常染色体显性视网膜色素变性家系视紫红质基因突变的检测分析

目的 观察一个常染色体显性视网膜色素变性(autosomal dominant retinitis pigmentosa,ADRP)家系的视紫红质(rhodopsin,RHO)基因突变特征。 方法 抽取20个ADRP家系成员外周血3～5 ml并提取DNA；聚合酶链反应(polymerase chain reaction,PCR)扩增RHO基因第1～5外显子基因片段, 用直接测序法对20个DNA样本进行RHO基因突变检测。 结果 该家系中10例ADRP患者的RHO基因的第182密码子发生G→A置换突变(Gly-182-Asp)，而在2例患者和8个未患病家系成员中均未发现此突变。 结论 Gly-182-Asp突变不一定是ADRP家系的致病原因;在RHO基因附近可能存在新的基因, 但还需要进一步研究证明。 (中华眼底病杂志, 2002, 18: 256-258)     

常染色体显性遗传RP患者视紫红质基因突变的检测分析

目的研究常染色体显性遗传视网膜色素变性（ADRP）患者视紫红质（RHO）基因的突变特征及其在视网膜色素变性（RP）发病机制中的作用。方法应用变性高效液相色谱分析（DHPLC）技术和直接及克隆测序方法对RHO基因进行突变检测。结果一家系4例ADRP患者RHO基因的第297密码子存在杂合的两种类型密码子（AGC和AGT）。该家系的另3名患者未检测到该突变，对照组发现1例此类型沉默型突变。该家系在第3外显子3’端下游第4个碱基处发生C—T转换，其11个成员中该位点呈T纯合子1例，呈杂合子状态8例。对照组发现2例该位点的杂合子状态。结论视紫红质基因Ser-297-Ser突变与RP疾病未出现“共分离”现象，因此该沉默型突变不是该ADRP家系的致病原因，系RHO基因的多态现象。     

视网膜色素变性一家系与IMPDH1基因突变相关

目的检测一个常染色体显性遗传性视网膜色素变性家系的IMPDHl基因的突变特征以及与临床表型的关系，探讨其病因和发病机制，利用分子遗传学的方法，确定家系内遗传连锁关系。方法严格按照有关伦理学要求进行家系收集，所有现存家系成员行详细的眼科检查（包括视力检查、裂隙灯和眼底镜检查、视野、暗适应阈值以及ERG检查）。提取该家系lO例患者、lO例未患病成员外周血基因组DNA：应用聚合酶链反应扩增IMPDHl第7外显子基因片段，利用扩增产物直接测序方法对样本进行IMPDHl基因突变检测。结果该家系中lO例患者的IMPDHl基因发生了Asp-226-Asn（GAC→AAC）的错义突变，lO例家系未患病成员则没有此突变。结论IMPDHl基因的一种已知突变Asp-226-Asn与该家系所发生的视网膜色素变性存在紧密连锁关系。     

常染色体显性视网膜色素变性家系基因定位的研究与视紫红质基因突变的检测分析

对一常染色体显性视网膜色素变性 (autosomaldominantretinitispigmentosa ,ADRP)大家系进行基因定位 ,并检测该家系12名患者的视紫红质基因是否存在突变。方法 :采用多个已知位点的遗传标记对该ADRP家系进行连锁分析 ,确定致病基因的大致染色体位置 ;在所定位的染色体区域将RHO基因作为侯选基因进行直接测序检测突变。结果 :连锁分析结果发现遗传标记D3S12 92 ,当θ =0 1时有最大Lod值 =2 732 85 2 ,因此考虑该家系致病基因位于D3S12 92附近。直接测序结果发现该家系中大部分患者在RHO基因的第 3外显子序列 ,第 182密码子的第 2个碱基发生G→A置换突变 ,导致甘氨酸 (Gly)变为天冬氨酸 (Asp) ,命名为Gly -182 -Asp突变 ,而在 2例患者中则未发现突变 ;同时 ,在该家系正常成员以及正常对照者中均未发现此突变。结论 :ADRP存在分子水平的遗传异质性 ,某些ADRP是由于RHO基因突变所致。但是由于本研究所涉及的ADRP家系中尚有2名患者未找到RHO基因突变 ,故不能将Gly -182 -Asp突变认为是该家系的致病原因。在D3S12 92与RHO基因之间可能存在新的基因 ,还需进一步研究证明。     

