胰腺癌组织乙酰肝素酶表达及其与肿瘤血管形成及预后关系的研究

目的:研究乙酰肝素酶(heparanase,HPSE)在胰腺癌组织中的表达及其与肿瘤血管形成及预后的关系.方法:采用免疫组织化学方法,分别应用HPSE抗体和CD34单克隆抗体检测47例胰腺癌、24例癌旁胰腺和10例正常胰腺组织中HPSE蛋白的表达.同时检测胰腺癌组织中CD34及微血管密度(MVD),分析HPSE蛋白的表达与胰腺癌临床病理学特征的关系,以及CD34在胰腺癌组织中的表达及微血管的分布特点及HPSE表达与MVD之间的相关性.结果:47例胰腺癌组织HPSE表达阳性率为59.6%(28/47),明显高于癌旁组织(20.8%,5/24 )和正常胰腺组织(20.0%,2/10),χ2值分别为9.59和3.90;P值分别为0.002 0和0.0487 1.HPSE表达阳性率与胰腺癌的大小和组织学分级无关,χ2值分别为1.09和2.89; P值分别为0.580 4和0.235 8.HPSE阳性表达率在有周围脏器浸润的胰腺癌组织中为73.3%,无浸润者为35.2%,两者间差异有统计学意义,χ2=6.52, P=0.010 7;伴淋巴结和远隔脏器转移者的胰腺癌组织HPSE阳性表达率为80.0%,高于无转移者的36.4%,差异有统计学意义,χ2=9.25, P=0.002 4 .生存期≤1年的胰腺癌组织中HPSE阳性率(70.54 %)明显高于生存期>1年(30.76%),χ2=6.19, P=0.012 8.47例胰腺癌组织中MVD为37.61±14.32,HPSE表达和胰腺癌组织中的MVD呈显著的正相关性,t= 5.09,P=0.000 0.结论:HPSE在胰腺癌的发生、侵袭转移和血管生成中发挥重要作用,可作为判断胰腺癌生物学行为和预后的有用指标.     

肝素酶调节对肝癌细胞粘附?侵袭能力的影响

  目的  探讨人肝素酶(HPSE)对肝癌细胞粘附、侵袭能力的影响。   方法  RT-PCR、Western blot检测人肝癌细胞系BEL-7402、HepG2、HCCLM3中HPSE的表达。构建4个HPSE的miR载体pcDNATM6.2-GW/EmGFP-miR-HPSE(pcDNA-miR-HPSE)和表达载体pIRES2-EGFP-HPSE; 分别转染HPSE高表达和低表达细胞。荧光显微镜观察转染效率, RT-PCR和Western blot检测转染细胞HPSE表达; 酶标仪检测细胞粘附能力, Transwell小室检测侵袭转移能力。   结果  HPSE mRNA和蛋白在在3种肝癌细胞中相对表达量均高于正常肝细胞(P < 0.05), 以HCCLM3表达最高, HepG2最低(P < 0.05);4种miR载体和表达载体鉴定符合要求; 转染效率75%~85%;miR载体均能抑制HCCLM3细胞HPSE表达, 以pcDNA-miR-HPSE-1抑制效果最佳(P < 0.01);表达载体可提高HepG2细胞HPSE表达(P < 0.05);HCCLM3细胞转染pcDNA-miR-HPSE-1后, 粘附率、侵袭和迁移细胞数均下降约50%(P < 0.01);HepG2细胞转染pIRES2-EGFP-HPS后上述各指标分别升高近40%(P < 0.05)。   结论  不同性质的HPSE载体可对肝癌细胞粘附和侵袭转移能力进行双向调节; HPSE不但参与肝癌细胞侵袭转移, 亦可能与肝癌细胞粘附有关。      

