茵陈蒿汤对酒精性肝纤维化大鼠肝组织Caspase-12通路的影响

目的观察茵陈蒿汤对酒精性肝纤维化大鼠内质网应激的同型半胱氨酸(Hcy)-真核生物翻译起始因子(eIF2α)-Caspase-12通路引起的细胞凋亡的影响,探讨茵陈蒿汤防治酒精性肝纤维的作用机制。方法将40只SD大鼠随机分为空白组、模型组和茵陈蒿汤组,模型组和茵陈蒿汤组采用乙醇灌胃的方法复制酒精性肝纤维化大鼠模型,茵陈蒿汤组同时给予3. 5g/kg茵陈蒿汤灌胃,10周后处死动物,采用赖氏法检测各组大鼠血清丙氨酸氨基转移酶(ALT)和门冬氨酸氨基转移酶(AST)水平,采用HE和Masson三色染色观察各组大鼠肝脏组织病理学表现,采用Real-Time PCR法检测各组大鼠肝脏组织中GRP78、eIF-2α、Caspase-12mRNA表达情况。结果模型组大鼠血清ALT、AST水平明显高于空白组(P均0. 05),茵陈蒿汤组大鼠血清ALT、AST水平均明显低于模型组(P均0. 05)。肝脏组织病理学显示,模型组大鼠出现明显肝纤维化表现,茵陈蒿汤组大鼠肝纤维化程度较模型组明显减轻。模型组大鼠肝脏组织中GRP78、eIF-2α、Caspase-12mRNA表达水平均明显高于空白组(P均0. 05),茵陈蒿汤组大鼠肝脏组织中GRP78、eIF-2α、Caspase-12mRNA表达水平均明显低于模型组(P均0. 05)。结论茵陈蒿汤抑制GRP78、eIF-2α、Caspase-12的活性可能是其抗酒精性肝纤维化的作用机制之一。     

平胃散加味对非酒精性脂肪肝大鼠炎症介质及氧化应激的影响研究

目的:研究平胃散加味对非酒精性脂肪肝(NAFLD)大鼠肝细胞凋亡、炎症介质及氧化应激的影响。方法:选取48只无特定病原体(SPF)级健康SD大鼠,按照随机数字表法分为对照组、模型组、低剂量组和高剂量组,每组12只。采用OpenSource DietsTM高脂饲料喂养12周,制备NAFLD大鼠模型。各组大鼠根据10 mL/kg给药,对照组和模型组大鼠给予等剂量生理盐水灌胃,低剂量大鼠给予189 g生药/kg灌胃,高剂量大鼠给予756 g生药/kg灌胃,1次/d,连续灌胃8周。比较各组大鼠肝脏指数、肝功能、炎症介质和氧化应激变化。结果:模型组、低剂量组和高剂量组肝脏指数高于对照组(P<005);低剂量组和高剂量组肝脏指数低于模型组,且高剂量组低于低剂量组(P<005)。模型组、低剂量组和高剂量组血清谷草转氨酶(GOT)和谷丙转氨酶(GPT)水平均高于对照组(均P<005);低剂量组和高剂量组血清GOT和GPT水平低于模型组,且高剂量组低于低剂量组(P<005)。模型组、低剂量组和高剂量组血清白细胞介素-2(IL-2)、白细胞介素-6(IL-6)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平均高于对照组(均P<005);低剂量组和高剂量组血清IL-2、IL-6和TNF-α水平低于模型组,且高剂量组低于低剂量组(P<005)。模型组、低剂量组和高剂量组血清丙二醛(MDA)水平高于对照组,而超氧化物歧化酶(SOD)水平低于对照组(P<005);低剂量组和高剂量组血清MDA水平低于模型组,而SOD水平高于模型组(P<005);高剂量组血清MDA水平低于低剂量组,而SOD水平高于低剂量组(P<005)。结论:平胃散加味可减轻NAFLD大鼠肝细胞凋亡,减轻肝脏炎症反应及调节肝脏氧化应激。     

