PI3K/Akt/mTOR信号通路靶向治疗在子宫内膜癌中的研究进展

子宫内膜癌是女性高发的恶性肿瘤之一,在生殖系统中常见的恶性肿瘤位居第三,近年其发病率呈上升趋势。磷磷脂酰肌醇-3-激酶/蛋白激酶B/雷帕霉素靶蛋白(PI3K/Akt/m TOR)信号通路是子宫内膜癌中发生最频繁的信号转导通路之一。有研究证实,24%~39%的子宫内膜癌患者存在PI3K/Akt/m TOR信号通路的异常激活。众多研究表明,其通路中分子的改变不同程度的参与并影响了多种生物功能,PI3K/Akt/m TOR信号通路的抑制剂在子宫内膜癌治疗中也起到了重要作用,并引发了其机制研究的热潮。临床前期实体肿瘤和临床各期试验研究均在证明不同种类PI3K/Akt/m TOR信号通路抑制剂的作用。本文将对子宫内膜癌中PI3K/Akt/m TOR信号通路整体阐述,进而对该通路各个组件相关的抑制剂做总结,从而对于药物靶向治疗或联合其他方案治疗子宫内膜癌提供广阔的治疗思路。     

抵抗素促进子宫内膜癌细胞生长作用机制的探讨

目的:研究抵抗素对子宫内膜癌细胞增殖的影响及其对子宫内膜癌细胞PI3K/Akt信号传导通路的作用。方法:CCK-8法检测不同浓度抵抗素(0ng/ml、10ng/ml、50ng/ml、100ng/ml、200ng/ml)对Ishikawa和KLE两种子宫内膜癌细胞系增殖的影响。Western blot法检测不同浓度抵抗素作用下PI3K/Akt信号通路的变化及PI3K/Akt信号通路抑制剂对抵抗素活化PI3K/Akt信号通路作用的影响。结果:抵抗素能促进两种子宫内膜癌细胞系Ishikawa和KLE的生长,并呈时间和浓度依赖性。抵抗素可促进两种子宫内膜癌细胞系中PI3K/Akt信号通路的激活。PI3K/Akt信号通路抑制剂LY29004可减弱抵抗素诱导的Akt磷酸化水平。结论:抵抗素能促进子宫内膜癌细胞增殖,这种作用可通过激活PI3K/Akt信号通路来实现。     

过表达MicroRNA-195抑制子宫内膜癌细胞系Ishikawa的增殖、迁移与侵袭能力

目的:观察MicroRNA-195对子宫内膜癌细胞增殖、迁移与侵袭能力的影响。方法:取对数生长期人子宫内膜癌细胞系Ishikawa,分别转染MicroRNA-195模拟物(MicroRNA-195过表达组)、MicroRNA-195抑制物(MicroRNA-195低表达组)及阴性对照质粒MicroRNA-NC(空白质粒组)。转染48h后,qRT-PCR法检测细胞中MicroRNA-195表达,CCK-8法检测细胞增殖,Transwell小室实验检测细胞迁移与侵袭能力,Western blot法检测Akt、p-Akt蛋白表达。将转染MicroRNA-195模拟物、MicroRNA-195抑制物及阴性对照质粒MicroRNA-NC的人子宫内膜癌细胞系Ishikawa分别注射至裸鼠皮下,每天检测肿瘤体积,实验周期为3周。结果:MicroRNA-195过表达可抑制人子宫内膜癌细胞系Ishikawa的增殖、迁移与侵袭能力(P<0.05),提高p-Akt蛋白表达(P<0.05);MicroRNA-195低表达可促进人子宫内膜癌细胞Ishikawa的增殖、迁移与侵袭能力(P<0.05),降低p-Akt蛋白表达(P<0.05)。MicroRNA-195过表达可抑制裸鼠体内人子宫内膜癌细胞Ishikawa的增殖(P<0.05),MicroRNA-195低表达可促进裸鼠体内人子宫内膜癌细胞Ishikawa的增殖(P<0.05)。结论:MicroRNA-195可抑制子宫内膜癌细胞Ishikawa的增殖、迁移与侵袭能力,其作用机制可能与激活PI3K/Akt信号通路有关。     

PI3K/PKB信号传导通路与子宫内膜癌研究进展

磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)/蛋白激酶B(PKB)信号通路是许多生长因子、细胞因子等的下游信号传导通路,通过抑制细胞凋亡,促进细胞生长、增殖、迁移、侵袭和肿瘤血管生成而与肿瘤发生发展密切相关.许多与子宫内膜癌相关的因素通过PI3K/PKB通路参与肿瘤发生发展,这为子宫内膜癌病因学研究及寻找新的治疗靶点提供了新思路.     

