聚合酶链反应检测解脲脲原体的研究

鉴于临床迫切需要建立特异、敏感、快速的实验诊断方法，从解脲脲原体（ＵＵ）基因组保守区域选择一对寡核甘酸引物建立检测ＵＵ的聚合酶链反应（ＰＣＲ）技术，扩增产物片段为１８６ｂｐ。同时采用ＰＣＲ法和培养法对５２份孕妇宫颈分泌物检测。研究表明：ＰＣＲ具有特异、敏感、快速等优点，是临床检测ＵＵ切实可行的方法。     

多重聚合酶链反应检测多肿瘤抑制基因初探

目的建立一种敏感、特异和快速检测多肿瘤抑制基因（ＭＴＳ１）的方法。方法选择ＭＴＳ１基因组中的外显子２为扩增靶序列，设计合成了一对引物，同时选择人的β球蛋白基因作为对照扩增，建立了多重聚合酶链反应（ＰＣＲ）检测ＭＴＳ１ＤＮＡ的方法。结果以常规ＰＣＲ与多重ＰＣＲ对正常组织进行检测，扩增产物均出现５３６ｂｐ和３１０ｂｐ条带，两种实验方法结果相同。对２０例肿瘤组织进行检测，检出３例肿瘤组织ＭＴＳ１基因发生了变异。结论所建立的方法较为敏感、特异，可反映ＭＴＳ１基因是否发生变异，为临床诊断、治疗和判断预后提供辅助的实验指标，也为进一步研究打下基础。     

聚合酶链反应检测解脲脲原体的研究

鉴于临床迫切需要建立特异、敏感、快速的实验诊断方法，从解脲脲原体（ＵＵ）基因组保守区域选择一对寡聚核甘酸引物建立检测ＵＵ的聚合酶链反应（ＰＣＲ）技术，扩增产物片段为１８６ｂｐ，同时采用ＰＣＲ法和培养法对５２份孕妇宫颈分泌物检测。结果ＰＣＲ检出率（７５％）明显高于培养法检出率（２９％），经统计学配对计数资料χ￣２检验有显著性差异（Ｐ＜０．０２５）。研究表明：ＰＣＲ具有特异、敏感、快速等优点，是临床检测ＵＵ切实可行的方法。     

用PCR检测慢性乙肝患者唾液、尿液中HBV－DNA

用ＰＣＲ检测慢性乙肝患者唾液、尿液中ＨＢＶ－ＤＮＡ龚希平，徐乾（南京市钟阜医院，２１００７０）本文通过应用ＰＣＲ技术对慢性乙肝患者的唾液、尿液进行了ＨＢＶ－ＤＮＡ检测，以了解唾液、尿液中ＨＢＶ－ＤＮＡ的确切情况及其传染性如何，并就其临床意义作了一些探...     

标本处理方法对PCR检测淋病奈瑟菌的影响

标本处理方法对ＰＣＲ检测淋病奈瑟菌的影响李韶深，朱继明（天津市长征医院检验科，３００００２１）ＰＣＲ技术是一项极敏感的体外由引物介导的特异基因扩增技术［１］，标本中靶ＤＮＡ的存在状态至关重要。因此，临床标本的处理对实验结果影响很大。我们对临床标本处理...     

聚合酶链反应结合探针杂交检测幽门螺杆菌

目的建立特异、灵敏的聚合酶链反应（ＰＣＲ）结合长臂光敏生物素探针杂交检测幽门螺杆菌（ＨＰ）的方法。方法用ＰＣＲ产物直接克隆并测序，以含ＨＰＤＮＡ序列的重组质粒外源片段为探针。用细菌培养、单纯ＰＣＲ和ＰＣＲ结合杂交（ＰＣＲ－Ｓｂ）检测经胃镜诊断为慢性胃炎、胃溃疡、十二指肠球部炎症、十二指肠溃疡的胃活检组织、唾液和粪便标本中的ＨＰ。结果检测胃活检标本７９份，ＰＣＲ－Ｓｂ阳性率为９９％，单纯ＰＣＲ及细菌培养的阳性率分别为９５％和６５％，ＰＣＲ－Ｓｂ的灵敏度达到１ｆｇ。唾液标本的检测阳性率为３５％，粪便标本的检测结果均为阴性。结论测序证实了ＰＣＲ扩增的正确性。ＰＣＲ结合长臂光敏生物素探针杂交是特异、灵敏、简便和对人体无害的检测ＨＰ的方法。     

