慢加亚急性肝衰竭大鼠肠源性内毒素血症时Th17/Treg表达变化的实验研究

目的:观察Treg/Th17细胞失衡及相关细胞因子在慢加亚急性肝衰竭肠源性内毒素血症(IETM)时的表达变化,进而探讨Treg/Th17细胞对内毒素介导的炎症反应的调控作用。方法:采用牛血清白蛋白致敏建立免疫性肝纤维化大鼠模型,以腹腔注射D-Gal+LPS液(合D-Gal 400mg/kg,LPS 100μg/kg)急性攻击建立肝衰竭IETM大鼠模型。流式细胞术检测不同时间点大鼠外周血中Th17、Treg细胞频数,ELISA法测定不同时间节点大鼠结肠组织IL-10、TNF-α、IL-17A、IL-23、TGF-β水平。结果:与正常组比较,模型组Treg、Th17细胞频数在各时间节点均升高(P 0. 05),Treg、Th17细胞与前一时间节点比较均有上升(P 0. 05);与正常组比较,模型组结肠组织Treg/Th17型细胞因子IL-17A、IL-23、TNF-α、TGF-β、IL-10各时间节点表达均升高(P 0. 05),且各炎症因子与前一时间节点比较均有上升(P 0. 05);正常组大鼠IL-10、TGF-β等抑炎因子水平高于IL-17A、IL-23、TNF-α等促炎因子,模型组Th17比例高于Treg,失衡向Th17方向偏移。结论:肝衰竭IETM发生时Treg/Th17细胞失衡,向Th17方向偏移,相关抑炎、促炎因子均释放增加,加剧IETM程度。     

犀角地黄汤对免疫性血小板减少症模型大鼠外周血CD4~+ CD25~+调节性T细胞及Th17细胞的影响

目的探讨犀角地黄汤对免疫性血小板减少症(ITP)模型大鼠外周血CD4~+ CD25~+调节性T细胞(Treg)、Th17细胞及相关细胞因子的影响。方法将48只大鼠随机分为正常组、模型组、醋酸泼尼松组及犀角地黄汤低、中、高剂量组,每组8只。除正常组外,其余组均采用腹腔注射兔抗大鼠血小板血清(APS)建立ITP模型,于造模开始后第7天开始,各给药组灌胃给予相应剂量药物,连续14 d。采用血细胞计数仪检测造模前、灌胃前、灌胃结束后各组大鼠外周血中血小板数目;灌胃结束后,采用流式细胞术检测各组大鼠Treg、Th17细胞比例,采用实时荧光定量PCR法检测淋巴细胞Foxp3 mRNA相对表达量,采用酶联免疫吸附法检测血清白细胞介素-17(IL-17)、IL-35水平。结果灌胃结束后,与模型组比较,犀角地黄汤各剂量组大鼠血小板数目明显上升(P均0.05),外周血淋巴细胞中Treg所占比例、Foxp3 mRNA相对表达量及IL-35水平均明显上升(P均0.05),而Th17细胞所占比例及IL-17水平均明显下降(P均0.05),且具有剂量依赖性;犀角地黄汤高剂量组各指标与醋酸泼尼松组比较差异均无统计学意义(P均0.05)。结论犀角地黄汤可能通过上调ITP大鼠外周血中Treg细胞表达,下调Th17细胞表达,维持Treg/Th17平衡,进而调节相关细胞因子IL-17、IL-35的表达发挥抗血小板减少作用。     

复方苦黄汤对实验性结肠炎小鼠结肠组织中Th17、Tregs分化相关转录因子表达的影响

目的:研究复方苦黄汤对实验性结肠炎小鼠结肠组织中Th17、Tregs分化相关转录因子表达的影响,探讨其治疗结肠炎的疗效和机制。方法:将36只BALB/c小鼠随机分为4组:正常对照组、模型组、地塞米松组和复方苦黄汤组,每组9只。正常对照组未行造模,其余3组自由饮用4%DSS水溶液共7 d建立实验性结肠炎模型。复方苦黄汤组小鼠给予复方苦黄汤灌胃,地塞米松组小鼠给予地塞米松腹腔注射,模型组和正常组小鼠均以蒸馏水灌胃,造模成功后第2天开始每日给药治疗共7 d,第8天禁食24 h后处死小鼠,观察实验小鼠结肠黏膜大体形态及肠道炎症评分,免疫组化法检测小鼠结肠Th17、Tregs分化相关转录因子ROR#x03A5;t及Foxp3表达。结果:模型组较正常对照组小鼠结肠肠道大体形态和炎症评分显著升高(P0.05),复方苦黄汤组及地塞米松组评分均显著低于模型组(P0.05),免疫组化结果模型组ROR#x03A5;t阳性细胞数计数显著高于正常组(P0.05),Foxp3阳性细胞数计数显著低于正常组(P0.05),而复方苦黄汤组及地塞米松组ROR#x03A5;t阳性细胞数计数显著低于模型组(P0.05),Foxp3阳性细胞数计数显著高于模型组(P0.05)。结论:复方苦黄汤可能通过调控肠道ROR#x03A5;t/Foxp3表达,从而调节结肠炎小鼠Th17/Treg平衡起到减轻结肠黏膜炎症,保护结肠黏膜的作用。     

