Bcl-2 mRNA在中药防治早期激素性股骨头坏死中的表达变化

目的:建立激素性股骨头坏死家兔模型,观察和评价中药对早期激素性股骨头坏死的防治效果,并探讨其作用机理。方法:选用成年雄性日本大耳白兔随机分为3组:正常组、治疗组、模型组。治疗组和模型组经耳缘静脉注射马血清两次,第1次10mL.kg-1,间隔3 w后,第2次注射6mL.kg-1,间隔2w后,连续3d每日1次腹腔注射甲强龙45mg.kg-1。注射激素后第2d治疗组用骨蚀灵胶囊进行灌胃,正常组和模型组两组均以等体积的蒸馏水灌胃。在灌胃第4w和第8w时分批处死动物,迅速取出股骨头,截取股骨头取材后迅速投入液氮中,从骨组织中提取核酸,应用RT-PCR法检测不同时间点Bcl-2 mRNA表达。结果:联合应用马血清和甲强龙的方法可成功造成家兔激素性股骨头坏死模型,成功率高,死亡率低。应用液氮下迅速研磨骨组织的方法成功提取了骨组织核酸,RT-PCR法检测不同时间点Bcl-2 mRNA表达,Bcl-2 mRNA的表达随着时间推移各组表达量逐渐降低,差异有统计学意义(P0.05)。结论:中药骨蚀灵胶囊通过调节股骨头局部血循环,可以抑制细胞凋亡,同时促进成骨和组织修复,作用全面,通过多种途径防治激素性股骨头坏死早期病理变化,防止病变的进展。通过探讨中药防治激素性股骨头坏死机理的研究,能够加深对激素性股骨头坏死早期病理变化的认识,针对其中的关键环节进行干预,可以更好的预防和治疗糖皮质激素所导致的骨坏死。     

中药防治激素性股骨头坏死实验研究

目的:探讨骨蚀灵胶囊防治激素性股骨头坏死的作用机理.方法:采用马血清与甲基强的松龙复制家兔激素性股骨头坏死模型,随机分为空白组、模型组、骨蚀灵组、川芎嗪组,测定各组不同时问点骨内压、TXB2、6-keto-PGF1a的动态变化.结果:模型组骨内压与空白组比较在6、8、10、12周时均出现显著增高,而骨蚀灵组与空白组自8周后无显著性差异;模型组血浆TXB2及T/P(TXB2/6-keto-PCF1a)比值显著高于空白组及骨蚀灵组(P＜0.05),而6-keto-PCF1a则显著低于空白组及骨蚀灵组(P＜0.05),且骨蚀灵组与正常组之间无显著性差异(P＞0.05).结论:骨蚀灵胶囊可调节骨内压及血浆中TXB2、T/P(TXB2/6-keto-PGF1a)的含量,从而防止骨坏死进一步恶化,有利于坏死的骨质修复.     

骨蚀灵胶囊对激素性股骨头坏死BGP及VEGF表达的影响

目的:探讨中药骨蚀灵胶囊对实验性兔BGP及VEGF的影响。方法:以健康成年日本大耳兔为激素性股骨头坏死的实验模型,通过对照组观察大耳兔BGP及VEGF表达的治疗前后。结果:显示运用中药骨蚀灵胶囊治疗后测定各组BGP及VEGF值有显著性差异。结论:中药骨蚀灵胶囊与盐酸川芎嗪片一样。骨蚀灵胶囊在对家兔激素性股骨头坏死预防、治疗作用方面优于盐酸川芎嗪碱,有显著的防治效果。     