混合样品中微量SRY基因的毛细管电泳检测

目的建立一种灵敏度高、重现性好的检测混合样品中微量目的基因的方法。方法采用聚合酶链反应（ＰＣＲ）扩增混合样品中微量男性ＤＮＡ的ＳＲＹ序列，分别通过琼脂糖凝胶电泳和毛细管电泳检测ＰＣＲ扩增产物，比较二者的检测灵敏度。结果毛细管电泳可检测到２０ｐｇ男性模板ＤＮＡ（相当于３～４个细胞中的ＤＮＡ含量）ＰＣＲ扩增产物总量的１／６００，琼脂糖凝胶电泳可检测到７４ｐｇ男性模板ＤＮＡ（相当于１３个细胞中的ＤＮＡ含量）ＰＣＲ扩增产物总量的１／３。毛细管电泳检测微量目的基因扩增产物的综合灵敏度是琼脂糖凝胶电泳的７５０倍。结论毛细管电泳灵敏度高、重现性好，与ＰＣＲ技术结合可广泛用于各种混合样品中微量核酸分子的检测。     

静脉及心脑血栓性疾病抗活化的蛋白C的研究

为探讨抗活化的蛋白Ｃ（ＡＰＣＲ）及其基因型在中国人血栓性疾病的发病情况，用活化的部分凝血活酶时间（ＡＰＴＴ）以加和不加活化的蛋白Ｃ（ＡＰＣ）的比值（ＡＰＣ－ＳＲ）检测ＡＰＣＲ；用多聚酶链反应扩增因子Ⅴ第１０外显子（包含５０６位密码子）的２２０ｂｐ片段，再用限制性内切酶ＭｎｌⅠ消化检测其基因型。共检测了４６例静脉血栓和下肢动脉血栓，５８例心、脑梗塞，７４例冠心病及４０名正常人的ＡＰＣＲ及其基因型。结果表明血栓性疾病患者与正常人的ＡＰＣＲ无明显差异，亦没有发现与ＡＰＣＲ相关的基因型，提示ＡＰＣＲ很可能不是中国人血栓性疾病常见相关病因     

聚合酶链反应限制性片段长度多态性（PCR—EFLP）分析维生素D受体（VDR） …

聚合酶链反应限制性片段长度多态性（ＰＣＲ－ＲＦＬＰ）分析维生素Ｄ受体（ＶＤＲ）基因型可以早期预测骨质疏松，为探讨便捷、可靠的实验条件供一般临床实验室使用，本文对比常规ＰＣＲ效果、不同ＮＤＡ模板量对ＰＣＲ和限制性内切酶酶切结果的影响。结果显示：热启动消除了引物错配和二聚体形成的机遇，使特异性条带大量扩增；模板量控制在２００～８００ｎｇ最佳，可避免太低不出现扩增条带，太高造成某些结果的误判。据此认为：     

逆转录－套式PCR检测血清中丙肝病毒RNA

利用与丙型肝炎病毒（ＨＣＶ）基因组５＇非编码区保守序列同源的套式引物，建立了检测血清中ＨＣＶＲＮＡ的聚合酶链反应（ＰＣＲ）技术，由于在引物设计中选择了最保守的区域且避开了与黄病毒属的同源序列，保证了ＰＣＲ检测的灵敏度和特异性。经逆转录和两轮ＰＣＲ扩增，可检出１×１０－３ｕｌ血清中的ＨＣＶＲＮＡ。研究了影响ＨＣＶＲＮＡＰＣＲ检测的各种因素，并对ＲＮＡ分离及ＲＴ－ＰＣＲ反应体系进行了优化，在此基础上研制了ＨＣＶ的ＰＣＲ检测试剂盒。     

