PI3K／Akt信号通路对神经元机械性损伤诱导的自噬调节作用

目的研究机械性神经元损伤后自噬的发生情况以及磷脂酰肌醇3激酶（P13K）／蛋白激酶B（Akt,即PKB）信号通路对其发挥的调节作用。方法小鼠皮层神经元原代培养2W后,采用机械性神经元损伤模型,通过蛋白印迹法（Westernblot）定量分析损伤后不同时间点自噬相关分子微管相关蛋白轻链3（LC3）I／II、Beclin-1和Akt蛋白磷酸化的表达情况;使用不同浓度的P13K抑制剂LY294002预处理神经元1h后给予机械性损伤,通过Westernblot来研究自噬相关分子LC3I／Ⅱ和Beclin-1的表达情况。结果自噬相关分子LC311于机械性神经元损伤后3h表达开始逐渐增加,而Beclin-1无明显变化;p-Akt的表达于损伤后3h达到高峰,此后逐渐恢复到正常水平;用P13K抑制剂LY294002预处理神经元,可以使损伤后神经元的自噬相关分子LC3lI和Beclin-1的表达上调。结论机械性神经元损伤可以诱导自噬发生,且PI3K／Akt信号通路在其中可能发挥调节作用。     

缺氧后胚鼠神经元自噬及凋亡相关蛋白的表达

目的观察缺氧致胚鼠神经元损伤后,凋亡和自噬的发生及变化情况,并探讨其在脑细胞缺血缺氧中的意义。方法取大鼠的胚鼠皮质神经元进行体外原代培养,建立缺氧(oxygen deprivation,OD)损伤模型,通过Western blot方法检测不同缺氧时间点自噬微管相关蛋白轻链3抗体(microtubule-associated protein 1 light chain 3,LC3)以及半胱天冬蛋白酶3(caspase-3)的表达情况。结果神经元于缺氧后可观察到自噬的发生,同时凋亡也随之出现,两者的标志蛋白于OD 0.5h开始表达,并且表达逐渐增加,于OD 4h时间点到达高峰,OD 6h时后凋亡标志蛋白caspase-3继续上调,自噬的标志蛋白LC3表达不再增强。结论 (1)除凋亡外,单纯缺氧能诱导胚鼠神经元发生自噬现象;(2)缺氧所致神经元的损伤过程中,凋亡与自噬同时发生,且表达趋势在OD 4h内一致,OD 4h后细胞凋亡增强。     

GSI对机械性损伤的神经元保护作用

目的探讨γ-分泌酶抑制剂(GSI)对神经元机械性损伤的保护作用。方法原代培养小鼠皮层神经元,培养基中加入10μmol/L GSI共同孵育24 h后,使用微量移液器枪头做机械性划伤。测定培养液中乳酸脱氢酶(LDH)活力的变化;Hochest染色测定神经元凋亡情况;Western blot方法检测切冬酶-3(caspase-3)蛋白表达情况。结果 GSI预处理可抑制因细胞损伤引起的LDH的释放,可降低损伤后Hochest阳性细胞的数量以及活化caspase-3的表达。结论 GSI对神经元机械性损伤有保护作用。     

高原低氧环境下小鼠皮层神经元自噬与凋亡的相关性研究

目的观察6000 m海拔高度下不同时长的高原低氧暴露对小鼠皮层神经元自噬及凋亡的影响,探讨其相关性。方法 40只C57BL/6小鼠随机分为平原对照组及不同时长(1 d、3 d、7 d、14 d)的高原低氧处理组,每组8只。模拟6000 m海拔的高原低氧环境,实验组分别给予1 d、3 d、7d、14 d的高原低氧处理,对照组饲养于舱外。采用Western Blot检测低氧诱导因子-1α(HIF-1α)及自噬标志物Beclin-1、微管相关蛋白1轻链3-II(LC3-II)在皮层组织的表达;赫斯特荧光染料33342(Hoechst 33342)染色用于观察皮层神经元的凋亡改变。结果与平原对照组相比,不同时长的高原低氧处理增加了小鼠皮层组织HIF-1α、Beclin-1及LC3-II的表达,同时明显增加了皮层神经元的凋亡率。结论高原低氧环境下,自噬的激活可能是小鼠皮层神经元凋亡发生的重要原因,而HIF-1α在该过程中可能发挥了重要的调控作用。     