PI3K/PKB信号传导通路与子宫内膜癌研究进展

磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)/蛋白激酶B(PKB)信号通路是许多生长因子、细胞因子等的下游信号传导通路,通过抑制细胞凋亡,促进细胞生长、增殖、迁移、侵袭和肿瘤血管生成而与肿瘤发生发展密切相关。许多与子宫内膜癌相关的因素通过PI3K/PKB通路参与肿瘤发生发展,这为子宫内膜癌病因学研究及寻找新的治疗靶点提供了新思路。     

环状RNA在子宫内膜癌中的表达及临床意义分析

Objective?To investigate the role and mechanism of lncRNA HCG22 in proliferation, migration and invasion of cervical cancer. Methods?The expressions of HCG22 and miR-629-5p in cervical tissues and cells were detected by RT-qPCR. HeLa cell were allocated into pcDNA3.1 group, pcDNA3.1-HCG22 group, and pcDNA3.1-HCG22+miR-629-5p mimics group. The HeLa cell growth, migration and invasion were assessed by MTT, wound-healing and Transwell assays, respectively. The interaction relationship between HCG22/miR-629-5p and miR-629-5p/FOXO3 were analyzed by luciferase reporter. Results?HCG22 was significantly decreased in cervical cancer tissues and cell lines compared with paired paracancerous tissues or END1/E6E7 cell (P<0.01). The upregulation of HCG22 significantly inhibited tumor cell proliferation (P<0.01), migration (P<0.01), and invasion (P<0.01) compared with pcDNA3.1 group. miR-629-5p expression was increased in cervical cancer tissues and cell lines compared with paired paracancerous tissues or END1/E6E7 cell (P<0.01). There was a negative correlation between HCG22 and miR-629-5p (r=-0.7661, P<0.01). The addition of miR-629-5p mimics reversed the suppressive effects of pcDNA3.1-HCG22 on cell proliferation, migration, and invasion (P<0.01). Both HCG22 and FOXO3 bound to miR-629-5p. pcDNA3.1-HCG22 inhibited miR-629-5p (P<0.01), while promoted mRNA expression of FOXO3 (P<0.01). Conclusions?HCG22 was downregulated in cervical cancer, while miR-629-5p was upregulated. HCG22 gave function as a tumor suppressor in proliferation, migration and invasion of cervical cancer by targeting miR-629-5p/FOXO3 axis.     

Fat-1基因过表达抑制宫颈癌Hela细胞生长机制研究

目的:探讨fat-1基因对宫颈癌Hela细胞生长的影响,并研究PI3K/Akt/mTOR通路是否参与fat-1对Hela细胞生长的调控作用。方法:构建真核表达载体(p-EGFP-fat-1),并转染人宫颈癌Hela细胞,使其过表达fat-1基因,为fat-1组,以转染空载质粒的Hela细胞为阴性对照组,以未经任何处理的Hela细胞为空白对照组。采用气相色谱法检测fat-1基因对ω-3多不饱和脂肪酸(ω-3PUFA)和ω-6多不饱和脂肪酸(ω-6PUFA)含量的影响;采用MTT和Hoechst实验检测fat-1基因对细胞增殖和凋亡的影响;采用Transwell和细胞划痕实验检测fat-1基因对细胞侵袭和迁移的影响;采用Western blot检测fat-1基因对PI3K/Akt/mTOR通路相关蛋白表达情况的影响。结果:Fat-1组细胞中fat-1基因表达水平高于空白对照组和阴性对照组(P0.01)。Fat-1组细胞中ω-3PUFA含量高于空白对照组和阴性对照组,ω-6PUFA含量和ω-6PUFA/ω-3PUFA比例均低于空白对照组和阴性对照组(P均0.01)。Fat-1组细胞的增殖、侵袭和迁移能力均低于空白对照组和阴性对照组,Fat-1组细胞凋亡水平高于空白对照组和阴性对照组(P均0.01)。Fat-1组细胞中p-PI3K、p-Akt和p-mTOR表达水平均低于空白对照组和阴性对照组(P0.01)。结论:Fat-1基因可通过增加细胞内ω-3PUFA含量,靶向作用于PI3K/Akt/mTOR通路,抑制宫颈癌Hela细胞的增殖、侵袭和迁移,促进细胞凋亡。     