消瘀化痰方对非酒精性脂肪肝大鼠肝细胞凋亡的影响

目的: 探讨消瘀化痰方治疗非酒精性脂肪肝(NAFLD)的作用机制.方法: 采用高脂饮食喂饲大鼠复制NAFLD模型,实验分组为模型组、消瘀化痰方高剂量组、消瘀化痰饮低剂量组、东宝肝泰对照组和正常对照组.以高、低剂量消瘀化痰方和东宝肝泰进行干预,然后观察其对肝组织形态学变化的影响,并运用流式细胞仪(FCM)观察各组大鼠肝细胞凋亡的情况.结果: HE染色镜下可见模型组大鼠肝脏中度以上脂肪变性,并有少量的肝细胞坏死;流式细胞术分析可见模型组大鼠细胞凋亡率明显高于正常组(P＜0-01).与模型组比较,各用药组肝脂变程度显著改善,肝细胞的凋亡率明显下降(P＜0-01).高、低剂量组低于对照组(P＜0-05或P＜0-01).结论: 消瘀化痰方可抑制NAFLD大鼠的肝细胞凋亡,此可作为其治疗NAFLD的作用机制之一.     

茵陈蒿汤对酒精性肝纤维化模型大鼠内质网应激介导肝细胞凋亡相关分子的影响

目的观察茵陈蒿汤对酒精性肝纤维化大鼠肝组织内质网应激凋亡通路的影响,探讨茵陈蒿汤抗酒精性肝纤维化的作用机制。方法将40只SD大鼠采用白酒-玉米油-吡唑混合液灌胃联合小剂量CCl_4腹腔注射复制大鼠酒精性肝纤维化模型,8周后随机分为对照组、模型组和茵陈蒿汤低剂量组、茵陈蒿汤高剂量组,每组10只。模型组以白酒混合物低剂量(6 mL/kg)持续灌胃,茵陈蒿汤低剂量组、高剂量组分别给予茵陈蒿汤1.75 g/kg(5 mL/kg)、3.5 g/kg(10 mL/kg),对照组灌胃给予等量的0.9%NaCl溶液。4周后检测大鼠肝指数及血清AST、ALT水平;采用流式细胞学技术检测各组大鼠肝细胞悬液凋亡率的比例;采用Western blot法检测各组大鼠肝脏GRP78、Cleaved-Caspase-12和Cleaved-Caspase-3蛋白表达情况。结果①与对照组比较,模型组大鼠肝指数水平显著升高(P0.05);与模型组比较,茵陈蒿汤各剂量组大鼠肝指数水平显著降低(P0.05);与茵陈蒿汤低剂量组比较,茵陈蒿汤高剂量组大鼠肝指数水平显著降低(P0.05)。②与对照组比较,模型组大鼠血清中ALT、AST水平显著升高(P0.05);与模型组比较,茵陈蒿汤各剂量组ALT、AST水平显著降低(P0.05);与茵陈蒿汤低剂量组比较,茵陈蒿汤高剂量组大鼠血清中ALT、AST水平显著降低(P0.05)。③与对照组比较,模型组大鼠肝细胞晚期凋亡率及总凋亡率显著升高(P0.05);与模型组比较,茵陈蒿汤各剂量组晚期凋亡率及总凋亡率显著降低(P0.05);与茵陈蒿汤低剂量组比较,茵陈蒿汤高剂量组大鼠肝细胞早期、晚期及总凋亡率均明显降低(P0.05)。④与对照组比较,模型组大鼠肝组织Cleaved-Caspase-3蛋白表达水平显著上调(P0.05);与模型组比较,茵陈蒿汤各剂量组大鼠肝组织GRP78、Cleaved-Caspase-12和Cleaved-Caspase-3蛋白表达水平显著下调(P0.05);与茵陈蒿汤低剂量组比较,茵陈蒿汤高剂量组大鼠肝组织GRP78和Cleaved-Caspase-12蛋白表达水平显著下调(P0.05)。结论茵陈蒿汤可明显改善酒精性肝纤维化大鼠的肝组织损伤,抑制内质网应激介导的肝细胞凋亡。     

