雌激素对蓝光及过氧化氢诱导的ARPE-19细胞内活性氧生成的影响

目的:观察17-β雌二醇(E2)对蓝光及过氧化氢(H2O2)诱导的人视网膜色素上皮ARPE-19细胞内活性氧(reactive oxygen species,ROS)生成的影响方法:对培养的ARPE-19细胞予以浓度为10nmol/L,100nmol/L,1μmol/L的E2预处理2h后接受蓝光照射(470±20nm,2000±500lx)或200μmol/LH2O2处理,在处理前、处理后30min;1,2,4h行2′,7′-二氢二氯荧光黄双乙酸钠(DCFH-DA)细胞内ROS荧光染色,以490nmol/L荧光显微镜观察照相,收集细胞后以流式细胞仪检测荧光强度。结果:蓝光照射和过氧化氢均可显著增强ARPE-19细胞内的ROS荧光,提示蓝光照射和过氧化氢处理均成功诱导氧化应激,10nmol/L、100nmol/L、1μmol/L17β-雌二醇剂量依赖性地减弱蓝光照射和过氧化氢处理后ARPE-19细胞内的ROS荧光增强的幅度。结论:蓝光照射及过氧化氢处理可诱导ARPE-19细胞内活性氧水平增高;17β-雌二醇可剂量依赖性地抑制蓝光照射诱导的ARPE-19细胞内活性氧水平增高。     

17-β雌二醇对H2O2诱导氧化损伤的晶状体上皮细胞的保护作用

目的 探讨17-β雌二醇对H2O2诱导氧化损伤的晶状体上皮细胞的保护作用.方法 将体外培乔的晶状体上皮细胞分为4组;空白对照组:以正常培养液培养;H2O2损伤组:给予培养融合状态达到80％的晶状体上皮细胞每孔加入100μmol·L-1H2O2,作用12 h;17-β雌二醇低浓度组:用10 μmol·L-1 17-β雌二醇孵育细胞24h后,加入H2O2作用12 h;17-β雌二醇高浓度组:用100 μmol·L-117-β雌二醇孵育细胞24 h后,加入H2O2作用12 h.通过CCK-8法测定细胞活力,流式细胞仪检测细胞凋亡率,荧光探针标记法测定细胞内活性氧自由基(reactive oxygen species,ROS),使用721 D分光光度计测定细胞内过氧化氢酶(catalase,CAT)、超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)及谷胱甘肽过氧化物酶(glutathione peroxidase,GSH-Px)含量.结果 H2O2损伤组晶状体上皮细胞经氧化损伤处理后,细胞存活率明显下降,与空白对照组相比差异有统计学意义(P＜0.05).与H2 O2损伤组(59.34％)相比,17-β雌二醇低浓度组和高浓度组晶状体上皮细胞存活率分别提高到67.44％和78.52％,差异均有统计学意义(均为P＜0.05).H2O2诱导损伤后,H2 O2损伤组晶状体上皮细胞凋亡率为(41.30±3.21)％,空白对照组为(1.67±0.32)％,两组比较差异有统计学意义(P＜0.0I).17-β雌二醇低浓度组和高浓度组晶状体上皮细胞凋亡率分别为(20.97±1.13)％和(14.27±0.90)％,与H2 O2损伤组比较差异均有统计学意义(均为P＜0.05).采用H2 DCFDA荧光探针检测胞内ROS变化情况,H2 O2损伤组细胞内ROS表达明显升高,DCF荧光信号明显增强,ROS主峰向基线右侧移位;17-β雌二醇低浓度组和高浓度组荧光信号强度逐渐减弱,ROS主峰向基线左侧移位.H2O2损伤组晶状体上皮细胞内CAT、SOD及GSH-Px含量均降低,与空白对照组相比差异均有统计学意义(均为P＜0.05);17-β雌二醇低浓度组和高浓度组CAT、SOD及GSH-Px含量较H2O2损伤组均逐渐升高,差异均有统计学意义(均为P＜0.05).结论 17-β雌二醇对H2 O2诱导损伤的晶状体上皮细胞具有明显的保护作用.     

