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相似文献
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1.
HSP70在香烟诱导人类气道上皮细胞黏液高分泌中的作用   总被引:1,自引:0,他引:1  
目的 研究热休克蛋白70(HSP70)在香烟提取物(CSE)诱导人类支气管上皮细胞(16-HBE)黏液高分泌中的作用.方法 建立CSE刺激16-HBE诱导黏液蛋白基因(MUC5AC)高表达模型,给予HSP70单抗阻断HSP70生物活性;提取细胞mRNA、蛋白,采用RT-PCR及Western blot等方法检测炎性细胞因子(TNF-α)、HSP70及MUC5AC的表达.结果 CSE刺激后细胞MUC5AC、TNF-α、HSP70 mRNA和HSP70蛋白表达较空白组(未予CSE刺激)增高(P<0.05).HSP70生物作用阻断后,MUC5AC和TNF-α mRNA的表达水平降低(P<0.05),同时表皮生长因子受体(EGFR)磷酸化水平也降低(P<0.05).结论 CSE可诱导16-HBE细胞MUC5AC基因表达增高,是重要的气道黏液刺激因子.HSP70参与了气道黏液分泌,其机制可能是通过上调TNF-α表达量,从而激活EGFR通路导致MUC5AC表达增加.  相似文献   

2.
热休克蛋白70重组腺病毒载体的构建及鉴定   总被引:3,自引:1,他引:3  
目的 构建人热休克蛋白70(HSP70)的腺病毒表达载体,为进一步研究HSP70对应激状态下细胞的保护作用提供实验基础.方法 采用AdEasy系统构建携带外源性HSP70编码基因的重组腺病毒载体pAd-HSP70,脂质体法转染人胚肾293细胞,包装产生重组腺病毒vAdvHSP.收获病毒进行滴度鉴定, RT-PCR方法检测目的 基因在Hela细胞的转录表达.结果 PCR、序列测定以及限制性酶切证实HSP70基因正确插入腺病毒表达载体,并在HEK293细胞中包装出重组腺病毒;荧光显微镜下可观察到GFP的表达,收获病毒的滴度为3.2×1012 U/L.结论 成功构建pAd-HSP70重组腺病毒表达载体,且重组腺病毒在Hela细胞能有效转录.  相似文献   

3.
目的 观察实验性结肠炎热休克蛋白(HSP70) 、白介素-10(IL-10)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)表达变化并研究双歧杆菌对其表达的影响.方法 40只SD大鼠随机均分为正常组、模型组、5-ASA组及双歧杆菌组.2,4,6-三硝基苯磺酸(TNBS)/乙醇制备大鼠结肠炎模型.5-ASA组给予奥沙拉秦钠胶囊100 m...  相似文献   

4.
目的 探讨高温与电离辐射联合对鼠胎脑热休克蛋白 (HSP70 )和蛋白质的影响。方法 孕d1 0的小鼠给予 4 2℃和 1 .0Gy( 6 0 Co)处理 ,取胎鼠全脑 ,用Westerndotblot和Lowrey方法测量HSP70和蛋白质含量。结果  1 .0Gy照射组、照射联合高温 ( 42℃ )组与对照组比较胎脑蛋白质明显减少 ,并诱导HSP70合成。高温 ( 42℃ )联合照射组与 4 2℃组相比胎脑蛋白质含量没有显著性变化 ,但二组诱导HSP70合成能力强。结论 高温诱导合成HSP70能力较辐射强 ,辐射引起胎脑蛋白质含量减少 ,预先高温处理孕鼠 ,然后再给电离辐射 ,胎鼠表现出交叉适应性反应  相似文献   