芹菜素对腺嘌呤所致慢性肾衰竭大鼠肾功能、血流动力学及血脂的影响

目的观察芹菜素对腺嘌呤诱导的慢性肾衰竭(CRF)大鼠肾功能、血流动力学及血脂的影响,探讨其对CRF的保护作用。方法将100只SD大鼠按照随机数字表法随机分为正常组、模型组、芹菜素低剂量组、芹菜素中剂量组、芹菜素高剂量组,每组20只。采用腺嘌呤连续灌胃21 d的方法复制CRF模型大鼠,芹菜素各剂量组腹腔注射给药治疗(1次/d),正常组和模型组同步给予生理盐水,疗程28 d。称量体质量、肾脏质量并计算肾脏指数,经腹主动脉取血并测定肾功能监测指标,HE染色法对肾脏组织进行病理学检查并进行组织病变评分;测定肾脏组织血流量(RBF),测量尾动脉收缩压(SBP)、舒张压(DBP)和肾静脉压(RVP);测定血浆血脂指标。结果模型组大鼠体质量明显低于正常组(P 0. 05),左侧肾脏质量、肾脏指数及明显高于正常组(P均0. 05);芹菜素中剂量组大鼠左侧肾脏质量、肾脏指数均明显低于模型组(P均0. 05);芹菜素高剂量组大鼠体质量明显高于模型组和芹菜素低剂量组(P均0. 05),左侧肾脏质量、肾脏指数均明显低于模型组和芹菜素低剂量组(P均0. 05)。模型组大鼠血清尿素氮(BUN)、血肌酐(SCr)、尿酸(UA)和24 h尿蛋白量(Pro)、肾脏组织病变评分均明显高于正常组(P均0. 05);芹菜素中、高剂量组大鼠血清BUN、SCr、UA水平和Pro、肾脏组织病变评分均明显低于模型组(P均0. 05),且芹菜素高剂量组各指标均明显低于芹菜素低剂量组(P均0. 05)。模型组大鼠尾动脉SBP、DBP及血浆三酰甘油(TG)、总胆固醇(TC)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)水平均明显高于正常组(P均0. 05),RVP、RBF及血浆高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)水平均明显低于正常组(P均0. 05);芹菜素中、高剂量组大鼠尾动脉SBP、DBP及血浆TC、TG、LDL-C水平均明显低于模型组(P均0. 05),RVP、RBF及血浆HDLC水平均明显高于模型组(P均0. 05);芹菜素高剂量组SBP、DBP及血浆TC、TG、LDL-C水平均明显低于芹菜素低剂量组(P均0. 05),RVP、RBF及血浆HDL-C水平均明显高于芹菜素低剂量组(P均0. 05)。上述各指标芹菜素高剂量组与芹菜素中剂量组比较差异均无统计学意义(P均 0. 05)。结论芹菜素可改善CRF大鼠肾功能、肾脏血流动力学及抑制肾脏组织病变,对CRF具有保护作用,可能与芹菜素的调节血脂作用有关。     

芪茵颗粒对非酒精性脂肪性肝病大鼠胰岛素抵抗和CYP2E1表达的影响

目的观察芪茵颗粒对非酒精性脂肪性肝病(NAFLD)大鼠模型胰岛素抵抗(IR)和肝细胞色素酶CYP2E1表达的影响,探讨芪茵颗粒治疗NAFLD的作用机制。方法将72只雄性SD大鼠随机分为空白组、模型组、芪茵颗粒低剂量组、芪茵颗粒中剂量组、芪茵颗粒高剂量组和硫普罗宁组,每组12只。除空白组常规饲养、自由进食水外,其余组均采用高脂乳剂给大鼠灌胃,每日1次,共10周。模型复制成功后,各给药组给予相应药物灌胃,空白组和模型组灌胃等体积蒸馏水,每日1次,共10周。检测各组大鼠血清TC、TG、ALT、AST、空腹血糖和空腹胰岛素水平,计算胰岛素抵抗指数(HOME-IR);称大鼠体质量,计算肝指数;光镜下观察肝脏病理组织学变化,计算肝脏NAS积分;免疫组化法检测各组大鼠肝组织中CYP2E1的阳性表达细胞数。结果实验结束后,芪茵颗粒中剂量组和高剂量组体质量均明显低于模型组(P均<0.05);模型组肝指数及血清TC、ALT、AST水平和HOME-IR均明显高于空白组(P均<0.05),各给药组肝指数及血清ALT和AST水平均明显低于模型组(P均<0.05),芪茵颗粒高剂量组、芪茵颗粒中剂量组及硫普罗宁组HOMEIR均明显低于模型组(P均<0.05)。模型组肝脏NAS积分和CYP2E1阳性表达率均明显高于空白组(P均<0.05),各给药组肝脏NAS积分和CYP2E1阳性表达率均明显低于模型组(P均<0.05);芪茵颗粒中剂量组和高剂量组肝脏NAS积分均明显低于芪茵颗粒低剂量组(P均<0.05),且芪茵颗粒中剂量组明显低于硫普罗宁组(P<0.05);芪茵颗粒中剂量组和高剂量组CYP2E1阳性表达率均明显低于芪茵颗粒低剂量组和硫普罗宁组(P均<0.05)。结论芪茵颗粒可以控制NAFLD大鼠体质量增长,降低肝脏转氨酶水平、肝指数及肝细胞CYP2E1的表达,改善肝组织脂肪变性及IR,从而发挥治疗NAFLD的作用。     

