CCl4诱导大鼠肝纤维化模型的建立

目的：构建肝纤维化大鼠动物模型。方法：取雄性Sprague—Dawley（SD）大鼠80只,通过腹腔注射以橄榄油稀释10N的四氟化碳．1mL／kg．每周1次．共8周．建立大鼠肝纤维化动物模型。造模结束时处死动物。酶联免疫吸附法检测血清ALT、AST水平．HE染色及免疫荧光法观察大鼠肝组织病理学变化和胶原沉积。分别观察在造模第5、6、7、8周时各项指标的变化。结果：建模第5周即可见肝功异常．血清AL丁和AST明显升高（P〈0．05）。第6周肝脏假小叶形成。大鼠肝脏有明显的纤维化病灶。于第7周始最为典型。大鼠HE染色中可见肝组织病变区域多,面积大,正常肝小叶结构破坏．肝细胞索排列紊乱．胶原纤维明显增生。呈较宽的务索状分隔肝小叶,弥漫分布,形成假小叶。建模成功率高达80．0％。结论：CCL诱导可成功建立大鼠肝纤维化模型。     

SVIP通过调节自噬抑制CCl4诱导的肝纤维化的研究

目的通过激活自噬来研究相互作用蛋白(SVIP)对四氯化碳(CCl4)诱导的肝纤维化的关键作用。方法用图像实验室软件Bio-Rad进行密度分析,用GraphPad进行统计分析。荧光显微镜检测脂滴和自噬体,进行图像采集和图像分析。结果在HepG2细胞中,SVIP可以激活自噬,但饥饿不能在体外和体内增加SVIP的表达。此外,与自噬活性和脂滴体积一致的SVIP表达在体内和体外用CCl4处理的肝纤维化进展期间首先增加然后减少。以及可以保护HepG2细胞免受CCl4的毒性,这可以通过饥饿来增强。最后,饥饿使大鼠肝脏中的SVIP和自噬保持在高的水平,显著延迟了肝纤维化的进展。可能SVIP的保护作用与核因子相关因子2(Nrf2)和转录因子EB(TFEB)有关。结论SVIP的表达与CCl4形成过程中的自噬水平密切相关,且诱导肝纤维化。SVIP能诱导自噬和延缓肝纤维化。研究SVIP激活自噬的分子机制具有十分重要的意义,为今后抗纤维化提供了新的理论依据。     

七叶皂苷钠对大鼠脑缺血损伤中神经细胞凋亡的影响

目的观测七叶皂苷钠对大鼠大脑中动脉闭塞缺血半球梗死面积及凋亡细胞数月的影响.方法选用健康雄性SI)大鼠.以头端烫圆的40)尼龙线由左侧颈总动脉插入,阻塞左侧大脑中动脉.建立缺血2 h再灌注22 h动物模型.再灌注即刻腹腔内注射七叶皂苷钠(5 mg/kg)为治疗组.注射生理盐水(10ul/g)为对照组.对视交叉部冠状脑组织块行TTC染色,测定其吻端梗死面积百分比对邻近脑组织块行原位末端转移酶标记(TUNEL).计数缺血半球凋亡细胞数目.结果治疗组和对照组大鼠脑梗死面积分别为(8.1 5士5.0)%和(22.1 4±7.7)%(P＜0.01);细胞凋亡数目分别为70±23和225±78(P＜0.01).结论再灌注即刻腹腔内注射七叶皂苷钠对大鼠短暂性、局灶性脑缺血具有保护作用;这种神经保护作用在一定程度上与抑制神经细胞凋亡有关系.     

七叶皂苷钠作用EIF4A1抑制肝癌细胞增殖的研究

目的研究EIF4A1的表达与肝细胞性肝癌(hepatocellular carcinoma,HCC)的相关性,以及七叶皂苷钠抑制肝癌细胞系增殖的潜在机制。方法应用免疫组化检测80例HCC患者的肿瘤标本中EIF4A1的表达水平,并结合临床指标和随访信息分析其相关性; Annexin V-FITC/PI双染标记法检测七叶皂苷钠对肝癌细胞Hep G2及人肝细胞L02两种细胞系凋亡的影响; Transwell迁移实验检测七叶皂苷钠对两种细胞系迁移能力的影响; Western blot、q PCR、细胞免疫荧光检测七叶皂苷钠处理两种细胞系后EIF4A1的表达变化。结果肝癌组织中EIF4A1表达量明显增高,且EIF4A1的表达与患者的肿瘤分化程度、肿瘤直径及生存期存在相关性。七叶皂苷钠(40μmol·L~(-1))可明显促进肝癌细胞系凋亡,并抑制其迁移能力,但对于正常肝细胞系无影响。七叶皂苷钠抑制肝癌细胞系生长增殖的同时,下调肝癌细胞系EIF4A1的表达。结论 EIF4A1的表达与HCC的发展呈相关性,七叶皂苷钠可能通过影响EIF4A1的表达,抑制肝癌细胞系的生长增殖。     

