血管紧张素Ⅱ及其受体1在食管鳞癌血管生成中的作用

目的 探讨血管紧张素Ⅱ（AngⅡ）及其受体1（AT1R）在食管鳞癌组织中的表达及其在血管生成中的作用。方法 应用免疫组化SP法检测30例食管鳞癌患者癌组织及其食管断端正常鳞状上皮中AngⅡ、AT1R和血管内皮生长因子（VEGF）蛋白的表达。结果 AngⅡ、AT1R和VEGF蛋白表达主要定位于鳞癌细胞iAngⅡ、AT1R在鳞癌组织中的表达均显著高于正常鳞状上皮（P均〈0．01）；癌组织中AngⅡ的表达程度与VEGF的表达程度呈正相关（ra′=0．4249，P〈0．05），AT1R的表达程度与VEGF无相关性（ra′=0．1298，P〉0．05）。结论 食管鳞癌癌组织中高水平表达AngⅡ及AT1R，二者可能通过诱导VEGF的产生促进肿瘤新生血管的形成。     

VEGF、Ang-2形成中的作用在Graves病血管形成中的作用

采用S—P免疫组织化学法检测35例Graves病患者甲状腺组织切除标本（观察组）和11例甲状腺良性腺瘤患者的正常甲状腺组织（对照组）中血管内皮生长因子（VEGF）、促血管生成素-2（Ang-2）蛋白的表达和CD34标记的微血管密度（MVD），并分析其相关性。结果 观察组VEGF、Ang-2的表达程度明显高于对照组（P均〈0．05）;观察组VEGF蛋白表达与Ang-2蛋白表达呈显著正相关（r=0.351，P〈0．05）．二者的表达程度与MVD亦均呈显著正相关（r分别为0．723、0．675，P均〈0．01）。提示VEGF、Ang-2表达在Graves病甲状腺血管形成中起重要作用。     

VEGF和Ang-2与甲状腺乳头状癌血管生成和转移的相关性探讨

采用免疫组化S-P法检测20例甲状腺乳头状癌（PTC,A组）、15例结节性甲状腺肿（B组）、15例甲状腺腺瘤（C组）和15例正常甲状腺组织（D组）中血管内皮生长因子（VEGF）、促血管生成素-2（Ang-2）蛋白的表达和微血管密度（MVD）。结果A组VEGF和Ang-2表达均显著高于其他组（P均〈0．05）;A组VEGF、Ang-2与MVD呈正相关（P均〈0．05）,而Ang-2与MVD无相关性;A组有淋巴结转移者VEGF表达和MVD均显著高于无转移者（P均〈0．05）,但Ang-2无显著差异。提示VEGF和Ang-2在PTC血管生成中起重要作用;VEGF与PTC转移密切相关。     

PCOS患者分泌期子宫内膜AngⅡ及AT2的表达变化

目的观察血管紧张素Ⅱ（AngⅡ）及其2型受体（AT2）在多囊卵巢综合征（PCOS）患者分泌期子宫内膜中的表达变化。方法12例曾接受促排卵治疗、基础体温双相的PCOS患者为A组,其中6例行诊断性刮宫（诊刮）术者为B组;10例月经正常的育龄妇女作为对照（C组）。于经前2～3d测血清生殖激素及子宫动脉和子宫内膜螺旋动脉的收缩期峰值流速（Vs）、舒张期末血流速度（WD）、阻力指数（RI）。同日B、C组行诊刮术,测子宫内膜AngⅡ及AT2。结果B组子宫内膜腺上皮AngⅡ灰度值低于C组,（P〈0．01）,其孕酮（P）显著低于C组（P〈0．01）,腺上皮AngⅡ与P呈正相关（r=0．969,P〈0．05）,其子宫内膜螺旋动脉管周基质细胞AngⅡ与螺旋动脉RⅡ呈正相关（r=0．989,P〈0．05）。A组子宫内膜螺旋动脉显示率低于C组（P〈0．05）。C组螺旋动脉Vs与其管周基质细胞AT2呈正相关（r=0．731,P〈0．05）。结论PCOS患者经促排卵治疗后,分泌期子宫内膜腺上皮细胞AngⅡ的表达高于正常,可能与P较低有关;分泌期子宫内膜血供较少,与螺旋动脉管周基质细胞AngⅡ及AT2的表达有关。     

