痛风泰颗粒对TOLL样受体基因TLR2、TLR3的调控作用

目的:分析痛风泰颗粒剂对Toll样受体基因TLR2、TLR3的调控作用,进而为解释该药物治疗痛风的作用机制提供理论依据。方法:首先痛风大鼠造模,获得原代炎性关节滑膜细胞。其次,将15只正常的SD大鼠随机分为生理盐水组,戴芬溶液组,低剂量、中剂量、高剂量痛风泰颗粒组,制备5种含药血清。最后,分别用上述5种血清刺激培养的炎性关节滑膜细胞,8 h后检测5组细胞TLR2和TLR3基因mRNA的表达。结果:经过不同条件的刺激后,TLR2基因只有中剂量痛风泰颗粒组的mRNA相对表达量与生理盐水组比较,具有显著差异(P0.05),但总体趋势不明显;TLR3基因的mRNA相对表达量无任何趋势及表达差异(P0.05)。结论:Toll样受体基因TLR2和TLR3可能并不是痛风泰颗粒剂治疗痛风的关键基因,更有价值的靶基因或调控因子有待于被发现。     

痛风颗粒对高尿酸血症大鼠的防治作用及机制研究

目的观察痛风颗粒治疗高尿酸血症的疗效并探讨其作用机制。方法将60只大鼠分为正常对照组、模型组、痛风颗粒(高、中、低剂量)组及阳性药物组(非布司他)。以氧嗪酸钾盐腹腔注射建立高尿酸血症模型,检测各组大鼠血清尿酸、肌酐、尿素氮、炎症因子[肿瘤坏死因子a(Tumor Necrosis Factor-α,TNF-α)和白介素因子1β(Interleukin-1 beta,IL-1β)]、基因[Toll样受体4(Toll-like receptor 4,TLR4)、蛋白激酶B(protein kinase B,AKT)、磷脂酰肌醇3激酶(phosphatidylinositol 3 kinase,PI3K)、K基因结合因子65(nuclear factor-k-gene binding,NF-κBP65)]的表达和关节滑膜组织病理变化。结果模型组和痛风颗粒低剂量组的尿酸(Uric Acid,UA)、血肌酐、尿素氮、TNF-α、IL-1β含量均显著高于其他组(P 0. 05),正常对照组的上述指标均显著低于其他组,痛风颗粒中剂量组的上述指标均显著高于痛风颗粒高剂量组和阳性药物组,痛风颗粒高剂量组效果明显。TLR4、AKT、PI3K、NF-κB-P65基因m RNA水平结果趋势与生化指标恰好相反。高剂量痛风颗粒对关节滑膜组织病理结构改善最明显。结论痛风颗粒具有显著的降尿酸、肌酐、尿素氮作用,且对滑膜组织功能损伤具有保护作用,其作用机制可能TLR4-NF-κBP65直接相关。     

软坚散结消石法对急性痛风大鼠滑膜组织细胞因子表达的影响

目的观察软坚散结消石法对尿酸钠所致急性痛风大鼠踝关节滑膜表面光滑程度及炎性细胞浸润程度,白细胞介素-1β(IL-1β)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)和核转录因子κB(NF-κB)的影响,初步探讨其可能的作用机制。方法 70只大鼠随机分成正常组,模型组,秋水仙碱组,痛风定组,软坚散结消石药配制的痛风安合剂高、中、低剂量组共7组,每组10只。药物组分别给痛风安合剂药液、痛风定混悬液和秋水仙碱混悬液灌胃,每次均为5 ml,正常组与模型组均用等量蒸馏水灌胃,1次/d,连续5 d。第3天7组大鼠灌胃后1 h按Coderre的经典方法开始造模,正常组踝关节腔内注射0. 2 ml生理盐水,其余各组注射0. 2 ml尿酸钠溶液。造模后72 h处死大鼠,关节组织切片,HE染色,光镜观察关节滑膜表面光滑程度及炎性细胞浸润程度,采用RT-PCR法测定各组大鼠滑膜组织IL-1β、TNF-α和NF-κB的mRNA表达水平。结果关节滑膜表面光滑程度及炎性细胞浸润程度,模型组最重,痛风安合剂低剂量组与秋水仙碱组相当,痛风安合剂中、高剂量组与痛风定组相当,高剂量组优于中剂量组。与正常组比较,模型组大鼠滑膜组织中IL-1β、TNF-α、NF-k B mRNA表达量明显升高。与模型组比较,各药物组均可降低大鼠踝关节滑膜中IL-1β、TNF-α和NF-κB的mRNA表达水平(P 0. 05);痛风安合剂中剂量组与痛风定组疗效差异无统计学意义(P 0. 05);痛风安合剂高剂量组明显降低大鼠踝关节滑膜中IL-1β、TNF-α和NF-κB的mRNA表达水平,并优于痛风安合剂中、低剂量组和痛风定组(P 0. 05),与秋水仙碱组疗效相当(P0.05),有明显抗炎作用。结论软坚散结消石法可抑制急性痛风大鼠踝关节滑膜组织中IL-1β、TNF-α和NF-κB的分泌,降低炎症反应。     