胆总管结扎术和CCl4诱导大鼠肝纤维化模型的建立

目的:构建大鼠肝纤维化动物模型。方法:取雄性Wistar大鼠180只,其中90只通过腹腔内注射四氯化碳,1.5mL/kg,每周1次,共10周,建立大鼠肝纤维化动物模型;另90只胆总管结扎,结扎时间是1d、2d、4d、7d,建立大鼠肝纤维化动物模型。造模成功后处死大鼠,立即取新鲜肝脏。应用HE染色及免疫荧光法观察实验大鼠肝组织病理学变化。结果:CCl4诱导建模第6周肝脏假小叶形成,大鼠肝脏有明显的纤维化病灶,在第7周始最为典型;胆总管结扎术4d和7d模型组肝脏假小叶形成,大鼠肝脏有明显的纤维化病灶。结论:胆总管结扎术和CCl4诱导可成功建立大鼠肝纤维化动物模型。     

三七皂苷抗肝纤维化作用的现状

肝纤维化是各种慢性肝病共同的病理基础，是慢性肝病发展到肝硬化、肝癌的必经途径。寻找有效的抗肝纤维化药物是近年研究的热点，其中对三七的研究也取得了很大进展。现综述近几年三七皂苷在保护肝细胞、抑制肝星状细胞活化、促进肝星状细胞凋亡、抑制细胞外基质的合成及促使其降解等方面的作用及可能机制，同时也阐述了三七皂苷在抗肝纤维化中的重要意义及应用前景。     

玉郎伞皂苷对四氯化碳诱导大鼠肝纤维化的影响

目的研究玉郎伞皂苷(YLSS)对四氯化碳(carbontetrachloride,CCl4)所致大鼠肝纤维化的药理作用,并探讨其作用机制。方法将SD大鼠随机分成模型组及空白对照组(NC),模型组大鼠以50%CCl4食用油溶液为诱导剂灌胃造模,NC组灌胃给予食用油。将病理检查确认形成肝纤维化的SD大鼠,随机分成模型对照组(MC)和药物干预组。药物干预组分为4小组,分别灌胃给予YLSS(20、40和80mg.kg-1)及秋水仙碱片(0.20 mg.kg-1),模型组给予等剂量NS,连续给药4周。末次给药24 h后处死大鼠,采集血清及肝组织,检测大鼠血清中AST、ALT活性,测定肝组织中SOD、MDA、GSH和GSH-Px的含量,并观察肝组织病理学改变。结果各剂量YLSS和阳性药能降低大鼠血清中CCl4所致异常升高的AST、ALT水平(P<0.01),提高肝组织SOD、GSH含量(P<0.01),并降低异常升高的MDA含量(P<0.05或P<0.01);各剂量YLSS能升高大鼠肝组织GSH-Px(P<0.01);中、高剂量YLSS及阳性药能够减轻肝细胞损伤程度(P<0.01)。结论玉郎伞皂苷对CCl4诱导的大鼠肝纤维化具有一定的抑制作用,其机制可能与其清除自由基、抑制脂质过氧化有关。     

血管紧张素Ⅱ1型受体阻断剂--氯沙坦抑制CCl4诱导的大鼠肝纤维化

目的探讨血管紧张素Ⅱ1型受体阻断剂--氯沙坦对CCl4诱导的大鼠肝纤维化的作用.方法SD大鼠按1 ml·kg-1体重皮下注射50?l4植物油溶液,用分光光度法测定血浆丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天门冬氨酸转氨酶(AST)活性和肝组织羟脯氨酸(Hyp)含量,并采用放免方法测定血清PCⅢ和HA含量.给药12周后取肝组织进行HE染色.结果氯沙坦剂量组(2.5,5,10 mg·kg-1,ig)、卡托普利组(100mg·kg-1,ig)明显降低肝纤维化大鼠血清转氨酶(ALT、AST)、PCⅢ、HA水平和肝组织中Hyp含量.组织病理学检查显示氯沙坦有减轻肝纤维化作用.结论氯沙坦对大鼠肝纤维化有抑制作用.     