散发性视网膜色素变性视紫红质基因突变筛查

目的研究中国人散发性视网膜色素变性（sporadic retinitis pigmentosa，SRP）患者视紫红质（rhodopsin，RHO）基因突变频率及特征，揭示其在SRP发病机制中的潜在作用。方法运用聚合酶链反应一单链构象多态性（polymerase chain reaction—single—strand conformation polymorphism，PCR—SSCP）结合DNA测序技术，对80例SRP患者和80例健康对照者进行RHO基因5个外显子的突变筛查。结果SRP患者RHO基因5个外显子PCR扩增产物经SSCP分析后，发现其电泳带型与对照组一致，均包括2条单链带和1条双链带，且电泳迁移率相同，即在患者和对照组中均未检测到RHO基因突变。结论中国人SRP患者RHO基因外显子的突变率较低；PCR—SSCP分子遗传学方法快速、简单、灵敏，适用于大批量RP患者的基因变异筛查。（中国眼耳鼻喉科杂志，2008，8：351—353）     

视网膜色素变性一家系与IMPDH1基因突变相关

目的 检测一个常染色体显性遗传性视网膜色素变性家系的IMPDH1基因的突变特征以及与临床表型的关系,探讨其病因和发病机制,利用分子遗传学的方法,确定家系内遗传连锁关系.方法 严格按照有关伦理学要求进行家系收集,所有现存家系成员行详细的眼科检查(包括视力检查、裂隙灯和眼底镜检查、视野、暗适应阈值以及ERG检查).提取该家系10例患者、10例未患病成员外周血基因组DNA;应用聚合酶链反应扩增IMPDH1第7外显子基因片段,利用扩增产物直接测序方法对样本进行IMPDH1基因突变检测.结果 该家系中10例患者的IMPDH1基因发生了Asp-226-Asn(GAC→AAC)的错义突变,10例家系未患病成员则没有此突变.结论 IMPDH1基因的一种已知突变Asp-226-Asn与该家系所发生的视网膜色素变性存在紧密连锁关系.     

汉族常染色体显性视网膜色素变性一家系的连锁分析及突变筛查

背景 原发性视网膜色素变性(RP)有明显的遗传异质性和表型异质性,目前已确定的致病基因较多,确定患病家系的致病基因是进行基因治疗的基础. 目的 对患常染色体显性遗传性RP(ADRP)的一个汉族家系进行致病基因的定位和基因突变分析.方法 此家系的5代21名成员纳入研究,包括12例ADRP患者和9名表型正常者.12例患者进一步接受中心视野、间接检眼镜、眼电图(EOG)、视网膜电图(ERG)检查.对22个已知的ADRP致病基因所在染色体位点进行连锁分析,以确定该家系与疾病连锁的染色体区域,随后对该区域附近的候选基因视紫红质(RHO)进行直接测序评估其突变情况. 结果 间接检眼镜检查该家系先证者眼底表现符合原发性RP表现,EOG和ERG表现为波形记录不到,视野呈向心性缩小.两点连锁分析结果显示,该家系致病基因位点与遗传标记D3S1292连锁,在θ=0.0时得到最大优势对数(LOD)值为3.6671.候选的RHO基因直接测序结果发现,该家系所有患者第53位密码子的第2个核苷酸均出现了C→G的突变,致其氨基酸由脯氨酸变为精氨酸(Pro53Arg),而该家系正常成员中未发现此突变. 结论 RHO基因的错义突变Pro53Arg与RP疾病出现共分离现象,可确定为该ADRP家系的致病基因.     

常染色体显性遗传视网膜色素变性患者视紫红质基因突变的研究

目的探讨常染色体显性遗传型视网膜色素变性(autosomal dominant retinitis pigmentosa,ADRP)患者视紫红质(rhodopsin,RHO)基因是否存在突变。方法应用聚合酶链反应(polymerase chain reaction,PCR)扩增RHO第1、5外显子基因片段，以限制性核酸内切酶酶切消化技术检测38个ADRP家系的57名患者和60名正常对照者RHO第58、347密码子的突变。结果1个ADRP家系的4名患者第58密码子发生点突变，另2个ADRP家系的6名患者第347密码子也出现点突变，而对照者未发现上述两种突变。结论ADRP存在分子水平的遗传异质性，某些ADRP是由于RHO基因突变所致。(中华眼底病杂志,1998,14:108-110)     