依达拉奉对大鼠视神经钳夹伤后视网膜细胞的保护作用

目的探讨大鼠视神经钳夹伤致视网膜细胞凋亡过程中活性氧(reactive oxygen species,ROS)的含量和依达拉奉对视网膜细胞的保护作用。方法选择健康清洁级SD大鼠192只(384眼),雌雄各半,随机分为正常组、假手术组、对照组、治疗组,每组各48只。对照组、治疗组用视神经钳夹法制作大鼠视神经夹挫伤模型;治疗组造模后腹腔注射依达氉拉奉30mg·kg-1,用生理盐水稀释后每隔12h腹腔注射给药。给药时间为30min,共14d。分别于造模后3d、6d、10d、14d处死大鼠。光镜下观察各组不同时间点视网膜结构,通过激光共聚焦显微镜观察视网膜切片TUNEL荧光标记,2’,7’-二氯双氢荧光素双乙酸酯为标记探针,通过流式细胞术定量检测各组不同时间点视网膜细胞内2’,7’-二氯双氢荧光素的荧光强度。以AnnexinV/PI双染色法通过流式细胞术定量检测各组不同时间点视网膜细胞凋亡率。结果造模后3～14d,正常组及假手术组视网膜细胞偶见TUNEL阳性标记;对照组见大量TUNEL阳性标记细胞,但治疗组明显少于对照组。视网膜细胞中ROS的表达量在造模后3d、6d、10d、14d时正常组分别为32.530±2.203、43.600±3.635、32.800±1.952、45.330±2.902,治疗组分别为84.507±3.754、65.130±5.308、63.400±5.226、66.990±6.320,对照组分别为92.830±2.875、99.900±0.100、99.300±1.212、92.470±2.159,每个时间点治疗组和对照组比较、正常组和对照组比较、正常组和治疗组比较,差异均有统计学意义(均为P<0.05);假手术组与正常组间相比差异均无统计学意义(均为P>0.05)。细胞总凋亡率也明显升高,造模后3d、6d、10d、14d时正常组分别为(9.550±0.325)%、(10.380±0.642)%、(11.540±1.224)%、(10.520±0.839)%,治疗组分别为(22.960±2.574)%、(27.590±1.369)%、(33.950±4.580)%、(25.810±2.170)%,对照组分别为(35.510±3.086)%、(37.550±2.357)%、(40.220±5.011)%、(34.320±3.351)%,每个时间点治疗组和对照组、正常组和对照组、正常组和治疗组之间比较,差异均有统计学意义(均为P<0.05),假手术组与正常组间相比差异均无统计学意义(均为P>0.05)。结论依达拉奉通过清除ROS,抑制了视网膜细胞凋亡,具有一定的视网膜细胞保护作用。     

灯盏花素通过调节Bcl-2和Bax表达拮抗高糖诱导的RPE细胞损伤

目的:探讨灯盏花素对高糖环境下人视网膜色素上皮(RPE)细胞氧化应激的影响。方法:常规培养RPE细胞,分为对照组(葡萄糖浓度为5.5mmol/L)、高糖组(葡萄糖浓度为30mmol/L)、灯盏花素低浓度组(30mmol/L葡萄糖+1μmol/L灯盏花素)和灯盏花素高浓度组(30mmol/L葡萄糖+10μmol/L灯盏花素)。细胞划痕实验观察RPE细胞的迁移性,CCK-8法检测细胞活性,流式细胞术检测细胞内活性氧(ROS)水平变化,Hoechst染色法观察凋亡细胞比例,Western blot分析各组Bcl-2和Bax的变化。结果:细胞划痕实验结果显示,灯盏花素低浓度组和灯盏花素高浓度组RPE细胞形态较高糖组改善,细胞迁移性较高糖组增加;CCK-8结果显示,用1、10μmol/L浓度的灯盏花素处理后,RPE细胞存活率分别提高到61.06%±5.59%和79.81%±7.04%,与高糖组(40.63%±4.72%)比较有差异(P<0.05);2’,7’-二氯二氢荧光素二乙酸酯(H2DCFDA)荧光探针染色结果显示,灯盏花素抑制了RPE细胞内ROS水平;Hoechst染色法显示,1、10μmol/L灯盏花素处理后发生凋亡的RPE细胞数量逐渐减少;Western blot结果显示,灯盏花素增强了Bcl-2蛋白的表达,降低了Bax蛋白的表达。结论:灯盏花素可以抑制高糖诱导的RPE细胞氧化损伤和凋亡的发生,为糖尿病视网膜病变的治疗靶点研究提供了理论支持。     