苗药痛风停对痛风性关节炎模型大鼠TLRs/MyD88通路及相关炎症因子的影响

目的:探讨痛风停方(TFT)对痛风性关节炎模型大鼠TLRs/MyD88通路及相关炎症因子的影响。方法:建立痛风性关节炎大鼠模型,随机分为模型对照组、空白对照组、痛风停低、中、高剂量组和秋水仙碱组,每组12只。空白对照组及模型组以等量生理盐水灌胃,其余各组予等容积相应药物灌胃,连续给药5天后收集标本,ELISA法检测外周血TNF-α、IL-1、IL-6、IL-8浓度,免疫印迹法检测大鼠关节滑膜组织TREM-1、TLR2、TLR4、MyD88蛋白表达情况,并对滑膜组织进行免疫组化检测。结果:(1)模型组大鼠血清IL-1、IL-6、IL-8、TNF-α显著升高(P0.05),与模型组比较,痛风停低、中、高剂量组及秋水仙碱组血清炎症因子均有不同程度降低(P0.05),其中痛风停高剂量组炎症因子浓度低于秋水仙碱组(P0.05)。(2)模型组大鼠关节滑膜组织中TREM-1、TLR2、TLR4、MyD88蛋白表达水平增加(P0.05),痛风停中、高剂量组及秋水仙碱组蛋白表达较模型组低(P0.05),其中痛风停高剂量组效果TLR4蛋白表达低于秋水仙碱组(P0.05)。(3)模型组滑膜组织免疫组化染色评分及阳性细胞数均显著高于空白组(P0.05),痛风停中、高剂量组及秋水仙碱组则低于模型组(P0.05),其中痛风停高剂量组在TLR4免疫组化染色评分及细胞阳性数方面较秋水仙碱组低(P0.05)。结论:苗药痛风停可以抑制痛风性关节炎大鼠关节滑膜TREM-1、TLR2、TLR4、MyD88蛋白表达,降低血清IL-1、IL-6、IL-8、TNF-α浓度,有效控制关节炎症。     

葛根素对急性痛风性关节炎大鼠TLR4/NF-κB通路的影响*

目的 观察葛根素治疗急性痛风性关节炎（AGA）大鼠的效果,并基于TLR4/NF-κB信号通路讨论葛根素治疗AGA的作用机制。方法 选取60只雄性SD大鼠作为研究对象,随机分为正常组、模型组、秋水仙碱组及葛根素组,每组15只。复制模型并进行药物干预2周后,记录AGA大鼠治疗前后关节肿胀程度,光学显微镜下观察膝关节滑膜组织病理切片,应用ELISA法和免疫组织化学法分别检测关节腔冲洗液中白细胞介素-1β（IL-1β）、肿瘤坏死因子-α（TNF-α）含量和关节滑膜组织Toll样受体4（TLR4）、核转录因子-κB（NF-κB）表达量。结果 AGA大鼠药物干预后,观察各项指标均得到不同程度的改善。3组AGA大鼠关节肿胀度、关节腔冲洗液中IL-1β、TNF-α含量和关节滑膜组织TLR4、NF-κB表达量比较,差异均有统计学意义（P?<0.05）;与模型组、秋水仙碱组比较,葛根素组大鼠关节肿胀程度减轻,关节腔冲洗液中IL-1β、TNF-α含量均下降,关节滑膜组织TLR4、NF-kB表达量均下调（P?<0.05）。结论 葛根素治疗AGA大鼠的作用机制可能与葛根素抑制TLR4/NF-kB信号通路,抑制下游炎症因子IL-1β、TNF-α的产生有关,从而减轻AGA炎症反应程度,起到治疗作用。     