FAM134B介导的自噬在无镁外液致痫海马神经元内质网应激及凋亡中的作用

目的 探讨FAM134B介导的自噬在无镁外液致痫海马神经元内质网应激及凋亡中的作用。方法原代培养新生24 h的SD大鼠海马神经元,通过无镁外液诱导体外癫痫模型。将海马神经元随机分为对照组(CON)、无镁诱导组(AE)、阴性对照组(Lenti-pGV)、过表达FAM134B组(Lenti-FAM134B)和低表达FAM134B组(Lenti-FAM134B-shRNA),并进一步采用选择性自噬抑制剂3-MA进行干预;采用LDH法检测细胞活力、TUNEL法检测细胞凋亡、Western blotting法检测自噬相关蛋白LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ、内质网应激相关蛋白GRP78及CHOP的表达。结果 与CON组相比,AE组LDH释放率明显升高,海马神经元活力下降,神经元凋亡明显增加,过表达FAM134B显著降低LDH释放率,增加海马神经元活力,减少AE诱导的神经元凋亡; AE组LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ比例增加,过表达FAM134B使LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ比例进一步增加; AE组GRP78和CHOP的表达明显增加,过表达FAM134B显著减少AE诱导的GRP78和CHOP表达的增加,而低表达FAM134B均发挥相反作用。与过表达FAM134B组相比,3-MA消除过表达FAM134B对AE诱导的内质网应激及神经元活力的影响,显著增加GRP78和CHOP的表达,并增加LDH释放率。结论 FAM134B可能通过调控自噬途径对内质网应激和神经元凋亡发挥保护作用。     

凝血酶导致的星形细胞死亡中自噬激活以及作用研究

目的探讨凝血酶导致的星形细胞死亡中是否存在细胞自噬,以及自噬在此过程中的作用。方法孕21 d SD大鼠原代培养星形细胞分为:生理盐水组,凝血酶组(凝血酶处理),自噬抑制剂3-甲基腺嘌呤(3-MA)组(3-MA干预),凝血酶+3-MA组(凝血酶+3-MA共处理)。应用Western blot法检测微管相关蛋白轻链3(LC3)转化,免疫组化学染色检测beclin 1表达水平,单丹磺酰尸胺(MDC)染色观察细胞自噬空泡;乳酸脱氢酶(LDH)和活/死细胞计数评估细胞死亡。结果星形细胞经凝血酶处理24 h后,1LC3Ⅰ向LC3Ⅱ转化和beclin 1表达明显上升(P0.05)。2MDC染色示自噬空泡数显著增加;3-MA可降低LC3Ⅰ向LC3Ⅱ的转化,下调beclin 1表达(P0.01)和减少MDC染色自噬空泡(P0.05)。3细胞死亡检测,星形细胞经凝血酶处理后LDH水平和活/死细胞计数与生理盐水组比较,死亡细胞比例上升(均P0.05);3-MA干预后,LDH水平和活/死细胞计数中的死亡细胞比例较凝血酶组进一步上升(均P0.05)。结论凝血酶导致的星形细胞死亡过程中存在细胞自噬,抑制细胞自噬加重细胞死亡。     