Pak4在子宫内膜癌组织中的表达及临床意义

目的:检测子宫内膜癌组织标本中Pak4及其活性形式p-Pak4~(ser474)的表达,分析其与临床病理参数的关系。方法:免疫组化法检测子宫内膜组织中Pak4及pPak4~(ser474)表达,应用免疫组化评分半定量分析Pak4表达与临床病理参数的关系。结果:正常子宫内膜组织、不典型增生内膜、子宫内膜癌和淋巴结转移灶中Pak4表达分别为4.00±2.88、7.20±1.10、9.69±2.83和12.00±0.00,p-Pak4~(ser474)表达分别为2.87±2.28、6.80±1.10、8.81±3.04及11.60±1.27,差异均有统计学意义(P0.001)。子宫内膜癌组织中Pak4及p-Pak4~(ser474)表达与FIGO分期(P=0.003,0.001)、细胞分化(P=0.001,0.001)、肌层侵犯(P=0.029,0.009)及脉管浸润(P=0.046,0.005)呈正相关。结论:Pak4及p-Pak4~(ser474)在内膜癌组织中高表达,Pak4可能促进内膜癌的恶性进展。     

BRD4抑制剂JQ1联合醋酸甲羟孕酮对子宫内膜癌细胞增殖和凋亡的影响

目的:探讨BRD4抑制剂JQ1与醋酸甲羟孕酮(MPA)单独或联合作用对子宫内膜癌细胞增殖和凋亡的影响。方法:JQ1与MPA单独或联合作用于孕激素敏感的子宫内膜癌Ishikawa细胞和孕激素不敏感的子宫内膜癌HEC-1A细胞。MTT法和流式细胞仪检测药物对子宫内膜癌细胞的增殖抑制作用和凋亡作用。Western blot法检测凋亡相关蛋白cleaved caspase 3、PARP、cleaved PARP及mTOR/Akt通路等相关蛋白的表达。利用siRNA沉默BRD4后,MTT法检测BRD4 siRNA与MPA联用对子宫内膜癌细胞的生长抑制作用。结果:在孕激素敏感的Ishikawa细胞中,与对照组比较,JQ1组、MPA组、JQ1+MPA组的细胞增殖率显著降低(P均<0.05),其中JQ1+MPA组的细胞增殖率最低,析因分析提示JQ1与MPA有交互作用(P<0.05);JQ1组、MPA组、JQ1+MPA组的细胞凋亡率显著增加(P均<0.05),凋亡相关蛋白变化明显,其中JQ1+MPA组的细胞凋亡率增加最为显著(P<0.05),凋亡相关蛋白变化最大。利用siRNA沉默BRD4后观察联合MPA的作用显示,与对照组比较,BRD4 siRNA组、MPA组、BRD4 siRNA+MPA组的细胞增殖率显著降低(P均<0.05),其中BRD4 siRNA+MPA组的细胞增殖率最低。结论:BRD4抑制剂JQ1联合MPA对孕激素敏感的子宫内膜癌细胞有较好的增殖抑制及凋亡作用,其可能机制与抑制mTOR/AKT通路有关。     

子宫内膜癌c-myc癌基因的表达及临床意义

目的探讨c-myc癌基因在子宫内膜癌中的表达及临床意义.方法采用免疫组化ABC法检测49例子宫内膜癌中c-myc癌基因蛋白的表达,与对照组临床病理学特征及预后相比较,进行统计分析.结果表明25例正常和增生过长的子宫内膜c-myc表达阴性,49例子宫内膜癌中10例c-myc表达阳性,占20%.c-myc的表达与组织学分级、手术分期及生存率显著相关,但与肌层浸润深度无关.结论c-myc癌基因蛋白可能在子宫内膜癌的发生、发展中起作用,并可能提示患者的预后.     

