HBV抗原基因修饰树突状细胞疫苗体外抗HBV的作用

目的：探讨腺病毒载体介导HBV抗原基因修饰的树突状细胞(DCs)诱导抗HBV特异性CTL反应方法：制备携带HBsAg、HBeAg和HBcAg基因的3种重组腺病毒Ad-HBs,Ad-HBe,Ad- HBc,分别转染自脐带血体外诱导培养的DCs,观察腺病毒转染DCs效率和DCs中HBV抗原的表达;混合淋巴细胞反应(MLR)测定HBV抗原基因修饰DCs刺激同种异体T淋巴细胞增殖能力;乳酸脱氢酶释放法检测特异性CTL细胞对HepG_222．1．5靶细胞的杀伤能力．结果：腺病毒载体能够高效介导HBV三个抗原基因在DCs中表达,90%以上DCs表达示踪基因EGFP,且DCs细胞形态完整：感染后72 h HBsAg和HBeAg含量分别为0．919和0．328(吸光度A值)．MLR实验显示,HBV抗原基因修饰DCs仍然具有刺激同种异体T细胞的增殖能力,Ad-HBs转染DCs组、Ad-HBe转染DCs组、Ad-HBc转染DCs组和未转染DCs组之间刺激T细胞的增殖水平无明显差异(F=1．194,P=0．389);在E：T比例为2：1,10：1和25：1时,Ad-HBs转染DC组、Ad-HBe转染DCs组和Ad-HBc转染DCs组对HepG_222．1．5细胞的杀伤率均明显高于未转染DCs组(P＜0．001);以Ad- HBc转染DC组对HepG_222．1．5细胞杀伤率最高．结论：HBV抗原基因修饰DCs疫苗具有刺激同种异体T细胞增殖能力,同时能增强抗HBV特异性CTL反应的能力,可能发展为一种新型抗病毒疫苗．     

干扰素治疗对慢性乙型肝炎患者外周血树突状细胞调节Th1/Th2分化的影响

树突状细胞(DCs)在慢性乙型肝炎(CHB)患者中的功能是低下的[1]。因此,DCs异常可能导致抗原提呈功能失调,引起体液和细胞免疫紊乱,最终导致患者病情迁延不愈。CHB患者辅助性T细胞(Th)亚群即Th1、Th2细胞的平衡与患者的预后有关,并且Th0向Th1/Th2的分化受多种因素的调节。本研究主要探讨干扰素对CHB患者外周血DCs,以及DCs对Th1/Th2分化作用的影响。对象与方法一、研究对象本院2002年3～12月的门诊及住院CHB患者24例,男21例,女3例,年龄21～42岁,平均28.6岁,其中CHB轻度14例,中度10例。诊断参照2000年西安全国病毒性肝炎会议修订的…     

CD4+调节性T细胞和树突状细胞及其在自身免疫性疾病中相互作用研究进展

CD4+调节性T细胞是外周免疫耐受新的重要作用机制,它可通过细胞-细胞接触或者抑制性细胞因子作用于APCs或效应性T细胞,从而发挥调节效应.树突状细胞(dendritic cells,DCs)是一类复杂且具有异质性、可塑性的细胞,系专职抗原提呈细胞(antigen presenting cells,APCs),它参与了机体免疫应答或免疫耐受的全过程.     

树突状细胞与1型糖尿病的关系

1型糖尿病是一种T淋巴细胞介导的器官特异性自身免疫性疾病,表现为胰岛β细胞的选择性破坏.树突状细胞(DCs)作为体内最重要的专职性抗原递呈细胞,在1型糖尿病的发病机制中具有极其重要的作用.DCs具有功能上的可塑性,不同类型DCs、不同成熟状态的DCs以及DCs所处微环境的不同,都将诱导其产生不同的功能状态.通过调节DCs的不同功能状态促进中枢或外周免疫耐受、扩展胰岛特异性调节性T细胞(CD4~+ CD25~+ Treg cell)、以及介导辅助性T(Th)细胞发生Th1/Tk2细胞的免疫偏离,可诱导免疫耐受,预防1型糖尿病的发生.     