多发性骨髓瘤骨髓组织中p53与血管新生的关系

目的　研究多发性骨髓瘤骨髓组织中 p5 3基因和VEGF表达与血管新生的关系。 方法　应用原位杂交及免疫组化染色技术对 4 2例多发性骨髓瘤患者骨髓组织中VEGF、p5 3及微血管密度 (MVD)进行检测。结果　VEGF的阳性率为 5 2 .4 % (2 2 /4 2 ) ,p5 3的阳性率为2 1.4 % (9/4 2 )。经连续切片对比及统计学分析显示 ,p5 3的表达与VEGF的表达显著相关 (P <0 .0 5 ) ;并且p5 3阳性组MVD显著高于阴性组MVD(P <0 .0 1) ,VEGF阳性组MVD显著高于阴性组MVD(P <0 .0 1)。结论　多发性骨髓瘤骨髓组织中 p5 3突变可以上调VEGF的表达 ,促进血管新生。     

非小细胞肺癌微血管计数与血管内皮生长因子表达

目的　探讨血管内皮生长因子 (VEGF)在非小细胞肺癌 (NSCLC)浸润和转移中的作用。方法　应用免疫组化法检测 6 5例癌组织中VEGF蛋白的表达及微血管计数 (MVC)。结果　NSCLC组织中VEGF阳性表达率为 83 .1%(5 4/ 6 5 ) ,有转移组癌组织中VEGF阳性表达比例 (10 0 %,44/ 44)以及MVC(5 8.90± 31.45 )均显著高于无转移组 (47.6 %,10 / 2 1;2 1.44± 12 .77) (P <0 .0 1) ;Ⅲ期肺癌VEGF表达阳性率 (10 0 %,2 9/ 2 9)以及MVC(6 0 .2 4± 2 8.2 9)亦显著高于Ⅰ和Ⅱ期肺癌 (6 9.4%,2 5 / 36 ;19.5 3± 16 .2 7) (P <0 .0 1)。VEGF表达强度与MVC间有密切关系。在不同组织学类型及肿瘤直径间VEGF阳性率和MVC均未见显著性差异 (P >0 .0 5 )。结论　VEGF可能在NSCLC浸润和转移过程中发挥重要作用 ,检测VEGF表达及MVC有助于判断NSCLC转移及预测患者预后。     

垂体腺瘤的血管生成、c-myc表达与侵袭性的相关意义

目的　探讨微血管密度 (microvesseldensity,MVD)、c -myc表达与肿瘤侵袭性的关系。方法　应用EnVision二步法免疫组化技术检测 5 8例垂体腺瘤的MVD、c-myc表达情况 ;分为侵袭组和非侵袭组进行统计学分析 ,并对MVD与c-myc的表达强度进行相关性分析。结果侵袭性垂体腺瘤MVD为 6 .78± 1.6 7;非侵袭性垂体腺瘤MVD为 3.72± 1.0 2 ;差异有显著性 (P <0 .0 0 1)。各型垂体腺瘤中c -myc均有表达 ,总阳性率为 37.9% ;其中侵袭性垂体腺瘤的阳性率为 5 5 .5 6 % ,非侵袭性垂体腺瘤的阳性率为 2 2 .5 8%。差异有显著性 (P <0 .0 5 ) ,侵袭性垂体腺瘤c -myc高表达。直线相关分析显示 ,c -myc表达强度与MVD呈显著正相关 (r=0 .5 5 4 ,P <0 .0 1)。结论　侵袭性垂体腺瘤MVD增高、c -myc高表达 ,是反映垂体瘤侵袭能力及预后的有用指标。侵袭性垂体腺瘤MVD与c -myc表达强度密切相关 ,提示c -myc表达强度与垂体腺瘤MVD在判定垂体腺瘤侵袭性方面有意义     