线粒体分裂抑制剂通过抑制自噬加重OGD/R损伤

目的探讨线粒体分裂抑制剂(Mdivi-1)处理对原代培养的皮层神经元缺血再灌注损伤的作用及其机制研究。方法在原代培养的小鼠皮层神经元上建立氧糖剥夺/复氧复糖(OGD/R)模型模拟体内缺血再灌注损伤,根据再灌注时间长短检测自噬的发生情况,并进一步选取自噬发生最明显的时间点。然后分别采用自噬抑制剂-3-MA、自噬激动剂-雷帕霉素(rapamycin)、Mdivi-1以及联合rapamycin和Mdivi-1进行干预,分别从mRNA以及蛋白水平检测自噬相关分子的改变,并同时检测神经元损伤情况。结果 OGD/R处理后,神经元自噬随再灌注时间增长而上调,在OGD 2 h/R 24 h时,Beclin 1以及微管相关轻链蛋白3 II/I(LC3 II/I)比值均达峰值(P0.001,P0.01)。细胞活力结果显示,rapamycin可减轻OGD/R损伤(P0.01),Mdivi-1则会加重OGD/R损伤(P0.05),但rapamycin可通过增加自噬来减轻Mdivi-1造成的损伤(P0.05)。蛋白检测结果显示,OGD/R处理后,Mdivi-1可明显降低神经元细胞内Beclin 1和LC3 II的表达(P0.05)。结论 Mdivi-1可能通过抑制自噬的发生,从而加重神经元OGD/R损伤。     

铜诱导原代皮层神经元凋亡的信号传导通路研究

目的 研究铜诱导皮层神经元凋亡的机制以及凋亡信号调节激酶-1(ASK1)抑制剂硫氧还蛋白(trx)的保护作用,探讨ASK1介导的c-Jtm氨基末端激酶(JNK)/caspase-3信号传导通路的可能作用机制. 方法 醋酸铜和trx预处理体外培养的原代皮层神经元,MTT法检测神经元活力,Annexin-V/PI法检测神经元凋亡,Western blot检测不同浓度和时间点磷酸化的ASK1、JNK和caspase-3蛋白表达. 结果 体外培养原代皮层神经元经醋酸铜诱导后,凋亡率上升,细胞活力下降,浓度越大下降越多,trx能拮抗此作用.Western blot检测发现磷酸化ASKl和JNK在4h时开始出现升高,48h表达达到高峰,呈时间和浓度梯度依赖;活化的caspase-3在24h出现活性表达,48h达到高峰.使用trx后,磷酸化ASK1、JNK和caspase-3蛋白表达减少,细胞凋亡率下降,活力升高,差异有统计学意义(P＜0.05). 结论 铜能诱导体外培养原代皮层神经元发生凋亡,ASK1介导的JNK/caspase-3信号转导通路在铜的神经元毒性过程中发挥了重要作用:trx对铜沉积导致的皮层神经元损伤可能起到保护作用.     

MCPG在神经元氧糖剥夺模型中的抗凋亡作用

目的通过神经元氧糖剥夺模型研究Ⅰ组代谢型谷氨酸受体拮抗剂α-甲基-4-羧苯基甘氨酸（MCPG）对神经元损伤的保护作用,并初步探讨其机制。方法大鼠皮层神经元原代培养2w后,采用氧糖剥夺法建立损伤模型,通过乳酸脱氢酶（LDH）活性测定及碘化丙啶（PI）/Hoechst33342双染鉴定神经元损伤程度;加入Ⅰ组代谢型谷氨酸受体拮抗剂MCPG（1mmol/L）,通过脱氧核糖核苷酸末端转移酶介导的缺口末端标记法（TUNEL）检测神经元凋亡情况,并采用蛋白印迹法研究凋亡相关因子caspase-3、细胞外信号调节激酶1/2（ERK1/2）、磷酸化ERK1/2（p-ERK1/2）的表达变化,讨论MCPG抗凋亡作用与ERK1/2信号通路的关系。结果 MCPG能抑制ERK1/2信号通路的活化并降低凋亡相关因子caspase-3的表达,减轻氧糖剥夺造成的神经元凋亡。结论 MCPG能够通过ERK1/2信号通路减轻氧糖剥夺造成的神经元凋亡。     

