雷公藤内酯醇对鳞癌A431细胞增殖凋亡及其COX-2和survivin表达的影响

目的 观察雷公藤内酯醇(TP)对皮肤鳞癌A431细胞株增殖与凋亡、环氧合酶-2(COX-2)和生存素(survivin)mRNA表达水平的影响,探讨TP抗皮肤肿瘤的作用机制.方法 以体外培养的人皮肤鳞癌A431细胞株为研究对象,MTT比色法测定不同浓度TP对A431细胞株增殖活性的影响,光镜观察细胞形态学变化,流式细胞仪检测TP作用于A431细胞株后细胞周期的分布以及凋亡峰的出现.RT-PCR法检测TP对A431细胞株COX-2和survivin mRNA表达水平的影响.结果 随着TP剂量的增加及作用时间的延长,TP对A431细胞株增殖活性的抑制作用增强,TP能够诱导A431细胞株凋亡和改变细胞周期的分布,与对照组相比,G0/G1期细胞比例增多(P<0.05),S期细胞比例减少(P<0.05);另外,TP能抑制A431细胞COX-2和survivin mRNA的表达,不同浓度处理组两两相比,差异具有显著性(P<0.01).结论 TP通过诱导A431细胞凋亡、抑制A431细胞COX-2和survivin mRNA表达发挥抗皮肤肿瘤的作用.     

雷公藤内酯醇对红白血病K562细胞株增殖和凋亡的影响

目的探讨雷公藤内酯醇对人类红白血病K562细胞株增殖和凋亡的影响。方法运用四甲基偶氮唑盐(MTT)法、流式细胞术(FCM)等检测雷公藤内酯醇对K562细胞株增殖和凋亡的影响。结果雷公藤内酯醇能明显抑制K562细胞的增殖,呈时间与剂量依赖性,作用24h时其半数抑制浓度IC50为25nmol/L。且经雷公藤内酯醇处理后K562细胞G1/S期所占的百分比较对照组上升(P<0.05)。雷公藤内酯醇作用48h,其浓度的变化与K562细胞凋亡率具有相关性(r=0.97,P<0.05),而作用24h时,则无明显诱导凋亡的作用。结论雷公藤内酯醇有明确的抗白血病细胞增殖的能力,干扰K562细胞周期,上调细胞G/S期检测点,并具有促进细胞凋亡的作用。     

雷公藤内酯醇对人绒毛膜癌细胞株JAR增殖凋亡及凋亡调控蛋白BCL-2/BAX表达的影响

目的:探讨雷公藤内酯醇(triptolide,TP)对人绒癌细胞株JAR增殖、凋亡及凋亡调控蛋白BCL-2/BAX表达的影响。方法:以体外培养的人绒癌细胞株JAR为研究对象,MTT法检测TP对细胞增殖的抑制情况;TUNEL法观察TP作用于细胞后引起细胞凋亡情况,PCR和Western blot检测TP对凋亡调控蛋白BCL-2/BAX mRNA和蛋白表达的影响。结果:随着作用浓度的增加及时间延长,TP能明显抑制JAR细胞增殖并诱导其凋亡(P<0.05);并能下调凋亡抑制蛋白BCL-2的mRNA和蛋白的表达,上调凋亡促进蛋白BAX的mRNA和蛋白表达(P均<0.05)。结论:雷公藤内酯醇在体外能抑制人绒癌细胞株JAR增殖,诱导其凋亡;凋亡调控蛋白BCL-2/BAX表达水平的变化可能是TP诱导JAR细胞凋亡的重要机制。     