慢性阻塞性肺病中的树突状细胞旧患的新突破口

树突状细胞（dendritic cells,DCs）是专门的抗原提呈细胞（antigen—presenting cells,APCs）,它与免疫稳态（immune homeostasis）有关。在组织损伤或感染的肺部应答中,DCs能启动和统筹先天性免疫和获得性免疫（adaptive immunity）。     

肺癌患者外周血CD4+ CD25+调节性T细胞的检测及其临床意义

目的检测肺癌患者外周血CD4 CD2 5调节性T细胞的分布并探讨相关机制。方法流式细胞仪分析46例肺癌患者外周血CD4 CD25 调节性T细胞占CD4 T淋巴细胞的比例;并用ELISA方法检测同标本血中转化生长因子-1(TGF-β1)的浓度。结果46例肺癌患者外周血中CD4 CD2 5调节性T细胞占CD4 T淋巴细胞的比例为(19.1±2.3)%,与对照组(4.1±0.6)%比较差异有显著性(P<0.05)。22例鳞癌、19例腺癌、5例小细胞癌患者外周血中CD4 CD2 5调节性T细胞比例分别为(20.1±0.9)%、(18.8±0.4)%、(19.2±0.4)%,各组间比较差异无显著性(P>0.05);均显著高于对照组(4.1±0.6)%,P<0.05;20例Ⅲ、15例Ⅳ晚期肺癌患者外周血中CD4 CD2 5调节性T细胞比例为(21.4±2.1)%、(20.1±1.3%),均显著高于11例Ⅱ期患者(10.6±1.5)%,P均<0.05。肺癌组外周血清中TGF-β1的水平显著高于对照组,且随着TGF-β1浓度的增加,CD4 CD2 5调节性T细胞比例逐渐增高,两者呈正相关(r=0.0615,P<0.05)。结论肺癌患者外周血中有CD4 CD25 调节性T细胞比例增高,且与分期有关。     

Tα1对食管癌细胞RNA转染的脐血树突状细胞功能的影响

目的 探讨食管癌T.Tn细胞RNA转染脐血树突状细胞(DCs)对T细胞增殖和细胞毒性T淋巴细胞(CTL)特异性抗肿瘤作用的影响,以及胸腺肽α1(Tα1)对脐血DCs疫苗的免疫佐剂作用.方法 分离脐血单个核细胞,经重组人粒细胞巨噬细胞集落刺激因子(rhGM-CSF)、重组人干细胞因子(rhSCF)、重组人IL-4(rhIL-4)诱导和T.Tn细胞RNA转染形成成熟DCs,加入Tα1制备肿瘤疫苗.检测RNA转染后DCs表型变化;MTT法检测各组脐血DCs诱导T细胞增殖和CTL细胞毒活性.结果 与转染前比较,T.Tn细胞RNA转染后脐血DCs表面MHC-Ⅰ、MHC-Ⅱ和CD54、CD80和CD86分子水平明显升高(P均<0.05);可显著促进T细胞增殖,有效诱导CTL的特异性杀瘤活性(P<0.05).而Tα1能显著促进RNA致敏脐血DCs的表面分子表达和T细胞功能(P<0.05).结论 Tα1联合食管癌细胞RNA转染脐血DCs可制备高效、特异的肿瘤疫苗,有望成为食管癌生物治疗的新途径.     

大肠癌患者外周血来源树突状细胞对T细胞活化作用的研究

目的比较无血清培养液AIM-V和RPMI1640 胎牛血清(FBS)培养液培养大肠癌患者外周血来源树突状细胞(DCs)的形态和免疫表型,检测DCs对T细胞的活化作用。方法对2003年3月至2004年10月首都医科大学附属北京朝阳医院消化内科收治的10例大肠癌患者,采集其外周血分离单核细胞,分别使用2种细胞培养液进行体外培养。观察细胞形态,检测细胞表面CD1a,CD80,CD86,CD83,CD14及HLA-DR的表达。再用丝裂霉素作用后的DCs作为刺激细胞,按照刺激细胞反应细胞(S∶R)1∶1,1∶10,1∶20,1∶40,1∶80的比例进行同种异体混合淋巴细胞反应(MLR),检测DCs刺激同种异体T细胞增殖的能力。结果大肠癌患者外周血单核细胞经2种细胞培养液培养后都可以诱导出DCs。细胞外型均呈毛刺状。细胞均表达CD1a、CD80、CD86和人类白细胞抗原(HLA-DR),不表达CD14、CD83,为不成熟DCs的特点。两组DCs细胞表型表达差异无显著性(P>0.05)。按S∶R不同比例进行同种异体MRL所得刺激指数分别为2.7,4.1,3.1,2.5,1.6,表明树突状细胞(DCs)在不同比例下都刺激T细胞增殖。结论使用AIM-V无血清培养液和传统的含FBS细胞培养液均可成功诱导培养大肠癌患者外周血来源的DCs,但使用AIM-V可以降低含血清培养液应用人体后引起的过敏反应等风险,更适合DCs的临床使用,可以替代含血清培养液。MLR结果显示,DCs在各种S∶R比例下均有刺激T细胞增殖的能力,但S∶R比为1∶10时最佳。     

