电针足三里激活胆碱能抗炎通路抗大鼠失血性休克的研究

目的:观察电针足三里穴对失血性休克大鼠平均动脉压(M AP)、动脉血乳酸及生存指标的影响,探讨其对失血性休克的保护作用及其可能机制。方法:100只雄性SD大鼠按随机数字表法分为假休克组、休克组、非经非穴组、足三里组、迷走神经切断组、迷切后电针组、M受体拮抗组、N受体拮抗组、N受体α7亚单位拮抗组和胆碱酯酶抑制组10组,每组10只。采用股动脉间断放血法复制失血性休克模型,于模型制备成功即刻(0 m in),以2~4 V和3 H z的强度持续电针刺激双侧足三里穴30 m in。刺激开始前颈总动脉置管连续监测M AP,0 m in和43 m in时分别取股动脉血检测乳酸值。另取40只大鼠随机分为假休克组、休克组、非经非穴组和足三里组(处理与以上前4组相同)4组,观察生存状况,除此以外不作其他干预,记录生存时间及存活率。结果:休克组M AP持续较低,43 m in时的乳酸值较0 m in明显上升,平均生存时间和各时间点的存活率也显著降低(P均<0.01);而非经非穴组上述情况与休克组相比无明显改变(P均>0.05);但电针足三里穴后M AP迅速显著升高,43 m in时的乳酸值较0 m in显著下降,平均生存时间和各时间点的存活率均显著提高(P均<0.01)。电针足三里前离断迷走神经,上述作用则完全消失。电针足三里前静脉注射阿托品,仍可产生与足三里组类似的保护效应,但电针足三里前静脉注射六烃季胺或αBGT,均可完全抵消上述保护效应。结论:电针足三里穴具有潜在的抗失血性休克作用,并且是通过激活胆碱能抗炎通路而实现的。     

神经电刺激在抗炎治疗中的作用及机制研究进展

神经电刺激是一种利用电流刺激神经系统从而调节中枢神经系统或周围神经系统功能的神经调控技术,近年来已被成功应用于慢性神经精神疾病如癫痫、帕金森病、难治性抑郁症和强迫症等的治疗中,并因其安全、经济、耐受性好、副作用少等优势获得了人们的广泛关注.随着神经电刺激技术的不断发展,越来越多的动物和实验临床研究发现其可能通过激活胆碱能通路、下丘脑-垂体-肾上腺轴通路等在炎性疾病中发挥抗炎作用.现将神经电刺激在抗炎治疗中的作用及机制综述如下,以期为抗炎治疗提供新方法和新思路.     

对胆碱能抗炎通路研究的新认识

炎症反应是机体对损伤和感染所表现出来的红肿热痛,在保护机体免受侵害的过程中起到很重要的作用[1].免疫系统是机体抵御病原体入侵的第一道防线,其功能正常对机体的存活是至关重要的[2].免疫反应的显著特征是在炎症条件下由免疫细胞产生和释放细胞因子,病原体的侵入和损伤可激活某些局部炎症反应释放细胞因子,包括肿瘤坏死因子(TNF)、白细胞介素(IL-1、IL-6)和高迁移率族蛋白B(HMGB)等,这是一种精确的紧密的可控性的反应[3-4].     

ghrelin对失血性休克大鼠胃黏膜的保护作用

目的 探讨重组大鼠ghrelin对失血性休克大鼠胃黏膜损伤的影响.方法 18只健康雄性SD大鼠被随机分为对照组、失血性休克组、ghrelin治疗组3组.每组6只.失血性休克组及ghrelin治疗组制备失血性休克模型.ghrelin治疗组休克复苏的同时经颈内静脉推注重组大鼠ghrelin 20μg/kg.于复苏后2 h使用激光多普勒血流仪测定大鼠胃黏膜血流量;用光镜及透射电镜观察胃黏膜损伤情况.结果 失血性休克组胃黏膜血流量较对照组明显降低(260.4±49.6)bpu比(418.6±57.3)bpu,P<0.013,胃黏膜细胞坏死、脱落、溶解,局部溃疡形成.ghrelin治疗组胃黏膜血流量较失血性休克组明显提高((352.9±72.9)bpu比(260.45±49.6)bpu,P<0.05),且与对照组比较差异无统计学意义(P>0.05);胃黏膜损伤显著改善.结论 重组大鼠ghrelin能够提高失血性休克大鼠胃黏膜血流量,改善胃黏膜缺血/再灌注损伤.     

