细胞中RB1表达的调控

目的:探讨子宫内膜癌RL-95-2细胞中let-7g对其靶基因视网膜母细胞瘤相关蛋白1(retinoblastoma-associated protein 1,RB1)表达的调控作用。方法:运用生物信息学方法对let-7g进行靶基因预测并分析其靶基因RB1;let-7g模拟物(let-7g mimic)、模拟物对照组(mimic control)、let-7g抑制物(let-7g inhibitor)、抑制物对照组(inhibitor control)分别转染至RL-95-2细胞,采用CCK-8法检测其对细胞增殖的影响;实时荧光定量PCR(real-time quantitative polymerase chain reaction,RT-qPCR)检测转染后RB1 mRNA的表达差异;Western blotting检测RB1蛋白的表达。结果:RB13'非编码区(3'UTR)含有一个let-7g结合位点,而且该结合位点在多个物种中高度保守;与未转染组相比,转染let-7g mimic可促进细胞增殖,且使RB1蛋白的表达显著降低,而转染let-7g抑制物则抑制细胞增殖,使RB1蛋白的表达显著增高,其余各组无明显变化;而各转染组RB1 mRNA表达无明显差异。结论:子宫内膜癌RL-95-2细胞中let-7g可以结合到RB1的3'UTR,负性调控RB1的表达,从而促进细胞生长。     

MiRNA-199a-3p通过mTOR通路与阿霉素联合抑制子宫内膜癌细胞的增殖和促凋亡作用

目的:探讨阿霉素对转染miRNA-199a-3p的子宫内膜癌(EC)的作用及机制。方法:构建pSIREN-miRNA-199a-3p过表达质粒并稳定转染内膜癌细胞系Ishikawa、SPEC-2细胞。应用逆转录PCR(RT-PCR)检测miRNA-199a-3p的表达;MTT、克隆形成实验检测细胞增殖;流式细胞术检测细胞凋亡;Western blot检测mTOR信号通路相关蛋白表达。结果:上调miRNA-199a-3p可显著抑制子宫内膜癌细胞Ishikawa、SPEC-2的克隆形成能力(P0.01,P0.05);miRNA-199a-3p可增强阿霉素对Ishikawa、SPEC-2细胞的生长抑制(P均0.05)和凋亡诱导作用(P均0.05);Western blot证实,miRNA-199a-3p可显著下调mTOR及其效应蛋白p70S6K的磷酸化水平。结论:miRNA-199a-3p可能通过mTOR通路与阿霉素联合抑制子宫内膜癌细胞的增殖并促进其凋亡,为联合应用miRNA和阿霉素治疗EC提供了实验依据。     

锌指转录因子GKLF在子宫内膜癌中的表达及其与手术病理分期的相关性

目的:探讨锌指转录因子GKLF/KLF4 mRNA在子宫内膜癌组织及良性子宫内膜组织中的表达,分析其表达的变化与手术病理分期的相关性。方法:采用半定量逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)方法检测37例子宫内膜癌组织(研究组)和26例良性子宫内膜组织(对照组)中GKLF mRNA表达强度的变化。结果:(1)每份实验标本中均检测到GKLF mRNA表达,子宫内膜癌中的相对表达强度为0．38±0．19,良性内膜组织中的表达强度则为0．72±0．16,与良性内膜组织相比较,内膜癌组织中GKLF mRNA的表达强度降低。经统计学分析差异有统计学意义(P＜0．01);(2)子宫内膜癌组织GKLF mRNA的表达强度依次为Ⅰ期内膜癌0．56±0．12,Ⅱ期内膜癌0．35±0．09,Ⅲ期内膜癌0．17±0．08,子宫内膜癌的手术病理分期愈晚,GKLF mRNA的表达强度愈低,差异有统计学意义(P＜0．01);(3)随着病理分级的增高,GKLF mRNA的表达强度逐渐降低,差异有统计学意义(P＜0．01)。结论:在子宫内膜癌组织中,GKLF表达下调,而且GKLF mRNA的表达水平与子宫内膜癌的临床分期和病理分级呈负相关,提示GKLF可能参与了子宫内膜癌的发生和进展过程。     

过表达miR-198通过靶向调控Wnt2 B表达抑制滋养细胞HTR-8/SVneo的增殖、转移与侵袭

目的:研究过表达miR-198对人滋养细胞株HTR-8/SVneo增殖、转移和侵袭能力的影响,并探讨其可能作用机制.方法:qRT-PCR检测子痫前期(PE)患者及正常产妇胎盘组织中miR-198表达水平.培养人滋养细胞株HTR-8/SVneo,采用脂质体法将miR-198 mimics及其阴性对照mimics NC转染...     