血液溶解产物对原代培养的小鼠脑皮层神经元的影响

目的 探讨血液溶解产物对原代培养的小鼠脑皮层神经元的影响及其机制。方法 分离培养新生1~3 d C57BL/6小鼠脑皮层神经元并进行鉴定;加入不同浓度的血液溶解产物,通过细胞形态学观察、细胞计数法评估细胞生长情况;Hochest33342染色法及流式细胞术检测细胞凋亡;Western blot法检测凋亡通路相关蛋白cleaved caspase-3的表达情况。结果 原代培养的小鼠脑皮层神经元NeuN阳性细胞率为（92.24±1.16）%;形态学显示随着血液溶解产物的浓度增加细胞损伤程度增大,贴壁细胞数减少,且Hochest33342染色阳性率增加,细胞凋亡率增加,凋亡通路相关蛋白cleaved caspase-3的表达也增加,且呈浓度依赖性,浓度越高,凋亡蛋白表达越高。结论 血液溶解产物能抑制脑皮层神经元的生长,其机制可能是通过上调凋亡通路相关蛋白的表达而诱导细胞凋亡来实现的。     

PINK1介导的线粒体自噬在小鼠皮层神经元氧糖剥夺后表达和意义

目的探究不同时长氧糖剥夺(OGD)后小鼠皮层神经元中线粒体自噬相关蛋白PTEN诱导的假定激酶1(PINK1)表达的时空动态改变。方法 C57BL/6J小鼠皮层神经元原代培养7 d,以OGD不同时长(0 h、2 h、4 h、6 h、8 h)作为观察时间点。倒置显微镜下观察神经元形态变化;MTT比色法检测神经元存活率;蛋白印迹法(Western blot,WB)观察LC3-Ⅱ、PINK1和Parkin表达的时间变化;免疫荧光观察PINK1OGD后表达的空间改变。结果 OGD严重损伤神经元活性,且随着时间延长细胞活性呈进展性下降趋势;OGD后自噬标志性分子LC3-Ⅱ和PINK1开始升高(4 h达到峰值)(P0.05),后进行性下降,而Parkin表达逐渐下降(P0.05);PINK1在胞浆可见均匀表达,在OGD后荧光强度短暂增高,并随OGD时间逐渐减弱。结论不同时长OGD可造成不同程度神经元损伤,并激活PINK1介导的线粒体自噬,PINK1可能通过影响线粒体在脑缺血损伤的病理生理过程中发挥作用。     

Preso调控nNOS在神经元机械性损伤中的作用

目的通过建立神经元机械性损伤模型,研究突触后致密物质(PSD)支架蛋白中的树突棘突触后致密物质-95(PSD-95)相互作用调节蛋白(Preso)在创伤性脑损伤中的作用及调控机制。方法建立神经元机械性损伤模型,通过细胞活力和乳酸脱氢酶(LDH)检测神经元损伤程度,并通过Western blot检测明确Preso在损伤后的表达变化;利用Preso慢病毒过表达载体上调Preso在神经元中的表达,通过细胞活力和LDH检测明确上调Preso在神经元损伤中的作用;利用神经元特异性一氧化氮合酶(nNOS)特异性抑制剂ARL 17477,通过细胞活力和LDH检测明确抑制nNOS对上调Preso调控神经元损伤的影响。结果神经元机械性损伤后,Preso表达无明显改变,而上调Preso表达可加重神经元损伤;利用nNOS特异性抑制剂ARL 17477可显著改善神经元损伤,并抑制上调Preso表达对神经元损伤的影响。结论神经元机械性损伤后,Preso可促进神经元损伤的形成,而nNOS是其重要的下游效应分子。     

15d-PGJ_2对神经元氧糖剥夺/复氧损伤的影响

目的观察过氧化物酶体增殖物激活受体γ(PPAR-γ)激动剂15d-PGJ_2对神经元氧糖剥夺/复氧(OGD/R)损伤的影响,并探讨其可能的作用机制。方法采用原代培养的小鼠胎鼠大脑皮质神经元,建立OGD/R损伤模型。将培养的神经元细胞进行分组,Western blot检测各组神经元内LC3-1、LC3-Ⅱ、Bcl-2、Beclin1、AMPK、m TOR及p70S6K等蛋白的表达;MTT法检测细胞活性,乳酸脱氢酶(LDH)漏出率测定细胞毒性。结果 OGD/R损伤6 h、12 h及24 h后神经元LC3-Ⅱ、Beclin 1表达明显增高,而p62表达持续下降,神经元的生存率明显下降,LDH漏出率增加。15d-PGJ_2可显著降低LC3-Ⅱ和Beclin 1表达水平,改善神经元的生存率及降低LDH的漏出率。OGD/R后Bcl-2的蛋白表达水平均明显减少,而Beclin 1表达则显着增加。15d-PGJ_2预处理显著增加OGD/R 24 h的Bcl-2表达量。利用Bcl-2 siRNA或scRNA转染神经元细胞发现,Bcl-2 siRNA可消除15d-PGJ_2对OGD/R后各时间点的抑制效应。结论 15d-PGJ_2能够有效地对神经元OGD/R损伤起到保护作用,其机制可能是通过上调Bcl-2的表达进而抑制自噬的发生实现的。     