地塞米松对大鼠创伤失血性休克模型的保护作用

目的探讨早期大剂量地塞米松对大鼠创伤失血性休克的保护作用.方法制作创伤失血性休克大鼠动物模型,随机分为正常对照组(A组)、创伤失血性休克组(B组)、创伤失血性休克地塞米松处理组(C组).分别于模型完成的1、2、3、6、12 h时间点测血浆肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素(IL)-1β、IL-10水平,取肺、脾做光镜检查.结果大鼠遭受创伤失血性休克打击后,血浆TNF-α水平持续增高,6 h达高峰;IL-1β、IL-10持续增高;光镜下肺损伤,脾小体萎缩、坏死,败血脾.地塞米松能显著降低血浆TNF-α、IL-1β、IL-10的表达水平,减轻脾、肺组织损伤,脾小体持续增生.结论早期大剂量地塞米松抑制过度炎症反应的同时,抑制IL-10的高水平表达,显示了较好的免疫调理作用.     

高渗盐水对创伤失血性休克兔促炎与抗炎细胞因子和黏附分子表达的影响及其意义

目的研究高渗盐水(HS)对创伤失血性休克时促炎与抗炎细胞因子和黏附分子表达的影响及其在急性肺损伤(ALI)防治中的作用。方法新西兰白兔30只随机分为3组:假手术组(Sham组)、生理盐水处理组(NS组)、高渗盐水治疗组(HS组)。双抗体夹心ELISA法测定休克前、休克末及复苏后2、4h血清肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素(IL)-6、IL-10及可溶性细胞间黏附分子-1(sICAM-1)的浓度;逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测肺组织各细胞因子及细胞间黏附分子-1(ICAM-1)和mRNA表达水平;显微镜观察肺组织的病理改变。结果与NS组比较,HS组复苏后4hTNF-α、IL-6、ICAM-1血清浓度及肺组织表达水平均有不同程度下降,而IL-10的浓度及mRNA水平明显增高(P<0·05,P<0·01),肺组织的病理学损伤显著减轻。结论HS治疗可抑制创伤失血性休克时促炎细胞因子及黏附分子的合成、分泌或表达,同时增加抗炎细胞因子的释放与表达,减轻肺部的炎症反应,发挥对肺损伤的保护作用。     

胆碱能抗炎通路对大鼠呼吸机相关性肺损伤的影响

目的 研究胆碱能抗炎通路对呼吸机相关性肺损伤(VILI)的影响.方法 36只SD大鼠按随机数字表法分为自主呼吸对照组、机械通气组、烟碱治疗组,每组12只.采用大潮气量(VT)通气制作大鼠VILI模型.于机械通气前10 min腹腔注射烟碱生理盐水2 mg/kg,其余两组注射等量生理盐水.各组大鼠均行血流动力学和动脉血气监测;通气2 h处死大鼠取肺组织,测定肺湿/干重(W/D)比值和髓过氧化物酶(MPO)活性,采用酶联免疫吸附法(ELISA)测定支气管肺泡灌洗液(BALF)中白细胞介素-8(IL-8)含量及肺组织匀浆细胞间黏附分子-1(ICAM-1)含量;苏木素-伊红(HE)染色观察肺组织病理改变,按修改后弥漫性肺泡损伤评分系统(DAD)进行评分.结果 机械通气期间,机械通气组和烟碱治疗组动脉血pH值呈升高趋势,动脉血氧分压(PaO2)、动脉血二氧化碳分压(PaCO2)、平均动脉压(MAP)均呈下降趋势.机械通气2 h,烟碱治疗组PaO2(mm Hg,1 mm Hg=0.133 kPa)显著高于机械通气组(85±4比76±3,P<0.05).机械通气组肺W/D比值和MPO活性显著高于对照组[W/D比值:5.66±0.33比4.53±0.21,P<0.01;MPO(U/g):1.73±0.50比0.89±0.17,P<0.05];烟碱治疗组肺W/D比值(5.02±0.37)和MPO活性(1.11±0.33)显著低于机械通气组(均P<0.05).与对照组比较,机械通气组和烟碱治疗组DAD评分(分:10.40±1.85、7.90±1.67比1.60±1.20)、IL-8(ng/L:1 625.3±271.7、965.5±310.5比428.5±120.6)及ICAM-1(μg/L:589.4±87.5、452.5±89.3比247.5±73.7)显著升高(均P<0.01),但烟碱治疗组各指标明显低于机械通气组(P<0.05或P<0.01).结论 胆碱能抗炎通路可抑制VILI大鼠肺组织中IL-8、ICAM-1的表达,减少中性粒细胞在肺内的黏附与渗出,从而减轻肺损伤.     