心房颤动患者心房组织血管紧张素Ⅱ受体表达的研究

目的 探讨心房颤动（房颤）患者心房组织血管紧张素Ⅱ受体（AT－R）基因转录和蛋白质表达的变化。方法 33例风湿性心脏瓣膜病患者，心脏外科手术时取右心耳组织。通过逆转录－聚合酶链反应和免疫组织化学，测量血管紧张素Ⅱ受体1（AT1－R)的血管紧张素Ⅱ受体2（AT2－R）的mRNA和蛋白的相对表达量。结果 窦性心律患者、阵发性房颤及慢性房颤患者之间的心房组织AT1－R手AT2－R的mRNA水平差别均无显著性（P均＞0．05）；AT1－R和AT2－R在各组患者心房组织中主要表达在心房肌细胞；与窦性心律患者相比，阵发性房颤和慢性房颤患者的心房组织AT1－R的蛋白表达均明显减少（P＜0．05；P＜0．01），而AT2－R的蛋白表达均明显增高（P＜0．01；P＜0．05）。结论 心房在房颤时AT1－R表达下调而AT2－R表达上调，提示血管紧张素系统参与了房颤的心房结构重构。     

白蛋白对肾小管上皮细胞血管紧张素转换酶2表达的抑制作用

目的观察白蛋白对人近端肾小管上皮细胞株（HK_2）血管紧张素转换酶2（ACE2）mRNA和蛋白表达的影响,探讨蛋白尿激活肾脏局部RAs的机制。方法采用不同浓度的牛血清白蛋白（BSA）作用HK-2细胞不同时间。以实时RT-PCR和Western印迹检测ACE2mRNA和蛋白的表达。采用放射免疫法检测细胞上清液中血管紧张素Ⅱ（ATⅡ）含量。采用激光共聚焦显微镜观察ACE2蛋白的表达。结果与对照组（相对表达量为O）相比,BSA使ACE2mRNA表达显著减少（2．5mg／ml：-1．05土0．12;5mg／ml：-1．30±0．11;10mg／ml：-2．54土0．44;P均〈0．05）。同时,BSA使ACE2蛋白表达显著降低（对照组：0．90±0．10;2．5mg／ml：0．66士0．09;5mg／ml：0．50士0．07;10mg／ml：0．35±0．05;P均〈0．05）。其中BSA（10mg／ml）使ACE2mRNA及蛋白表达减少呈时间依赖性（P均〈0．05）。与对照组相比,不同浓度BSA组的细胞上清液中的ATⅡ均显著升高（P均〈0．05）。激光共聚焦显微镜可见ACE2主要分布于细胞膜。结论BSA可显著抑制HK-2细胞ACE2 mRNA和蛋白的表达,此作用所导致的近曲小管间质液ATⅡ浓度升高可能与间质纤维化相关。     

血管紧张素转换酶和血管紧张素Ⅱ-1型受体基因多态性与冠心病的相关性分析

目的研究血管紧张素转换酶（ACE）基因I／D多态性和血管紧张素Ⅱ-Ⅰ型受体（AT1R）基因A1166／C多态性与冠心病（CHD）的关系。方法采用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性（PCR—RFLP）技术检测130例CHD组和90例对照组ACE和AT1R基因多态性。结果ACE—DD基因型频率在CHD组显著高于对照组（38．5％，14．4％，P〈0．001）。AT1R—AC基因型在两组间差异无显著性（13．1％，10％，P〉0．05），但合并AC基因型的DD型患者发生CHD和MI的OR值（5．836和3．985）明显高于合并AA型（3．102和2．979）。结论ACE基因I／D多态性中DD基因型是冠心病发病的独立危险因素之一，AT1R—C等位基因增加ACE—DD型发生CHD和MI的危险，二者具有协同作用。     