SLP-2 mRNA在子宫内膜癌中的表达及其意义

目的探讨SLP-2mRNA在子宫内膜癌中的表达,及其在子宫内膜癌发生、发展中的作用。方法采用半定量RT-PCR技术检测32例子宫内膜癌组织和28例正常子宫内膜组织中SLP-2mRNA的表达情况;并用表达SLP-2基因的正义和反义质粒,分别转染子宫内膜癌细胞系HEC-1B细胞,RT-PCR技术检测转染前、后HEC-1B细胞中SLP-2mRNA的表达情况,观察转染前、后细胞的形态变化;用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测细胞生长情况,并绘制细胞生长曲线;流式细胞仪检测细胞周期的变化。结果子宫内膜癌组织中SLP-2mRNA的表达水平为1.6±0.7,正常子宫内膜组织为0.7±0.3,两者比较,差异有统计学意义(P<0.05)。表达SLP-2基因的正义和反义质粒成功转入HEC-1B细胞中,正义质粒转染后SLP-2mRNA表达水平增加约2.4倍,细胞生长变快,其中G1期减少12.5%,S期增高8.0%;反义质粒转染后SLP-2mRNA表达水平减少50%,细胞生长变慢,其中G1期增高10.5%,S期减少9.8%。结论子宫内膜癌中SLP-2mRNA的高表达与子宫内膜癌发生、发展有一定关系。     

miR-95在子宫内膜癌组织的表达及临床意义

目的:探讨miR-95在子宫内膜癌患者组织的表达及其临床意义。方法:收集2007年9月至2009年12月子宫内膜癌患者手术标本66例,以癌旁组织标本作为正常对照,应用原位杂交(in situ hybridization,ISH)及实时荧光定量PCR(real time quantityPCR,qRT-PCR)检测子宫内膜癌患者组织及癌旁组织中miR-95的表达水平,分析miR-95表达与子宫内膜癌临床病理参数之间的关系,并分析miR-95表达与患者预后的关系。结果:ISH检测显示,66例子宫内膜癌组织中miR-95阳性表达率为75.76%,与癌旁对照组(25.76%)的差异有统计学意义(P<0.01);qRT-PCR结果显示,临床Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ期子宫内膜癌组织miR-95表达水平为1.65±0.11、2.92±0.27、3.44±0.29、5.12±0.41,与癌旁组织的差异均有统计学意义(P<0.05),各期组间比较,差异亦有统计学意义(P<0.01);有、无盆腔淋巴结转移子宫内膜癌患者组织miR-95的表达水平分别为5.16±0.46、2.39±0.31,差异有统计学意义(P<0.01);高、中、低分化子宫内膜癌组织中miR-95表达水平为3.42±0.33、3.87±0.49、3.57±0.41,三者无统计学差异(P>0.05);Ⅰ型和Ⅱ型子宫内膜癌组织中miR-95表达水平分别为3.94±0.58、3.70±0.45,与癌旁组织的差异均有统计学意义(P<0.05),但二者差异无统计学意义(P>0.05);子宫内膜样腺癌和非子宫内膜样腺癌子宫内膜癌组织中miR-95表达水平分别为3.69±0.44,3.73±0.41,与癌旁组织的差异均有统计学意义(P<0.05),但二者差异无统计学意义(P>0.05)。Kaplan-Meier生存分析显示,miR-95表达越高患者生存率越低(P=0.010)。结论:miR-95与子宫内膜癌的发生、临床分期及淋巴结转移等密切相关,将其作为子宫内膜癌潜在的治疗靶点及预后判断具有重大意义。     