生骨胶囊对兔早期激素性股骨头坏死骨组织BMP-2、PPAR-γ表达影响的研究

目的:研究生骨胶囊对兔早期激素性股骨头坏死的BMP-2、PPAR-γ的影响,分析其治疗兔早期激素性股骨头坏死作用机理。方法:应用静脉注射马血清和激素方法成兔激素性股骨头坏死模型,选取成模的动物,分为模型组、仙灵骨葆组、生骨胶囊组,每组12只,另取12只健康动物作为空白组对照组。仙灵骨葆组采用中药仙灵骨葆灌胃治疗;生骨胶囊组采用中药生骨胶囊粉灌胃治疗;生理盐水组采用生理盐水灌胃治疗;空白对照组常规饲养。治疗8周后应用免疫组化观察骨组织BMP-2、PPAR-γ的染色情况,运用RT-PCR方法检测股骨头组织内BMP-2mRNA及PPAR-γmRNA表达的结果。结果:仙灵骨葆组及生骨胶囊组PPAR-γ的表达均较模型组低,生骨胶囊组的PPAR-γ的表达量低于仙灵骨葆组,与空白对照组PPAR-γ表达接近,仙灵骨葆组及生骨胶囊组BMP-2表达均较模型组表达增强;RT-PCR检测结果显示股骨头组织内BMP-2mRNA及PPAR-γmRNA的表达量优于模型组,且应用生骨胶囊后PPAR-γmRNA表达量与空白对照组接近。结论:生骨胶囊可以调节坏死股骨头内BMP-2及PPAR-γ的表达,抑制由激素诱导的髓腔PPAR-γ的高表达,改善局部环境,同时上调内源性BMP-2的表达,促进局部骨质再生与修复,达到治疗骨坏死的目的,是经济安全、疗效较好、易于应用的治疗激素性股骨头坏死的有效组方。     

早期激素性股骨头坏死GR-α mRNA表达的变化及意义

目的：通过激素性股骨头坏死家兔模型,观察和评价GR-α mRNA在早期激素性股骨头坏死中的作用。方法：选用成年雄性日本大耳白兔,随机分为正常组、治疗组和模型组。治疗组和模型组经耳缘静脉注射马血清2次,第1次10mL/kg,间隔3周后第2次注射6mL/kg,间隔2周后,连续3天每日1次腹腔注射甲强龙45mg/kg。注射激素后第2天治疗组用骨蚀灵胶囊进行灌胃,正常组和模型组两组均以等体积的蒸馏水灌胃。在灌胃第4周和第8周时分批处死动物,迅速取出股骨头,截取股骨头取材后迅速投入液氮中,从骨组织中提取核酸后,应用RT-PCR法检测不同时间点糖皮质激素受体α（GR-α）mRNA表达。结果：联合应用马血清和甲强龙的方法可成功造成家兔激素性股骨头坏死模型,成功率高,死亡率低。应用液氮下迅速研磨骨组织的方法成功提取了骨组织核酸,RT-PCR法检测不同时间点GR-α mRNA表达,GR-α mRNA的表达随着时间推移各组表达量逐渐升高,差异有统计学意义（P〈0.05）。结论：糖皮质激素受体包括受体α和受体β,糖皮质激素主要和糖皮质激素受体α结合,发挥其生理及药理功能,糖皮质激素受体α的密度及亲和力与糖皮质激素的作用成正相关。在早期激素性股骨头坏死局部低氧环境中GR-α的表达增加从而加速了糖皮质激素的作用,加速了病理过程的发展。     

骨蚀灵胶囊防治激素性股骨头缺血坏死的实验研究

目的:探讨中药骨蚀灵胶囊对实验性大鼠血清胆固醇、血清甘油三酯的影响。方法:以Wistar大白鼠臀肌注射激素作为激素性股骨头缺血坏死实验模型,通过对照组观察大鼠血清胆固醇及血清甘油三酯治疗前后水平。结果:显示运用中药骨蚀灵胶囊治疗后血清胆固醇及血清甘油三酯水平降低(P<0.05)。结论:中药骨蚀灵胶囊能有效降低激素所导致的血清总胆固醇、甘油三酯升高的作用。     