长链非编码RNA-P21在过氧化氢诱导的人晶状体上皮细胞损伤中的表达

目的检测过氧化氢诱导的人晶状体上皮细胞HLE-B3生物活性及长链非编码RNA-p21(lncRNA-p21)的表达变化。方法将HLE-B3细胞分为正常对照组和过氧化氢组, 分别用正常培养液和含200 μmol/L过氧化氢的培养液培养24 h。采用MTS比色法检测细胞活力;采用活性氧试剂盒检测细胞活性氧簇(ROS)的水平;采用流式细胞术检测细胞凋亡情况;采用Caspase-3活性试剂盒法检测细胞Caspase-3活性;采用Western Blot方法检测细胞凋亡相关Bax, Bcl-2蛋白表达;采用流式细胞术检测细胞周期分布;采用EDU增殖试剂盒检测细胞增殖能力;采用实时荧光定量PCR法检测细胞中lncRNA-p21的表达;采用荧光原位杂交实验法检测细胞中lncRNA-p21的定位。结果过氧化氢组细胞ROS水平为4.65±0.38, 明显高于正常对照组的1.00±0.01, 差异具有统计学意义(t=16.66, P<0.05)。与正常对照组相比, 过氧化氢组细胞凋亡率显著上升, Caspase-3活性增强, 凋亡蛋白Bax相对表达量明显升高, 差异均有统计学意义(t=20.69、3...     

miR-15a对高糖诱导人晶状体上皮细胞氧化应激损伤的促进作用及其机制

目的探讨微小RNA15a(miR-15a)对高糖诱导的人晶状体上皮细胞(LECs)抗氧化应激能力的调控作用及其可能的作用机制。方法收集糖尿病性白内障(DC)患者晶状体前囊膜组织标本及健康供体前囊膜组织标本各26个, 采用实时荧光定量PCR法和Western blot法分别检测组织中miR-15a和沉默信息调节蛋白1(SIRT1)的表达。取人晶状体上皮细胞系HLEB-3细胞分别于0、10、20和50 mmol/L葡萄糖条件下培养24 h, 采用实时荧光定量PCR法检测细胞中miR-15a表达;采用Western blot法检测细胞中SIRT1、叉头转录因子3a(FOXO3a)、p53蛋白表达;采用流式细胞术检测细胞凋亡;采用2’’, 7’’-二氯荧光黄双乙酸盐(DCFH-DA)探针法检测细胞内源性活性氧簇(ROS)含量, 试剂盒检测细胞内源性活性氧总抗氧化能力(T-AOC)、超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性及丙二醛(MDA)浓度。将miR-15a对照和miR-15a抑制剂分别转染至HLEB-3细胞, 在50 mmol/L葡萄糖条件下培养24 h, 采用流式...     