抑制核因子-κB对创伤休克大鼠肝脏热休克蛋白70的影响

目的 探讨抑制核因子-κB(NF-κB)后热休克蛋白70(HSP70)在创伤失血性休克肝组织中的变化及其对肝脏结构和功能的影响.方法 雄性健康Wistar大鼠66只,采用双侧股骨骨折伴失血性休克创伤模型,随机分成正常对照组6只,创伤休克组30只,NF-κB抑制伴创伤休克组30只,NF-κB抑制采用致伤前1 h腹腔注射二硫代氨基甲酸吡咯烷(PDTC)200mg/kg.动态观察伤后0.5、2、4、6、8h大鼠肝组织NF-κB、HSP70、肝脏病理、肝功能、TNF-α、IL-6等变化.NF-κB采用EMSA法测定结合活性,HSP70采用免疫印迹法测定其蛋白含量,并进行计算机图像分析.数据采用SPSS 12.0软件分析,两组间比较采用成组资料的t检验.结果 NF-κB的活性伤后迅速升高,伤后6 h达到高峰;HSP70伤后2 h较正常对照相比[(10.8±1.1)、vs.(4.7±0.5),P＜0.01],伤后6 h达到高峰,和正常组相比[(23.0±1.7)vs.(4.7±0.5),P＜0.01].TNFα、IL-6伤后逐渐升高,并于伤后6 h达到高峰,和正常组相比[TNF-α(173.7±12.1)vs.(30.8±1.8)pg/ml,P＜0.01;IL-6(175.5±12.5)vs.(10.4±0.7)pg/ml,P＜0.01];伤后8 h光镜下可见肝窦内淤血明显,有大量炎性细胞浸润;血清ALT、TB伤后4 h开始增高,8 h达到峰值,和创伤组相比[ALT(640.6±80.2)vs.(536.8±60.0)nmol-1·L-1,P＜0.01;TB(4.7±1.1)vs.(1.6±0.2)mol/L,P＜0.01].抑制NF-κB再致伤后,HSP70在肝组织中表达仍然较高,但在伤后各个时相点的表达均较未抑制NF-κB创伤性休克伤组明显回落;伤后6 h和创伤组相比[(16.9±4.4)vs.(23.0±1.7),P＜0.05].TNF-α、IL-6伤后各个时相点均迅速回落,伤后6 h,和创伤组相比[TNF-α(135.2±10.2)vs.(173.7±12.1)pg/ml,P＜0.05;IL-6(113.0 4±10.8)vs.(175.5±12.5)pg/ml,P＜0.05];肝脏大体淤血、肿胀明显减轻;伤后8 h光镜下可见肝细胞变性明显好转,肝窦内淤血减轻,仅见少许淋巴细胞及中性粒细胞浸润;伤后4 h,血清ALT、TB即明显下降,和未抑制组相比[ALT(540.8±66.2)vs.(640.6±80.2)nmol-1·L-1,P＜0.05;TB(2.3±0.3)vs.(4.7±1.1)mol/L,P＜0.05].结论 NF-κB、HSP70参与了严重创伤失血性休克后肝损伤与抗损伤的发生,抑制NF-κB的活性有助于减轻创伤失血性休克后肝脏的急性损害,NF-κB、HSP70可作为反映创伤休克后肝脏损害程度的重要应激指标.     