JMJD2B对人皮肤鳞状细胞癌A431细胞株生物学行为的影响

目的 探讨组蛋白去甲基化酶JMJD2B(Jumonji domain-containing protein 2B)小干扰RNA(siRNA)对人皮肤鳞状细胞癌A431细胞株生物学行为的影响.方法 采用免疫组化和细胞免疫荧光的方法检测JMJD2B在人皮肤鳞状细胞癌组织和A431细胞中的表达,转染JMJD2B siRNA至A431细胞株,分别采用CCK-8、克隆形成实验、流式细胞仪、Transwell法检测细胞增殖、克隆、周期分布、凋亡、迁移及侵袭情况.结果 JMJD2B在肿瘤组织中的表达高于正常皮肤.与未转染组和转染对照组比较,JMJD2B siRNA转染组增殖、克隆、迁移及侵袭能力显著受抑,肿瘤细胞发生G1期阻滞,细胞凋亡比例增加(P＜0.05).结论 JMJD2B在人皮肤鳞状细胞癌中呈高表达,JMJD2B siRNA能促进A431细胞的凋亡,同时也抑制了肿瘤细胞的增殖、克隆、迁移以及侵袭的能力.     

蜂毒肽通过线粒体凋亡途径促进皮肤鳞状细胞癌A431细胞株对5-FU的敏感性

目的探究蜂毒肽通过线粒体凋亡途径促进皮肤鳞状细胞癌A431细胞株对5-氟尿嘧啶(5-FU)敏感性机制。方法筛选蜂毒肽作用于A431细胞株的半数抑制浓度(IC₅₀),并用于后续干预浓度。将A431细胞随机分为对照组(不干预)、蜂毒肽组(0.5 μmol/L蜂毒肽)、5-FU组(0.25 μmol/L 5-FU)和联合组(0.5 μmol/L蜂毒肽+0.25 μmol/L 5-FU)。检测各组A431细胞在24、48、72 h细胞活性、72 h细胞周期占比,以及细胞凋亡率及细胞线粒体凋亡蛋白(Smac)、活化半胱氨酸蛋白酶-3(cleaved Caspase-3)、细胞色素C(Cyt C)、促凋亡蛋白(Bax)的蛋白表达量。采用裸鼠荷瘤实验观察各组细胞的肿瘤生长抑制率。结果与对照组相比,不同时间点下蜂毒肽组、5-FU组、联合组的细胞存活率降低(P＜0.05);与蜂毒肽组和5-FU组相比,不同时间点下联合组的细胞存活率降低(P＜0.05)。与对照组比较,蜂毒肽组、5-FU组、联合组的细胞凋亡率、G0/G1期细胞比例、Smac、cleaved Caspase-3、Cyt C、Bax蛋白表达增加(P＜0.05);与蜂毒肽组和5-FU组相比,联合组的细胞凋亡率、G0/G1期细胞比例、Smac、cleaved Caspase-3、Cyt C、Bax蛋白表达增加(P＜0.05)。与对照组比较,蜂毒肽组、5-FU组、联合组的S期与G2/M期细胞比例降低(P＜0.05);与蜂毒肽组和5-FU组比较,联合组的S期与G2/M期细胞比例降低(P＜0.05)。与蜂毒肽组和5-FU组比较,联合组肿瘤生长第30天的肿瘤生长抑制率升高(P＜0.05)。结论蜂毒肽可增强人皮肤鳞状细胞癌A431细胞对5-FU的敏感性,蜂毒肽和5-FU联合使用可将A431细胞周期有效阻滞在G0/G1期,促进细胞凋亡,抑制细胞增殖,其机制可能与激活线粒体凋亡途径有关。     

雷公藤内酯醇抑制胰腺癌细胞增殖和诱导凋亡的研究

目的：探讨雷公藤内酯醇（TL）对胰腺癌细胞增殖和凋亡的影响及其机制。方法：胰腺癌细胞SW1990与TL共同孵育,采用MTT法观察TL对胰腺癌细胞增殖的抑制作用,以流式细胞仪AnnexinⅤ/碘化丙啶（PI）双染法检测TL对SW1990细胞的凋亡的诱导作用和对细胞周期的干预作用。结果：TL抑制SW1990细胞增殖和促进细胞凋亡,呈现为浓度和时间依赖性,TL阻滞胰腺癌细胞周期于G0/G1期。结论：TL能抑制胰腺癌细胞增殖、诱导细胞凋亡及干预胰腺癌细胞周期,TL具有潜在的肿瘤治疗作用。     