基于TLR4/MyD88/NF-κB通路异甘草素对大鼠颅脑外伤后炎症反应及Th1/Th2失衡的影响

【摘要】 目的 探讨异甘草素（ISL)通过介导Toll样受体4（TLR4）/髓样分化因子88（MyD88）/核转录因子-κB (NF-κB)通路对大鼠颅脑外伤 （TBI)炎症反应及Th1/Th2细胞失衡的影响。方法将SPF级大鼠随机分为模型组、ISL低剂量组（20 mg·kg-1）、ISL高剂量组（40 mg·kg-1）、阳性药物组（甘油果糖氯化钠,40 mg·kg-1）,每组10只,另设对照组。HE染色观察大鼠脑组织病理学变化;比较血清白细胞介素-1β（IL-1β）、白细胞介素-4（IL-4）、γ干扰素（IFN-γ）、肿瘤坏死因子-α（TNF-α）水平,脑组织TLR4、My D88、NF-κB p65 mRNA及TLR4、My D88、NF-κB p65、磷酸化核转录因子-κB p65（p-NF-κB p65）蛋白表达。结果与对照组比较,模型组血清IL-1β、IL-4、TNF-α水平,脑组织TLR4、My D88 mRNA及TLR4、My D88、p-NF-κB p65蛋白水平升高,血清IFN-γ水平降低（均P＜0.05）;与模型组比较,ISL低剂量组、ISL高剂量组、阳性药物组血清IFN-γ水平升高,IL-1β、IL-4、TNF-α水平降低,脑组织TLR4、My D88 mRNA及TLR4、My D88、p-NF-κB p65蛋白水平降低（均P＜0.05）;与ISL低剂量组比较,ISL高剂量组、阳性药物组血清IFN-γ水平升高,IL-1β、IL-4、TNF-α水平降低,脑组织TLR4、My D88 mRNA及TLR4、My D88、p-NF-κB p65蛋白水平降低（均P＜0.05）;与ISL高剂量组比较,阳性药物组血清IFN-γ水平升高,IL-1β、IL-4、TNF-α水平降低,脑组织TLR4、My D88 mRNA及TLR4、My D88、p-NF-κB p65蛋白水平降低（均P＜0.05）。HE结果显示,ISL低剂量组、ISL高剂量组、阳性药物组脑组织病变较模型组出现不同程度改善,ISL高剂量组和阳性药物组改善尤为明显。结论ISL能有效改善大鼠TBI炎性反应、调节Th1/Th2细胞平衡,可能基于调控TLR4/MyD88/NF-κB通路相关mRNA和蛋白表达发挥作用。     

痛风泰颗粒对兔滑膜细胞IL-1β和TNF-α表达的影响

目的观察痛风泰颗粒对尿酸钠（MSU）诱导的兔膝滑膜组织中白细胞介素-1β（IL-1β）和肿瘤坏死因子-α（TNF-α）表达的影响。方法取3只实验兔分别空腹灌胃生理盐水、痛风泰颗粒溶液、戴芬溶液,1 h后抽取静脉血,离心取血清编号为血清1、血清2、血清3,采用改良组织块培养法培养第4代滑膜细胞,随机分为空白组（NS＋血清1）、模型组（MSU＋血清1）、中药组（MSU＋血清2）、西药组（MSU＋血清3）培养3 d后,应用ELISA法测定每组滑膜细胞培养液中IL-1β和TNF-α含量;用细胞蛋白定量法检测各组培养孔细胞蛋白定量。结果模型组IL-1β、TNF-α的水平明显高于中药组、西药组及空白组,差异有统计学意义（P〈0.05）;中药组和西药组之间的IL-1β、TNF-α水平比较,差异无统计学意义（P〉0.05）。各组间细胞蛋白定量比较,差异无统计学意义（P〉0.05）。结论痛风泰颗粒能够显著抑制尿酸钠诱导的兔滑膜组织IL-1β和TNF-α的表达,表明痛风泰颗粒对痛风的治疗作用可能是通过抑制滑膜组织炎症因子IL-1β和TNF-α的释放实现的。     