基于中医“治未病”理论探讨骨蚀灵胶囊预防激素性股骨头坏死的实验研究

目的:探讨激素诱导股骨头坏死发生发展过程中脂质代谢的变化规律,以及早期给予中药干预的作用效果及机制,寻求有效预防激素性股骨头坏死的新思路。方法:通过激素诱导股骨头坏死实验兔模型,实验分正常组、模型组、西药组、中药组,分组给药,于给药后3、5周测定各组家兔血脂;同时观察局部股骨头骨组织形态学的相应改变。结果:3周时,与正常对照组比较,模型组、中药组、西药组兔血清TC、TG、LDL均明显升高(P0.01),HDL明显降低(P0.05),与模型组比较,中西药组血脂无明显变化;5周时,中药组、西药组血清中的TC、TG、LDL开始明显降低,明显低于模型组(P0.05),但仍高于正常组(P0.05)。光镜观察模型组兔股骨头骨组织有骨坏死表现,中西药组病变不明显。结论:脂质代谢是激素诱发股骨头坏死的重要病理基础之一;中药通过调节脂质代谢可以早期预防激素性股骨头坏死;体现其多"靶点"整合调节作用,且毒副作用小。     

通络生骨胶囊促进兔激素性股骨头坏死修复的机制研究

目的研究通络生骨胶囊促进新西兰兔激素性股骨头坏死修复的机制。方法 20只新西兰兔随机分为3组:正常组6只,模型组和中药组(通络生骨胶囊组)各7只,采用内毒素(LPS)联合甲泼尼龙琥珀酸钠(MPS)的方法制备激素性股骨头坏死模型,最后一次肌肉注射MPS后24 h,中药组给予0.3 g·kg-1通络生骨胶囊混悬液灌胃,每天一次,正常组和模型组灌服等体积超纯水,连续16周。灌胃16周后进行髋关节MRI检测和组织病理学检测以评估建模效果,采用实时荧光定量-聚合酶链反应(RT-q PCR)检测兔股骨头ABCB1、RUNX2、OPN、PPARγ的m RNA表达水平,采用Western Blot检测兔股骨头ABCB1、RUNX2、OPN、PPARγ的蛋白表达水平。结果与正常组比较,模型组的ABCB1和RUNX2的m RNA表达下调(P0.05)、ABCB1的蛋白表达下调(P0.05)、PPARγ的m RNA表达上调(P0.05)。与模型组比较,中药组的ABCB1和RUNX2的m RNA和蛋白表达均上调(P0.05,P0.01),PPARγ的m RNA表达下调(P0.05)。结论通络生骨胶囊促进新西兰兔激素性股骨头坏死的修复可能与调节ABCB1、RUNX2、PPARγ基因的功能有关。     

活血补肾汤对兔激素性股骨头坏死VEGF的影响

目的:探讨激素性股骨头坏死(SANFH)过程中血管内皮生长因子(VEGF)在股骨头局部的表达改变及活血补肾汤对VEGF表达的影响。方法:130只新西兰大白兔随机均分为正常对照组、激素造模组、高、中、低剂量中药治疗组,造模成功后,各组于给药后的4、8、12周分别处死后取一侧股骨头,免疫组化SP法测定VEGF含量,并行常规病理组织学检查。结果:第4周时,高、中、低剂量组及模型组明显低于正常对照组(P0.01)。即表达增强。第8周:高、中、低剂量中药组VEGF灰度值比模型组均显著降低(P0.01),即VEGF表达明显增强;12周时高、中、低剂量组的VEGF灰度表达值明显低于模型组(P0.01),即VEGF表达明显强于模型组。结论:激素可导致股骨头局部VEGF的表达明显降低(4周时有代偿性增高),活血补肾汤可显著提高VEGF的表达,促进血管及新骨生成。可能是其治疗激素性股骨头坏死的主要作用机制之一。     