视网膜色素变性遗传致病基因peripherin/RDS的突变筛选

目的 了解中国视网膜色素变性患者（RP）中peripherin/RDS基因的突变谱及突变率。方法 应用聚合酶链-异源双链-单链构象多态性（PCR-SSCP）及DNA序列分析技术对收集的15个常染色体显性遗传视网膜色谱变性家系和55例散发视网膜色素变性患者peripherin/RDS基因的第一，第二外显子进行检测。结果 15个家系及55例散发患者未检测到peripherin/RDS基因突变。结论 本研究所检测的视网膜色素变性患者与RDS基因无关，显示视网膜色素变性的遗传异质性。     

常染色体隐性遗传视网膜色素变性CNGA1基因突变检测

目的检测常染色体隐性遗传视网膜色素变性患者杆体α—cGMP门离子通道基因（α—cGMP—gated cation channel，CNGA1）基因突变。设计对照性实验研究。研究对象35名常染色体隐性遗传视网膜色素变性（autosomal recessive retinitis pigmentosa，ARRP）家系的先证者和55名散发病例。随机收集100名正常人作为对照。方法采集患者外周血，应用DNA分离试剂盒提取DNA，应用11对CNGA1基因引物进行聚合酶链反应（polymerase chain reaction，PCR），扩增CNGA1基因的全部编码区及内含子外显子的拼接区。利用单链构象多态性（single strand conformation polymorphism，SSCP）技术，将PCR产物进行10％非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳，用硝酸银染色，观察有无变异带。如果发现变异带，再将该PCR产物进行DNA测序。主要指标通过PCR，SSCP和DNA测序技术，发现CNGA1基因突变。结果未发现CNGA1基因突变。结论CNGA1基因突变在国人RP患者中的致病情况有待进一步研究。     

视网膜色素变性患者特异性光感受器细胞核受体基因突变检测分析

目的 观察特异性光感受器细胞核受体(NR2E3)基因在宁夏地区视网膜色素变性(RP)患者中的突变频率及特征,探讨其在RP发病机制中的作用。方法 经检查确诊的120例RP患者纳入研究。其中,常染色体显性遗传RP (ADRP)患者33例,来自18个家系;常染色体隐性遗传RP (ARRP)患者20例,来自15个家系;散发型RP(SRP)患者67例。选取100名健康成年人作为对照组。采用聚合酶链反应(PCR)和直接测序方法,检测NR2E3基因全编码区和邻近剪切位点的内含子区域序列突变。多因素分析研究NR2E3基因突变位点对RP的作用。结果 120例RP患者NR2E3基因检测出变异位点12个。其中,非编码区5个;第4、6、7外显子上7个。12个变异位点中,新发现变异位点6个。外显子上7个变异位点中,同义突变3个;错义突变4个。统计学分析结果显示,所有变异位点均为NR2E3基因多态性。多因素Logistic回归分析显示,变异位点均与RP发生无相关性。18例ADRP先证者、67例SRP患者和正常对照组中,分别有1、3、2例NR2E3基因第4外显子上发现p.Glu121Lys变异。发生该位点变异的ADRP患者家系（NXRP-1）另外8例患者中,出现p.Glu121Lys位点变异5例,未出现变异3例。出现变异的6例患者发病年龄较未出现p.Glu121Lys位点变异的3例患者早,且较早出现明显的中心视力损害。结论 宁夏地区RP患者NR2E3基因致病突变率小于1％,NR2E3基因的p.Glu121Lys变异发生率较低。     

A pedigree with retinitis pigmentosa and its concomitant ophthalmic diseases

AIM: To characterize the ophthalmic clinical phenotype of a family with retinitis pigmentosa (RP) and closed-angle glaucoma and to detect pathogenic genes and mutation sites causing RP in this family. METHODS: Ophthalmic clinic performance was examined in detail in 8 enrolled family members. Genomic DNA was extracted from the peripheral blood of 4 family members for whole-exome sequencing (WES) to select potential genetic mutations whose structures were identified by bioinformatics analysis. Then, Sanger sequencing was used in 12 family members and control group members to validate and confirm the disease-causing mutation loci, and we analyzed the genotype-phenotype relationships. RESULTS: The known c.512C>T (p.P171L) mutation in the rhodopsin (RHO) gene was only found in afflicted family members and was confirmed by WES and Sanger sequencing as the pathogenic mutation in this family. In addition to being diagnosed with RP, family member III:4 was found to have bilateral closed-angle glaucoma, high myopia, and concurrent cataracts, and family members II:2 and II:4 had pathological changes of anterior chamber angle narrowing. Family members IV:3 and IV:4 were found to have retinoschisis. CONCLUSION: Glaucoma and related pathological changes, such as retinoschisis, in family members are preliminarily considered RP complications caused by RHO mutation.     