Toll样受体在新生儿呼吸窘迫综合征中作用的研究

目的 探讨Toll样受体在新生儿呼吸窘迫综合征(NRDS)中的作用.方法 选取酉阳县人民医院2014年10月至2015年10月的42例NRDS患儿作为病例组,选取同期的42例非NRDS患儿作为对照组,对两组研究对象的TLR2、TLR3和TLR4、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-6(IL-6)、JNK和核因子-κB(NF-κB)血清学水平进行检查,TLRs/JNK/NF-κB/TNF-α信号通路进行表达,分析TLR2、TLR3和TLR4血清学水平与NRDS发病的相关性,以及TNF-α、IL-6、JNK和NF-κB与NRDS发病的相关性.结果 两组患者的治疗后3d和7d的TNF-α、IL-6、JNK和NF-κB血清学水平与治疗前存在明显差异,而且病例组的TNF-α、IL-6、JNK和NF-κB血清学水平与对照组差异有统计学意义(P＜0.05);两组患者治疗后3d和治疗后7d的TLR2、TLR3和TLR4明显低于治疗前,而且病例组治疗后3d和治疗后7d的TLR2、TLR3和TLR4明显低于对照组,差异具有统计学意义(P＜0.05);TNF-α、IL-6、JNK和NF-κB血清学水平与NRDS发病具有良好的相关性,TLR2、TLR3和TLR4与NRDS发病具有良好相关性.结论 对NRDS的Toll样受体分析可以更好的发现TLRs/JNK/ NF-κB/TNF-α信号通路与新生儿呼吸窘迫综合征的相关性.     

药用爬山虎对CIA大鼠血清IL-17和关节滑膜细胞NF-κB表达的影响

目的:探讨药用爬山虎对牛II型胶原诱导性关节炎大鼠(CIA)关节滑膜细胞核周因子-κB(NF-κB)表达及血清IL-17水平的影响。方法:将40只6周龄雌性wistar大鼠随机分为空白对照组、模型对照组、雷公藤多苷对照组和爬山虎治疗组各10只。除空白对照组外,其余各组建立CIA模型,造模第7天开始予爬山虎汤剂和雷公藤水溶液灌胃治疗,连续用药4周,空白对照组和模型对照组灌服等量生理盐水,于末次给药2h后采集血清,处死大鼠,摘取双后肢膝关节分离滑膜,采用ELISA检测血清IL-17的表达,Western-blot检测关节滑膜NF-κB/P65的蛋白表达。结果:与空白对照组比较,模型组大鼠血清IL-17表达增加,爬山虎和雷公藤能够明显降低IL-17的表达(P0.05);模型对照组大鼠关节滑膜细胞NF-κB/P65蛋白水平明显高于空白对照组(P0.05),爬山虎与雷公藤多苷治疗组均能降低CIA大鼠关节滑膜细胞NF-κB/P65的表达,两组无显著性差异(P0.05)。结论:药用爬山虎能够降低CIA模型大鼠血清IL-17的表达,下调关节滑膜细胞NF-κB的蛋白水平。     

双醋瑞因联合玻璃酸钠治疗膝骨关节炎的疗效分析

：目的 探讨双醋瑞因联合玻璃酸钠治疗膝骨关节炎的疗效及其对细胞因子和 Toll 样受体 4 （TLR4）/核因子κB（NF-κB）信号通路的影响。方法 选取2016年6月—2019年5月在西安市红会医院和西京 医院就诊的膝骨关节炎患者100例,随机分为观察组和对照组,每组50例。对照组患者给予玻璃酸钠关节腔注射 液,1次/周;观察组患者在对照组基础上口服双醋瑞因胶囊,50 mg/次,2次/d。两组疗程均为5周。比较两组疗 效和治疗前后Lysholm膝关节功能评分和视觉模拟评分（VAS）、血清细胞因子［白细胞介素-1β（IL-1β）、IL-6 和肿瘤坏死因子-α（TNF-α）］,以及关节滑膜中TLR4和NF-κB蛋白相对表达量。结果 两组患者总有效率 比较,差异无统计学意义（P >0.05）。观察组治疗前后Lysholm膝关节功能评分和VAS评分的差值高于对照组 （P <0.05）。观察组治疗前后血清IL-1β、IL-6、TNF-α的差值高于对照组（P <0.05）。观察组治疗前后关节滑膜 中TLR4和NF-κB蛋白相对表达量的差值高于对照组（P <0.05）。结论 双醋瑞因联合玻璃酸钠治疗膝骨关节炎 患者效果良好,其作用机制可能与降低细胞因子IL-1β、IL-6、TNF-α水平及下调TLR4/NF-κB表达有关。     