青藤碱对胶原诱导性关节炎小鼠滤泡辅助性T细胞的影响

目的研究青藤碱对胶原诱导性关节炎(CIA)小鼠外周血滤泡辅助性T细胞(Tfh)的影响,探讨青藤碱治疗类风湿关节炎的可能机制。方法 35只DBA/1小鼠随机分为正常组(5只),模型组(10只),青藤碱组(10只),地塞米松组(10只)。青藤碱组予青藤碱溶液74 mg/(kg·d),地塞米松组予地塞米松0. 88 mg/(kg·2d),正常组和模型组予0. 9%氯化钠注射液10 m L/(kg·d),造模后1 d即实验第1 d,各组小鼠均后肢肌肉注射给药,连续用药58 d。实验第21 d开始,计算各组小鼠关节炎指数。实验第59 d处死小鼠,观察关节滑膜病理变化。收集眼眶血,应用流式细胞仪测定小鼠Tfh细胞比例,应用酶联免疫吸附法(ELISA)检测白细胞介素21(IL-21)水平,应用实时免疫荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)检测脾脏组织B细胞淋巴瘤-6(Bcl-6) mRNA水平,应用蛋白免疫印迹法(WB)检测脾脏组织Bcl-6蛋白水平。结果与正常组比较,模型组的关节炎指数、Tfh细胞比例和IL-21水平均升高(P 0. 01),脾脏组织Bcl-6mRNA表达、Bcl-6蛋白水平增加(P 0. 01);与模型组比较,青藤碱组和地塞米松组关节炎指数下降(P 0. 05,P 0. 01),青藤碱组Tfh细胞比例、IL-21水平、脾脏组织Bcl-6 mRNA表达、Bcl-6蛋白水平降低(P0. 05,P 0. 01),地塞米松组Tfh细胞比例降低(P 0. 05),脾脏组织Bcl-6 mRNA表达、Bcl-6蛋白水平比较差异均无统计学意义(P 0. 05)。结论青藤碱能下调CIA小鼠Bcl-6 mRNA和Bcl-6蛋白的表达,降低Tfh细胞比例,抑制IL-21水平,并改善小鼠的关节炎症状。     

左归丸加减对雌激素缺乏骨丢失小鼠Th17/Treg亚群的影响

目的观察左归丸加减对雌激素缺乏骨丢失模型小鼠脾脏辅助性T细胞亚群17（Th17）/调节性T细胞亚群（Treg）亚群平衡的影响,并探讨其作用机制。方法 50只BALB/c小鼠按随机数字表法随机分为假手术组、卵巢切除模型组、左归丸加减（简称中药）小、中、大剂量组,共5组,每组10只。中药组分别给予中药小、中、大剂量（7.25、14.50、29.00 g/kg）,1天1次,1次约0.5 m L,连续用药12周;同时假手术组及模型组给予等量的生理盐水。采用酶联免疫吸附（enzyme linked immunosorbent assay,ELISA）法检测各组血清雌二醇（E2）水平,双能X线骨密度仪检测股骨骨密度（bone mineral density,BMD）,流式细胞仪胞内外双染色法检测脾脏单个核细胞Th17/Treg亚群比例,RT-PCR法检测脾脏单个核细胞IL-17A、TGF-βmRNA表达。结果与假手术组比较,模型组E2、BMD均降低（P〈0.05）,Th17亚群比例、Th17/Treg比值均升高（P〈0.05）,Treg亚群比例明显降低（P〈0.05）,IL-17A mRNA表达明显升高（P〈0.05）,TGF-βmRNA表达明显降低（P〈0.05）;与模型组比较,中药中、大剂量组BMD值明显升高（P〈0.05）,Th17亚群比例、Th17/Treg比值降低（P〈0.05）、Treg亚群比例升高（P〈0.05）,IL-17A mRNA表达降低（P〈0.05）及TGF-βmRNA表达升高（P〈0.05）。相关性分析显示BMD与血清E2水平、Treg亚群比例呈明显正相关（P〈0.05）,与Th17亚群比例呈明显负相关（P〈0.05）;血清E2水平与Treg亚群比例呈明显正相关（P〈0.05）,与Th17亚群比例呈明显负相关（P〈0.05）。结论 Th17/Treg亚群平衡状态与雌激素缺乏骨丢失存在相关性,左归丸加减能降低雌激素缺乏骨丢失小鼠Th17亚群比例,升高雌激素缺乏骨丢失小鼠Treg亚群比例。左归丸加减可能通过调节雌激素缺乏骨丢失小鼠Th17/Treg亚群平衡达到治疗作用,且该方无明显雌激素样作用。     