雷公藤内酯醇通过p38MAPK信号通路诱导Hut102细胞凋亡

目的 探讨雷公藤内酯醇(triptolide,TP)诱导皮肤T细胞淋巴瘤蕈样肉芽肿细胞株Hut102的凋亡及其机制.方法 体外培养的Hut102细胞与12.5、25、50、100 nmol/L雷公藤内酯醇共同孵育,分别在24、48、72 h用MTT法检测Hut102细胞的增殖抑制率,Annexin V-FITC/PI 双染流式细胞术分析细胞凋亡,Western blot检测Hut102细胞中磷酸化p38丝裂原活化蛋白激酶(p-p38)、caspase-3蛋白的表达水平.结果 不同浓度雷公藤内酯醇(12.5、25、50、100 nmol/L)作用Hut102细胞24 h后的增殖抑制率分别为8.67%、30.02%、52.54%、59.62%.Annexin V-FITC/PI 双染流式细胞术检测经25、50、100 nmol/L雷公藤内酯醇处理24 h后Hut102细胞凋亡率分别为9.19%、21.49%、26.34%,当50 nmol/L雷公藤内酯醇组预先用p38MAPK特异性抑制剂SB203580干预后,Hut102细胞凋亡率下降为14.35%.不同浓度雷公藤内酯醇(50、100 nmol/L)处理Hut102细胞后p38、caspase-3蛋白的表达被激活,同样50 nmol/L雷公藤内酯醇组也预先用p38MAPK特异性抑制剂SB203580干预,结果p-p38的表达降低,caspase-3激活被抑制.结论 雷公藤内酯醇可以抑制Hut102细胞的增殖,其作用机制可能是通过激活p38MAPK信号通路使部分Hut102细胞产生凋亡.     

雷公藤内酯醇对成纤维细胞的影响

目的：研究雷公藤内酯醇(Tri)对成纤维细胞的细胞动力学及形态学影响，以探讨其抑制增生性瘢痕的机制。方法：用光镜、电镜观察用药前后成纤维细胞的形态学变化，用流式细胞仪检测细胞周期和细胞凋亡。结果：用药组在光镜下细胞密度较低，细胞体细长，部分失去正常的细胞形态、细胞质红染，并可见典型的凋亡小体；电镜下粗面内质网疏松，内容物减少，并可见各期凋亡细胞。细胞动力学检测(FCM)示用药组凋亡比例(AI)明显增加，并呈一定的量效关系，对细胞周期则无影响。结论：Tri促进成纤维细胞的凋亡，可能对胶原的分泌也有一定的影响。     

雷公藤内酯醇抗肿瘤作用研究进展

雷公藤内酯醇是从卫矛科植物雷公藤中分离出的环氧化二萜内酯化合物，对多种肿瘤细胞均有很好的杀伤作用，其主要作用机制是通过抑制细胞增殖、干预细胞周期、诱导细胞凋亡、抑制核因子NF-κB、抑制基质金属蛋白酶（MMP）的表达、影响血管形成等多种途径来诱导肿瘤细胞凋亡。     

雷公藤内酯醇对T淋巴细胞增殖活性的影响

应用体外细胞培养方法，研究了雷公藤内酯醇（Triptolide，Tri）对小鼠T淋巴细胞增殖活性的影响。结果表明：Tri对ConA激活的淋巴细胞转化及特异性抗原激活的混合淋巴细胞反应均有明显抑制作用，抑制作用的强度与Tri的应用剂量及时机有关。     