TLR4/NF-κB信号通路在抑郁模型大鼠高脂血症产生中的作用研究

目的探讨抑郁模型大鼠高脂血症的发生情况,并探究TLR4/NF-κB信号通路在其中所起作用。方法将40只雄性SD大鼠随机分为四组(n=10):对照组、抑郁模型组、TLR4对照组、TLR4沉默组。对照组不予处理,其余三组均采用慢性不可预知性温和应激法(CUMS)构建抑郁模型。抑郁建模前一天,TLR4沉默组尾静脉注射AAV-CMV-U6-shRNA(TLR4)病毒沉默大鼠体内TLR4表达,TLR4对照组注射等量空白病毒载体,对照组、抑郁模型组注射等量生理盐水。4周后,采用糖水偏好试验检测大鼠行为学表现;血脂试剂盒检测大鼠血清TC、TG、HDL-C、LDL-C水平;Western blot技术检测海马组织、主动脉TLR4、NF-κB、IL-1β、TNF-α蛋白表达水平。结果与对照组相比,抑郁模型组与TLR4对照组大鼠糖水偏好分数显著减小(P0.001),HDL-C水平显著降低,LDL-C、TG、T-CHO水平显著升高(P0.001),海马组织、主动脉TLR4、NF-κB、IL-1β及TNF-α蛋白表达量明显升高(P0.05);TLR4沉默组糖水偏好分数无显著差异(P0.05),LDL-C升高(P0.001),HDL-C、TG、T-CHO差异无显著性(P0.05),TLR4、NF-κB、IL-1β及TNF-α蛋白表达量较对照组升高,但差异无显著性(P0.05)。结论抑郁可以导致大鼠高脂血症的产生,且其机制可能与激活TLR4/NF-κB信号通路相关。     

丙泊酚后处理对大鼠肝缺血再灌注损伤时Toll样受体4、NF-κB及血清TNF-α表达的影响

目的探讨丙泊酚后处理对大鼠肝缺血再灌注损伤的影响。方法成年健康Wistar大鼠60只,随机分为5组（n=12）：假手术组（S组）、缺血再灌注组（IR组）、丙泊酚1、2、4mg/kg后处理组（P1、P2、P4组）。用逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）法测定肝组织中TLR4 mRNA、NF-κB mRNA的表达,放射免疫法测定血清TNF-α的浓度,光镜观察肝组织形态学变化。结果与S组比较,各组TLR4 mRNA、NF-κB mRNA表达上调,TNF-α升高,差别均有统计学意义（P〈0.01）;与IR组比较,P1、P2、P4组TLR4 mRNA、NF-κB mRNA表达下调,TNF-α降低（P〈0.01）;与P4组比较,P1、P2组TLR4 mRNA、NF-κB mRNA表达下调,TNF-α降低（P〈0.01）;与P1组比较,P2组TLR4 mRNA、NF-κB mRNA表达下调,TNF-α降低（P〈0.01）。病理检查显示P1、P2、P4组肝组织结构损伤明显小于IR组。结论丙泊酚后处理减轻大鼠肝缺血再灌注损伤的机制可能与下调TLR4、NF-κB的表达,降低肝组织炎症反应有关。     