肠系膜淋巴管结扎对失血性休克大鼠的器官保护作用

目的 观察肠系膜淋巴管结扎对失血性休克大鼠肠、肝、肺组织细胞因子表达以及组织病理学的影响.方法 24只SD大鼠被随机均分成对照组、失血性休克组、失血性休克+肠系膜淋巴管结扎组.采用逆转录一聚合酶链反应(RT-PCR)检测各组大鼠肠、肝、肺组织肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-6(IL-6)的mRNA表达;苏木素一伊红(HE)染色观察各组织的病理学改变.结果 失血性休克大鼠肠、肝、肺组织TNF-α mRNA和IL-6 mRNA表达均较对照组明显升高(TNF-α mRNA:肠0.54±0.07比0.37±0.05,肝1.014-0.06比0.56±0.07,肺0.94±0.07比0.62±0.06;IL-6 mRNA:肠0.89±0.12比0.50±0.09,肝1.07±0.10比0.57±0.12,肺1.09±0.09比0.67±0.06,P均<0.01);肠系膜淋巴管结扎可明显降低肠、肝、肺组织TNF-αmRNA和IL-6 mRNA表达(TNF-α mRNA:肠0.47±0.05比0.54±0.07,肝0.81±0.07比1.01±0.06,肺0.80±0.05比0.94±0.07;IL-6 mRNA:肠0.66±0.07比0.89±0.12,肝0.83±0.13比1.07±0.10,肺0.73±0.11比1.09±0.09,P<0.05或P<0.01).组织病理学观察显示,肠系膜淋巴管结扎可明显减轻失血性休克引起的肠黏膜绒毛坏死、脱落;减轻肝细胞变性、坏死;减轻肺水肿和炎性细胞浸润.结论 肠系膜淋巴管结扎可降低失血性休克大鼠肠、肝、肺组织细胞因子TNF-α、IL-6的表达及病理损伤程度,对器官功能起保护作用.     

失血性休克大鼠器官组织中促炎细胞因子表达及释放的时相性研究

目的探讨休克后促炎细胞因子表达释放的时相性变化。方法80只SD大鼠被随机分为失血性休克组（40只）和对照组（40只）。于休克后30、60和90min及复苏后30min和90min各处死8只大鼠，采用逆转录-聚合酶链反应（RT～PCR）检测失血性休克后各时间点肠、肝、肺组织内肿瘤坏死因子-α（TNF—α）、白细胞介素-1β（IL-1β）、IL-6的mRNA表达，采用酶联免疫吸附试验（ELISA）双抗体夹心法测定血清中TNF—α、IL-6的含量。结果①休克30min时，肠、肝、肺组织中促炎细胞因子的mRNA表达均未见升高；休克60min肠道首先出现TNF—α mRNA表达升高（P〈0．05），而肝脏在休克90min时表达开始升高（P〈0．01），肺脏则在复苏后30min表达开始升高（P〈0．05）。复苏后90min肠、肝、肺组织中TNF—α mRNA表达仍高于对照组（P均〈0．01）。TNF—α mRNA在肠、肝、肺内的表达升高最早，其后才是IL-1β mRNA和IL-6 mRNA。②休克30min门静脉血和下腔静脉血中TNF—α、IL-6的含量与对照组比较差异均无显著性，而休克60min时门静脉血中TNF—α含量显著升高（P〈0．05）；休克90min、复苏后30min和90min门静脉血和下腔静脉血中TNF—α、IL-6含量均较对照组显著升高（P均〈0．01）。结论失血性休克时细胞因子的释放顺序县肠道、肝脏和肺脏。椎测存在“肠→肝→肺”细胞因子释放轴。     