青蒿琥酯对人表皮鳞癌A431细胞增殖和凋亡的影响

目的 初步探讨青蒿琥酯(artesunate,ART)对人表皮鳞癌细胞增殖和凋亡的影响及其相关机制.方法 以人表皮鳞癌细胞系A431为研究对象,人永生化角质形成细胞系HaCaT为正常对照,顺铂(diamminedichloroplatinum,DDP)为药物阳性对照,通过MTT法和流式细胞术观察ART对A431细胞增殖和凋亡的影响,以及铁离子抑制剂去铁敏(desferrioxamine.DFOM)部分阻断ART对A431细胞的生长抑制作用.结果 ART对A431细胞有较明显的增殖抑制作用,对HaCaT细胞的损害显著低于DDP;药物组ART60 μmol/L(IC50)作用A431细胞48 h,A431细胞阻滞于S期[(67.60±4.12)%,P<0.05],同时凋亡率上调[(19.87±0.03)%,P<0.01];药物阻断组DFOM 60μmol/L预处理A431细胞4 h、加入ART60 μmol/L作用钙h,凋亡率显著下调[(7.37±0.02)%,P<0.01],而周期检测未发生变化.结论 ART通过阻滞A431细胞停滞于S期和诱导A431细胞凋亡发挥增殖抑制作用,此作用在一定范围内与药物剂量呈正相关;ART对A431细胞的诱导凋亡作用与Fe2+介导有关;ART毒副作用明显低于DDP.     

奥沙利铂对人舌鳞癌CAL27细胞增殖和凋亡的影响及其机制

目的：探讨奥沙利铂（Oxaliplatin）对人舌鳞状细胞癌（简称舌鳞癌）CAL27细胞增殖和凋亡的影响,并阐明其潜在作用机制。方法：采用不同浓度（0、10、20、40和80 mg·L^-1）Oxaliplatin处理CAL27细胞,分别作为对照组和10、20、40及80 mg·L^-1 Oxaliplatin组,采用结晶紫染色法观察各组CAL27细胞形态表现,CCK-8法检测各组CAL27细胞增殖率,流式细胞术检测不同细胞周期CAL27细胞百分比和凋亡率,实时荧光定量PCR法检测各组CAL27细胞中周期蛋白依赖性激酶2（CDK2）和细胞周期蛋白E（cyclin E）mRNA表达水平,Western blotting法检测各组CAL27细胞中抗凋亡蛋白survivin和促凋亡蛋白Bax的表达水平。结果：与对照组比较,40 mg·L^-1 Oxaliplatin组CAL27细胞出现一定程度的皱缩,80 mg·L^-1 Oxaliplatin组CAL27细胞明显失去原有形态,细胞间连接丧失。与对照组比较,10、20、40和80 mg·L^-1 Oxaliplatin组CAL27细胞增殖率明显降低（P<0.05或P<0.01）。与对照组比较,40 mg·L^-1 Oxaliplatin组G₀/G₁期CAL27细胞百分比明显升高（P<0.01）,CDK2和cyclin E mRNA表达水平明显降低（P<0.05）。与对照组比较,40与80 mg·L^-1 Oxaliplatin组CAL27细胞凋亡率明显升高（P<0.01）。与对照组比较,40和80 mg·L^-1 Oxaliplatin组CAL27细胞中survivin蛋白表达水平明显降低（P<0.01）,Bax蛋白表达水平则明显升高（P<0.05或P<0.01）。结论：Oxaliplatin能够抑制CAL27细胞增殖,促进细胞凋亡,其机制可能与细胞发生G₀/G₁期阻滞以及survivin蛋白表达水平降低和Bax蛋白表达水平升高有关。     

RNAi抑制皮肤鳞癌A431细胞EGFR表达的实验研究

目的:研究RNA干扰(RNA interference,RNAi)对皮肤鳞癌A431细胞表皮生长因子受体(EGFR)基因表达的抑制作用及其对A431细胞增殖、凋亡的影响.方法:设计制备两对针对EGFR基因的小干扰RNA(small interfering RNA,siRNA),转染A431人皮肤鳞癌细胞株,采用RT-PCR法检测EGFR mRNA的表达;Western Blot测定EGFR蛋白的表达;MTT法检测细胞生长的影响;流式细胞仪检测细胞凋亡率.结果:siRNA2干扰后EGFR mRNA与蛋白的表达强度分别为(16.5±1.6)%和(11.1±1.6)%,与对照组比较有统计学差异(P<0.05);在EGFR表达受到抑制的同时,转染后的A431胞生长速度明显变慢;A431细胞的凋亡率为(12.6±1.4)%,与对照组比较有统计学差异(P<0.05).结论:siRNA2能有效抑制皮肤鳞癌细胞EGFR基因的表达,抑制细胞的增殖,并促进细胞凋亡.     