土家族中一个先天性无虹膜家系的临床特点和PAX6基因突变位点分析

目的：确认土家族中一个先天性无虹膜家系的PAX6基因致病突变并分析其临床特点。方法：实验研究。详细询问家族病史并对该家系中所有7 例成员（4 例患者,3 例正常人）进行详细的眼部检查,采集家系成员及100例（50例土家族人和50例汉族人）正常对照者的外周静脉血,提取DNA;对先证者PAX6基因的全部外显子进行PCR扩增及测序;对家系中所有成员和正常对照者进行PAX6基因突变位点的验证检测。结果：该家系中患者主要以虹膜缺损、白内障、眼球震颤、黄斑中心凹发育不良和角膜病变为主要临床表现,虹膜缺损轻重不一,角膜病变和白内障情况随年龄增加而加重。该家系的4 例患者均在第3 外显子与内含子3 交界处出现一个杂合突变（c.357+1G > A）,正常家系成员及正常对照者均无此突变。结论：该先天性无虹膜家系患者虹膜缺损程度不一。PAX6是该家系的致病基因,该家系患者PAX6基因的突变位点是杂合突变(c.357+1G > A）。     

视网膜色素变性患者视紫红质E341ter基因突变及临床表型分析

目的 探讨常染色体显性遗传视网膜色素变性患者视紫红质基因突变及其与临床表型的关系。方法 应用聚合酶链反应（polymerase chain reaction,PCR)和单链构象多态性（single strand conformation polymorphism,SSCP)技术,对13个常染色体显性遗传视网膜色素变性家系的27例成员,进行视紫红质基因整个编码区的突变筛选,对SSCP检测有变异带的外显子PCR产物进行测序;同时应用裂隙灯、眼底镜、动静态视地和视网膜电流图（ERG）对患者进行临床检测。随机收集30例正常人进行对照检测。结果 发现1个家系患者有视紫红质E341ter突变,呈杂合子,密码子341第一个碱基由G变成T。该家系临床表现为青年期出现夜盲,视力和视野损害较重,ERG检查杆体和锥体无反应或仅有较小的锥体反应。结论 视紫红质基因突变家系的视网膜色素变性病史开始于杆体功能的丢失,进而累及锥体系统,并最终导致视功能严重丧失。视紫红质E341ter突变被认为是该家系的病因。     

视网膜色素变性患者的相关致病基因PDE6B突变及其临床表型分析

目的：了解磷酸二酯酶β亚单位（phosphodiesterase β subunit,PDE6B）基因突变在我国视网膜色素变性（retinitis pigmentosa,RP）患者中的突变形式及其临床表型特征。方法：应用聚合酶链反应-异源双链-单链构像多态性及DNA序列分析技术,对收集的35个常染色体隐性家系和55例散发RP患者进行PDE6B基因的22个外显子和5′-端非编码区（5′-UTR）全基因扫描,并行眼部检查及家系分析。结果：检测出1例散发性RP患者第6外显子第2492位点T→C碱基突变异致其编码氨基酸由甘氨酸变为丝氨酸,第10外显子5′-端上游（第9内含子内）第27与28碱基之间有2个碱基（TG）插入突变。以上两种突变在100例正常人中均未检测出。RP患者表现为视乳头萎缩、血管变细及色素散布。多焦视网膜电图检测提示视杆细胞受损较重。1例常染色体隐性家系患者PDE6B基因第11外显子5′-端上游第19位碱基（第10内含子内）发生G→A颠换。另2例散发RP患者分别发现第4外显子5′-端上游30与31碱基间2个碱基（GT）插入和第18外显子3′-端下游第15个碱基发生G→C转换。结论：PDE6B基因的复合杂合突变可能是我国散发性RP患者的致病基因,通常以视杆细胞受累较重,其眼部临床表现符合典型的RP患者特征,我国RP患者的PDE6B基因内含子变异呈多种形式。     

Best病家系卵黄样黄斑营养不良基因突变分析

目的 观察Best病家系卵黄样黄斑营养不良基因(VMD2)基因型与表现型之间的相互关系，为建立Best病基因诊断方法提供理论依据。 方法 采用聚合酶链反应（PCR）和DNA直接测序法对一个Best病家系10个成员的VMD2基因编码区和启动子序列进行突变筛查，并与同时采用相同方法结合构像敏感性凝胶电泳(CSGE)对100个正常对照者的VMD2基因筛查结果进行比较。 结果 Best病家系10个成员中，9人VMD2基因外显子2第223位碱基C-T颠换，其中6人通过眼底和眼电生理检查证实为Best病患者，2人为该突变的纯合子；另外有3个年轻成员虽然携带VMD2基因突变, 临床上仅表现为眼电图的异常。在正常对照者中没有发现上述突变。 结论 Best病家系中VMD2表现型与基因型密切相关，VMD2基因突变是该家系的致病原因。VMD2基因突变筛查可用于Best病的诊断和遗传咨询。 (中华眼底病杂志, 2006, 22: 86-89)     