环氧化酶-2在非小细胞肺癌的表达及与肿瘤血管生成的研究

目的　为探讨COX 2对非小细胞肺癌发生发展的影响 ,我们对肺癌患者与肺部良性疾病患者肺组织中COX 2表达情况进行了比较 ,并研究了COX 2与肺癌临床病理特征的关系及对肿瘤血管生成的影响。方法　免疫组化检测非小细胞肺癌COX 2表达、血管内皮生长因子 (VEGF)表达 ,并测定肿瘤微血管密度 (MVD)。结果　非小细胞肺癌组织COX 2蛋白阳性表达率为 69.2 % (5 4/78) ,显著高于良性对照组织的14 .3 % (2 /14 ) (χ2 =15 .0 44 ,P <0 .0 1)。COX 2表达阳性组MVD计数 (19.41± 8.5 6)显著高于COX 2表达阴性组 (12 .0 0± 5 .3 7) (t=3 .90 6,P <0 .0 1)。COX 2表达与肺癌患者性别、年龄、吸烟史及TNM分期无明显关系 (P >0 .0 5 ) ;在不同肿瘤的病理类型中 ,腺癌组织COX 2表达率为 88.9% (3 2 /3 6) ,显著高于鳞癌的5 0 .0 % (2 0 /4 0 ) (χ2 =13 .2 62 ,P <0 .0 1) ;鳞癌组织中低分化癌组织表达率为 81.0 % (17/2 1) ,显著高于中高分化癌组织的 15 .8% (3 /19) (χ2 =16.942 ,P <0 .0 1) ;腺癌组织中低分化癌组织表达率为 10 0 .0 % (18/18) ,显著高于中高分化癌组织的 77.8% (14 /18) (χ2 =6.0 46,P <0 .0 5 )。相关关系分析显示肺癌COX 2表达与VEGF表达呈显著正相关 (r =0 .5 0 9,P <0 .0 1) ;VEGF表达与MVD呈     

胃癌组织中MMP-9表达、微血管生成与胃癌侵袭与转移

目的　探讨胃癌组织基质金属蛋白酶 - 9(MMP - 9)基因表达与血管生成相关性及其在胃癌侵袭、转移中的作用。方法　采用免疫组化SP法 ,用抗MMP - 9及抗血管内皮细胞CD34单克隆抗体对 40例胃癌组织标本进行标记分析。结果　弥漫型胃癌、有淋巴结转移组MMP 9阳性表达率分别明显高于肠型胃癌和无淋巴结转移组 (P值分别 <0 .0 5和 0 .0 1 ) ;有淋巴结转移组、远外转移组胃癌组织微血管密度 (MVD)显著高于无淋巴结和远处转移组 (P值分别 <0 .0 1和 0 .0 5) ;MMP 9阳性表达组胃癌MVD显著高于阴性表达组 (34 .5± 8.3Vs 2 6 .8± 1 0 .4,P <0 .0 5)。结论　胃癌组织中基质金属蛋白酶 9的基因表达及微血管生成与胃癌侵袭、转移密切相关 ,MMP 9与胃癌血管生成关系密切。联合检测MVD及MMP 9表达对胃癌治疗和预后判断有一定价值     

原发性肝癌中结构型一氧化氮合酶mRNA的表达及其意义

目的　观察结构型一氧化氮合酶 (cNOS)在正常肝组织、肝硬化和原发性肝细胞癌 (以下简称肝癌 )中的表达情况 ,探讨其在肝癌的发生、血管生成、肿瘤细胞增殖和转移过程中的作用。方法　运用原位杂交技术检测cNOSmRNA在 2 0例正常肝组织、4 0例肝硬化、80例肝癌标本中的表达分布和定位情况 ;采用S P免疫组化方法测量组织的微血管密度 (MVD)和细胞增殖指数。结果　肝癌及非癌性肝组织中血管内皮细胞、肝癌细胞及单核和 (或 )吞噬细胞上均可见有cNOSmRNA的表达。肝癌中癌细胞cNOSmRNA阳性表达率明显高于肝硬化组织中的肝细胞 (P <0 .0 1) ,而正常肝组织中的肝细胞未见有cNOSmRNA的表达 ,肝癌、肝硬化中内皮细胞cNOSmRNA阳性表达率明显高于正常肝组织 (P <0 .0 1)。肝癌组织中内皮细胞cNOSmRNA阳性表达者的MVD、细胞增殖指数明显高于阴性表达者 (P <0 .0 1,<0 .0 5 )。肝癌中细胞增殖指数随着MVD的增大而增高 (r =0 .35 77,P <0 .0 1) ,且有转移倾向的肝癌MVD和细胞增殖指数明显高于无转移倾向的肝癌 (P <0 .0 1,<0 .0 5 )。单核和 (或 )吞噬细胞中cNOSmRNA表达在正常肝组织、肝硬化及肝癌之中未见明显差别 ,且与肝癌组织学分型、MVD、细胞增殖指数及转移无关。结论　肝癌细胞cNOSmRNA表达可能与肝癌的发生、     