人参总皂苷对四氯化碳诱导的大鼠肝纤维的保护作用

目的 观察人参总皂苷(缓控 of panax ginseng,SPG)对四氯化碳所诱导的肝纤维化大鼠的保护作用.方法 将大鼠随机分为正常组、模型组、人参总皂苷40、80、160 mg·kg-1组,阳性药秋水仙碱0.1 mg·kg-1组.除正常组外,其余各组采用四氯化碳诱导肝纤维化模型.于造模第7周起,给药组分别灌胃给予...     

苦参素对肝纤维化大鼠肝脏TGF-β1的调节作用

目的观察苦参素(OM)对肝纤维化大鼠的防治作用及对转化生长因子β1(TGF-β1)表达的影响。方法采用CCl4诱导大鼠肝纤维化模型。于实验的第12周末采血,检测ALT、AST、Ⅰ型胶原和TGF-β1。肝脏病理学检测HE染色后观察肝组织改变,Masson胶原纤维染色,每组样本随机观察8个视野的肝纤维化程度,RT-PCR检测TGF-β1mRNA表达。结果苦参素组能明显降低肝纤维化大鼠血清谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)、Ⅰ型胶原和TGF-β1水平,同时病理组织学显示苦参素能明显改善CCl4诱导的肝纤维化大鼠的肝组织结构和肝纤维化;TGF-β1基因表达量较模型组明显减少。结论苦参素可明显降低实验大鼠胶原沉积,对CCl4诱导的肝纤维化大鼠有良好的保护作用,对TGF-β1表达的影响可能是其作用机制之一。     

Fucoidan partly prevents CCl4-induced liver fibrosis

Fucoidan, a sulfated polysaccharide extracted from brown algae, has a wide range of biological activities, including anti-inflammatory, anti-viral, and anti-tumor activities. In the present study, we investigated the effects of fucoidan on CCl₄-induced liver fibrosis. Administration of fucoidan reduced CCl₄-induced acute and chronic liver failure. Hepatic fibrosis induced by CCl₄ was also attenuated by injection of fucoidan. Damage to hepatocytes and activation of hepatic stellate cells are key events in liver fibrosis, and, interestingly, treatment of hepatocytes with fucoidan prevented CCl₄-induced cell death and inhibited the proliferation hepatic stellate cells. These results indicate that fucoidan might be a promising anti-fibrotic agent possessing dual functions, namely, protection of hepatocytes and inhibition of hepatic stellate cell proliferation.     

Deferoxamine alleviates liver fibrosis induced by CCl4 in rats

Several chronic liver diseases can lead to the occurrence of hepatic fibrosis through the accumulation of iron, which causes induction of oxidative stress and consequently activation of fibrogenesis. The present study was designed to investigate the potential antifibrotic and anti‐oxidant effects of deferoxamine (DFO), a well‐known iron chelator in an experimental rat model of liver injury using carbon tetrachloride (CCl₄). First, the potential effective dose of DFO was screened against CCl₄‐induced acute hepatotoxicity. Then, rats were co‐treated with DFO (300 mg/kg, i.p.) for 6 weeks starting from the third week of CCl₄ induction of chronic hepatotoxicity. Liver function was assessed in addition to histopathological examination. Furthermore, oxidative stress and fibrosis markers were assessed. It was found that treatment of animals with DFO significantly counteracted the changes in liver function; histopathological lesions and hepatic iron deposition that were induced by CCl₄. DFO also significantly counteracted the CCl₄‐induced lipid peroxidation increase and reduction in antioxidant activities of superoxide dismutase and glutathione peroxidase enzymes. In addition, DFO ameliorated significantly liver fibrosis markers including hydroxyproline, collagen accumulation, and the expression of the hepatic stellate cells (HSCs) activation marker; alpha smooth muscle actin and transforming growth factor‐beta (TGF‐β). Together, these findings indicate that DFO possesses a potent antifibrotic effect due to its antioxidant properties that counteracted oxidative stress and lipid peroxidation and restored antioxidant enzymes activities as well as reducing HSCs activation and fibrogenesis.     