细胞角蛋白在子宫内膜癌淋巴结中的表达及意义

目的 :研究细胞角蛋白 (cytokeratin ,CK)在子宫内膜癌淋巴结中的表达及其意义。方法 :采用免疫组化SP法检测 5 0例子宫内膜癌患者的淋巴结 2 98枚中CK的表达。结果 :(1)在转移淋巴结中 ,CK皆呈强阳性表达 ,其阳性表达率为 10 0 %。在Ⅰ、Ⅱ、Ⅲc期无转移淋巴结中 ,CK皆呈弱阳性表达 ,其阳性表达率分别为 14 .5 %、15 .1%和 16 .4 % ,3期差异无显著性 (P >0 .0 5 ) ;(2 )Ⅰ、Ⅱ期病例的淋巴结中CK表达在肌层浸润深度、组织学类型、组织学分级 3组的组内差异无显著性 (P >0 .0 5 ) ;而淋巴管浸润组的组内差异有显著性 (P <0 .0 5 ) ;(3)Ⅰ、Ⅱ期病例的淋巴结中CK表达及其他预后因素与肿瘤复发的关系 ,淋巴结中CK表达、淋巴管浸润、术后治疗 3组的组内差异有显著性 (P <0 .0 5 ) ,而肌层浸润深度、组织学类型、组织学分级 3组的组内差异无显著性 (P >0 .0 5 ) ;(4 )对子宫内膜癌的诸预后因素如肌层浸润深度、组织学类型、组织学分级、淋巴结中CK表达、淋巴管浸润、术后治疗等进行多元回归分析 ,结果显示 :淋巴结中CK表达是Ⅰ、Ⅱ期子宫内膜癌患者复发的唯一相关因素。结论 :在无转移淋巴结中 ,CK表达与淋巴管浸润有关 ,提示可能存在淋巴结微转移 ,是Ⅰ、Ⅱ期子宫内膜癌复发的独立危险因素     

子宫内膜癌患者血清hsa-miR-155的表达及其临床意义

目的 探讨hsa-miR-155在子宫内膜癌患者血清中的表达及其临床意义.方法 选择2008年9月至2009年12月间解放军第一六九医院妇产科收治的44例子宫内膜癌患者,以同期12例健康志愿者作为对照,应用实时荧光定量PCR技术检测子宫内膜癌患者和健康志愿者血清hsa-miR-155的表达水平(以倍数表示),分析hsa-miR-155表达与子宫内膜癌临床病理指标间的关系.结果 相对于健康志愿者,子宫内膜癌患者血清hsa-miR-155的表达水平为(3.9±0.7)倍,两者比较,差异有统计学意义(P＜0.01).其中,高、中、低分化子宫内膜癌患者血清hsa-miR-155的表达水平分别为(3.7±0.6)、(3.9±0.6)、(3.7±0.6)倍,3者分别比较,差异均无统计学意义(P＞0.05);子宫内膜样腺癌与非子宫内膜样腺癌患者血清hsa-miR-155的表达水平分别为(3.8±0.6)、(3.9±0.6)倍,两者比较,差异无统计学意义(P＞0.05);Ⅰ～Ⅱ、Ⅲ～Ⅳ期子宫内膜癌患者血清hsa-miR-155的表达水平分别为(2.1±0.4)、(5.6±0.8)倍,两者比较,差异有统计学意义(P＜0.01);有、无盆腔淋巴结转移子宫内膜癌患者血清hsa-miR-155的表达水平分别为(5.5±0.5)、(1.9±0.2)倍,两者比较,差异有统计学意义(P＜0.01).结论 hsa-miR-155与子宫内膜癌的发生、转移密切相关,有可能成为判断子宫内膜癌疗效及预后的潜在生物学指标.     

促性腺激素释放激素受体mRNA在正常子宫内膜及子宫内膜腺癌组织中的表达

目的探讨促性腺激素释放激素受体（GnRH-R）mRNA在正常子宫内膜及子宫内膜腺癌组织中的表达.方法采用原位杂交技术,检测23份增生期正常子宫内膜、30份分泌期正常子宫内膜及30份子宫内膜腺癌组织中GnRH-R mRNA的表达.结果正常子宫内膜及子宫内膜腺癌组织中GnRH-R mRNA均呈阳性表达,其阳性信号物质位于细胞质.增生期及分泌期正常子宫内膜组织GnRH-R mRNA的阳性表达率分别为17%（4/23）和17%（5/30）,两者比较,差异无统计学意义（P＞0.05）;子宫内膜腺癌组织GnRH-R mRNA的阳性表达率为40%（12/30）,明显高于正常子宫内膜组织[17%（9/53）,P＜0.05].结论GnRH可直接作用于子宫内膜产生内分泌作用,癌变的子宫内膜细胞表面GnRH-R明显增多.     

