对蛋白、细胞结构与功能及其与药物相互作用进行监测的显微测定技术

本文介绍我们发展起来的用于对单个蛋白分子与细胞的结构与功能及其分子分布和相互作用进行监测的系列显微测定技术。本系列技术包括一显微激光动态散射技术系统，一快速多道显微分光光度分析系统，一宽场（明场）显微光切片系统，一综合了激光剪技术、激光镊技术以及微管操控技术的细胞显微操控与细胞微环境形成技术系统，一基于细胞微环境技术的激光共焦拉曼散射显微扫描测定与成像技术系统，一单细胞凝胶电泳图像分析技术系统，以及一快速荧光成像动态监测系统。不但可测定细胞与分子的结构参数：包括细胞内及细胞膜上分子的化学结构、浓度、其流体力学半径与在细胞内的分布状态；蛋白分子与细胞的三维立体结构形态、大小、形状、表面曲率和形状规化因子。还可测定有关功能参数包括细胞内分子的扩散传输系数；蛋白的功能变化；红细胞内血红蛋白分子的携氧能力；细胞膜的变形能力、附着能力、张力、粘弹性与刚性；细胞分化、细胞增殖、细胞DNA含量及DNA损伤的定量定位侧定等。     

临床前药物安全性评价中的毒性病理学

毒性病理学是从形态学的角度阐明药物毒性造成的组织损伤,包括药物损伤类型、作用部位、病变程度和预后等基本问题,为临床前药物安全性评价研究提供客观准确的数据支持。因此,毒性病理学在药物安全性评价中具有重要作用,其数据或结论常常决定了许多药物研发项目的终止或继续。从毒性病理学的特点、规范性管理、病理学新技术的发展（包括原位杂交、激光扫描细胞技术、激光捕获显微切割等）,以及毒性病理学发展面临的问题等方面进行了简要论述。     

药物毒性病理学研究技术新进展

药物毒性病理学是药物毒性检测的关键环节。传统的形态病理学为临床诊断的金标准,但其主观性突出,只能定性而无法准确定量,故已无法满足人们对药物安全性评价高标准的需求。为更深入地研究分析药物毒性损害和病变,一些能够从不同水平反映毒理学效应终点的新技术、新方法已应用到药物毒性病理学研究中。这些新技术有免疫组织化学、原位杂交、共聚焦激光扫描显微镜技术、激光捕获显微切割技术、流式细胞术、毒理芯片技术、分子影像技术等。它们不仅弥补了传统形态病理学的局限和不足,而且拓宽了毒性病理学的研究思路,必将促使药物毒性病理学飞跃式发展。     

胃癌中hMLH1基因突变及其与HP感染的关系

目的探讨hMLHl基因突变与胃癌临床病理特征的关系及HP致胃癌的可能机制。方法应用激光捕获显微切割技术获取所需细胞,聚合酶链反应-单链构象多态性分析(PCR-SS-CP)银染技术检测49例胃癌hMLH1基因突变,用Warthin-Starry银染法观察胃癌组织HP感染情况。结果胃癌组织中hMLH1基因5个外显子总突变率为6.12%,hMLH1突变率与胃癌患者的年龄、性别、发生部位、有无淋巴结转移、组织学类型、分化程度及病理变化进展程度均无显著关联(P>0.05)。HP感染胃癌组与非感染胃癌组hMLH1突变率差异无显著性(P>0.05)。结论hMLH1基因突变可能参与了部分胃癌的发生,其与胃癌的临床病理特征无显著关联;本实验尚未发现HP感染与hMLH1基因突变间的显著关联。     

89例鼻NK/T细胞淋巴瘤与EB病毒关系的研究

目的:研究鼻NK/T细胞淋巴瘤与EB病毒的关系。方法:筛选鼻NK/T细胞淋巴瘤89例,应用手工显微切割挖取小片肿瘤组织,用PCR方法检测EB病毒(EBV)的LMP-1基因序列,并同时与免疫组织化学染色相比较。结果:用PCR方法检测89例鼻NK/T细胞淋巴瘤中LMP-1阳性率为69.66%(62/89),与鼻咽癌中检测结果(18/30,60.0%)比较差异无统计学意义(P>0.05),但高于B细胞性淋巴瘤(1/20,5%)和鼻咽黏膜组织(2/20,10%)的检出率(P<0.05)。在NK/T细胞淋巴瘤中用PCR方法检测LMP-1阳性率明显高于免疫组化检出率(11/89,12.36%,P<0.05)。结论:鼻NK/T细胞淋巴瘤与EBVLMP-1基因有关,LMP-1对该淋巴瘤的形成和发展起着重要的作用;PCR方法较免疫组化能明显提高EBV检出率;利用显微切割技术能很好地提高"目的细胞"的"富集度",提高检出率和准确性。     