栀子与淡豆豉配伍减毒机制的研究

目的探讨栀子与淡豆豉配伍减毒作用的机制。方法将50只Wistar大鼠随机分为空白对照组(等容积蒸馏水)、栀子中剂量组(1. 4 g生药/kg)、栀子高剂量组(2. 8 g生药/kg)、栀子中剂量+淡豆豉中剂量组(各1. 4 g生药/kg)、栀子高剂量+淡豆豉高剂量组(各2. 8 g生药/kg),连续灌胃给药7 d后,腹主动脉取血,测定大鼠血清丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天冬氨酸氨基转移酶(AST)活性,将大鼠脊椎脱臼处死取出肝脏,计算肝脏指数并观察肝脏病理变化。结果与空白对照组比较,栀子中剂量组、栀子高剂量组、栀子中剂量+淡豆豉中剂量组、栀子高剂量+淡豆豉高剂量组ALT、AST升高(P 0. 05);栀子高剂量组ALT、AST高于栀子中剂量组(P 0. 05);栀子中剂量+淡豆豉中剂量组、栀子高剂量+淡豆豉高剂量组与栀子中剂量组、栀子高剂量组比较ALT、AST均降低(P 0. 05);栀子高剂量+淡豆豉高剂量组与栀子中剂量+淡豆豉中剂量组比较ALT、AST降低(P 0. 05)。与空白对照组比较,栀子中剂量组、栀子高剂量组、栀子中剂量+淡豆豉中剂量组、栀子高剂量+淡豆豉高剂量组肝脏指数均升高(P 0. 05);栀子高剂量组肝脏指数高于栀子中剂量组(P 0. 05);栀子高剂量+淡豆豉高剂量组与栀子中剂量+淡豆豉中剂量组比较肝脏指数降低(P 0. 05);与栀子中剂量组、栀子高剂量组比较,栀子中剂量+淡豆豉中剂量组、栀子高剂量+淡豆豉高剂量组肝脏指数均降低(P 0. 05)。结论栀子与淡豆豉配伍使用,能够大大降低肝毒性。     

逍遥散对雷公藤致急性肝损伤大鼠肝脏组织Bcl-2、Bax蛋白表达及Caspase-3活性的影响

目的探讨逍遥散防治雷公藤致急性肝损伤的可能作用机制。方法 30只SD大鼠随机分为正常组、模型组、逍遥散组,每组10只。逍遥散组大鼠造模前4天灌胃逍遥散6.75 g/(kg·d),正常组和模型组给予等体积蒸馏水,每天1次。第5天模型组和逍遥散组大鼠灌胃雷公藤水煎剂3.75 g/(kg·d)连续4天,建立大鼠急性肝损伤模型。比较各组大鼠肝脏指数及血清丙氨酸氨基转移酶(ALT)、门冬氨酸氨基转移酶(AST)水平,检测肝脏组织B细胞淋巴瘤/白血病-2(Bcl-2)和Bcl-2相关X蛋白(Bax)蛋白表达及天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶3(Caspase-3)活性。结果与正常组比较,模型组大鼠的肝脏指数和血清ALT、AST水平明显升高,肝脏组织Bcl-2蛋白表达及Bcl-2/Bax值明显下降,Bax蛋白表达和Caspase-3活性明显升高(P0.05或P0.01);与模型组比较,逍遥散组大鼠的肝脏指数和血清ALT、AST水平明显降低,肝脏组织Bcl-2蛋白表达及Bcl-2/Bax值明显升高,Bax蛋白表达和Caspase-3活性明显下降(P0.05或P0.01)。结论逍遥散对雷公藤致大鼠急性肝损伤的防控作用可能与其上调肝脏组织Bcl-2蛋白水平和下调Bax蛋白水平、Caspase-3活性,从而改善肝细胞凋亡有关。     