白芍总苷治疗四氯化碳致大鼠肝纤维化的作用与其影响肝星状细胞功能的关系*

目的:研究白芍总苷(TGP)通过影响肝星状细胞(HSC)的功能发挥治疗四氯化碳(CCl_4)致大鼠肝纤维化的作用。方法:建立CCl_4诱导化学性肝纤维化模型,全自动生化仪检测血清中丙氨酸氯基转移酶(ALT)、天冬氨酸氨基转移酶(AST)和碱性磷酸酶(ALP)水平;放免法检测血清及体外HSC培养上清中透明质酸(HA)和Ⅲ型前胶原(PCⅢ)的含量;流式细胞仪检测HSC凋亡率。苏木素-伊红染色处理肝脏组织切片,光镜观察病理学改变。结果:在CCl_4诱导大鼠肝纤维化模型,TGP给药(40,80,160mg·kg~(-1),ig)均明显降低血清ALT,AST,ALP,HA和PCⅢ水平;升高白蛋白水平及白蛋白球蛋白比值(A/G)。TGP(60,120和240mg·L~(-1))能明显降低HSC体外分泌的HA和PCⅢ水平,促进HSC凋亡,明显改善肝脏病理组织状况。结论:TGP对CCl_4致大鼠肝纤维化具有治疗作用,该作用与其降低HSC分泌HA和PCⅢ、促进HSC凋亡有关。     

软肝片抗肝纤维化作用的实验研究

目的探讨软肝片对四氯化碳中毒性肝纤维化的防治作用。方法用四氯化碳皮下注射造成大鼠肝纤维化模型 ,以联苯双酯作为阳性对照 ,测定血清丙氨酸氨基转移酶 (ALT)、天冬氨酸氨基转移酶 (AST)、玻璃酸(HA)、唾液酸及肝组织羟脯氨酸 (Hyp)、丙二醛 (MDA)、超氧化物歧化酶 (SOD)含量 ,以反映肝细胞损伤及肝纤维化程度。结果软肝片可明显降低肝纤维化大鼠血清ALT、AST、HA、唾液酸水平及肝组织Hyp和MDA水平 ,提高肝组织中SOD活力。结论软肝片具有一定的抗肝纤维化及抗脂质过氧化作用。     

Protective effect of diphenylmethyl selenocyanate against CCl4-induced hepatic injury

Organoselenocyanates represent an important class of chemopreventive agent, which possess antioxidative, antimutagenic as well as cancer chemopreventive properties. The present study is an attempt to evaluate the protective effect of diphenylmethyl selenocyanate -- a synthetic organoselenocyanate against carbon tetrachloride (CCl(4))-induced hepatic damage in Swiss albino mice in vivo.Mice were pretreated with the Se-compound orally in a duration dependent manner (7 and 15 days) to observe its protective action against an acute toxic dose (24 h) of CCl(4) (single injection at a dose of 20 microl and 50 microl kg(-1) b.w.) that induced hepatic necrosis and caused DNA damage (strand breaks) in the hepatocytes.This study revealed that pretreatment with the Se-compound reduced the extent of massive hepatic necrosis in a duration dependent manner, but it had no modulatory effect on hepatocellular apoptosis caused by acute toxic doses of CCl(4). It was also found that the Se-compound could significantly (P < 0.01) prevent the CCl(4)-induced elevation of DNA damage in hepatocytes measured by comet assay in a duration dependent manner.So these findings will further strengthen the view that organoselenocyanate is an effective chemopreventive agent against acute hepatic damage, caused by halogenated alkanes such as CCl(4).     

Developing strategies for liver fibrosis treatment

Liver fibrosis represents a major worldwide healthcare burden. Current therapy is limited to removing the causal agent. This approach is successful in some diseases; particularly haemochromatosis and chronic viral hepatitis. However, for many patients treatment is not possible, while other patients present to medical attention at an advanced stage of fibrosis. There is therefore a great need for novel therapies for liver fibrosis. The hepatic stellate cell has been recognised to be responsible for most of the excess extracellular matrix observed in chronic liver fibrosis. The detailed understanding of hepatic stellate cell biology has allowed the rational design of novel antifibrotic therapies. This review describes for the general reader the novel emerging therapies for liver fibrosis.     