帕金森病细胞模型中维生素C调控SIRT3影响自噬水平的研究

目的探讨维生素C(Vit C)通过调控沉默信息调解转录因子3(SIRT3)影响帕金森病模型中PC12细胞自噬的意义和作用机制。方法培养拟神经元PC12细胞株,随机分组为:正常对照组(Control组)、单纯Vit C组(Vit C组)、帕金森病组(MPP~+组)和Vit C治疗组(Vit C+MPP~+组),在含有Vit C组中分别加入400μmol/L Vit C孵育6 h后,在含有MPP~+组中均加入700μmol/L MPP~+,模拟帕金森病的神经细胞损伤,孵育48 h后,利用细胞增殖-毒性检测试剂盒(cell counting Kit-8,CCK-8)检测细胞存活率;利用小鼠乳酸脱氢酶(LDH)试剂盒检测LDH变化; Western blot(WB)检测PC12细胞中SIRT3、微管相关蛋白1轻链3(LC3-Ⅱ)的表达变化情况,免疫荧光检测细胞SIRT3、LC3-Ⅱ的表达变化情况。结果 CCK-8和LDH检测结果提示,Vit C能改善细胞生存环境,明显减轻帕金森病PC12细胞损伤,提高细胞活力;同样的,WB结果提示,与MPP~+组比较,Vit C上调SIRT3和LC3-Ⅱ的表达,促进神经元自噬的发生,组间差异有统计学意义(P 0. 05);同样的,免疫荧光结果显示,Vit C+MPP~+组中SIRT3和LC3-Ⅱ荧光强度均较MPP~+组增加。结论 Vit C可以激活SIRT3表达,并提高细胞自噬,发挥一种内源性的神经保护作用,拮抗MPP~+对PC12细胞的损伤。     

大鼠脑外伤后自噬被激活并在早期对受损神经元起保护作用

目的研究大鼠脑外伤后自噬是否被激活并探讨其在脑外伤后神经细胞损伤和修复中的作用。方法建立大鼠定量脑外伤模型,于脑外伤后不同时间点处死动物并取脑;应用透射电镜检测脑组织自噬双层膜结构以及次级溶酶体的形成情况;应用白噬标记抗体LC3B和DBeclin-1对脑外伤后不同时间点的脑组织进行免疫荧光和Western blot检测;LC3和caspase-3或Beclin1和Fluoro—Jade双标记检测。结果脑外伤后1h在损伤区周围即检测到双层膜结构,并且一直持续到脑外伤后32天。脑外伤后1h,脑组织中LC3和Beclin-1表达增加,损伤后3天内阳性细胞以神经元为主,之后阳性胶质细胞增加,第8天达到高峰,并可持续至脑外伤后32天仍维持高表达。大多数阳性细胞分布在损伤区周围（包括海马）而不是损伤区。此外,脑外伤后24小时以前,在损伤区周围不是所有的LC3阳性细胞都与caspase-3阳性细胞重叠。同样脑外伤后6h至48h,Beclin1阳性海马神经元与Fluoro—Jade染色不重叠。结论脑外伤后自噬被激活,在损伤后早期保护损伤区周围神经细胞免于凋亡和退行性变,并对神经细胞损伤与修复发挥长期作用。     

Role of apoptosis and autophagy in the control of cell proliferation in dentate gyrus after hippocampal lesion