TNF-α、NF-κB在抗心磷脂抗体阳性复发性流产患者蜕膜和血清中表达及相关性分析

目的探讨TLR4/核转录因子κB(NF-κB)信号通路上炎性因子NF-κB、肿瘤坏死因子α(TNF-α)在抗心磷脂抗体(ACA)阳性复发性流产(RSA)患者蜕膜、血清中的表达及其与ACA阳性RSA发病的相关性。方法 2015年3月—2016年3月选取正常孕妇28例,ACA阳性RSA患者27例。ACA阳性RSA患者根据妊娠结局不同分为血清试验组(11例)和蜕膜试验组(16例)。正常孕妇根据有无继续妊娠意愿分为血清对照组(13例)和蜕膜对照组(15例)。采用实时荧光定量PCR法检测蜕膜对照组、蜕膜试验组TNF-α、NF-κB m RNA表达水平。ELISA法检测血清对照组、血清试验组TNF-α、NF-κB、孕酮(P)、人绒毛膜促性腺激素(β-HCG)含量。分析ACA阳性RSA患者血清TNF-α、NF-κB水平与孕酮(P)、β-HCG的相关性。结果血清试验组P、β-HCG水平低于同期的血清对照组,TNF-α、NF-κB表达高于血清对照组,差异均有统计学意义(P 0. 05)。与蜕膜对照组相比,蜕膜试验组TNF-αm RNA、NF-κB m RNA水平显著升高,差异有统计学意义(P 0. 05)。血清试验组β-HCG与TNF-α、NF-κB无显著相关性;血清试验组P水平与TNF-α、NF-κB水平存在负相关性。结论TLR4/NF-κB信号通路上炎性因子TNF-α、NF-κB在ACA阳性RSA患者的蜕膜、血清中表达比正常孕妇显著升高,其可能参与了血栓、炎性进程,并与流产发生相关。为进一步研究TLR4/NF-κB信号通路在流产发生中的作用和分子机制提供了依据。     

盆腔炎颗粒对慢性盆腔炎大鼠NF-κB及相关指标表达的影响

目的:研究盆腔炎颗粒对慢性盆腔炎大鼠核因子κB(NF-κB)及相关指标表达的影响。方法:以混合细菌加机械损伤法复制大鼠慢性盆腔炎模型,随机分为正常对照组、假手术组、模型组、盆炎净组及盆腔炎颗粒大、中、小剂量组,造模2周后,各治疗组灌胃给药2周,免疫组化法检测各组大鼠子宫组织中NF-κB、核因子κB结合蛋白(IκB)、细胞间黏附分子-1(ICAM-1)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的表达,逆转录-聚合酶链反应法检测各组大鼠子宫组织中ICAM-1mRNA、TNF-αmRNA表达。结果:盆腔炎颗粒可以显著降低模型大鼠NF-κB、IκB、TNF-α、ICAM-1、TNF-αmRNA及ICAM-1mRNA的表达,盆腔炎中剂量组子宫组织NF-κB与TNF-αmRNA及ICAM-1mRNA表达之间均呈显著正相关。结论:NF-κB活化的抑制在活血补肾法治疗慢性盆腔炎抗炎及抗粘连机制中起重要作用。     

乌司他丁减轻老年大鼠髋部骨折后肺损伤程度的实验研究

目的 探讨乌司他丁减轻髋部骨折后肺损伤的作用及相关机制。方法 将24只10月龄SD大鼠随机分为对照组、实验组及干预组,每组8只,后2组制成左侧髋部骨折,其中干预组在造模前给予尾静脉注射乌司他丁50 000 U/kg。造模24 h后处死各组大鼠,检测各组实验动物血清中线粒体DNA（mtDNA）水平,肺泡灌洗液中肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、白细胞介素-6（IL-6）水平,肺组织中toll样受体-9（TLR9）、转录因子NF-κB表达水平,肺组织干湿质量比（W/D）、病理评分情况。结果 实验组大鼠血清中mtDNA水平,肺泡灌洗液中TNF-α、IL-6水平,肺组织中TLR9、NF-κB表达水平,肺组织W/D、病理评分情况均高于对照组（ P<0.05）;干预组大鼠血清中mtDNA水平,肺泡灌洗液中TNF-α、IL-6水平,肺组织中TLR9、NF-κB表达水平,肺组织W/D、病理评分情况均较实验组下降（ P<0.05）,但均未恢复至对照组水平（ P<0.05)。结论 乌司他丁可能通过减少髋部骨折释放的mtDNA,进而降低肺组织中TLR9、NF-κB表达及下游的炎症因子水平,最终达到保护肺功能的作用。     