P27蛋白在非小细胞肺癌中表达的预后意义

Ｐ2 7蛋白具有限制性调节细胞周期进程的作用 ,这一作用主要通过抑制细胞周期蛋白依赖性激酶 (ＣＤＫＳ)复合物的功能来实现。Ｐ2 7蛋白表达与预后的关系在乳癌、淋巴瘤、前列腺癌以及消化道肿瘤已有报道[1] ,而在肺癌中的研究甚少。我们运用免疫组化法检测Ｐ2 7在非小细胞性肺癌组织中的表达水平 ,从而探讨其在非小细胞性肺癌中的意义。对象和方法　 1 对象 :5 6例非小细胞肺癌 (ＮＳＣＬＣ)病例均在本院接受治疗及随访。其中男 42例 ,女 14例 ,年龄39～ 77岁 ,平均 6 0岁。中位随访时间 2年 (1～ 5年 ) ,5 6例ＮＳＣＬＣ中 ,腺癌 36例 ,鳞…     

间充质干细胞在成人隐匿性自身免疫性糖尿病患者中免疫抑制作用的研究

目的探讨脐带间充质干细胞(MSCs)对LADA患者单核细胞衍生的树突状细胞(DCs)的免疫调节作用。方法选取5例LADA患者外周血DCs与MSCs进行共培养(MSCs+DCs组),之后刺激自体T细胞。流式细胞术检测DCs组成熟和活化水平、CD3+T、Treg、Th17细胞比例,ELISA法检测细胞培养上清中TGF-β、前列腺素E2(PGE-2)、IL-10和IL-6水平,流式多因子检测法测定细胞培养上清T细胞因子水平,全转录组测序分析筛选新的治疗靶点。结果 MSCs与DCs共培养后,调节性DCs(regDC)增加,同时TGF-β、PGE-2、IL-10和IL-6数量显著增加。两组与T细胞共培养结果显示,MSCs+DCs组IL-4、IL-5、IL-6、IL-9、IL-10、IL-13和TGF-β表达水平升高(P0.05),INF-γ、TNF-α和IL-17A表达水平降低(P0.05);MSCs+DCs组T细胞增殖活化水平显著降低,MSCs+DCs组Th17细胞比例降低(P0.05),Treg细胞比例增加(P0.05)。结论在LADA中,MSCs能在体外诱导未成熟DCs(imDCs)分化生成CD11b~(high)1a~(low)CD11c~(low)regDCs,表现出免疫抑制作用,这些DCs有助于抑制T细胞介导对胰岛β细胞的破坏,促进MSC发挥抗炎作用。     

阿司匹林诱导小鼠脾源性树突状细胞产生免疫耐受的机制

目的探讨阿司匹林(ASP)诱导小鼠脾源性树突状细胞(DCs)产生免疫耐受的机制。方法将16只小鼠随机均分为空白对照组(对照组)、ASP1组、ASP2组、ASP3组[分别腹腔注射ASP 0.01、0.02、0.03 mg/(kg.d)]各4只。1个月后取各组小鼠脾脏制备脾细胞,观察细胞生长情况,计算脾源性DCs数量,检测脾源性DCs表型变化、脾源性DCs刺激T细胞增殖的能力、DCs培养液中的IL-10、IL-12表达。结果除对照组外,ASP1组、ASP2组、ASP3组大部分细胞有典型树枝样突起;与对照组比较,ASP组脾源性DCs表型33D1表达、DCs培养液中的IL-10表达升高,CD80与CD86表达、T细胞增殖活性、DCs培养液中的IL-12表达降低(P均<0.05),以ASP3组变化最明显。结论小鼠体内输注ASP后,其脾源性DCs表型33D1表达升高,CD80、CD86表达降低,刺激T细胞增殖能力减弱,DCs培养液中IL-10升高、IL-12降低。     