灵猫方对急性肝损伤模型保肝降酶作用的实验研究

应用急性肝损伤动物模型观察灵猫方的保肝降酶作用。方法：建立ANIT小鼠急性肝损伤、CCl4大鼠急性肝损伤动物模型,实验分为正常对照组、模型组、阳性对照组、灵猫方低剂量组、灵猫方中剂量组和灵猫方高剂量组,分别给予相应处理,处死动物。分离血清测定AST、ALT。结果：与模型组相比,灵猫方低剂量、中剂量和高剂量可明显降低ANIT急性肝损伤小鼠ALT水平（P〈0．05）,灵猫方中剂量、高剂量组的AST均明显降低（P〈0．05）;与模型组相比,灵猫方低剂量、中剂量和高剂量可明显降低CCI。急性肝损伤大鼠的ALT水平（P〈0．05）,低剂量组的AST水平明显降低（P〈0．05）。结论：灵猫方对急性肝损伤具有保肝降酶作用。     

川芎嗪对骨关节炎兔软骨细胞增殖与凋亡的影响及其机制研究

目的探讨川芎嗪对骨关节炎兔软骨细胞增殖与凋亡的影响及其作用机制。方法选取12只兔建立骨关节炎动物模型,体外分离培养软骨细胞,并分为模型组、川芎嗪低剂量组、川芎嗪中剂量组、川芎嗪高剂量组,另选取3只正常兔体外分离培养软骨细胞作为正常对照组。模型组和正常对照组给予10%DMEM培养液进行培养,而川芎嗪低、中、高剂量组分别给予含10μg/m L、20μg/m L、30μg/m L川芎嗪注射液的培养液进行培养。采用流式细胞仪测定兔软骨细胞周期及增殖指数,采用TUNEL法检测细胞凋亡情况,采用MTT法检测软骨细胞活性,采用Western-blot法检测软骨细胞中bax、bcl-2、Caspase-3蛋白表达情况。结果模型组G0/G1期细胞所占比例及PI均明显低于正常对照组(P均<0.05),S期及G2/M期细胞所占比例均明显高于正常对照组(P均<0.05);川芎嗪中、高剂量组G0/G1期细胞所占比例、PI均显著高于模型组和川芎嗪低剂量组(P均<0.05),而S期及G2/M期细胞所占比例均显著低于模型组和川芎嗪低剂量组(P均<0.05)。川芎嗪中、高剂量组软骨细胞凋亡率均明显低于模型组(P均<0.05),川芎嗪高剂量组显著低于低剂量组(P<0.05),而川芎嗪高剂量组与正常对照组比较差异无统计学意义;川芎嗪中、高剂量组软骨细胞活性均显著高于模型组(P均<0.05),川芎嗪高剂量组显著高于低剂量组(P<0.05),而川芎嗪高剂量组仍然低于正常对照组(P<0.05)。模型组软骨细胞中bax及Caspase-3表达量均明显高于正常对照组(P均<0.05),bcl-2表达量显著低于正常对照组(P<0.05);而川芎嗪各剂量组软骨细胞中bax及Caspase-3表达量均明显低于模型组(P均<0.05),bcl-2表达量均明显高于模型组(P均<0.05),且川芎嗪高剂量组各指标改善情况均显著优于低剂量组(P均<0.05)。结论川芎嗪能够促进软骨细胞的增殖,同时还能通过上调抗凋亡因子bcl-2表达,下调软骨细胞促凋亡因子bax以及Caspase-3表达而抑制软骨细胞的凋亡。