人胃癌组织中TGFβ1的表达与胃癌血管形成的研究

目的　研究TGFβ1在胃癌组织中表达 ,探讨其在胃癌血管形成中的重要作用。方法　用SP免疫组化法 ,检测 45例胃癌手术切除标本中胃癌TGFβ1蛋白的表达 ,用抗CD34单克隆抗体显示血管内皮细胞。结果　TGFβ1阳性表达产物主要见于细胞的胞质内。胃癌组织中TGFβ1阳性表达率 (6 0 0 %)和强阳性表达率 (2 2 2 2 %)显著高于癌周组织 (2 6 6 7%) (8 89%) (P <0 .0 5 )。胃癌组织和癌周组织中血管内皮细胞质呈棕黄色染色。胃癌组织微血管密度 (MVD)值 (5 8 13± 19 99)显著高于癌周组织 (2 4 0 2± 10 2 8) (P <0 0 5 )。TGFβ1表达阳性MVD值 (6 0 94± 16 91)显著高于表达阴性MVD值 (40 2 6± 18 83) (P <0 0 5 )。结论　TGFβ1在胃癌组织中高水平表达 ,它可能参与胃癌的血管形成。     

涎腺多形腺瘤与腺样囊性癌中MMP-2的表达差异与MVD的关系

目的　研究基质金属蛋白酶 2 (MMP 2 )在涎腺肿瘤中表达及对微血管密度的影响。探讨其与该肿瘤侵袭和转移的关系。方法　应用免疫组化S P法观察 3 6例涎腺肿瘤石蜡包埋组织中的MMP 2、CD3 4表达。并在CD3 4染色切片上检测间质微血管密度(MVD)。结果　MMP 2在涎腺腺样囊性癌中高表达阳性率 ( 68 2 %) ,明显高于涎腺多形性腺瘤 ( 2 8 6%)。涎腺腺样囊性癌中的MVD的平均值 ( 63 41± 4 43 )明显高于涎腺多形性腺瘤 ( 4 5 43± 4 3 0 )。MMP 2高表达阳性组的MVD的平均值 ( 66 84± 4 65 )明显高于MMP 2表达阴性组 ( 4 4 76± 3 5 3 )。结论　MMP 2促进涎腺肿瘤间质血管生成 ,促进肿瘤的侵袭和转移 ,有可能成为判定涎腺肿瘤生物学行为和预后的指标     

乙酰肝素酶mRNA表达和血管生成与胃癌发展的关系

目的　探讨乙酰肝素酶mRNA表达状况和血管生成与胃癌发展的关系。方法　应用原位杂交技术 ,检测 5 2例胃癌组织中乙酰肝素酶mRNA的表达情况 ,并用免疫组化法对全部标本用CD34抗体进行肿瘤血管内皮染色 ,计数肿瘤微血管密度 (MVD) ,分析乙酰肝素酶mRNA与MVD及其与胃癌组织分化程度、浸润深度、淋巴结转移和器官转移的关系。结果　胃癌组织乙酰肝素酶mRNA阳性表达 2 5例 (4 8.1% ) ,MVD平均值为 73.2± 2 2 .8;阴性表达 2 7例 (5 1.9% ) ,MVD平均值为 4 4 .8±11.9,两者之间差异有显著性 (P <0 .0 0 1)。乙酰肝素酶mRNA表达和MVD与胃癌组织浸润深度、淋巴结转移有关 (P <0 .0 0 5 )。结论　乙酰肝素酶与胃癌的血管生成密切相关 ,对胃癌的生长和浸润转移有促进作用 ,乙酰肝素酶可作为反映胃癌生物学行为的客观指标。     