糖基化终末产物对体外培养牛眼小梁细胞氧化应激及凋亡的影响

目的通过观察糖基化终末产物(advancedglycationendproducts,AGE)对体外培养牛眼小梁细胞凋亡的影响,研究AGE与原发性开角型青光眼(primaryopenangleglaucoma,POAG)之间的关系,进一步探讨其发病机制。方法 体外培养牛眼小梁细胞,通过形态学观察和神经元特异性烯醇化酶染色对培养的细胞进行鉴定。将第3代小梁细胞接种于6孔培养板,在培养基中加入不同浓度(0μgmL-1、50μgmL-1、100μgmL-1、200μgmL-1)的AGEBSA培养96h。终浓度(200μgmL-1)的AGEBSA培养液处理细胞不同时间(48h、72h、96h)。应用流式细胞仪检测小梁细胞凋亡率;活性氧荧光探针2’,7’二氯荧光黄双乙酸盐检测细胞内活性氧(ROS)水平。结果 50μgmL-1、100μgmL-1、200μgmL-1AGEBSA作用96h后细胞凋亡率分别为(5.60±0.25)%、(9.57±0.08)%、(17.68±0.21)%,与对照组(0μgmL-1AGEBSA)细胞凋亡率(445±0.12)%相比均明显增高,且差异均有统计学意义(均为P<0.05);200μgmL-1AGEBSA作用细胞48h、72h、96h后凋亡率分别为(10.51±0.28)%、(13.47±0.42)%、(17.68±0.21)%,与对照组相比也均明显增高,差异均有统计学意义(均为P<0.05)。与对照组比较,AGEBSA处理后细胞内ROS水平显著提高,差异有统计学意义(P<0.05),BSA组差异无统计学意义(P>0.05)。结论 在体外培养的条件下,AGE可能通过刺激牛眼小梁细胞产生大量ROS介导小梁细胞凋亡。     

蛋白酶体β5过表达对人晶状体上皮细胞抗氧化能力的影响

目的:研究蛋白酶体β5(PSMB5)过表达对人晶状体上皮细胞抗氧化能力的影响。方法:实验研究。构建重组质粒pcDNA3.1-PSMB5,将其转染入人晶状体上皮细胞株SRA01/04中,形成稳定表达(作为实验组),设pcDNA3.1空载体作为对照组。将2组细胞置于40 μmol/L H 2O 2环境下,Hoechst 33342荧光染色观察2组细胞核形态的变化;流式细胞仪检测2组细胞凋亡率的变化。数据采用独立样本 t检验。 结果:40 μmol/L H 2O 2环境下,Hoechst 33342荧光染色可见,与实验组相比,对照组的细胞核明显皱缩、变形;流式细胞仪检测发现,实验组和对照组的细胞凋亡指数分别为(9.3±0.9)%和(15.7±1.9)%,均高于处理前的(5.9±0.8)%和(7.1±1.1)%,对照组凋亡指数比实验组的凋亡指数更高( t=3.742, P=0.008)。 结论:PSMB5基因过表达能有效提高人晶状体上皮细胞的抗氧化能力。     

晶状体上皮细胞凋亡与过氧化氢诱导白内障形成研究

目的 探讨晶状体上皮细胞凋亡与皮质性白内障形成的关系。方法用200μmol／L过氧化氢(H2O2)诱导离体兔晶状体白内障形成,TUNEL法检测H：0：作用1,6,18,24,48h的晶状体上皮凋亡细胞,同时测定晶状体超氧化物歧化酶(SOD)活性。结果H2O2作用1h,晶状体保持透明,未发现凋亡上皮细胞。随着作用时间的延长,凋亡上皮细胞数量逐渐增多,晶状体逐渐变混浊。SOD活性早期无变化,18h后逐渐降低。结论晶状体上皮细胞凋亡是皮质性白内障形成的细胞学基础,其发生先于晶状体抗氧化机制的变化。     

两种低强度微波辐射致兔晶状体上皮细胞改变的定量研究

目的　观察辐射强度为 5mW cm2 和 10mW cm2 的微波对兔晶状体上皮细胞的影响 ,探讨国际公认微波辐射安全域值的可靠性。方法　以辐射强度为 5mW cm2 (Ⅰ组 )和 10mW cm2 (Ⅱ组 )的微波分别连续照射兔眼 3h ,采用AnnexinⅤ 碘化丙啶荧光标记双染色流式细胞技术定量检测兔晶状体上皮细胞中正常细胞、早期凋亡细胞及继发性坏死细胞的数量 ,分别记录百分比。以对侧正常眼为对照。结果　Ⅰ组实验眼早期凋亡细胞的平均百分比为 (16 0± 6 8) % ,明显高于自身正常对照眼 ,差异有非常显著意义 (P <0 0 1) ;实验眼继发性坏死细胞的平均百分比与自身正常对照眼比较 ,差异无显著意义 (P >0 0 5 )。Ⅱ组实验眼早期凋亡细胞的平均百分比与自身正常对照眼比较 ,差异无显著意义 (P >0 0 5 ) ;实验眼继发性坏死细胞的平均百分比为 (16 2± 5 6 ) % ,明显高于自身正常对照眼 ,差异有显著意义 (P <0 0 5 )。 2个组实验眼早期凋亡细胞的平均百分比比较 ,差异无显著意义(P >0 0 5 ) ;继发性坏死细胞的平均百分比比较 ,Ⅱ组明显高于Ⅰ组 ,差异有显著意义 (P <0 0 5 )。结论　辐射强度为 5mW cm2 和 10mW cm2 的微波均可导致兔晶状体上皮细胞发生不可逆损伤 ,且微波辐射强度增加可加重损伤改变 ;5mW cm2 和 10mW c     