丙型肝炎病毒不同基因区的聚合酶链反应扩增

目的探讨提高聚合酶链反应（ＰＣＲ）对丙型肝炎病毒（ＨＣＶ）病毒血症的检出率和对变异较大区域的扩增效率的方法。方法分别以ＨＣＶ基因组５＇端非编码区（５＇ＵＴＲ）、非结构基因４区（ＮＳ４）及ＮＳ５ｂ区的引物检测ＨＣＶ，并比较双退火温度与单一退火温度对ＨＣＶ基因扩增效率的影响。结果ＨＣＶ不同基因区（５′ＵＴＲ、ＮＳ４、ＮＳ５ｂ）引物的ＰＣＲ扩增阳性率分别为９２％、６２％、５９％。以双退火温度扩增ＮＳ４区与ＮＳ５ｂ区基因，扩增阳性率分别提高到７７％与７９％。将血清按原血清、１０－１～１０－１０系列稀释后检测，发现２份血清单退火温度ＰＣＲ的检出水平分别为１０－５与１０－７，双退火温度ＰＣＲ检出水平则分别提高至１０－８与１０－９稀释血清。结论５′ＵＴＲ引物对ＨＣＶＲＮＡ的检出率明显高于ＮＳ４区与ＮＳ５ｂ区引物。双退火温度ＰＣＲ可显著提高ＨＣＶＲＮＡ检出的敏感性     

PCR产物的聚丙烯酰胺凝胶电泳分析

ＰＣＲ产物检测方法的灵敏度对临床诊断结果有较大的影响。我们对端粒酶催化亚基蛋白质（ｈＴＲＴ）ｍＲＮＡ［１］的ＲＴ－ＰＣＲ扩增产物琼脂糖凝胶电泳ＥＢ染色法和聚丙烯酰胺凝胶电泳银染法进行比较，以期在ＰＣＲ检测方面引起重视。１材料和方法１．１材料ＨＬ－６０...     

用PCR技术检测沙眼衣原体主要外膜蛋白基因序列

本实验应用ＰＣＲ技术从宫颈分泌物中直接检测沙眼衣原体。ＰＣＲ所用的引物衣原体主要外膜蛋白（ＭＯＭＰ）基因中具有特异性的稳定区域中的两条核苷酸序列，扩增片段长度为１４４ｂｐ。将经过蛋白酶Ｋ处理的标本作了模板，经变性，退火和延伸，在毛细管ＰＣＲ仪上循环６０个周期后，扩增出的衣原体特异性片段在２．０％的琼脂糖凝胶上电泳后即可被检出。在７７个标本中，１６个为ＰＣＲ阳性。与荧光单克隆抗体免疫学方法比较证明。     

荧光定量PCR与RT-PCR技术检测HCV-RNA的比较观察

目的 比较荧光定量ＰＣＲ与ＲＴ－ＰＣＲ（定性）检测不同检材中的ＨＣＶ－ＲＮＡ,评价荧光定量ＰＣＲ技术测定ＨＣＶ－ＲＮＡ水平的价值。方法 采用荧光定量ＰＣＲ及ＲＴ－ＰＣＲ（定性）技术同时检测了７１例血液透析患者的血清,血浆,淋巴细胞、尿液标本中ＨＣＶ－ＲＮＡ。结果 血清、淋巴细胞,尿液标本中ＨＣＶ－ＲＮＡ的荧光定量ＰＣＲ检出率（４６．３８％,８０．００％）,分别高于相应标本中ＨＣＶ－ＲＮＡ的ＲＴ－Ｐ     