乙酰肝素酶与大肠癌浸润、转移和血管生成的相关性

 目的 探讨乙酰肝素酶与大肠癌浸润、转移和血管生成之间的关系。方法 应用原位杂交方法检测乙酰肝素酶mRNA在95例大肠癌组织中的定位及表达。并用免疫组化方法对全部标本进行CDl05染色，记数肿瘤微血管密度（microvessel density，MVD），分析乙酰肝素酶mRNA表达与大肠癌浸润、转移和MVD之间的关系。结果 95例大肠癌组织中，乙酰肝素酶mRNA阳性表达49例（51．57％），MVD平均值为（72．1±20．6）；阴性表达46例（48．42％），MVD平均值为（41．3±12．4），差异有统计学意义（P〈0．01）。乙酰肝素酶tuRNA表达与大肠癌组织浸润深度、淋巴结转移及MVD有关（P〈0．05）。结论 乙酰肝素酶可促进大肠癌的浸润、转移和血管生成，可作为反映大肠癌生物学行为的客观指标。     

乙酰肝素酶在乳腺癌组织中的表达与肿瘤血管形成及预后的关系

背景与目的:乙酰肝素酶是一类裂解硫酸乙酰肝素的糖苷内切酶,通过降解肿瘤细胞胞外基质及基底膜和促进新生血管形成加速肿瘤扩散和转移。本研究探讨乳腺癌组织中乙酰肝素酶表达与血管生成及预后的关系。方法:采用免疫组化方法,分别应用乙酰肝素酶抗体及CD34单克隆抗体检测120例浸润性乳腺癌组织中乙酰肝素酶的表达和微血管密度(microvesseldensity,MVD),并与患者年龄、肿瘤大小、组织学分级、腋淋巴结转移、临床分期及5年生存率进行相关分析。统计学分析采用χ2检验和t检验、Kaplan-Meier及log-rank检验。结果:①乳腺癌组织中乙酰肝素酶的阳性率为65%,与正常乳腺组织中的阳性率有显著性差异(P<0.05);乳腺癌组织中MVD值为53.84±13.45,显著高于正常对照组(33.32±8.55)(P<0.01)。②乙酰肝素酶的表达与乳腺癌肿瘤大小、组织学分级及腋淋巴结转移率、临床分期、5年生存率密切相关(P<0.05)。③乙酰肝素酶的表达与乳腺癌血管生成有关,乙酰肝素酶高表达组MVD值大于低表达组(P<0.05),两者呈显著正相关(r=0.358,P<0.05)。结论:乙酰肝素酶与乳腺癌血管形成及预后关系密切。     

人肝癌组织中iNOS、VEGF的表达及微血管密度的病理意义

背景与目的:诱导型一氧化氮合酶(inducible nitric oxide synthase,iNOS)和血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)被认为是诱导和调节肿瘤血管生成,进而影响肿瘤病理进展和预后的重要相关因子。本研究检测人肝细胞癌(hepatocellular carcinoma,HCC)及相应癌旁组织中iNOS、VEGF的表达,探讨其与血管生成的关系,为临床诊治HCC及判断其预后提供理论依据。方法:应用组织芯片技术,采用原位杂交和免疫组化法分析147例HCC组织及癌旁组织中iNOS、VEGF的表达,并用CD34标记免疫组化法检测微血管密度(microvessel density,MVD)。结果:iNOS、VEGF在癌旁组织中的阳性率分别为33.33%和40.82%,而在癌组织中的阳性率分别为86.39%和78.91%,癌组织与癌旁组织比较差异有显著性(P<0.01)。癌组织的MVD值为56.5±12.8,癌旁组织的MVD值为8.4±3.6,两者差异有显著性(P<0.01)。iNOS的表达与肿瘤大小、乙型肝炎表面抗原(HBsAg)相关(P<0.05),而与转移和肿瘤分化程度无关(P>0.05)。VEGF的表达及MVD值与肿瘤大小、转移相关(P<0.05),而与HBsAg和肿瘤分化程度无关(P>0.05)。在癌组织中MVD与VEGF、iNOS的表达呈正相关,VEGF和iNOS之间亦存在正相关关系(P<0.01)。结论:HCC中iNOS及VEGF的表达与肿瘤血管生成有关。癌组     

Heparanase expression is an independent prognostic factor in patients with invasive cervical cancer.