二甲双胍对人子宫内膜癌细胞迁徙能力的影响

目的：体外检测二甲双胍对人子宫内膜癌（Ec）细胞迁徙能力的影响,并探讨其可能的作用机制。方法：培养Ishikawa和HEC-1A人子宫内膜癌细胞系,用不同浓度的二甲双胍干预EC细胞。采用划痕试验检测细胞迁徙能力;流式细胞术检测细胞周期和凋亡;Western blot法检测Akt、p-Akt及PTEN的表达。结果：二甲双胍显著抑制Ishika—wa和HEC-1A细胞的迁徙能力（P均〈0．05）。流式细胞术检测显示,二甲双胍使G0／G1期细胞比例显著升高,同时有凋亡诱导作用;Westernblot法检测显示,二甲双胍能下调P—Akt的表达（P均〈0．05）。结论：二甲双胍显著抑制EC细胞的迁徙能力,其作用机制可能与下调p-Akt的表达有关。     

Marinobufagenin inhibits proliferation and migration of cytotrophoblast and CHO cells

Marinobufagenin (MBG) is an endogenous mammalian cardiotonic steroid that is involved in the inhibition of the sodium pump Na(+)/K(+)-ATPase. Increased plasma levels of MBG have been reported in patients with volume expansion-mediated hypertension and preeclampsia. We have recently demonstrated that MBG impairs both the proliferation and growth factor-induced migration of human first trimester cytotrophoblast (CTB) cells, crucial for proper placental development. However, the intracellular signaling mechanisms regulating the MBG-induced impairment of CTB differentiation, migration and invasion are unknown. The human extravillous CTB cell line SGHPL-4 was utilized for this study. The phosphorylation of MAP kinase protein ERK1/2 was evaluated by Cellular Activation of Signaling ELISA (CASE) in control CTB cells and those treated with MBG. MBG at concentrations of 10 and 100nM inhibited CTB cell proliferation, migration and invasion (60%, 50% and 50%, respectively). MBG also caused a significant decrease in the phosphorylation of ERK1/2. In addition, MBG decreased proliferation, migration, and ERK1/2 activity in another motile cell line, CHO cells. Another sodium pump inhibitor, ouabain, similarly decreased proliferation and ERK1/2 activity in CTB and CHO cells. These data suggest that the changes observed in cell function may be mediated by inhibition of Na(+)/K(+)-ATPase. We demonstrate that the MBG-induced impairment of CTB cell proliferation, migration and invasion is associated with decreased ERK1/2 activity which may be mediated by inhibition of Na(+)/K(+)-ATPase.     

PKM2促进子宫内膜癌细胞增殖的作用及机制研究

目的研究PKM2在子宫内膜癌细胞增殖中的作用及相关机制。方法采用TCGA数据库及瑞金RNA表达谱数据库分析PKM2在子宫内膜癌和正常内膜中的表达差异。实时定量PCR、免疫印迹法及免疫组化法检测PKM2在内膜癌细胞株及正常内膜组织、内膜癌组织中的表达。慢病毒敲低PKM2表达,检测内膜癌细胞功能变化。结果PKM2在内膜癌组织中表达上调,其表达上调与组织学分级及不良预后相关。在内膜癌细胞株中下调PKM2可显著抑制细胞增殖。高表达的PKM2可增加缺氧诱导因子1α(HIF-1α)募集,激活NF-κB信号通路发挥促癌作用。结论PKM2可能作为内膜癌患者治疗的潜在靶点。     