5.
目的:了解皮层肌动结合蛋白(cortical actin-binding protein,又称cortactin)在人气道上皮细胞黏蛋白(mucin,MUC)5AC分泌中的作用及不同磷酸化位点对其的影响。方法:培养人气道上皮细胞HBE16,以皮层肌动结合蛋白不同磷酸化位点突变载体转染细胞,并分为空白对照组、剪应力刺激组、剪应力+增强绿色荧光蛋白质粒(enhanced green fluorescent protein plasmid, pEGFP)-N1组、剪应力+pEGFP-N1-cortactin (Cort)组、剪应力+pEGFP-N1-Cort-Y421A组、剪应力+pEGFP-N1-Cort-Y470A组及剪应力+pEGFP-N1-Cort-Y486A组,剪应力设定为4 dynes/cm2。采用酶联免疫吸附法(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)、real-time PCR法测定转染前后各组细胞及培养上清中MUC5AC蛋白和mRNA水平,Western印迹检测各组皮层肌动结合蛋白及磷酸化皮层肌动结合蛋白含量;异硫氰酸荧光素(fluorescein isothiocyanate,FITC)标记的鬼笔环肽染色观察丝状肌动蛋白(filamentous actin,F-actin)的分布情况。结果:4 dynes/cm2 剪应力刺激30 min后,细胞中磷酸化皮层肌动结合蛋白表达增加,在2 h时表达水平最高;剪应力刺激2 h后,MUC5AC mRNA表达增强,细胞及培养上清中MUC5AC的含量与空白对照组相比,各组均显著增加(均P<0.05);与剪应力刺激组相比,剪应力+pEGFP-N1-cortactin(Cort)组的细胞培养上清液中MUC5AC蛋白含量显著增加,F-actin在胞膜的分布也明显增多(均P<0.05),而胞质内MUC5AC蛋白及MUC5AC mRNA水平变化不大。与剪应力+pEGFP-N1-Cort组相比,剪应力+pEGFP-N1-Cort-Y421A组、剪应力+pEGFP-N1-Cort-Y470A组培养上清液中的MUC5AC蛋白含量有明显降低,F-actin在胞膜的聚集也有所减少(均P<0.05),而剪应力+pEGFP-N1-Cort-Y486A组中MUC5AC含量变化不明显(P>0.05)。结论:皮层肌动结合蛋白参与了剪应力诱导产生的人气道上皮细胞MUC5AC蛋白分泌,Tyr421和Tyr470位点磷酸化在其中可能起重要的作用。  相似文献   

6.
目的:探讨HSP70和HSP27在食管癌组织中的表达情况。方法:采用SP免疫组织化学染色检测59例食管癌组织中HSP70和HSP27。结果:HSP70和HSP27的总阳性率分别为64.41%(38/59)和58.62%(34/58),HSP70和HSP27的共同阳性率为30.00%(9/30)。结论:在食管癌中HSP70和HSP27普遍表达。  相似文献   

7.
半夏提取物对气道黏液高分泌的影响   总被引:1,自引:0,他引:1  
目的 探讨半夏提取物(EP)对脂多糖诱导的大鼠气道黏液高分泌模型的干预作用.方法 30只Wistar大鼠随机分为5组(n=6),分别为空白组、模型组、低剂量EP组、中剂量EP组及高剂量EP组.模型组和EP组经气道注入脂多糖(LPS)复制大鼠气道黏液高分泌模型.低、中、高剂量EP组连续4 d分别给予管饲EP 10、30及60 g/kg;采用免疫组化法检测肺内气道的黏蛋白5AC(MUC5AC)蛋白表达,RT-PCR法检测肺组织MUC5AC mRNA、水通道蛋白5(AQP-5)mRNA;ELISA法检测BALF中的TNF-α浓度.结果 大鼠气道上皮MUC5AC蛋白和肺组织MUC5AC mRNA的表达在模型组中均明显高于空白组(P<0.05);在低剂量及中剂量EP组较模型组稍降低(P>0.05),仍显著高于空白组(P<0.05);在高剂量EP组显著低于模型组(P<0.05).大鼠AQP-5 mRNA表达在模型组显著低于空白组(P<0.05);在低剂量及中剂量EP组较模型组稍升高(P>0.05),仍较空白组显著降低(P<0.05);在高剂量EP组显著高于模型组(P<0.01).BALF中TNF-α浓度与肺组织MUC5AC mRNA的表达呈正相关(r=0.948,P<0.05),肺组织AQP-5 mRNA与MUC5AC mRNA及TNF-α的表达呈负相关(r=-0.955,P<0.05;r=-0.909,P<0.05).结论 高剂量的EP能明显抑制大鼠气道上黏液高分泌状态.  相似文献   