视网膜色素变性和视锥-视杆细胞营养不良患者基因突变频谱分析

目的：分析中国宁夏地区常染色体隐性遗传视网膜色素变性(ARRP)及视锥-视杆细胞营养不良(CORD)的基因突变频谱。

方法：纳入2016-09/2020-02在宁夏人民医院眼科医院就诊的35例ARRP患者和18例常染色体隐性CORD患者,行详细的眼科检查。抽取外周静脉血,对先证者应用包含232个致病基因的遗传性视网膜疾病捕获芯片进行靶向捕获富集高通量测序。利用在线分析软件对可疑基因变异致病性进行预测,利用Sanger测序对家系成员进行共分离分析。

结果：ARRP患者35例中,检测到致病基因16个,以RP1基因突变率最高,占14%(5/35),其次为ABCA4、CRB1和EYS基因,均占11%(4/35); 18例常染色体隐性CORD患者中,检测到致病基因10个,以ABCA4基因突变率最高,占28%(5/18),其次为ALMS1、PROM1、RPE65、USH2A基因,均占11%(2/18); ARRP和CORD患者中,共同致病基因有ABCA4、CLN3、CRB1、PROM1、NRL共5个,占42%(22/53)。

结论：ARRP及CORD两种疾病在表型之间具有一定程度的相似性和交叉性,致病基因突变谱上存在一定重叠性。宁夏地区最常见的重叠基因为ABCA4。     

Expression of the TIGR gene in the iris,ciliary body,and trabecular meshwork of the human eye

Purpose: To identify mutations in the rhodopsin ( RHO ) gene in Chinese patients with autosomal dominant retinitis pigmentosa (ADRP) and to measure the prevalence rate of RHO mutations in Chinese ADRP cases. Methods: Thirteen Chinese families with ADRP were clinically characterized. The complete coding region and intron splice sites of RHO were analyzed for mutations with single-strand conformation polymorphism (SSCP) analysis and direct genomic sequencing. Results: One of the 13 Chinese families with ADRP was found to have a new, previously unidentified RHO mutation, a change from GAG to TAG at codon 341. The mutation (E341X) results in an in-frame stop codon, leading to the truncation of the rhodopsin protein. Mutation E341X was not detected in 100 normal control individuals. Patients carrying mutation E341X reported night blindness and showed optic atrophy, vessel attenuation, and a few bone spicule-like pigments in peripheral retina at the age of 23–25 years. At the age of 30 years, visual acuity was severely impaired, peripheral visual field was greatly constricted, rod and cone ERG was not detectable, and only a slight left cone response remained. Conclusion: We have identified a novel rhodopsin mutation (E341X) in a Chinese family with ADRP. The location and character of the mutation expand the spectrum of RHO mutations causing RP. Identification of a RHO mutation in one of the 13 ADRP families studied suggests that only 7.7% of the ADRP cases in a Chinese population were caused by RHO mutations, a ratio significantly lower than that from North America or Europe.     

完全型X连锁先天性静止性夜盲临床和基因研究

目的 明确一国人家族遗传性完全型X连锁先天性静止性夜盲(CSNB)的诊断，并检定致病基因突变。 方法 对一CSNB家系进行临床研究和系谱分析。采集家族中5位患者和16位正常人的静脉血并提取基因组DNA。通过连锁分析确定该病致病基因的染色体位点后，应用聚合酶链反应（PCR）扩增候选基因外显子及其侧翼，直接测序确定致病的基因突变。采用PCR直接测序法进行群体分析。对照组包括正常人群对照和家族内正常对照，按照一定标准入选。 结果 该CSNB家系家族中所有患者NYX基因外显子2发生了错义突变，核苷酸772位的腺嘌呤被胞嘧啶取代（A772C）；对应的苏氨酸改变为脯氨酸 (T258P)，女性携带者均为杂合。家族中正常人及110名正常人群对照均未发现该突变。 结论NYX新突变A772C (T258P )和该家系X连锁CSNB相关。(中华眼底病杂志，2007，23：184-188)