补骨脂乙素对舌鳞状细胞癌Tca8113细胞增殖的抑制作用和凋亡诱导作用及其机制

目的：观察补骨脂乙素（IBC）对人舌鳞状细胞癌Tca8113细胞增殖和凋亡的影响,并阐明其可能的作用机制。方法：将体外培养的Tca8113细胞分为对照组（0 μmol·L^-1）和不同浓度IBC组（10、20、40及80 μmol·L^-1）。通过MTT法检测细胞增殖抑制率,流式细胞术检测细胞凋亡率,Western blotting法检测各组细胞中Akt、p-Akt、Erk、p-Erk、Bax、Bcl-2和Caspase-3蛋白的表达水平。结果：MTT法检测,随着IBC浓度的增加和作用时间的延长,Tca8113细胞的增殖抑制率逐渐增加,12、24和48h半数抑制浓度（IC₅₀）分别为（285.13±8.97）、（132.40±7.76）和（58.56±5.93） μmol·L^-1,不同时间点IC₅₀比较差异有统计学意义（P < 0.05）。流式细胞术检测,与对照组（1.69%±0.65%）比较,作用48h后20和40 μmol·L^-1 IBC组细胞凋亡率（分别为8.21%±2.32%和22.45%±1.18%）明显升高（P < 0.05）。Western blotting法检测,与对照组比较,作用48h后20和40 μmol·L^-1 IBC组细胞中Bcl-2、p-Akt和p-Erk表达水平明显降低（P < 0.05）,Bax表达水平明显升高（P < 0.05）;Akt和Erk蛋白表达水平无明显变化（P > 0.05）;与对照组比较,作用48h后40 μmol·L^-1 IBC组Tca8113细胞中Caspase-3蛋白表达水平明显升高（P < 0.05）。结论：IBC可抑制Tca8113细胞的增殖并诱导细胞凋亡,Akt和Erk通路可能是其诱导肿瘤细胞凋亡的途径。     

PTEN基因调控口腔鳞癌细胞TCA-8113增殖及凋亡

目的 评估PTEN基因在人口腔鳞癌细胞系TCA-8113中的增殖抑制和促凋亡功能.方法 利用PTEN真核表达质粒转染TCA-8113细胞,另设PBS处理作为空白组,转染pcDNA3.1质粒和Lipofectamine处理作为对照组.采用MTT和克隆形成实验检测细胞增殖情况,采用流式细胞术、TUNEL和Western b...     

那可丁联合奥沙利铂对人舌鳞状细胞癌 Tca8113 细胞增殖及凋亡的影响

目的 探究那可丁联合奥沙利铂对人舌鳞状细胞癌Tca8113 细胞增殖及凋亡的影响。方法 将 体外培养的人舌鳞状细胞癌Tca8113 细胞随机分为空白对照组、奥沙利铂组、那可丁组和联合用药组。 CCK-8 法检测各组药物对Tca8113 细胞的存活率;Hoechst33342 染色荧光显微镜下观察凋亡形态变化;流 式细胞术检测细胞凋亡率;Western blotting 法检测各组细胞中Bax、Bcl-2、PARP、Cleaved Caspase-9 及 Cleaved Caspase-3 蛋白的表达水平。结果 奥沙利铂组、那可丁组和联合用药组Tca8113 细胞存活率较空白 对照组低（P <0.05）,联合用药组较奥沙利铂组、那可丁组低（P <0.05）。Hoechst33342 染色法结果显示：奥 沙利铂组、那可丁组和联合用药组处理后均使人舌鳞状细胞癌Tca8113 细胞发生凋亡特征性改变。奥沙利铂组、 那可丁组和联合用药组Tca8113 细胞凋亡率较空白对照组高（P <0.05）,联合用药组较奥沙利铂组、那可丁 组高（P <0.05）。奥沙利铂组、那可丁组和联合用药组Bax、PARP、Cleaved Caspase-9 及Cleaved Caspase-3 的蛋白表达较空白对照组高（P <0.05）,而Bcl-2 的蛋白表达较空白对照组低（P <0.05）,联合用药组Bax、 PARP、Cleaved Caspase-9 及Cleaved Caspase-3 的蛋白表达较奥沙利铂组、那可丁组高（P <0.05）,Bcl-2 的 蛋白表达较奥沙利铂组、那可丁组低（P <0.05）。结论 那可丁联合奥沙利铂对人舌鳞状细胞癌Tca8113 细 胞的生长具有协同抑制作用,并促其凋亡,其作用机制可能与调节细胞凋亡相关蛋白表达有关。     