熊果酸对脓毒症模型大鼠肺损伤的保护作用及对HMGB1/TLR4/NF-κB通路的影响

目的:观察熊果酸对脓毒症大鼠肺损伤的保护作用及对HMGB1/TLR4/NF-κB通路的影响。方法:Wistar大鼠75只随机分为假手术组,模型对照组,熊果酸低剂量组(20 mg·kg~(-1))、中剂量组(40 mg·kg~(-1))、高剂量组(80 mg·kg~(-1)),每组15只。采用盲肠结扎穿孔法制备大鼠脓毒症模型,术后立即及8 h后尾静脉注射给药。造模后24 h处死大鼠,苏木精-伊红染色法评估肺组织病理学变化;ELISA法测定血清中肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)、白细胞介素-1β(interleukin-1β,IL-1β)、白细胞介素-6(interleukin-6,IL-6)水平;硫代巴比妥酸比色法检测肺组织匀浆丙二醛(malonaldehyde,MDA)含量,黄嘌呤氧化酶法测定超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)活性;Western blot法检测肺组织中高迁移率族蛋白B1(high mobility group protein B1,HMGB1)、Toll样受体4(Toll-like receptors 4,TLR4)、核因子-κB(nuclear factor-κB,NF-κB)的蛋白表达。结果:与假手术组比较,模型组大鼠肺组织中MDA、HMGB1、TLR4、NF-κB表达显著增加,SOD活性下降,血清中TNF-α、IL-1β和IL-6水平显著升高(P0.01);与模型组比较,熊果酸各剂量组大鼠肺组织病理明显改善,MDA、HMGB1、TLR4、NF-κB表达显著降低,SOD活性升高,血清中TNF-α、IL-1β和IL-6水平显著下降(P0.01或P0.01)。结论:熊果酸可能通过抑制HMGB1/TLR4/NF-κB信号通路减轻炎症反应,从而发挥对脓毒症肺损伤的保护作用。     

TLR4/NF-κB对哮喘大鼠气道平滑肌细胞增殖、凋亡的影响

目的 探讨Toll样受体4(Toll like receptors4,TLR4)/核因子-κB(Nuclear Factor Kappa B,NF- κB)对哮喘大鼠气道平滑肌细胞增殖、凋亡的影响.方法 体外培养哮喘大鼠气道平滑肌细胞,将细胞分为空白对照组、TNF-α组、(TNF-α+PDTC)组和(TNF-α+TLR4)抗体组.用四甲基偶氮唑蓝(MTT)微量比色法检测ASMCs增殖反应,用TUNNEL法检测ASMCs凋亡情况,用ELISA检测细胞培养上清液中NF-κB的蛋白含量,用RT-PCR、Westem blot检测各组细胞TLR4的mRNA和蛋白表达水平.结果 TNF-α组ASMCs的增殖反应与对照组相比增加,差异有显著性(P＜0.05),(TNF-α +PDTC)组、(TNF-α +TLP4)抗体组ASMCs增殖反应显著低于TNF-α处理组(P＜0.01),(TNF-α+PDTC)组与对照组相比差异无显著性(P＞0.05),(TNF-α +TLR4)抗体组ASMCs增殖反应显著低于对照组(P＜0.01);TNF-α处理组细胞凋亡率与对照组相比差异无显著性(P＞0.05),(TNF-α+PDTC)组和(TNF-α +TLP4)抗体组细胞凋亡率显著高于TNF-α处理组(P＜0.01)及对照组(P＜0.01);TNF-α组NF- κB含量显著高于对照组、(TNF-α+PDTC)组及(TNF-α+TLR4)抗体组(P＜0.01);(TNF-α +PDTC)组与(TNF-α +TLR4)抗体组之间差异无显著性(P ＞0.05);TNF-α组TLR4mRNA表达水平明显高于对照组及(TNF-α +TLR4)抗体组(P＜0.05);(TNF-α +TLR4)抗体组TLR4mRNA表达水平与对照组之间差异无显著性(P＞0.05);TNF-α组TLR4蛋白表达水平显著高于对照组及(TNF-α+TLR4)抗体组(均P＜0.01);对照组TLR4蛋白表达水平显著高于TNF-α+TLR4抗体组(P＜0.01).结论 TLR4可能通过NF-κB参与哮 喘大鼠气道平滑肌细胞增殖凋亡.     