The protective effect of the cholinergic anti-inflammatory pathway against septic shock in rats

To investigate the effects of the cholinergic anti-inflammatory pathway on hemodynamics, blood biochemistry, the plasma TNF-alpha level, and the nuclear factor-kappaB (NF-kappaB) activation during septic shock, male Sprague-Dawley rats were subjected to cecal ligation and puncture (CLP, a model of polymicrobial sepsis) or sham operation. Forty-eight rats were randomly assigned into six equal groups: sham CLP group; CLP group; VGX group was subjected to bilateral cervical vagotomy after CLP; STM group was subjected to bilateral cervical vagotomy after CLP plus the left vagus nerve trunk electrical stimulation; THA group was administered tetrahydroaminoacridine after CLP and bilateral cervical vagotomy; and alpha-BGT group was administered alpha-bungarotoxin before electrical stimulation of the vagus nerve. The right carotid artery was cannulated to monitor MAP. The plasma TNF-alpha level was measured using enzyme-linked immunosorbent assays. The hepatic NF-kappaB activation was determined by Western blotting. Cecal ligation and puncture produced progressive hypotension. Serum aspartate transaminase and alanine transaminase levels significantly increased after CLP challenge. The plasma TNF-alpha level and the hepatic NF-kappaB activation significantly increased after CLP alone or with bilateral cervical vagotomy compared with sham-operated group. Application of constant voltage pulses to the caudal vagus trunk significantly prevented the development of CLP-induced hypotension, alleviated the hepatic damage, and reduced the plasma TNF-alpha production, but electrical stimulation had no effect on the hepatic NF-kappaB activation. Tetrahydroaminoacridine administration after bilateral cervical vagotomy reversed hypotension and attenuated the plasma TNF-alpha response; in addition, it had no effect on the hepatic NF-kappaB activation. alpha-Bungarotoxin pretreatment significantly reversed the inhibitory effect of vagal electrical stimulation, but it had no effect on the hepatic NF-kappaB activation. Our results showed that the cholinergic anti-inflammatory pathway might produce a potential protective effect on polymicrobial sepsis in rats.     

The role of erythropoietin in hemorrhagic shock-induced liver and renal injury in rats

Introduction  The aim of the present study was to evaluate the role of erythropoietin (EPO) in liver and renal injury following hemorrhagic shock (HS) after inhibition of tyrosine kinase activity in rats.. Methods  Forty-eight Sprague-Dawley rats were assigned to six groups: (I) HS alone; (II) HS followed by retransfusion; (III) EPO and genistein followed by HS; (IV) EPO and genistein followed by HS, followed by retransfusion; (V) HS followed by EPO and genistein; and (VI) HS followed by EPO and genistein, followed by retransfusion. HS was induced for 60 minutes after withdrawal of 30% of the calculated total blood volume of each rat from the left femoral artery. Blood and tissue samples (from the kidney and liver) were obtained 60 minutes after HS in Group I, III, and V; blood and tissue samples were obtained 60 minutes after retransfusion in Group II, IV, and VI. In Group III and IV, EPO was given 60 minutes before HS, and genistein 30 minutes before HS. In Group V and VI, EPO and genistein were given 30 minutes after HS. Results  Liver and renal injury were significantly attenuated with EPO and genistein administration. Conclusion  These results suggest that EPO is effective in attenuating liver and renal injury in HS, even with inhibition of tyrosine kinase activity with genistein.     