间皮素mRNA在子宫内膜癌的表达及意义

目的:研究间皮素mRNA表达与子宫内膜癌发生、发展的关系。方法:采用半定量RT-PCR技术检测41例子宫内膜癌组织和14例正常子宫内膜组织中间皮素mR-NA的表达。结果:间皮素mRNA在子宫内膜癌和正常子宫内膜组织中的表达率分别为82.9%(34/41)与78.6%(11/14),相对含量分别为74.95±22.34、54.45±9.01。子宫内膜癌组间皮素mRNA相对含量高于正常内膜组(P=0.005)。手术病理分期Ⅲ~Ⅳ期、有淋巴结转移、深肌层浸润及低分化组的子宫内膜癌间皮素mRNA相对含量分别高于手术病理分期Ⅰ~Ⅱ期、无淋巴结转移、浅肌层浸润及高、中分化组(P分别为0.000、0.014、0.01和0.034),而与病理类型无关(P=0.219)。结论:间皮素mRNA过表达与子宫内膜癌的浸润、转移有相关性,检测其表达有助于判断子宫内膜癌的恶性程度和评估预后。     

子宫内膜癌中fhit、survivin的表达及临床意义

目的 :探讨脆性组氨酸三联体基因蛋白fhit和凋亡抑制蛋白survivin在子宫内膜癌中的表达及临床意义。方法 :用免疫组化S P法检测 12例正常子宫内膜 ,15例不典型增生子宫内膜 ,4 2例子宫内膜癌组织中fhit蛋白、survivin蛋白的表达。结果 :fhit蛋白在子宫内膜癌中的阳性率明显低于正常子宫内膜或不典型增生子宫内膜 ,差异有显著性 (P <0 .0 5 )。survivin在正常子宫内膜、不典型增生子宫内膜、子宫内膜癌中的阳性表达率分别为 16 .7%、6 6 .7%、90 .5 % ,差异有显著性 (P <0 .0 5 ) ;在子宫内膜癌组织中 ,随组织学病理分级的增加、手术临床分期的进展、肌层浸润程度的加深和淋巴结的转移 ,fhit蛋白表达阳性率逐渐下降 ,survivin表达强阳性率则逐渐上升 ,差异有显著性 (P <0 .0 5 ) ;fhit蛋白、survivin蛋白表达呈负相关性 (r=- 0 .76 9,P =0 .0 0 0 )。结论 :fhit、survivin在子宫内膜癌的发生、发展过程中起着重要的作用 ,联合检测可为子宫内膜癌的早期诊断、进一步治疗及预后判断提供必要的理论依据。     

Prognostic significance of AgNORs expression in endometrial cancer

OBJECTIVES: The purpose of the study was assessing prognostic value of AgNORs expression in endometrial cancer. MATERIALS AND METHODS: The study was performed in a group of 90 patients, diagnosed with endometrial cancer, treated in Clinic of Gynecological Oncology in Wroc?aw. Silver nucleolar organizer regions (AgNORs) were stained in paraffin-embedded samples, using Ploton method modified by Oefner. RESULTS: The mean number of AgNORs was 2.76 +/- 0.46. To assess the possible influence of AgNORs expression, patients were divided into three groups, based on the mean number of AgNORs: I- <2.3; II- 2.3-3; III- >3. The differences in the outcome between these groups were not significantly different. The mean number of AgNORs in the group of patients with distant metastases and progression did not differ (2.72). The highest mean number of AgNORs (3.38) was observed in patients with local failure. CONCLUSIONS: At this point in time, there is inadequate evidence to use AgNORs as predictive factors in patients with endometrial cancer further studies are warranted.