研究背景：很多病理情况下都可以引起神经发生（新的神经元产生）,新生细胞的命运和这些疾病的预后有着直接的关系。实验证明脑损伤往往导致海马齿状回神经发生区细胞增殖的增加,新生细胞的数量随着时间的推移逐渐减少,但是新生细胞减少的原因尚不知。阐明这些新生细胞的命运将增加对脑损伤病理过程和治疗手段的理解。 目的：本文研究凋亡和自噬这两种程序性细胞死亡在海马损伤诱导的海马齿状回细胞增殖后新生细胞减少中的作用。 设计、时间和设定：海马齿状回细胞增殖的动物实验于2008年2月至2009年3月在苏州大学医学部神经生物学系进行。 材料：成年雄性SD大鼠通过微量注射海人酸(购自美国Sigma公司)建立海马损伤模型。 方法：5-溴脱氧嘧啶核苷（BrdU）用于标记增殖细胞,海马损伤后齿状回的不同时间点BrdU阳性细胞用免疫组织化学方法鉴定,阳性细胞的数量采用无偏差体视学(Stereology)方法进行定量。凋亡相关蛋白caspase-3、Bcl-2、p53和自噬相关蛋白LC3、Beclin1通过免疫荧光和蛋白质印迹(Western blot）的方法进行检测。 主要结果检测：凋亡和自噬的检测,是在海马损伤后不同时间点,在激光共聚焦显微镜下观察BrdU阳性细胞共表达BrdU/caspase-3、BrdU/LC3和BrdU/Beclin 1。同时, 还用Western blot的方法检测齿状回凋亡相关蛋白和自噬相关蛋白的改变。 结果：定量分析显示海马损伤组在连续3天注射BrdU后的第1天有最多的BrdU阳性细胞,BrdU阳性细胞随着时间的推移逐渐减少。海马颗粒细胞层和门区发现BrdU/cleaved caspase-3双标细胞,海马损伤后的各个时间点未发现BrdU/LC3、BrdU/Beclin 1双标细胞。但Western blot结果显示海马损伤后LC3Ⅱ、Beclin 1、p53的表达上调,pro-caspase-3和Bcl-2的表达下调。 结论：成年大鼠海马损伤后能导致齿状回显著的细胞增殖,这些增殖细胞随着时间的推移逐渐减少,凋亡和自噬可能参与海马损伤后增殖细胞的减少。     

代谢型谷氨酸受体5对创伤性神经元损伤保护作用研究

目的研究代谢型谷氨酸受体5（mGluR5）的特异性激动剂对创伤性脑损伤后神经元的保护作用,并初步探讨其作用机制。方法原代培养2W大鼠皮层神经元细胞,采用神经元机械性损伤模型,加入两种mGluR5特异性激动剂2-氯-5羟苯基甘氨酸（CHPG）和3-氰．氮苯甲酰胺（CDPPB）,通过乳酸脱氢酶（LDH）释放率、caspase-3活性检测,研究mGluR5激动剂对神经元损伤可能具有的保护作用;通过western—blot检测细胞外信号调节激酶（ERK）、c—Jun氨基末端激酶（JNK）、p38表达变化并研究这种保护作用的产生机制。结果损伤后LDH释放率和easpase-3活性显著增加,CHPG和CDPPB明显抑制了LDH的释放率和easpase-3的活性,并呈剂量依赖性;Westernblot结果提示,CHPG和CDPPB显著增加了ERK的磷酸化水平,而对JNK、p38无影响。结论mGluR5的激动剂CHPG和CDPPB对机械性神经元损伤具有保护作用,这种保护作用可能是通过激活ERK通路实现。     