8.
目的:探讨HSP27和HSP70mRNA在大肠癌中表达的临床意义。方法:取大肠癌标本77例,采用免疫组织化学方法检测HSP27的表达状况,从中选取36例手术标本.采用核酸原位杂交技术(ISH)检测HSP70mRNA的表达。结果:HSP27和HSP70mRNA在大肠癌中的阳性率分别为40.3%和66.9%.HSP27和HSP70mRNA均与大肠癌的分化程度相关.与发生部位、浸润深度及淋巴结转移无明显相关性。结论:检测HSP27和HSP70mRNA可作为大肠癌患者预后的一个重要指标。  相似文献   

9.
目的 探讨重组腺病毒介导的热休克蛋白70 (HSP70)表达对低氧-复氧损伤后神经细胞生长的影响.方法 用携带全长HSP70基因的重组腺病毒vAd-HSP70感染体外原代培养的神经细胞,RT-PCR和Wes-tern blotting方法 检测靶细胞中外源性HSP70基因表达.实验分为vAd-HSP70感染组、vAd-...  相似文献   

10.
热休克蛋白70在神经元可塑性中作用的研究进展   总被引:2,自引:1,他引:2  
热休克蛋白(heat shock protein,HSP)是体内一族重要的蛋白质,不仅具有帮助蛋白质正确组装、折叠、转运的作用,也参与抑制凋亡,并与抗原提呈、甾体激素受体功能、细胞内运输、核受体结合有关。热休克蛋白包括小分子HSP家族、HSP60家族、HSP70家族、HSP90家族和HSP110家族,其中H  相似文献   

11.
目的通过体外实验观察HSP70的小分子干扰RNA(small interfering RNA,siRNA)对宫颈癌HeLa细胞株增殖及凋亡的影响,探讨HSP70在HeLa细胞增殖和凋亡中的功能。方法针对HSP70基因设计siRNA序列,克隆到空载体pTZU6+1中,转化DH5α菌株,提取质粒,进行酶切鉴定和测序分析。在脂质体2000的介导下转染HeLa细胞,同时转染空载体为阴性对照及不加任何试剂的空白对照。转染48h后,应用半定量RT-PCR,Westernblot检测HeLa细胞HSP70mRNA及蛋白的表达情况;MTT法检测HeLa细胞的生长抑制率;AO/EB染色法观察HeLa细胞形态学变化;流式细胞术检测HeLa细胞的凋亡率和细胞周期分布情况。结果与对照组相比,转染pHSP70-siRNA组HSP70的mRNA及蛋白表达均明显下降(P<0.01),表明Phsp70-siRNA质粒转染能有效降低HSP70的表达;细胞生长抑制率明显增高(P<0.05),且在48h时细胞抑制率达到最大;在荧光显微镜下观察到HeLa细胞出现凋亡形态;流式细胞术结果显示pHSP70-siRNA组细胞凋亡率显著高于对照组,且G0/...  相似文献   

12.
目的研究谷氨酰胺(Gln)对氧化应激状态下体外培养肺微血管内皮细胞(pulmonary microvascular endothelial cells,PMVEC)热休克蛋白(HSP)70表达的影响。方法采用体外培养Wistar大鼠PMVEC,分为阳性对照组(G组)、生理盐水组(PS组)、谷氨酰胺组(Gln组)、过氧化氢加生理盐水组(H2O2+PS组)和过氧化氢加谷氨酰胺组(H2O2+Gln组)。Western blotting检测PMVEC HSP70的表达情况,分别记录平均灰度值。结果与PS组(9.05±1.51)相比,Gln组(40.28±10.19)和H2O2+PS组(43.89±10.32)PMVEC HSP70表达分别增高4.5倍和5倍(P<0.01);与H2O2+PS组相比,H2O2+Gln组(65.59±14.53)HSP70表达进一步增高,约为PS组的7倍,接近G组(70.56±12.23)表达水平。结论谷氨酰胺可增强氧化应激状态下体外培养肺微血管内皮细胞HSP70表达。  相似文献   