骨复活汤对激素性股骨头坏死细胞凋亡的影响

目的:观察激素性股骨头缺血性坏死(SANFH)骨标本及骨复活汤对SANFH细胞凋亡的影响。方法:采用臀部注射醋酸氢化泼尼松建立兔股骨头骨坏死模型,6周处死取材,采用TUNEL标记法,研究细胞凋亡情况。结果:激素性骨坏死标本上,存在大量凋亡的骨细胞及成骨细胞,模型组与对照组、骨复活汤组及仙灵骨葆组家兔股骨头骨细胞凋亡指数比较均有显著性差异(P<0.05)。结论:家兔早期SANFH病程中,骨坏死是通过激素诱导骨细胞及成骨细胞的凋亡和坏死共同作用的结果,骨复活汤在改善家兔SANFH的骨细胞、成骨细胞凋亡及坏死方面有一定作用。     

骨复生对激素性股骨头坏死大鼠骨组织中OPG及RANK表达的影响

目的:基于动物模型探讨骨复生对激素性股骨头坏死大鼠骨保护素(OPG),受体活化因子(RANK)信号通路的影响。方法:将80只大鼠随机分为正常组、模型组、中药组、西药组4组,每组各20只。除正常组外其余各组连续2d中每日经尾静脉注射40μg/kg的脂多糖,之后每隔3d臀部肌肉(所有动物统一从右侧臀大肌以45°角匀速注射)注射地塞米松25mg/kg,连续注射6周。观察造模前后以及治疗前后的股骨头X线变化、组织病理学改变以及OPG,NF-κB基因表达情况。结果:1)中药组、西药组双侧股骨头X线结果与正常组最为接近,股骨头大小形态正常,骨密度均匀,骨小梁清晰,但西药组仍有少部分密度不均匀;模型组股骨头密度不均,但股骨头仍完整,偶见透亮囊状阴影。2)正常组细胞结构清晰,空骨陷窝较少见;中药组可见骨细胞大部分正常,空骨陷窝较少;西药组变化大致与中药组接近,但空骨陷窝较中药组多;模型组细胞结构紊乱、细胞萎缩、细胞集聚固缩,空骨陷窝明显存在。3)中药组和西药组分别与模型组比较,中药组和西药组骨组织中RANK的表达均下调,且中药组下调更明显,而中药组和西药组骨组织中OPG表达均上调,差异有统计学意义(P<0.05);中药组和西药组与正常组比较,骨组织中OPG,RANKL及RANK的表达差异无统计学意义(P>0.05);中药组与西药组比较,骨组织中OPG的表达差异有统计学意义(P<0.05)。结论:骨复生可明显上调OPG的表达,下调RANK的表达,增加骨细胞形成,促进骨量上升,减少骨钙流失,促进骨质成熟,改善股骨头局部缺血缺氧环境,从而有效干预激素性股骨头坏死的形成。     

中药关节腔灌注配合小针刀疗法对激素性股骨头坏死家兔病理组织学变化及TGF-β1表达影响的研究

目的:通过建立激素性股骨头坏死(SANFH)家兔模型,探讨活骨注射液髋关节注射配合针刀疗法治疗SANFH病程中股骨头局部病理组织学变化及转化生长因子(TGF-β1)表达的变化及意义。方法:选择健康成年雄性新西兰大白兔72只,采用马血清加激素法造模。造模成功后,将造模家兔随机分为模型组、针刀组、灌注组与联合组4组,每组18只。模型组与针刀组家兔双侧髋关节每日给予生理盐水关节腔注射,灌注组与联合组给予等量活骨注射液双髋关节注射治疗。各组2、5、8周各处死6只,取双侧股骨头,HE染色检测股骨头病理改变,免疫组化法检测TGF-β1蛋白表达,RT-PCT法检测TGF-β1 mRNA表达变化。结果:联合组在SANFH治疗的过程中对股骨头病理组织学及TGF-β1的表达有影响(P0.05),具有统计学意义。结论:活骨注射液髋关节注射配合针刀治疗SANFH,在治疗2周后可使股骨头病理组织学发生改变,并促进TGF-β1的表达上调,其中8周达到疗效最佳。     