Strabisme Alternant - Etude clinique - traitement

The author defines motor and sensory alternation: the term alternation should not be used in isolation, it should always be accompanied by the name of the parameter concerned. Sensory alternation is always found together with motor alternation but the reverse is not true.The examining criteria for a diagnosis of sensory alternation are given, sensory alternation must not be confused with alternating inhibition. Working from clinical observations of cases of motor alternating strabismus, the author selects 2 types of binocular sensory relations which allow one to differentiate between:- cases of primary alternating strabismus- cases of secondary alternating strabismusThese forms will develop in different ways; in both cases a cure is possible providing that the right treatment is prescribed and once prescribed carefully followed, etc. It is always a case of serious forms of strabismus whose developmental period is spread over several years.According to the authors, the frequency of cases of true primary strabismus is from 1–3%, the frequency of cases of secondary alternating strabismus varies according to the type of therapy practised on cases of monocular strabismus with amblyopia. These latter will become cases of alternating strabismus under the influence of certain types of therapy carried out over several years (penalization, rocking, alternated occlusion, etc...).Experimental data on kittens confirm clinical data; kittens placed in abnormal environments during the sensitive period will show modification in the distribution of cortical cells and the absence of binocular cells (either because the excitation of the two eyes was not simultaneous, or not identical: artificial strabismus, occlusion, opaque glasses). This disturbances become irreversible after a certain period of exposure (a function of age, length of exposure, etc...).It is thus necessary to bear in mind: 1) the iatrogenic risks of certain orthoptic treatments, 2) the necessity for a binocular form of treatment as soon as possible, as once a certain stage is passed, cortical plasticity diminishes and the elaboration of normal binocular relations becomes impossible.

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Effects of Adenosine Agonists on Intraocular Pressure and Aqueous Humor Dynamics in Cynomolgus Monkeys

The effects of single or multiple topical doses of the relatively selective A₁adenosine receptor agonists (R)-phenylisopropyladenosine (R-PIA) and N⁶-cyclohexyladenosine (CHA) on intraocular pressure (IOP), aqueous humor flow (AHF) and outflow facility were investigated in ocular normotensive cynomolgus monkeys. IOP and AHF were determined, under ketamine anesthesia, by Goldmann applanation tonometry and fluorophotometry, respectively. Total outflow facility was determined by anterior chamber perfusion under pentobarbital anesthesia. A single unilateral topical application of R-PIA (20–250 μg) or CHA (20–500 μg) produced ocular hypertension (maximum rise=4.9 or 3.5 mmHg) within 30 min, followed by ocular hypotension (maximum fall=2.1 or 3.6 mmHg) from 2–6 hr. The relatively selective adenosine A₂antagonist 3,7-dimethyl-1-propargylxanthine (DMPX, 320 μg) inhibited the early hypertension, without influencing the hypotension. Neither 100 μg R-PIA nor 500 μg CHA clearly altered AHF. Total outflow facility was increased by 71% 3 hr after 100 μg R-PIA. In conclusion, the early ocular hypertension produced by topical adenosine agonists in cynomolgus monkeys is associated with the activation of adenosine A₂receptors, while the subsequent hypotension appears to be mediated by adenosine A₁receptors and results primarily from increased outflow facility.