低分子量肝素对大鼠内毒素休克的保护作用

用大鼠内毒素（ＬＰＳ）休克模型，观测其平均动脉压（ＭＡＰ）、血浆肿瘤坏死因子（ＴＮＦ）、组织因子（ＴＦ）、组织因子途径抑制物（ＴＦＰＩ）含量、抗凝血酶Ⅲ（ＡＴⅢ）活性的变化、血白细胞及血小板计数，探讨低分子量肝素（ＬＭＷＨ）对大鼠内毒素休克的作用。结果：ＬＰＳ组大鼠ＭＡＰ呈进行性下降，血浆ＴＮＦ和ＴＦ含量显著升高，ＡＴⅢ活性明显降低，ＴＦＰＩ／ＴＦ比值降低，血白细胞和血小板计数下降，与对照组比较差异显著；而ＬＭＷＨ＋ＬＰＳ组的以上指标变化与对照组比较均无显著性差异。证明ＬＭＷＨ对ＬＰＳ所致的大鼠休克有保护作用     

低血容量性休克大鼠全身氧动力学的变化研究

目的：研究低血容量性休克时全身氧动力学的变化特点。方法：按４ｍｌ／ｋｇ,每隔０．５分次从静脉放血,观察大鼠休克过程中全身氧供给（ＤＯ２）,氧消耗（ＶＯ２）和氧摄取率（ＥｘｔＯ２）的变化。结果：失血后１．５小时血红蛋白浓度开始显著降低,心率明显加快,失血２．０小时平均动脉压明显下降,此时ＤＯ２亦开始进行性下降,由于ＥｘｔＯ２出现代偿升高,ＶＯ２维持相对不变;     

乌司他丁对创伤失血性休克兔肺损伤的保护作用

目的 探讨乌司他丁对肺缺血-再灌注损伤的保护作用及其机制。方法 新西兰白兔30只,随 机分为假手术对照组、创伤失血性休克组和乌司他丁治疗组。动物模型用经股动脉放血使平均动脉压降至 (40±5)mm Hg(1 mm Hg=0.133 kPa).维持90 min后回输全部失血及等量乳酸林格液进行复苏。复苏后4 h 测定肺组织髓过氧化物酶(MPO)、肺泡灌洗液中中性粒细胞弹性蛋白酶(BALF-NE)活性、肺叶湿／干重比 及肺组织病理学改变。结果 休克组和乌司他丁治疗组MPO含量、BALF-NE活性以及湿／干重比均较假手 术对照组显著增高(P均<0.05),乌司他丁治疗组各指标均明显低于休克组(P均<0.05)。结论 蛋白酶抑 制剂乌司他丁在创伤失血性休克时能够抑制肺MPO和NE活性,降低肺组织湿／干重比,减轻缺血-再灌注 后的肺损伤。     

眼镜蛇毒因子对创伤失血性休克大鼠肠道的作用

目的观察眼镜蛇毒因子（CVF）抑制补体激活对创伤失血性休克大鼠肠道的影响。方法雄性SD大鼠建立创伤失血性休克模型,随机分成对照组和CVF组,根据观察时间点的不同各组再分为休克前、复苏后1、6、24h时相组。结果对照组大鼠复苏后1h血总补体活性（CH50）水平迅速下降,血内毒素（LPS）浓度、肠黏膜损伤评分均明显升高,随后2个时间点快速恢复至休克前水平;二胺氧化酶（DAO）活性在随后1h和6h时相明显升高,然后快速下降。CVF组大鼠除CH50水平始终〈5％,其余各指标复苏后1h仅略升高,其复苏后各时相组均较对照组相应时相组明显降低。结论在创伤失血性休克中使用补体抑制剂可明显减轻补体激活导致的肠道损伤及肠屏障破坏,减少内毒素移位的发生,明显降低血浆内毒素含量。     

白藜芦醇甙对内毒素休克大鼠损伤器官的保护作用

为了寻找内毒素休克时损伤器官的保护方法，达到延缓和减轻器官损伤的目的，我们复制了大鼠内毒素休克模型，应用白藜芦醇甙处理，以探讨其对大鼠内毒素休克时损伤器官的保护作用，实验结果：白藜芦醇甙处理组大鼠的肝、肾、肠组织的肿瘤坏死因子、丙二醛明显低于休克对照组；而超氧化物歧化酶则明显高于休克对照组，并且白藜芦醇甙处理组大鼠的肝、肾功能状态好于休克对照组，其肺灌洗液蛋白低于休克对照组。说明，白藜芦醇甙对丙毒