不同树突状细胞亚型在支气管哮喘中的作用

树突状细胞(DCs)是目前已知功能最强的抗原递呈细胞,也是唯一能将抗原递呈给naiveT细胞、激发初次免疫应答的抗原递呈细胞,其在机体固有免疫以及适应性免疫中均发挥着重要的作用.支气管哮喘(简称哮喘)是一种常见的气道慢性炎症性疾病,存在Th1/Th2细胞亚群数量与功能失衡.近年来,研究显示,通过释放一系列的趋化因子以及细胞因子,DCs能活化naive T细胞并影响其极化,参与哮喘的发生发展.然而,不同DCs的亚型诱导naive T细胞极化的方向不尽相同,在决定机体对抗原是免疫耐受还是免疫反应发挥着不同作用.本文就DCs不同亚型在哮喘中的作用作一综述.     

CD73与调节性T细胞在非小细胞肺癌中的表达及其临床意义

目的研究非小细胞肺癌中CD73与调节性T细胞的表达及其临床意义。方法采用免疫组化SP法检测CD73与Foxp3标记的调节性T细胞在70例非小细胞肺癌及10例癌旁正常肺组织的表达,分析其与临床病理其特征的相关性。Kaplan-Meier生存分析研究CD73及调节性T细胞与患者生存期的关系。单因素及Cox回归多因素分析非小细胞肺癌预后相关因素。结果 CD73与调节性T细胞在10例癌旁正常肺组织中均呈阴性表达。70例非小细胞肺癌组织中53例CD73呈阳性表达(73.7%),49例调节性T细胞呈阳性表达(70%)。CD73与调节性T细胞的表达与淋巴结转移、TNM分期及生存期相关(P0.05)。CD73与调节性T细胞的表达有相关性(r=0.284,P0.05)。在单因素分析中,患者预后与肿瘤大小、淋巴结转移、分化程度、TNM分期、CD73与调节性T细胞的表达相关(P0.05)。Cox多元回归分析提示CD73与调节性T细胞是患者生存期的独立影响因素(P0.01)。结论 CD73与调节性T细胞在非小细胞肺癌表达上调,有可能成为监测非小细胞肺癌病情及判断预后的有效指标。     

老年肺癌患者免疫功能的研究

近年来对肺癌的免疫功能研究颇受重视 ,但大多研究仅限于某个细胞功能。为此我们选择了外周血 T淋巴细胞亚群、自然杀伤细胞 (NKC)活性和淋巴细胞转化率作为免疫指标 ,综合研究了 134例老年肺癌患者的细胞免疫功能 ,以期为肺癌的免疫治疗提供理论依据。1　对象与方法1.1　 对象　老年肺癌组 134例 ,初诊确诊为原发性肺癌。男112例 ,女 2 2年 ,年龄 6 0～ 80岁 ,平均 76 .8岁 ,均经细胞学或病理学证实。未采用任何治疗方法 ,排除免疫方面的疾病。鳞癌99例 ,腺癌 12例 ,小细胞癌 17例 ,大细胞癌 6例。非老年肺癌组 112例 ,男 87例 ,女 2 5例…     

氧化低密度脂蛋白对大鼠树突状细胞趋化因子分泌及趋化因子受体表达的影响

目的:探讨氧化低密度脂蛋白(oxLDL)对SD大鼠骨髓源树突状细胞(DCs)趋化因子巨噬细胞炎性蛋白(MIP)-1a和单核细胞趋化蛋白(MCP)-1分泌及趋化因子受体(CCR)5和CCR7表达的影响.方法:将SD大鼠骨髓源DCs为研究对象,以PBS作阴性对照,分别与10和50 mg/L的oxLDL混合培养48 h后,动态观察DCs成熟过程中的形态学变化,酶联免疫吸附试验检测细胞培养上清趋化因子MIP-1a和MCP、1,荧光定量RT-PCR检测DCs细胞趋化因子受体CCR5和CCR7浓度的表达.结果:oxLDL可促进SD大鼠骨髓源DCs上清MCP-1的表达(P＜0.05),并可以明显促进细胞表达CcR7(P＜0.01).结论:oxLDL可促进DCS成熟,增加DCs分泌MCP-1,并上调CCR7的表达,DCs迁徙变化可能参与动脉粥样硬化的形成.     