大黄素抑制人口腔鳞癌细胞Tca8113增殖及细胞周期进程的实验研究

目的探讨大黄素对人口腔鳞癌细胞体外生长增殖及细胞周期改变的影响。方法采用2.5、5.0、10、20、40、60和80 μmol/L
大黄素分别干预体外培养的口腔鳞癌细胞Tca8113,作用24、48和72 h后,并设含0.1%二甲基亚砜的培养液作为对照组,通过
MTT检测不同浓度大黄素干预对于口腔鳞癌细胞Tca8113的增殖作用;以FCM检测不同浓度大黄素干预对于口腔鳞癌细胞周
期的影响;结合Western blotting 方法分析大黄素干预后对口腔鳞癌细胞周期相关蛋白CDK2、Cyclin E和P21 表达水平的变
化。结果大黄素能够在72 h内明显抑制Tca8113细胞生长以及增殖行为。MTT结果显示,随作用时间从24、48到72 h,大黄素
对于Tca8113细胞的抑制效应呈明显的时间—浓度依赖关系;由细胞周期检测结果显示,大黄素作用使口腔鳞癌Tca8113细胞
周期表现为G0~G1期细胞时相阻滞;蛋白免疫印迹则表明经大黄素干预口腔鳞癌Tca8113 细胞的细胞周期相关蛋白CDK2、
Cyclin E和P21表达水平明显降低,与空白对照组相比较,具有显著的统计学差异（P<0.05）。结论大黄素能够明确抑制人口腔鳞
癌细胞Tca8113的生长增殖以及影响其细胞分裂周期,这可能与抑制细胞周期调控信号通路中分子的活化与转导有关。
     

lncRNA UCA1对口腔鳞状细胞癌细胞增殖、凋亡的影响及其机制研究

目的 探究长链非编码RNA尿路上皮癌相关基因1（lncRNA UCA1）通过靶向miR-206调控Yes相关蛋白1（YAP1）的表达,介导口腔鳞状细胞癌（OSCC）细胞增殖、凋亡的分子机制。方法 通过实时荧光定量聚合酶链反应（qRT-PCR）检测人正常口腔角质细胞系HOK和人口腔鳞状细胞癌细胞株TSCCA、SCCl5、HN13、CAL27、HSC3和SCC9中lncRNA UCA1和microRNA-206（miR-206）的表达;在HN13细胞中敲除IncRNA UCA1,采用CCK-8法和流式细胞术检测其对HN13细胞增殖和细胞凋亡的影响;通过生物信息学网站starBase预测IncRNA UCA1、YAP1与miR-206的互补结合位点,并通过双荧光素酶实验验证它们之间的结合关系;Western blotting检测YAP1蛋白的表达。结果 qRT-PCR结果显示,相比于人正常口腔角质细胞系HOK,6种OSCC细胞中lncRNA UCA1 mRNA相对表达量上调（P <0.05）,而miR-206 mRNA相对表达量均降低（P <0.05）。与转染siNC的对照组相比,siUCA1组细胞活力下降,凋亡比例升高（P <0.05）。生物信息学预测结合双荧光素酶实验证实miR-206与lncRNA UCA1、YAP1均存在互补结合。qRT-PCR和Western blotting检测结果显示,siUCA1组miR-206 mRNA相对表达量较对照组升高（P <0.05）,YAP1 mRNA相对表达量较对照组降低（P <0.05）,而同时转染siUCA1和miR-206 inhibitor则抑制miR-206表达,恢复YAP1的表达（P <0.05）。结论 lncRNA UCA1在OSCC细胞中高表达,通过抑制miR-206的表达,上调YAP1,从而促进OSCC细胞增殖,抑制凋亡。