13.
目的:观察不同波长激光照射C57黑鼠的犊鼻穴对骨关节炎模型关节软骨损伤的作用及对热休克蛋白70表达的影响。方法:C57黑鼠共60只分为6组,每组10只。其中1组为正常对照组,其余5组接受负荷训练。在电动跑台上进行1周的适应性训练后,以5m/min的速度连续训练50m,并人工驱赶保持其运动状态,每日1次,持续进行6周,以引发小鼠骨关节炎。造模成功后,除模型对照组和假治疗组外,其余3组每天分别接受10.6μm激光、650nm激光及二者的复合激光分别照射犊鼻穴,Mankin评分评定小鼠的软骨退化情况,免疫组织化学荧光染色检测热休克蛋白70在小鼠关节软骨的表达情况。结果:模型对照组及假治疗组的关节软骨Mankin评分高于正常对照组(P〈0.01),复合激光组的关节软骨Mankin评分明显低于模型对照组(P〈0.01)。与正常组比较,复合激光组、10.6μm激光组、650nm激光组、假对照组及模型对照组关节软骨的热休克蛋白70阳性表达均有增强,但复合激光组的热休克蛋白70阳性表达增强较其他组更为明显。结论:650nm及10.6μm和二者的复合激光针灸对膝关节软骨退变均有明显治疗效应,复合激光较单一激光更为明显。复合激光对关节软骨中热休克蛋白70阳性表达的增强亦较650nm及10.6μm单一激光明显。激光针灸对骨关节炎的治疗效应可能与热休克蛋白70的表达有关。10.6μm与650nm激光具有协同作用。  相似文献   

14.
蒋国红  黄良国  施迎兵 《重庆医学》2012,41(19):1948-1950
目的观察白细胞介素10(IL-10)对出血性颅脑损伤大鼠脑组织热休克蛋白70(HSP70)、胱天蛋白酶3(caspase-3)表达的影响,以探讨IL-10对出血性颅脑损伤的保护作用及机制。方法 96只SD大鼠随机分为正常组(N组)、模型组(M组)、IL-10低剂量组(L组)、IL-10高剂量组(H组)。Ⅶ型胶原酶注射法制备颅脑损伤模型,记录各组6h、12h、1d、3d、7d大鼠神经功能改善程度;免疫组化法测定HSP70和caspase-3的表达。结果与M组比较,L组和H组HSP70表达明显升高(P<0.01),caspase-3表达明显降低(P<0.01),神经功能缺损评分明显下降(P<0.01),且以H组更为显著(P<0.05)。结论 IL-10可通过上调HSP70表达及抑制caspase-3表达对出血性颅脑损伤起保护作用。  相似文献   

15.
目的 探讨热性惊厥患儿脑缺氧损伤与血清脑源性神经营养因子(brain-derived neurotrophic factor,BDNF)、热休克蛋白70(heat shock protein 70,HSP70)水平变化情况.方法 选取热性惊厥患儿70例作为研究组,根据患儿热性惊厥发作时间分为单纯惊厥组(45例)、惊厥持...  相似文献   

16.
周从阳  张志坚  熊华威 《重庆医学》2011,40(9):886-887,890
目的检测百草枯(PQ)诱导急性肺损伤(ALI)中肺组织热休克蛋白70(HSP70)的表达情况。方法健康雄性SD大鼠36只,随机分为对照组(n=18),ALI组(n=18)。ALI组用PQ灌胃(200 mg/kg)染毒建立大鼠ALI模型。对照组用等量生理盐水灌胃。采用RT-PCR检测大鼠肺组织HSP70的表达,比色法检测肺组织髓过氧化物酶(MPO)、伊文蓝(EBD),观察肺组织病理变化。结果 ALI组大鼠肺组织HSP70的表达在染毒后12 h明显增高,差异有统计学意义(P<0.05),24 h达高峰。MPO及EBD水平显著增高(P<0.01)。肺组织病理检查可见PQ中毒后肺泡壁充血、炎性细胞浸润,并有局灶性出血。结论 HSP70在PQ中毒后的表达增多,可能参与了PQ诱导的ALI后的组织保护作用。  相似文献   