埋线针刀结合骨蚀胶囊对早期激素性股骨头坏死患者血清OPG/RANKL表达的影响

目的:观察埋线针刀结合骨蚀胶囊对激素性股骨头坏死(SANFH)的临床疗效及对病人OPG/RANKL表达的影响。方法:选择SANFH患者50例(56髋),随机分为埋线针刀结合骨蚀胶囊组(25例,27髋)和仙灵骨葆胶囊组(25例,29髋)。比较两组施行试验方案之前与足疗程治疗后Harris评分中疼痛评分、功能积分、骨节活动度积分、总评分以及患者血清中的外周血骨保护素(OPG)、NF-κB受体活化因子配体(RANKL)含量水平的变化。结果:两组患者治疗后Harris评分中骨节活动度、疼痛、骨节功能部分的评分及总分均明显高于治疗前(P0.01),且埋线针刀结合骨蚀胶囊组Harris评分明显高于仙灵骨葆胶囊组(P0.01);干预后两组患者血清OPG明显上升、RANKL水平均下降,具有显著差异(P0.01),且埋线针刀结合骨蚀胶囊组血清OPG水平明显高于仙灵骨葆胶囊组,差异具有统计学意义(P0.01);埋线针刀结合骨蚀胶囊组血清RANKL水平明显低于仙灵骨葆胶囊组(P0.01)。结论:埋线针刀结合骨蚀胶囊治疗SANFH具有一定的临床疗效,发挥作用可能与其调节血清中OPG、RANKL的含量、防止股骨头骨质疏松的发生有关。     

活骨注射液对SANFH家兔BMP-2及VEGF表达的影响

目的:通过建立SANFH家兔模型,探讨活骨注射液髋关节注射治疗激素型股骨头坏死(steroidinduced avascular necrosis of femoral head,SANFH)中股骨头局部血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)及骨形态发生蛋白2(bone morphogenetic protein 2,BMP-2)表达的变化及意义。方法:选择健康成年雄性新西兰大白兔72只,空白组18只无特殊处置,其余家兔采用马血清加激素法造模。将造模成功家兔随机分为模型组、对照组与治疗组3组,每组18只。模型组家兔双侧髋关节每日给予生理盐水关节腔注射,对照组给予等量冠心宁关节腔注射治疗,治疗组给予等量活骨注射液双髋关节注射治疗。2、5、8周各处死6只新西兰大白兔,取双侧股骨头,免疫组化法检测BMP-2及VEGF的蛋白表达,RT-PCT法检测VEGF mRNA表达变化。结果:活骨注射液在SANFH治疗的过程中对BMP-2及VEGF的表达有影响(P0.05),具有统计学意义。结论:活骨注射液在SANFH治疗2周后可使BMP-2及VEGF的表达上调,其中8周达到最佳疗效。     

补肾活血汤对激素性股骨头缺血坏死骨材料力学的影响

目的观察补肾活血汤对激素性股骨头缺血坏死(SANFH)骨材料力学的影响。方法臀肌注射醋酸泼尼松龙建立SANFH兔模型,HE染色,随机分为治疗组、模型组、空白组,治疗组用补肾活血汤高剂量灌胃,空白组、模型组用等量生理盐水灌胃,3组干预后6周、8周分别处死6只,取右侧股骨头进行材料力学指标检测,观察3组股骨头弹性模量的变化。结果 HE染色见空白组中骨小梁完整,排列规则;脂肪细胞较少;模型组软骨缺损,骨髓腔内填充大量的脂肪细胞,骨髓造血细胞减少,骨小梁稀疏。股骨头弹性模量比较:空白组治疗组模型组,模型组2个时段有差异。空骨陷窝率比较:空白组为(10.06±0.13)%,造模组为(29.68±1.23)%,二者有显著性差异P0.01。结论补肾活血汤可改善骨材料力学性能,增加骨强度,有利于坏死骨组织的修复,可用于防治SANFH。     