青蒿琥酯对高糖诱导的肾小管上皮细胞TLR4、NF-κB表达及合成的影响

目的：探讨青蒿琥酯( Art)对高糖诱导下的大鼠肾小管上皮细胞(NRK-52E)Toll样受体4(TLR4)、核转录因子-κB( NF-κB)表达及合成的影响。方法体外培养NRK-52E细胞,分为6组：正常对照组、高糖组、Art小剂量组、Art中剂量组、Art高剂量组、依那普利组。培养48 h后收集各组细胞,采用逆转录-聚合酶链反应( RT-PCR)法检测细胞TLR4、NF-κB mRNA 含量;采用 Western blot 法检测细胞TLR4、NF-κB蛋白表达水平。结果①与正常对照组比较,高糖组细胞TLR4、NF-κB mRNA和蛋白表达水平明显升高( P <0．05);②与高糖组比较, Art 小、中、高剂量组细胞TLR4、NF-κB mRNA和蛋白表达水平明显降低,且呈剂量依赖性(P<0．05);③与依那普利组比较,Art小、中、高剂量组细胞TLR4水平表达均升高,且Art高剂量组与依那普利组差异无统计学意义。与依那普利组比较,Art小、中剂量组细胞NF-κB水平表达升高,Art高剂量组细胞NF-κB水平表达降低,且Art中、高剂量组与依那普利组差异无统计学意义。结论 Art可呈剂量依赖性地抑制高糖环境下NRK-52E细胞TLR4、NF-κB的高表达及合成。     

TLR9、MyD88及NF-κB在过敏性紫癜中的表达及意义

目的 探讨免疫上游因子TLR9、MyD88、NF-κB及免疫下游细胞因子IL-6、TNF-α在HSP组与正常对照组间的差异及相关性。方法 采用实时荧光定量PCR检测HSP患儿外周血单核细胞TLR9、MyD88及NF-κB mRNA表达量,ELISA法检测血浆IL-6、TNF-α水平。结果 1HSP患儿外周血单核细胞TLR9、MyD88及NF-κB mRNA表达均显著高于正常对照组;2HSP组血浆IL-6、TNF-α水平较对照组水平显著增高;3HSP组中TLR9与MyD88、TLR9与NF-κB、MyD88与NF-κB、NF-κB与IL-6以及NF-κB与TNF-α均存在线性正相关关系。结论HSP患儿TLR9、MyD88、NF-κB、IL-6、TNF-α水平均较正常儿童显著升高。TLR9-MyD88-NF-κB信号通路参与HSP发病,并在其中起重要作用。     

丹酚酸B对急性脑缺血小鼠TLR4/NF-κB信号通路的影响

目的:探讨丹酚酸B对急性脑缺血小鼠的抗炎作用及Toll样受体4/核转录因子-κB(TLR4/NF-κB)信号通路的影响。方法:建立小鼠大脑中动脉阻塞(MCAO)模型。造模后阳性组(尼莫地平30μg/kg)、丹酚酸B低剂量组(丹酚酸B 11.25 mg/kg)、丹酚酸B高剂量组(丹酚酸B 22.5 mg/kg)分别尾静脉注射给药1次,模型组和假手术组给予同等体积的生理盐水。造模后6 h,分别采用酶联免疫吸附法测定脑组织中IL-1β及TNF-α的含量,采用实时定量PCR法检测缺血侧脑皮层TLR4、NF-κBp65 mRNA的表达,采用Western blot法检测缺血侧脑皮层TLR4、NF-κBp65蛋白的表达。结果:与模型组比较,丹酚酸B高、低剂量组均能显著降低小鼠脑组织中IL-1β、TNF-α含量(P0.01,P0.05);丹酚酸B高、低剂量组小鼠缺血侧脑皮层TLR4 mRNA、NF-κBp65 mRNA表达显著降低(P0.01,P0.05);丹酚酸B高剂量组小鼠缺血侧脑皮层TLR4、NF-κB蛋白表达显著降低(P0.01)。结论:丹酚酸B可通过抑制TLR4/NF-κB信号通路,降低TLR4和NF-κB相关基因蛋白的表达,减少炎症因子IL-lβ和TNF-α的含量,进而发挥抗脑缺血的作用。