17.
Zhou LQ  Song G  He ZS  Hao JR  Na YQ 《中华医学杂志》2007,87(6):404-408
目的利用RNA干扰(RNAi)技术,探讨核小体结合蛋白1(NSBP1)基因对人激素依赖前列腺癌细胞系LNCaP增殖的作用。方法设计并合成针对NSBP1的4种小分子干扰RNA(siRNA)(包含1种阴性对照),构建能抑制NSBP1 mRNA表达的重组pSilencer 2.1-U6 neo质粒,转染LNCaP细胞。应用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)、Western印迹实验检测不同质粒对NSBP1表达的抑制效率,选取抑制效率最高的质粒转染LNCaP细胞,用四甲基偶氮唑盐(MTT)法测定细胞增殖活性,用流式细胞光度术检测细胞周期的变化。结果筛选出抑制效率最高的质粒pSilencer-81(mRNA水平抑制80%,蛋白水平抑制85%),与阴性对照pSilencer-Neg质粒分别转染LNCaP细胞。转染60h后,经过84h、108h,一直到132h,LNCaP/81细胞A值(代表细胞活性)低于LNCaP/Neg细胞A值,差异均有统计学意义(t=4.501,4.282,5.229,4.759,均P〈0.05)。抑制率随时间延长而增加,在84h有所降低,在108h达最大值30.2%。转染60h后,经过84h,一直到108h,LNCaP/81细胞的G2M+S期细胞百分率较LNCaP/Neg细胞的降低,差异均有统计学意义(t=3.705,3.887,8.220,均P〈0.05)。结论针对NSBP1的siRNA通过抑制前列腺癌LNCaP细胞中NSBP1基因的表达,能明显抑制细胞的增殖,NSBP1可能参与前列腺癌细胞生长增殖过程。  相似文献   

18.
目的:观察不同压力对家犬气道黏液层黏蛋白(MUC)分泌的影响,并初步探讨其参与机制。方法:24只健康家犬行双腔支气管导管插管,并随机分为4组(n=6)。A组家犬正常呼吸的频率及压力双侧通气(A1,A2);B组一侧不通气(B1),另一侧予以过量通气(B2);C组预先张力敏感性阳离子通道4(TRPV4)阻断剂钉红(RR)后按A组通气模式通气(C1,C2);D组预先TRPV4阻断剂RR处理后按B组通气模式通气(D1,D2)。通气12 h后,ELISA检测3组支气管灌洗液(BALF)中MUC(2,5AC和5B)蛋白含量;RT-PCR检测支气管肺组织匀浆中MUC(2,5AC和5B) mRNA转录水平。结果:与正常通气的A2组比较,过量通气的B2组家犬BALF中3种MUC蛋白含量显著升高,且以MUC5AC为主(P<0.05);与A1组比较,未通气的B1组则明显下降(P<0.05)。与A1,A2组比较,给予RR处理后的C1,C2组蛋白含量均明显降低(P<0.05)。与过量通气的B2组比较,给予TRPV4特异性阻断剂处理后再过量通气的D2组3种MUC蛋白含量亦明显下降(P<0.05)。与A2组比较过量通气的B2组肺组织MUC(2,5AC和5B) mRNA表达均明显上调(P<0.05);与A1,A2比较,给予RR处理后C1,C2组肺组织3种MUC mRNA转录水平显著下降(P<0.05);给予RR预处理后与B2组相比,D2组内MUC mRNA转录水平显著下调(P<0.05)。结论:节律性压力波参与维持家犬气道上皮黏液层黏蛋白分泌平衡调控,其机制主要通过TRPV4通道实现。  相似文献   

19.
热休克蛋白融合蛋白对人树突状细胞分化成熟的刺激作用   总被引:1,自引:0,他引:1  
目的:研究热休克蛋白融合蛋白对人树突状细胞分化成熟的刺激作用。 方法:采用GM-CSF和IL-4将人外周血单核细胞诱导成未成熟树突状细胞,然后用热休克蛋白融合蛋白刺激其分化成熟,以单核细胞条件培养液(MCM)和模拟的单核细胞条件培养液(MCM mimic)为对照。以流式细胞仪检测树突状细胞表面分子的表达情况。 结果:热休克蛋白融合蛋白可以刺激树突状细胞表面表达CD40、CD80、CD86和HLA-A2分子。结论:热休克蛋白融合蛋白可诱导人树突状细胞分化成熟。  相似文献   

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