BACKGROUND: Endoglycosidic heparanase degrades heparan sulfate glycosaminoglycans, and may be important in cancer invasion and metastasis, although its expression in human cervical cancer has not been characterized. MATERIALS AND METHODS: Heparanase association with clinicopathological features related to prognostic significance was examined in patients presenting with invasive cervical cancer. Gene expression of heparanase was assessed by RT-PCR in 10 normal cervix and 92 invasive cervical cancer samples. RESULTS: Heparanase mRNA expression was not detected in any of the normal cervix specimens, but was significantly higher in advanced-stage tumors (P = 0.026). In cases treated with radical hysterectomy and pelvic lymphadenectomy, heparanase mRNA expression was significantly higher in tumors exhibiting lymph-vascular space invasion (P = 0.01). A significant relationship was found between microvessel counts and heparanase mRNA expression (P = 0.035). The disease-free and overall survival rates of patients exhibiting heparanase mRNA expression were significantly lower than those of patients lacking heparanase mRNA expression (P = 0.019 and 0.017, respectively). Furthermore, multivariate analysis showed that heparanase mRNA expression was an independent prognostic factor for both disease-free and overall survival. CONCLUSIONS: These findings provide evidence that heparanase expression can serve as an indicator of aggressive potential and poor prognosis in cervical cancer. Consequently, heparanase inhibitor will be a novel candidate for therapeutic intervention in this disease.     

Coexpression of inducible nitric oxide synthase and COX-2 in hepatocellular carcinoma and surrounding liver: possible involvement of COX-2 in the angiogenesis of hepatitis C virus-positive cases.

Expression of inducible nitric oxide synthase (iNOS) and cyclooxygenase-2 (COX-2) has been reported to be responsible for enhanced tumor growth and angiogenesis in various tumors. However, the relationships between tumor vascularity and COX-2 and iNOS expression have not been evaluated in hepatocellular carcinoma (HCC). In this study, we examined the expression of iNOS and COX-2 and microvessel density (MVD) by immunohistochemical staining in 100 tissue sections collected from HCC patients. iNOS expression was significantly higher in hepatitis C virus (HCV)-positive HCCs (P = 0.011). COX-2 expression was significantly correlated with iNOS expression (P = 0.046) and tumor MVD (P = 0.011) in HCV-positive HCCS: iNOS expression was neither correlated with MVD nor had any influence on patient survival; however, combined negative expression of iNOS and COX-2 had a significant impact on patient survival (P = 0.041 and 0.018, log-rank test for overall and recurrence-free survival rate, respectively). The present findings suggest that combined expression of iNOS and COX-2 may play an important role in prognosis of HCV-positive HCC patients and that this could be partially attributable to modulation of angiogenesis by COX-2.     

Tissue factor expression correlates with tumor angiogenesis and invasiveness in human hepatocellular carcinoma.

PURPOSE: Recent studies have shown that tissue factor (TF) may be involved in tumor angiogenesis and metastasis. The role of TF in hepatocellular carcinoma (HCC) was unknown. This study evaluated whether TF expression correlates with microvessel density (MVD), vascular endothelial growth factor (VEGF) expression, tumor invasiveness, and prognosis in human HCC. EXPERIMENTAL DESIGN: Tissue samples were obtained from 58 specimens of resected HCC. Immunohistochemical expression of TF was examined, and tumor MVD was evaluated using CD34 as the endothelial marker. TF and VEGF protein levels in the tumor cytosol were quantified by ELISA. Clinicopathologic and follow-up data of patients were prospectively collected. RESULTS: The immunohistochemical expression of TF in the tumors correlated significantly with tumor MVD (P = 0.002). The median cytosolic TF protein level in the tumors was 720 pg/mg total protein (range, 67-2406 pg/mg total protein). A significant positive correlation was found between TF and VEGF levels in the tumor cytosol (r = 0.475, P < 0.001). High tumor cytosolic TF level was associated with venous invasion (P = 0.004), microsatellite nodules (P = 0.024), unencapsulated tumor (P = 0.007), and advanced tumor stage (P = 0.010). A higher than median tumor cytosolic TF level was an independent predictor of poor survival (risk ratio, 1.836; 95% confidence interval 1.130-5.312, P = 0.023). CONCLUSIONS: This study shows that TF is related to tumor angiogenesis and invasiveness in HCC. Evaluation of tumor TF expression may be useful as a prognostic indicator in patients with HCC.