贝氏柯克斯体重组膜蛋白抗原激活树突状细胞诱导特异性免疫应答

目的分析贝氏柯克斯体(Coxiella burnetii,Cb)膜蛋白抗原对树突状细胞(dendritic cells,DCs)的激活作用,筛选能有效激活DCs的蛋白抗原,探讨该蛋白抗原间接激活T细胞的作用。方法从健康成年人外周血中分离单核细胞,加入GM-CSF和IL-4体外培养单核细胞成未成熟DCs;分别用Cb的5种重组膜蛋白IcmO、EnhA、SecB、Lo1A、HspB刺激DCs;用流式细胞仪(fluorescence activated cell sorter,FACS)检测刺激后DCs表面分子表达。结果 SecB刺激的DCs表达CD83,CD86,CD80,CD54,CD58,和CD40水平显著高于其它4种蛋白;将SecB激活DCs或SecB激活DCs培养上清刺激T淋巴细胞,FACS检测显示刺激后CD4+和CD8+细胞高水平表达的T淋巴细胞活化标志CD69以及细胞因子IFN-γ和TNF-α。结论 SecB膜蛋白抗原能有效激活DCs和它所激活DCs能够诱导特异性细胞免疫应答,为贝氏柯克斯体潜在保护性抗原。     

大肠癌患者外周血来源树突状细胞对T细胞活化作用的研究

目的 比较无血清培养液AIM—V和RPMI1640＋胎牛血清（FBS）培养液培养大肠癌患者外周血来源树突状细胞（DCs）的形态和免疫表型，检测DCs对T细胞的活化作用。方法对2003年3月至2004年10月首都医科大学附属北京朝阳医院消化内科收治的10例大肠癌患者，采集其外周血分离单核细胞．分别使用2种细胞培养液进行体外培养。观察细胞形态，检测细胞表面CD1aCD80CD86CD83CD14及HLA—DR的表达。再用丝裂霉素作用后的DCs作为刺激细胞，按照刺激细胞：反应细胞（S：R）1：1，1：10，1：20．1：40，1：80的比例进行同种异体混合淋巴细胞反应（MLR），检测DCs刺激同种异体T细胞增殖的能力。结果 大肠癌患者外周血单核细胞经2种细胞培养液培养后都可以诱导出DCs。细胞外型均呈毛刺状。细胞均表达CD1a、CD80、CD86和人类白细胞抗原（HLA—DR），不表达CD14、CD83，为不成熟DCs的特点。两组DCs细胞表型表达差异无显著性（P〉0.05）。按S：R不同比例进行同种异体MRL所得刺激指数分别为2．7，4．1，3．1，2．5，1．6，表明树突状细胞（DCs）在不同比例下都刺激T细胞增殖。结论使用AIM—V无血清培养液和传统的含FBS细胞培养液均可成功诱导培养大肠癌患者外周血来源的DCs，但使用AIM—V可以降低含血清培养液应用人体后引起的过敏反应等风险，更适合DCs的临床使用，可以替代含血清培养液。MLR结果显示．DCs在各种S：R比例下均有刺激T细胞增殖的能力，但S：R比为1：10时最佳。     