激素性股骨头坏死大鼠模型内毒素剂量的优选

目的确定建立激素性股骨头坏死(SANFH)模型最佳内毒素剂量。方法 SD大鼠随机分为空白对照组,大肠杆菌脂多糖10、20、40μg/kg组,尾静脉注射大肠杆菌脂多糖2 d后,臀肌注射甲基强的松龙20 mg/kg 3 d以建立SANFH模型,观察造模后大鼠体质量变化,分别于造模4、8、12周检测骨组织形态学、骨组织病理学、股骨骨密度、骨生物力学及骨钙、磷含有量。结果内毒素剂量增至40μg/kg时,对大鼠股骨骨组织形态、骨小梁排列结构的破坏,骨小梁面积的减少更为明显,股骨骨密度及大鼠骨钙、磷含有量的降低更显著。结论建立激素性股骨头坏死动物模型的最佳内毒素剂量为40μg/kg。     

骨蚀宁Ⅰ号胶囊对激素性股骨头缺血性坏死TGF-β1表达的影响

目的:探讨中药骨蚀宁Ⅰ号胶囊对实验性激素性股骨头缺血性坏死兔TGF-β1表达的影响。方法:将40只健康成年新西兰大白兔随机分成空白组、骨蚀宁胶囊组、模型组和仙灵骨葆对照组4组,观察治疗前后TGF-β1的表达。结果:各组TGF-β1值治疗前后有显著性差异。结论:骨蚀宁Ⅰ号胶囊能够促进坏死股骨头的修复。     

髓芯减压联合生骨再造丸对兔激素性股骨头坏死骨组织BMP-2与VEGF mRNA的影响

目的:探讨髓芯减压联合生骨再造丸对激素性家兔坏死股骨头骨形成蛋白2(BMP-2)与血管内皮生长因子mRNA(VEGF mRNA)的影响。方法:将成年雄性青紫兰兔60只随机分为5组,正常对照组(N)8只,模型对照组(Y)、生骨再造丸组(M)、手术组(S)、综合治疗组(MS),每组13只。Y、M、S、MS组采用内毒素加激素联合造模,造模4周后每组随机处死1只兔子,检验造模是否成功。造模成功后N组和Y组灌服生理盐水20 mL/d,M组灌服生骨再造丸溶液4. 6 mL/(kg·d),S组采用髓芯减压术治疗,MS组在手术治疗基础上灌服同量生骨再造丸溶液,各组分别干预8周,处死动物所获股骨头行HE染色,采用RT-PCR观察骨组织中BMP-2与VEGFmRNA表达情况。结果:与Y组比较,各治疗组空陷窝率下降,BMP-2和VEGF mRNA表达水平均有不同程度升高,差异有统计学意义(P0. 05),其中以MS组空陷窝率降低最为显著(P0. 01)。结论:增强股骨头骨组织BMP-2和VEGF mRNA表达是髓芯减压术联合生骨再造丸治疗激素性兔股骨头坏死的作用机制之一。     

中药对激素性股骨头坏死血管新生机制的实验研究进展

激素性股骨头坏死（steraid induced Arascular Necrosis of Femoral Head SANFH）是骨科的难治性疾病，中青年患者多见，致残率高，常双侧发病，严重影响患者的生存质量。为了探索寻求中药治疗激素性股骨头缺血坏死的可行性，进一步阐明中药防治骨坏死的作用机制，为了研究观察探讨其疗效机理，众多学者采用造模方式制成典型的SANFH模型，并予中药治疗，结果表明中药有促进骨组织血管、骨髓修复和再生，促进死骨吸收和新骨生长的作用。本文将近年来的有关中药对激素性股骨头坏死血管新生机制的实验研究成果综述如下。