脑出血患者载脂蛋白E和血管紧张素Ⅱ受体-1 A1166C基因多态性分析

目的：探讨脑出血（ICH）患者载脂蛋白E（ApoE）和血管紧张素Ⅱ受体-1（AT1R）A1166C基因多态性是否有协同致ICH效应。方法：应用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性技术检测80例ICH患者和90名健康对照者ApoE和AT1R A1166C基因多态性,并运用logistic回归分析ApoE和AT1R A1166C基因多态性致ICH的效应。结果：ICH组ApoE基因型频率和等位基因频率与正常对照组无显著差异;AT1RAC基因型频率为32．5％,C等位基因频率为16．2％,显著高于正常对照组的11．1％和5．6％（P均〈0．05）;togistic回归分析显示,AT1RC等位基因个体发生ICH的优势比（OR）为3．299（95％CI1．537～7．079,P〈0．05）;同时携带AT1RC等位基因和ApoE ε4等位基因的个体患ICH的OR为4．784（95％CI1．325～17．272,P〈0．05）。结论：AT1R A1166C基因多态性可能是ICH发病的独立遗传因素;AT1R A1166C基因多态性与Ap0E基因多态性具有协同致ICH效应。     

肝癌组织中HIF-1α与VEGF的表达及意义

目的探讨缺氧诱导因子-1α（HIF-1α）、血管内皮生长因子（VEGF）在肝细胞肝癌（HCC）发生、发展中的作用。方法采用免疫组化法检测30份HCC组织（HCC组）和10份正常肝组织（对照组）标本中HIF-1α和VEGF蛋白表达。结果HCC组HIF．10r．阳性率为73．3％,对照组为0％（P〈0．05）。HCC有肝内转移者HIF-1α表达明显高于无肝内转移者（P〈0．05）。HCC组VEGF阳性率为60．0％,对照组为10．0％（P〈0．05）。HCC有肝内转移、癌栓形成者VEGF表达明显高于无肝内转移及癌栓形成者（P均〈0．05）。HCC中HIF-1α与VEGF的表达呈正相关（r=0．431,P〈0．05）。结论HIF-1α、VEGF在HCC中表达上调,且在HCC的发生、发展中起促进作用。     

哇巴因对血管紧张素Ⅱ及其1型和2型受体mRNA在肾脏中表达的影响

目的观察哇巴因对血管紧张素Ⅱ（AngⅡ）及其1型（AT1）与2型（AT2）受体mRNA在肾脏中表达的影响。方法72只SD大鼠随机分为3组,分别为哇巴因组（27．8ng／kg／d哇巴因腹腔注射）、Losartan组（27．8ng／kg／d哇巴因腹腔注射,同时给于Losartan 30ng／kg／d灌胃）、对照组（生理盐水2ml／d／只腹腔注射）,每周测定鼠尾血压,共6周。应用放免法测定各组大鼠血浆及肾脏中AngⅡ含量,同时采用实时荧光定量PCR（FQ—PCR）观察肾脏中AT1和AT2 mRNA表达的变化。结果血浆中的AngⅡ水平在哇巴因组及Losartan组都显著高于对照组（P〈0．05）,哇巴因组肾皮质中AngⅡ含量亦显著高于对照组（P〈0．05）。与对照组相比,哇巴因组肾脏中AT1mRNA与AT2mRNA的表达明显上调（P〈0．05）。结论外周长期、慢性给予哇巴因后可持续升高SD大鼠的血压,这一作用可能是通过激活RAS系统介导的。肾脏作为高血压的靶器官,其AT1及AT2受体活性也增加。     