萸连丸对结肠炎小鼠脾脏Treg细胞PD-1/PD-L1表达的调节作用

目的 探明萸连丸对溃疡性结肠炎小鼠脾脏Treg细胞PD-1/PD-L1表达的调节作用。方法 采用经典的DSS诱导溃疡性结肠炎小鼠模型。雄性SPF级BALB/c共40只，随机平均分为正常组、模型组、模型+萸连丸组、模型+美沙拉嗪组，除正常组外都给予DSS复制溃疡性结肠炎模型。造模后，模型+萸连丸组给予0.5g/kg萸连丸溶液灌胃，模型+美沙拉嗪组给予0.3g/kg美沙拉嗪溶液灌胃，正常组与模型组给予相同容积的生理盐水灌胃。记录小鼠体重、粪便粘稠度、便血情况；分离结肠并测量其结肠长度和重量，计算肠重指数；ELISA法检测结肠组织中IL-2、IL-17A的表达水平；分离脾脏，流式细胞术检测各组小鼠脾脏Treg细胞及其PD-1/PD-L1的表达水平；Western blot法检测Raptor、TSC1、TSC2的表达水平。结果 与模型组相比，模型+萸连丸组小鼠体重明显增加(P<0.05)、结肠长度显著恢复(P<0.01)、结肠重量以及肠重指数明显减轻(P<0.05);结肠组织炎性细胞浸润减少，黏膜损伤恢复；IL-2、IL-17A表达水平显著降低(P<0.01);脾脏中C...     

黄芪甲苷对结肠炎小鼠的抑炎作用及对外周血Th17细胞比例的影响研究

探讨黄芪甲苷对溃疡性结肠炎(UC)小鼠的抑炎作用及对外周血辅助性T细胞(Th17)比例的影响。采用2%葡聚糖硫酸钠(DSS)建立结肠炎小鼠模型,阳性对照组以及黄芪甲苷低、高剂量组小鼠分别灌胃相应药物,计算疾病活动指数(DAI),ELISA法检测血清白细胞介素-17(IL-17)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、转化生长因子-β(TGF-β)含量,HE染色法观察结肠组织病理学变化,流式细胞仪检测外周血Th17细胞/调节性T细胞(Treg)比例,蛋白印迹法检测叉头蛋白p3(Foxp3)、视黄酸相关孤儿核受体γt(ROR-γt)蛋白相对表达量。结果显示,正常小鼠结肠组织结构完整,杯状细胞未减少,腺体排列整齐,无黏膜糜烂、出血,无阳性细胞浸润;模型组小鼠结肠组织黏膜结构严重破坏,腺体排列紊乱或缺失,可见血管扩张、充血,大量炎性细胞浸润;各药物治疗组结肠组织病理损伤出现不同程度减轻。与正常组比较,模型组Th17细胞百分比、IL-17和TNF-α含量、ROR-γt蛋白相对表达量升高,TGF-β含量、Treg细胞百分比、Foxp3蛋白相对表达量降低;与模型组比较,阳性对照组、黄芪甲苷低剂量组、黄芪甲苷高剂量组DAI评分、组织病理学评分、Th17细胞百分比、IL-17和TNF-α含量、ROR-γt蛋白相对表达量降低,TGF-β含量、Treg细胞百分比、Foxp3蛋白相对表达量升高;与阳性对照组比较,黄芪甲苷低剂量组DAI评分、组织病理学评分、Th17细胞百分比、IL-17和TNF-α含量、ROR-γt蛋白相对表达量升高,TGF-β含量、Treg细胞百分比、Foxp3蛋白相对表达量降低;与黄芪甲苷低剂量组比较,黄芪甲苷高剂量组DAI评分、组织病理学评分、Th17细胞百分比、IL-17和TNF-α含量、ROR-γt蛋白相对表达量降低,TGF-β含量、Treg细胞百分比、Foxp3蛋白相对表达量升高;阳性对照组与黄芪甲苷高剂量组比较,各指标差异无统计学意义。结果表明,黄芪甲苷可抑制结肠炎小鼠的炎症反应,降低Th17细胞比例。     