大鼠早期局灶性脑缺血再灌注损伤中USP10的表达水平变化及其与自噬的关系

目的 探讨早期局灶性脑缺血再灌注损伤大鼠模型中再灌注不同时间点USP10的表达水平变化及其与自噬的关系。方法 将36只成年雄性SD大鼠随机分成4组:假手术组、脑缺血2 h再灌注6 h模型组、脑缺血2 h再灌注12 h模型组、脑缺血2 h再灌注24 h模型组; 采用线栓法致大脑中动脉栓塞(middle cerebral artery occlusion, MCAO)制备大鼠局灶性脑缺血再灌注模型,给予神经行为学评分,用TTC染色法测定脑梗死体积,透射电镜观察梗死周边区皮层神经元自噬,Western blot 法检测梗死周边区皮层USP10和自噬相关蛋白LC3B的表达水平,免疫荧光双标法检测梗死周边区皮层神经元中USP10及LC3B的表达水平变化。结果 免疫荧光双标显示模型组自噬蛋白阳性细胞数与存活神经元数均于再灌注12 h最多(P<0.05),二者某种程度上趋势一致; Western blot免疫荧光双标均显示与假手术组相比,USP10及LC3B蛋白在模型组中表达上调(P<0.01),且于再灌注12 h组达到高峰(P<0.05); 透射电镜显示再灌注不同时间点自噬强度的变化与免疫荧光自噬蛋白表达水平的趋势基本一致。结论 早期脑I/R损伤中自噬的激活某种程度上可减轻神经元的损伤,而USP10可能通过某种机制调控脑I/R中自噬的发生发展。     

高原低氧环境对小鼠海马神经元自噬的影响及意义

目的研究6000 m海拔高度下,不同时长的高原低氧暴露对小鼠负性情绪、海马神经元损伤、海马神经元自噬的影响,探讨其相互关系。方法利用低压氧舱模拟6000 m海拔高原低氧环境,实验组给予不同时长的高原低氧处理,对照组置饲养于舱外。采用高架十字迷宫实验评估高原低氧环境对小鼠负性情绪的影响,HE染色观察海马神经元病理学变化,Western Blot法检测低氧诱导因子-1α(HIF-1α)及自噬标志性蛋白Beclin-1和微管相关蛋白1轻链3-II(LC3-II)在海马组织的表达变化。结果高原低氧1、3、14 d暴露明显减少了小鼠高架十字迷宫开臂滞留时间百分比和开臂进入次数百分比;HE染色显示,高原低氧1、3、14 d组小鼠海马CA1区的神经元排列紊乱、细胞间隙变大、胞体不规则、核固缩表现明显,而高原低氧7 d组海马CA1区神经元的损伤表现相对较轻;Western Blot结果显示,海马HIF-1α、Beclin-1及LC3-II的表达在高原低氧暴露1 d后即达到高峰,后逐渐下降。至高原低氧处理第7天,HIF-1α和LC3-II表达与对照组已无显著差异。结论高原低氧环境下,小鼠负性情绪的增加与海马神经元的损伤密切相关,而自噬的激活可能参与了急性高原低氧期海马神经元的损伤。     

小檗碱对淀粉样B蛋白诱导大鼠皮质神经元毒性的拮抗作用

目的：探讨小檗碱对β-淀粉样肽诱导原代培养大鼠皮层神经元损伤的保护作用 方法: 原代培养大鼠胎鼠皮层神经元,40μg• ml-1 Aβ25-35作用36h复制Alzheimer`s Disease(AD)细胞模型,同时给予小檗碱(0.5-2μΜ)进行干预。通过MTT实验观察细胞活力,TUNEL染色检测细胞早期凋亡,Western blotting方法观察activated caspase-3蛋白表达情况。 结果：MTT实验结果显示,与正常培养大鼠胎鼠皮层神经元比较,40μg• ml-1 l Aβ 作用36h后细胞活力明显下降（P<0.01）,0.5μM、2μM小檗碱能显著增加细胞活力（与模型组比较,P<0.01）。TUNEL实验结果显示, Aβ作用后神经元凋亡率明显增加（与正常组比较,P<0.01）,小檗碱能降低TUNEL阳性细胞比例。Western blotting结果显示,小檗碱能降低Aβ诱导cleaved caspase-3异常活化（与模型组比较,P<0.05）,抑制Aβ引起的神经元凋亡。 结论：0.5-2μΜ小檗碱能通过减少神经元死亡,抑制早起凋亡对Aβ诱导神经元损伤具有保护作用,这种保护作用可能是通过抑制异常活化的caspase-3蛋白表而实现的。小檗碱可能具有治疗Aβ损伤引起的相关神经退行性疾病的潜力。