血管内皮生长因子和内抑素在大鼠糖尿病肾病发病中的作用

目的研究血管内皮细胞生长因子（VEGF）作为促血管生长因子和内抑素（ENS）作为血管生成抑制因子,在糖尿病肾病（DN）血管生成中的作用。方法以正常大鼠为对照,30只雄性Wistar大鼠建成糖尿病模型,分别于糖尿病模型建立2、4、8周观察24小时尿白蛋白排泄率（UAER）,用免疫组织化学染色显示大鼠肾组织VEGF和ENS的表达及半定量分析;用酶联免疫法测定血中VEGF和ENS的浓度,根据DN病理学改变确定DN的血管增生严重性,分析内皮细胞增生、肾小球中弥漫或结节病变及肾小球硬化与VEGF和ENS的关系;采用RT-PCR的方法观察大鼠肾脏VEGF和ENSmRNA的表达。结果DN大鼠肾组织VEGF和ENS的mRNA和蛋白表达水平明显高于对照组（P〈0．05）;DN大鼠血清VEGF和ENS水平也明显高于对照组（P〈0．05）。DN大鼠UAER与血浆VEGF和ENS相关（r=0．468,P〈0．01;r=0．395,P〈0．05）,DN大鼠无论在血中还是肾组织免疫组化和RT-PCR都有VEGF和ENS的表达,VEGF的表达与DN血管增生程度密切相关（r=0．404～0．476,P〈0．01～0．05）,ENS的表达也与DN严重程度密切相关（r=0．409~0．617,P〈0．05～0．01）,血浆VEGF和ENS二者具有正相关性（r=0．484,P〈0．01）。结论VEGF和ENS与DN血管增生密切相关。     

抗血管紧张素Ⅱ AT1受体抗体对大鼠脾脏T淋巴细胞的促增殖作用

目的观察抗AT1受体（AT1R）抗体对培养的大鼠脾脏T淋巴细胞增殖活性的影响。方法以人工合成的AT1R细胞外第二环肽段（AT1R—ECⅡ）为抗原主动免疫Wistar大鼠,利用亲和层析法提纯免疫大鼠血清中含有抗AT1R抗体的IgGs;培养大鼠脾淋巴细胞,刀豆蛋白A（ConA）诱导其活化和增殖,分别给予不同浓度的提纯IgGs（0．01、0．1、1umol／L）和血管紧张素Ⅱ进行干预,通过CCK-8法测定脾淋巴细胞增殖情况,并确定抗AT,R抗体的作用位点。结果ConA刺激48h后,大鼠脾淋巴细胞CCK-8吸光度显著高于空白对照组（0．38±0．05比0．27±0．02,P〈0．05）;不同浓度的IgGs剂量依赖性促进脾脏T淋巴细胞增殖（A值分别为0．53±0．03、0．71±0．04和0．94±0．05）,与血管紧张素Ⅱ的作用相类似（A值为0．73±0．14、1．52±0．17和2．14±0．12）;AT1R特异性阻断剂Losartan和AT,R—ECⅡ均可显著减弱含抗AT1R抗体IgGs的促增殖效应（A值由0．71±0．04分别降为0．54±0．02,P〈0．01;0．52±0．04,P〈0．01）。结论抗AT1R抗体具有受体激动剂样效应,通过特异结合AT1R—ECⅡ剂量依赖性增强离体脾T淋巴细胞增殖活性。     

内皮细胞中血管紧张素Ⅱ对诱导型一氧化氮合酶表达影响及干预的实验研究

目的 探讨在内皮细胞中血管紧张素Ⅱ对诱导型一氧化氮合酶表达的影响以及血管紧张素Ⅱ一型受体（AT1）、血管紧张素Ⅱ二型受体（AT2）和核因子-kappaB在其中的作用。方法 体外培养人脐静脉内皮细胞,用血管紧张素Ⅱ单独和与AT1、AT2、核因子-kappaB的抑制剂联合干预细胞后,用RT-PCR检测诱导型一氧化氮合酶mRNA表达,Western blot检测诱导型一氧化氮合酶蛋白表达,电泳迁移率变动分析（EMSA）检测核因子-kappaB的活性。结果 在血管紧张素Ⅱ干预2h后核因子-kappaB活性增强（P〈0．05）,5h后诱导型一氧化氮合酶的mRNA和蛋白表达增加（P〈0．05）,核因子-kappaB和AT1的抑制剂能抑制这种增加（P〈0．05）,AT2则无此作用。结论 在内皮细胞中血管紧张素Ⅱ与AT1结合后激活核因子-kappaB,后者的激活引起诱导型一氧化氮合酶表达的增强,从而增加了心血管系统的炎性反应。     