针灸治疗对狼疮性肾炎小鼠Th17/Treg细胞及其细胞因子表达影响的研究

目的:观察针灸治疗对狼疮性肾炎小鼠的影响,并探讨针灸对调节性T细胞(Treg)及辅助性T细胞17 (Th17)分化及其细胞因子表达的调控作用。方法:将MRL/lpr狼疮性肾炎模型小鼠随机分为针灸组、地塞米松组、模型组,每组10只。另取10只C57BL/6小鼠作为正常组。采用HE染色法检测小鼠肾脏病理改变;PI单染流式细胞术检测各组小鼠肾脏组织中Th17/Treg比例;采用q RT-PCR和ELISA法检测肾脏中叉头样转录因子3 (Foxp3)、维A酸相关孤儿受体-γt (RORγt)及白细胞介素-17 (IL-17)的水平。结果:与正常组比较,模型组肾小球肾炎、间质性肾炎以及血管病变评分、Th17/Treg比值及RORγt、IL-17蛋白及mRNA表达水平均显著升高(P<0.05),Foxp3蛋白及mRNA表达水平均下降(P<0.05)。与模型组比较,地塞米松组、针灸组肾小球肾炎、间质性肾炎以及血管病变评分、Th17/Treg比值及肾脏组织RORγt、IL-17蛋白及m RNA表达水平均显著降低(P<0.05);Foxp3蛋白及mRNA表达均升高(P<0.05)。结论:针灸能显著减少狼疮性肾炎小鼠肾脏RORγt及IL-17表达,增加Foxp3水平,调控Th17/Treg比例,改善肾脏病理改变,从而对MRL/lpr狼疮肾炎小鼠肾脏起到保护作用。     

温经化瘀止痛法对寒凝血瘀证痛经大鼠Th17、Treg细胞分化及其细胞因子表达的影响

目的观察温经化瘀止痛法对寒凝血瘀证原发性痛经大鼠Th17、Treg细胞分化及其特征性细胞因子(IL-17A、TGF-β)表达的影响,探讨温经化瘀止痛法治疗寒凝血瘀证原发性痛经的免疫机制。方法将50只大鼠随机分为空白组、模型组、西药组、中药高剂量组和中药低剂量组。除空白组外,通过寒冷刺激法联合苯甲酸雌二醇和缩宫素建立寒凝血瘀证原发性痛经大鼠模型。从造模第7天开始,分别给予中药、布洛芬和蒸馏水治疗。检测各组Th17、Treg细胞比例、IL-17A、TGF-β含量及IL-17A、TGF-βmRNA表达水平。结果与空白组比较,模型组Th17细胞比例、IL-17A含量、IL-17A mRNA表达和IL-17A/TGF-β比值均升高(P0.05,P0.01);Treg细胞比例、TGF-β含量和TGF-βmRNA表达降低(P0.01)。与模型组比较,西药组和中药低剂量组Th17细胞比例降低,中药高、低剂量组IL-17A含量降低,中药高剂量组IL-17A mRNA表达降低(P0.05,P0.01);各治疗组Treg细胞比例、TGF-β含量和TGF-βmRNA表达均升高,IL-17A/TGF-β比值降低(P0.01)。中药两组间比较,中药低剂量组调节Th17、Treg细胞比例和降低IL-17A含量优于中药高剂量组(P0.01);中药高剂量组升高TGF-β含量、降低IL-17A mRNA表达优于中药低剂量组(P0.01)。结论温经化瘀止痛法调节Th17、Treg细胞比例及IL-17A、TGF-β表达可能是其治疗寒凝血瘀证PD的免疫机制之一。     

益气补肾方对自然流产小鼠Th17/Treg细胞及相关细胞因子的影响

目的:观察益气补肾方对自然流产模型小鼠外周血Th17/Treg及相关细胞因子的影响及其对妊娠结局的影响。方法:孕鼠随机分为正常妊娠模型组、自然流产模型组、环孢素组、中药高、中、低剂量组,每组6只。正常妊娠模型组和自然流产模型组给予生理盐水;环孢素组给予环孢素A;中药高、中、低剂量组分别给予48、24、12g/kg益气补肾方,连续2周,每天1次。给药结束后取血,检测外周血Th17、Treg细胞含量及Th17/Treg细胞比例,检测干扰素-γ(IFN-γ)、白介素-4(IL-4)、白介素-17(IL-17)、白介素-10(IL-10)含量。观察子宫胚胎数量并计算胚胎吸收率。结果:连续给药2周,中药各剂量组均能显著减少胎盘吸收率(P0.05),增加胎盘存活数量;中药各剂量自然流产模型小鼠Th17/Treg细胞百分率比值均显著降低,中药高、中剂量组Th17细胞比例显著降低(P0.05);中药低、中剂量组Treg细胞比例显著升高(P0.05);中药各剂量自然流产模型小鼠IL-17、IFN-γ含量均显著降低(P0.05);中药低剂量组IL-10含量显著升高(P0.05);中药中剂量组IL-4含量显著升高(P0.05)。结论:益气补肾方可能通过调节Th17及Treg细胞的表达水平,降低Th17/Treg比例,并调节相关细胞因子的表达水平,影响Th17/Treg平衡,诱导妊娠免疫耐受,促进胚胎发育,从而改善妊娠结局。