Tα1对食管癌细胞RNA转染的脐血树突状细胞诱导T细胞杀瘤活性的影响

目的:探讨食管癌细胞RNA转染脐血树突状细胞(dendritic cells.DCs)对T细胞增殖和CTL特异性抗肿瘤作用的影响,以及Tα1对脐血DCs疫苗的免疫佐剂作用.方法:分离脐血单个核细胞,经rhSCF、rhGM-CSF和rhlL-4诱导和T.Tn细胞RNA转染形成成熟DCs,加入Tα1制备肿瘤疫苗.流式细胞术(FCM)检测各组DCs表型变化;MTT法检测各组脐血DCs诱导T细胞增殖和CTL细胞毒活性.结果:T.Tn细胞RNA转染后组较转染前组脐血DCs高表达MHC-Ⅰ、MHC-Ⅱ、CD54、CD80和CD86分子(MHC-Ⅰ:70-36±6.09 VS8.17±1.93;MHC-Ⅱ:72.03±5.32 VS 7.64±5.33;CD54:69.36±7.33 VS 2.05±2.03;CD80:67.21±6.77 VS 2.33±1.65;CD86:68.85±7.41VS 6.73±1.97,P＜0.01);与转染前组相比,可显著促进T细胞增殖(10:1:4.77±0.79 V5 1.65±0.71;50:1:3.85±0.57 VS 1.56±0.13;100:1:2.89±0.59 VS 1.19±0.21,P＜O.05),并有效诱导CTL的特异性杀瘤活性(10:1:27.36±8.93VS 10.35±2.93;20:1:44.55±2.36 VS 11.77±1.03;50:1:51.08±4.92 VS 12.75±1.49,P＜0.05).而Tα1能显著促进RNA致敏脐血DCs的各种表面分子表达(MHC-Ⅰ:87.88±9.13VS 70.36±6.09;MHC-Ⅱ:93.16±3.34 VS 72.03±5.32;CD54:91.75±3.84 VS 69.36±7.33;CD80:87.27±8.68 VS 67.21±6.77;CD86:89.09±6.86 VS 68.85 7.41,P＜0.05);和刺激T细胞增殖能力(10:1:8.31±1.78 VS 4.77±0.79;50:1:5.97±0.14 V5 3.85±0.57;100:1:4.03±0.13 VS 2.89±0.59,P＜0.05);及诱导CTL的能力(10:1:47.66±4.12 VS 27.36±8.93;20:1:56.72±7.24 VS 44.55±2.36;50:1:76.48±3.47 VS 51.08±4.92,P＜0.05).结论:Tα1联合食管癌细胞RNA转染脐力DCs可制备高效、特异的肿瘤疫苗,有望成为食管癌生物治疗的新途径.     

MAGE-1九肽负载的树突细胞的体外抗瘤效应

目的 探讨MAGE-1九肽致敏树突细胞对肝癌细胞SMMC-7721的体外抑制作用.方法 获取人外周血单核细胞诱导分化为树突细胞(DCs).以MAGE-1九肽加以负载,应用MTT法检测致敏的DCs激活的T淋巴细胞对人肝癌细胞SMMC-7721的体外抑制作用.结果 负载MAGE-1九肽的DCs细胞对SMMC-7721细胞生长的抑制率为87%,DCs组为76%,两者差异显著(P<0.05).结论 MAGE-1九肽致敏的DCs在体外可产生有效的抗瘤效应.     

应用自体肿瘤免疫细胞治疗中晚期肿瘤的意义

目的探讨树突状细胞(dendritic cells,DCs)和细胞因子诱导的杀伤细胞(cytokine induced kil-ler,CIK)联合化疗治疗晚期实体瘤的临床意义。方法采用自体肿瘤免疫细胞治疗晚期实体瘤患者130例。分离外周血单个核细胞,其中贴壁细胞用粒细胞巨噬细胞集落刺激因子、肿瘤坏死因子及白细胞介素4等诱导产生DCs,并用自体肿瘤细胞或外源性肿瘤细胞抗原致敏,获得Ag.DCs;悬浮细胞经干扰素-γ、IL2和CD3单克隆抗体(CD3 monoclonal antibody,CD3mAb)等诱导产生CIK细胞,将DCs与CIK细胞共同培养;采用FCM法检测DCs及CIK细胞表型,一次回输患者。结果 130例中晚期肿瘤自体肿瘤免疫细胞联合化疗治疗后,完全缓解(CR)5例,部分缓解(PR)19例,稳定(SD)87例,疾病进展(PD)13例,6例晚期肿瘤进展死亡,疾病控制率85.38%。结论 DCs-CIK细胞联合化疗治疗中晚期恶性实体瘤安全有效,具有重要的临床意义和应用前景。