乳腺癌组织中Cyclin D1和VEGF的表达及意义

目的探讨乳腺癌组织中细胞周期素（Cyclin）D1和血管内皮生长因子（VEGF）在乳腺癌发生、发展中的作用。方法采用免疫组化EliVision Plus法检测57份乳腺浸润性导管癌组织（乳腺癌组）及20份乳腺纤维腺瘤组织（对照组）标本中Cyclin D1和VEGF的表达,分析其与乳腺癌临床病理特征的关系及两者表达的相关性。结果乳腺癌组Cyclin D1阳性率（54．38％）明显高于对照组（20％）,P〈0．01;Cyclin D1阳性表达与患者年龄、肿瘤直径、腋窝淋巴结转移、组织学分级无关。乳腺癌组VEGF阳性率（61．40％）明显高于对照组（35％）,P〈0．05;VEGF阳性表达与乳腺癌腋窝淋巴结转移、组织学分级有关（P〈0．05）,与患者年龄、肿瘤直径无关。乳腺癌组织中Cyclin D1与VEGF的阳性表达呈正相关（r=0．287,P〈0．05）。结论Cyclin D1和VEGF高表达在乳腺癌的发生、发展中起重要作用;二者可能存在协同作用。     

血管紧张素Ⅱ-1型受体的shRNA对自发性高血压大鼠血压影响的实验研究

目的观察以重组腺病毒为载体的血管紧张素Ⅱ-1型受体的shRNA（AdS—AT1R—shRNA）对自发性高血压大鼠（SHR）血压的影响及对组织血管紧张素Ⅱ-1型受体（AT1R）基因表达的影响。方法在293细胞内扩增已构建好的荧光蛋白标记的携带AT1R shRNA的重组腺病毒（AdS—AT1R—shRNA）,TCID50法测定重组腺病毒滴度。22只SHR随机分为2组,实验组（n=11）和高血压对照组（n=11）,另设11只Wistar—Kyoto（WKY）大鼠为正常血压对照组,实验组SHR经鼠尾静脉单次注射Ad5—AT1R—shRNA,Ad5—AT1R—shRNA经TCID50法测定感染性滴度为1．7×10^9TCID50／ml,高血压对照组和正常血压对照组经鼠尾静脉单次注射对照重组复制缺陷型腺病毒（Ad5—EGFP）,感染性滴度为7.9×10^9TCID50／ml。注射前及注射后每天定时监测血压及心率,于血压出现明显下降时处死部分动物,取出心脏、肝脏、肾脏、主动脉及肾上腺组织,在荧光显微镜下观察他们对Ad5—AT1R—shRNA的吸收情况,采用荧光定量PCR检测肝脏、肾脏及主动脉组织AT1R mRNA的表达情况。结果实验开始24h后,实验组收缩压[（163±7）mmHg,1mmHg=0．133kPa]出现明显下降,最大降压幅度达29mmHg,与SHR组[（182±8）mmHg]比较差异有统计学意义（P〈0．05）,此后降压作用可持续5天,最长可持续7天。SHR组和WKY组血压均未见明显下降,SHR组有的血压可见继续升高。3组动物的心率变化不明显,肾脏、心脏、肝脏、主动脉及肾上腺组织在荧光显微镜下可见大量荧光表达。实验组肾脏及主动脉AT1R的mRNA表达量（分别为0．086±0．014,0,051±0．023）明显低于SHR组（分别为0．362±0．042,0．463±0．045）,P〈0,01。结论AdS—AT1R—shRNA经静脉注射后可被许多重要脏器吸收,且对SHR的AT1R起到RNA干扰的作用,在mRNA水平抑制AT1R的基因表达。AdS—AT1R·shRNA通过阻抑AT1R生成对SHR起到明显且持久的降压作用。     

胃癌患者血清VEGF和IL－8水平变化及意义

目的探讨胃癌患者血清VEGF和IL－8的水平变化及意义。方法采用EHSA法测定60例胃癌患者（胃癌组）和20例胃良性病变患者（良性组）血清VEGF和IL－8水平,与20例体检健康者（对照组）进行比较。结果胃癌组血清VEGF和IL－8水平明显高于良性组和对照组;胃癌组Ⅲ、Ⅳ期患者明显高于I、Ⅱ期患者（P均〈0．05）,术后明显低于术前,但仍高于对照组（P均〈0．05）。血清VEGF和IL－8水平呈正相关（r=0．433,P〈0．05）。结论VEGF和IL－8可促进胃癌的发生、发展;血清VEGF和IL－8水平有助于胃癌病情和预后的判断。     