钙激活性中电导钾离子通道在子宫内膜癌组织中的表达及其在细胞增殖中的作用

目的 探讨子宫内膜癌组织中钙激活性中电导钾离子通道(IKCal)的表达变化及其在子宫内膜癌细胞增殖中的作用.方法 应用蛋白印迹(western blot)法、RT-PCR技术来研究13份正常子宫内膜及25份子宫内膜癌组织中IKCal mRNA和蛋白的表达;利用IKCal的阻断剂--克霉唑(clotrimazole),使用小分子干扰RNA(siRNA)的RNA干扰技术和氚胸腺嘧啶核苷掺入试验等观察子宫内膜癌HEC-1A细胞增殖的变化.结果 子宫内膜癌组织中IKCal mRNA的阳性表达率及表达水平(分别为84%、0.89±0.52)明显高于正常子宫内膜组织(分别为8%、0.14±0.12,P均＜0.01).子宫内膜癌组织中IKCal蛋白的阳性表达率及表达水平(分别为80%、1.18±0.41)也明显高于正常子宫内膜组织(分别为15%、0.71±0.26,P均＜0.01).子宫内膜癌组织中IKCal mRNA和蛋白的表达水平与手术病理分期无关(P＞0.05),但与病理分级有关(P＜0.05).克霉唑呈剂量和时间依赖性方式阻滞HEC-1A细胞的增殖.与转染阴性对照siRNA的细胞比较,转染IKCal siRNA的HEC-1A细胞IKCal蛋白的表达水平降低,为转染阴性对照siRNA的细胞的(48.27±9.07)%.与转染阴性对照siRNA的HEC-1A细胞比较,转染IKCal siRNA能减少细胞的增殖(P＜0.05).结论 IKCal的异常表达与子宫内膜癌的发展密切相关,降低其表达可减少子宫内膜癌细胞的增殖.     

脂联素对子宫内膜癌细胞增殖凋亡的影响

目的:研究脂联素对子宫内膜癌细胞增殖凋亡的影响及其信号的传导。方法:免疫细胞化学方法及RT-PCR法检测子宫内膜癌Ishikawa3-H-12细胞AdipoR1/R2蛋白及mRNA的表达,不同浓度脂联素(2.5,5,10,20μg/ml)作用子宫内膜癌细胞30min,Western blot检测AMPK磷酸化程度,不同浓度脂联素作用细胞48h及AMPK抑制剂(复合物C)预处理后脂联素再作用48h后,MTT试验及流式细胞仪检测不同处理组细胞的增殖及凋亡。结果:子宫内膜癌Ishikawa3-H-12细胞AdipoR1/R2蛋白呈棕黄色颗粒状表达,并可见AdipoR1/R2基因表达。除2.5μg/ml浓度外,其余浓度组脂联素均显著诱导AMPK磷酸化,不同浓度组AMPK活化差异有统计学意义(F=27.985,P0.01),脂联素以浓度依赖模式诱导子宫内膜癌细胞AMPK活化。脂联素以浓度依赖模式显著抑制子宫内膜癌细胞增殖(F=13.322,P0.01),诱导子宫内膜癌细胞凋亡(F=46.826,P0.01),复合物C可以阻断脂联素诱导的细胞增殖抑制及凋亡。结论:脂联素可能通过影响AMPK信号通路抑制子宫内膜癌细胞增殖,促进凋亡。     

环状RNA在子宫内膜癌中的表达及临床意义分析

Objective?To investigate the role and mechanism of lncRNA HCG22 in proliferation, migration and invasion of cervical cancer. Methods?The expressions of HCG22 and miR-629-5p in cervical tissues and cells were detected by RT-qPCR. HeLa cell were allocated into pcDNA3.1 group, pcDNA3.1-HCG22 group, and pcDNA3.1-HCG22+miR-629-5p mimics group. The HeLa cell growth, migration and invasion were assessed by MTT, wound-healing and Transwell assays, respectively. The interaction relationship between HCG22/miR-629-5p and miR-629-5p/FOXO3 were analyzed by luciferase reporter. Results?HCG22 was significantly decreased in cervical cancer tissues and cell lines compared with paired paracancerous tissues or END1/E6E7 cell (P<0.01). The upregulation of HCG22 significantly inhibited tumor cell proliferation (P<0.01), migration (P<0.01), and invasion (P<0.01) compared with pcDNA3.1 group. miR-629-5p expression was increased in cervical cancer tissues and cell lines compared with paired paracancerous tissues or END1/E6E7 cell (P<0.01). There was a negative correlation between HCG22 and miR-629-5p (r=-0.7661, P<0.01). The addition of miR-629-5p mimics reversed the suppressive effects of pcDNA3.1-HCG22 on cell proliferation, migration, and invasion (P<0.01). Both HCG22 and FOXO3 bound to miR-629-5p. pcDNA3.1-HCG22 inhibited miR-629-5p (P<0.01), while promoted mRNA expression of FOXO3 (P<0.01). Conclusions?HCG22 was downregulated in cervical cancer, while miR-629-5p was upregulated. HCG22 gave function as a tumor suppressor in proliferation, migration and invasion of cervical cancer by targeting miR-629-5p/FOXO3 axis.