Kupffer细胞在肝纤维化形成与转归中的作用

肝纤维化是由于反复肝损伤引起持续性炎症反应、瘢痕组织形成，导致正常组织结构破坏甚至器官衰竭的一类疾病。临床研究和动物实验均证实，肝脏内慢性长期炎症是导致过量瘢痕形成的主要诱因。在肝损伤期，Kupffer细胞快速激活并释放大量可溶性调节因子(包括过氧化物、细胞因子和蛋白酶等)，刺激肝星状细胞增殖、迁移和活化。另一方面，有研究显示，Kupffer细胞还参与肝纤维化转归，其功能可能与调节星状细胞的生物学活性及促进细胞外基质的降解有关。因此，深入研究Kupffer细胞的生物学特性以及在细胞因子环境下与星状细胞间的相互作用，对于理解肝纤维形成的病理学过程和肝纤维化转归的生理学机制具有重要的指导意义。     

十二味穿甲片原料抗CCl4所致大鼠肝纤维化的实验研究

目的:探讨十二味穿甲片原料对四氯化碳(CCl₄)所致大鼠肝纤维化的保护作用。方法:将雄性SPF级SD 大鼠98只随机分为空白对照组,模型对照组,阳性对照组,中药十二味穿甲片原料4.2,2.8,1.4,0.7 g·kg^-1剂量组。除空白对照组腹腔注射同体积的注射用大豆油外,其余各组均腹腔注射40%的CCl₄大豆油溶液2 mL·kg^-1,每周2次并连续8周建立大鼠肝纤维化模型,造模同时给药进行抗肝纤维化干预,共59 d。通过测定体质量,检测肝功能指标丙氨酸转氨酶(ALT)、天冬氨酸转氨酶(AST)、总蛋白(TP)、白蛋白(ALB),比色法测定肝脏羟脯氨酸(Hyp)含量并进行肝内胶原定量分析,HE染色以观察肝组织病理变化,评价药物的抗纤维化作用。结果:与模型对照组比较,十二味穿甲片原料药粉4.2,2.8 g·kg^-1剂量组大鼠肝脏Hyp和胶原含量显著降低(P<0.05),2.8,0.7 g·kg^-1剂量组大鼠血清ALT、AST含量及1.4 g·kg^-1剂量组血清ALT均显著下降,差异具有显著性意义(P<0.05或P<0.01),而4.2 g·kg^-1剂量组血清ALT、AST和1.4 g·kg^-1剂量组AST含量亦呈下降趋势,但无显著性差异(P>0.05)。2.8 g·kg^-1剂量组大鼠血清ALB和TP呈明显升高趋势,但较模型对照组统计学意义不显著(P>0.05),病理结果显示2.8 g·kg^-1剂量组大鼠肝纤维化改善显著。结论:本实验条件下,十二味穿甲片原料具有抗CCl₄所致大鼠肝纤维化的作用,以2.8 g·kg^-1剂量抗肝纤维化作用最为明显。     

吲哚-3-原醇对猪血清诱导大鼠肝纤维化的治疗作用

研究吲哚-3-原醇(I3C)对猪血清诱导大鼠肝纤维化的治疗作用及其机制。腹腔注射猪血清制备大鼠肝纤维化模型,造模成功后用I3C治疗17天。采用HE和Masson三色染色法分别观察肝脏病理学和胶原含量改变;生化比色法测定肝组织羟脯氨酸(Hyp)含量;免疫组织化学法观察肝脏中α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)的表达。进一步培养大鼠肝星状细胞株HSC-T6,用13C处理24 h后,FITC-Annexin V/PI双重染色法检测细胞凋亡;实时荧光定量PCR法检测细胞凋亡相关蛋白Bax和Bcl-2的mRNA表达。结果显示,与模型对照组比较,各I3C治疗组的肝组织Hyp含量不同程度降低,肝细胞损伤减轻,胶原纤维沉积减少(P<0.01),α-SMA表达降低(P<0.01)。细胞实验显示,I3C可明显增加HSC-T6细胞凋亡率,升高Bax/Bcl-2的mRNA表达(P<0.05)。以上结果说明,I3C对猪血清诱导大鼠肝纤维化有一定治疗作用,可能与其诱导活化HSC凋亡继而促进基质胶原降解有关。     

生长抑素治疗肝纤维化研究进展

生长抑素是人体内广泛分布的环肽激素,近期有研究表明生长抑素能够减少星状细胞分泌细胞因子及细胞外基质,抑制其增殖及收缩,并促进其凋亡;同时调节枯否细胞分泌功能,介导肝干细胞归巢,对于各种病因肝纤维化尤其对于血吸虫性肝纤维化具有治疗作用。