心力衰竭病人心房利钠肽与肾素-血管紧张素-醛固酮系统的关系

目的 研究慢性充血性心力衰竭病人心房利钠肽（atrial natriuretic peptide,ANP）与肾素-血管紧张素-醛固酮系统的关系。方法 采用放射免疫分析法测定对受试者血浆血管紧张素Ⅱ（angiotensinⅡ,ATⅡ）、醛固酮（aldosterone,ALD）及ANP含量。结果 心力衰竭组血浆ANP、ATⅡ、AID显著高于对照组,治疗后血浆水平均下降,与治疗前差异有统计学意义（P〈0．001）。ANP水平与ATⅡ水平呈正相关（P〈0．01）,与ALD水平呈正相关、（P〈0．05）。结论 同步监测ATⅡ、ALD、ANP有助于早期发现心力衰竭,判断病情及预后。     

原发性高血压患者年龄与血浆肾素-血管紧张素-醛固酮系统的关系

目的：探讨原发性高血压（EH）患者年龄与血浆肾素－血管紧张素－醛固酮（RAS）系统的关系。方法i200例EH患者按年龄分为5组,测定其血浆RAS含量,并进行统计学分析。结果：随着年龄的增加,血浆肾素（PRA）、血管紧张素II（AngⅡ）含量降低（P均〈0．05）,醛固酮（ALD）含量无明显变化（P〉0．05）。直线相关分析表明年龄与PRA,AngⅡ含量呈负相关（r=－0．283,P〈0．001,r=－0．165,P〈0．05）,年龄与脉压呈正相关（r=0．293,P〈0．001）。结论：随着年龄的增加,肾素－血管紧张素分泌减少,醛固酮与肾素呈分离现象。     

β榄香烯对肝星状细胞分泌ANGⅡ及表达AT_1R mRNA的影响

目的为肝纤维化的治疗提供新思路。方法将肝星状细胞（HSC）-T6细胞株培养24h，分别以质量浓度为10．0、5．0、2．5mg／L的β榄香烯（实验1、2,3组）作用4、12、24h，收集细胞上清及细胞，并设空白对照组。放射免疫法检测培养上清中血管紧张素Ⅱ（ANGⅡ）水平，RT—PCR检测ANGⅡ的Ⅰ型受体（AT1R）mRNA表达。结果作用12、24h时各实验组ANGⅡ水平及均较空白对照组降低（P〈0．05、0．01）；三个时间点各实验组AT1RmRNA表达均显著低于空白对照组（P〈0．01），并呈剂量依赖性。结论β榄香烯可能延缓肝纤维化的发生、发展。     

孕期脂多糖刺激对子代大鼠血管肾素血管紧张素系统的影响

目的 探讨孕期炎症刺激对子代大鼠血管局部肾素血管紧张素系统的影响。方法 Sprague Dawley(SD)孕鼠6只随机分为对照组和脂多糖(LPS)组,于孕期第8、10、12天分别给予生理盐水和LPS 0.79 mg/kg(腹腔注射),子代大鼠出生后采用无创伤尾动脉方法测定血压,免疫组织化学方法测定胸主动脉血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)蛋白的表达水平,Western blot方法测定血管局部血管紧张素Ⅱ1型受体( AT1 R)、血管紧张素Ⅱ2型受体(AT2R)的蛋白含量。结果 LPS组子代大鼠出生后第12周血压明显高于对照组子代大鼠(P＜0.01),15周龄胸主动脉血管组织的AngⅡ表达明显高于对照组子代大鼠(P＜0.01),AT1R蛋白表达明显高于对照组子代大鼠(P＜0.05),AT2R蛋白表达低于对照组子代大鼠,但差异无统计学意义,AT1R/AT2R比值明显高于对照组子代大鼠(P＜0.01)。结论 孕期炎症刺激导致子代大鼠血管局部肾素血管紧张素系统异常,可能是子代大鼠高血压发生发展的重要原因。