巨细胞病毒即刻早期基因mRNA检测方法的建立

目的建立快速简便的逆转录聚合酶链反应（ＲＴＰＣＲ）方法检测人巨细胞病毒（ＨＣＭＶ）即刻早期（ＩＥ）基因ｍＲＮＡ。方法设计合成跨越ＨＣＭＶＩＥ基因内含子区的一对引物，分别用ＲＴＰＣＲ和ＰＣＲ技术扩增ＨＣＭＶｍＲＮＡ和ＤＮＡ，用Ｓｏｕｔｈｅｒｎ杂交鉴定阳性产物。结果ＨＣＭＶＩＥ基因ｍＲＮＡ表达在感染后６小时即可出现，并持续到感染后至少９６小时，ＲＴＰＣＲ检测的最低敏感性为１００ｆｇ总ＲＮＡ，其他病毒和细胞ＲＮＡ不能被扩增。结论ＲＴＰＣＲ技术检测ＨＣＭＶｍＲＮＡ敏感、特异，有望应用于临床作为ＨＣＭＶ活动性感染的早期诊断方法     

聚合酶链反应检测肿瘤细胞株的端粒酶活性

目的比较聚合酶链反应酶免法（ＰＣＲＥＬＩＳＡ）和聚合酶链反应聚丙烯酰胺凝胶电泳（ＰＣＲＰＡＧＥ）方法检测白血病细胞端粒酶活性的临床应用价值。方法ＰＣＲＥＬＩＳＡ以地高辛标记对端粒重复片段特异的探针与ＰＣＲ变性产物杂交，通过ＥＬＩＳＡ系统检；ＰＣＲＰＡＧＥ方法直接用电泳法分离ＰＣＲ扩增端粒酶的合成产物，经溴乙啶染色，分析端粒酶活性。结果ＰＣＲＥＬＩＳＡ方法能准确特异地检测白血病细胞的端粒酶活性，检测灵敏度可达１×１０２细胞数。经ＰＡＧＥ分离显示，端粒酶的ＰＣＲ产物有含５０ｂｐ等６条梯带。结论两种方法均可用于临床检测。ＰＣＲＥＬＩＳＡ方法似更简单、方便一些。     

用多聚酶链反应（PCR）快速诊断白色念珠菌感染

由白色念珠菌引起的院内感染日益增多，应用多聚酶链反应（ＰＣＲ）体外扩增白色念珠菌ＤＮＡ，为临床敏感，特异，快速诊断白色念珠菌感染提供了有用的工具，本文就ＰＣＲ检测白色念珠菌ＤＮＡ的引物，标本处理，扩增程序，扩增产物分析以及临床应用效果予以介绍。     

多重聚合酶链反应检测多肿瘤抑制基因初探

建立一种敏感，特异和快速检测多肿瘤抑制基因的方法。选择ＭＴＳ１基因组中的外显子２为扩增靶序列，设计合成了一对引物，同时选择人的β球蛋白基因作为对照扩增，建立了多重聚合酶链反应检测ＭＴＳ１ＤＮＡ的方法。以常规ＰＣＲ与多重ＰＣＲ对正常组织进行检测，扩增产物均出现５３６ｂｐ和３１０ｂｐ要带，两种实验方法结果相同。     

复合聚合酶链反应检测恶性疟原虫及混合感染

目的 应用一种简易、快速的复事ＰＣＲ扩增系统检测恶性疟的虫及混合感染。方法 以间日疟原虫（Ｐ．ｖ）和恶性疟原虫（Ｐ．ｆ）小亚单位核糖体核糖核酸基因（ＳＳＵｒＤＮＡ）特定片段为靶基因，设计并合成引物，建立复合ＰＣＲ护增系统。采用煮沸法快速制备ＤＮＡ模板研究本系统的敏感性和特异性，并用于临床血样的检测。结果 从Ｐ．ｖ和Ｐ．ｆ感染血样中分别扩增出分子量大小为７０５ｂｐ和５７５ｂｐ的特定扩增带。而食蟹猴疟     

定量PCR技术

聚合酶链反应（ＰＣＲ）是模拟ＤＮＡ体内复制过程,在体外将ＤＮＡ片段加人工扩增的技术,有许多因素都可以影响ＰＣＲ的扩增效率,导致常规ＰＣＲ的特异性不强,准确性不高,为此,大量学者设计了定量ＰＣＲ技术,从克服各种因素对ＰＣＲ扩增的干扰,从而提高ＰＣＲ的特异性及准确性,本文对定量ＰＣＲ技术进行了简要的综述。