龙葵碱对HepG2细胞线粒体膜电位及细胞内[Ca^2＋]i的影响

目的：观察龙葵碱对HepG2细胞线粒体膜电位及细胞内[Ca^2＋]i的影响，揭示龙葵碱诱导细胞凋亡的机制。方法：采用AO／EB双染HepG2细胞，激光共聚焦扫描显微镜观察细胞形态学改变；TMRE单染HepG2细胞，激光共聚焦扫描显微镜观察细胞线粒体膜电位的改变；Fluo-3／AM单染HepG2细胞，激光共聚焦扫描显微镜观察细胞内[Ca^2＋]i的改变；TMRE和Fluo-3／AM双染HepG2细胞，激光共聚焦扫描显微镜同时观察细胞线粒体膜电位和细胞内[Ca^2＋]i的改变。结果：形态学实验表明0．0032μg／mL、0．016μg／mL龙葵碱使细胞外周呈微弱皱缩状改变，0．08、0．4、2μg／mL龙葵碱使HepG2细胞出现大量碎片及凋亡小体等典型的细胞凋亡形态，即龙葵碱能够诱导HepG2细胞凋亡；TMRE单染激光共聚焦测定表明龙葵碱能够降低HepG2细胞膜电位；Fluo-3／AM单染激光共聚焦测定表明龙葵碱能够升高肿瘤细胞内[Ca^2＋]。浓度；TMRE和Fluo-3／AM双染激光共聚焦观察表明龙葵碱在降低线粒体膜电位的同时能够升高细胞内[Ca^2＋]i浓度。结论：龙葵碱能够诱导HepG2细胞凋亡，其机制为降低HepG2细胞膜电位，开放细胞膜PT通道，使细胞内Ca^2＋顺浓度梯度转运，从而升高细胞内Ca^2＋浓度启动细胞凋亡机制。     

激光捕获显微切割技术纯化的乳腺癌上皮细胞和间质比较蛋白质组学研究

目的研究乳腺癌上皮细胞和间质间蛋白表达的差异。方法用改良HE染色法对临床侵润性导管内原位癌患者的石蜡包埋样品进行染色,用激光捕获显微切割技术(LCM)纯化分离癌变的乳腺上皮细胞和其周围间质后分别进行质谱分析。结果质谱总共检测了431种蛋白,上皮细胞和间质中分别检测到384和298种蛋白。251种共同表达的蛋白中,69种间质蛋白的含量比在上皮细胞中高,60种比在上皮细胞中低。所检测到蛋白的上皮细胞和间质定位及表达水平和它们在肿瘤发生、发展过程中的作用一致。结论在上皮细胞和间质中差异表达蛋白可以是疾病的筛选、诊断和预后判断的蛋白标志。     

多功能显微摄像系统在细胞形态学实验教学中的体会

目的:探讨多功能显微摄像系统在细胞形态学实验教学中应用的效果;方法:应用多功能显微摄像系统进行细胞形态学实验教学;结果:应用多功能显微摄像系统后,使细胞形态学实验教学更加具体、直观、形象、生动;结论:多功能显微摄像系统提高了细胞形态学的实验教学效果,应用效果良好.     

利用激光显微切割／压力弹射技术和纳流液相色谱／质谱／质谱联用系统（LC／MS／MS）对死后人脑组织中的蛋白质进行鉴定

大多数神经退化性疾病，例如帕金森氏症、阿滋海默症等的在分子层面的发病机理目前尚不清楚．大多数蛋白质的表达分析都是在完整组织均质化制备的样品的基础上完成的．用这种方法制备的样品，没有提供特定细胞类型的相关改变的信息．本研究的目的在于检查用激光显微切割方法制备死后脑组织单细胞类型样品能否用于蛋白质表达分析．     

玻璃体手术显微器械的清洗消毒保养与使用

近两年来，我院大量进行玻璃体切割显微手术，玻璃体切割术的仪器及器械精密、昂贵，随着玻璃体切割器的不断改进，玻璃体手术的辅助器械逐渐配套，除具备精巧的显微手术操作技术，还有对玻璃体显微手术器械的清洁、消毒、保养、使用作出规定和完善，以确保手术的顺利进行...     

萤光显微技术及其进展

自1976年在美国和1978年在西德召开了第五次和第六次国际自动细胞学工程基础会议以来,细胞学自动分析技术所显示的成就日益显著。由于电子计算机、激光和新型光电器件的进展,在光学显微镜特别是萤光显微技术和分光光度技术基础上发展了细胞自动分析系统,它基本上有两种类型:高分辨系统即扫描显微光度计和低分辨系统即多参数流动细胞自动分析系统。生物科学和医学分析技术从繁琐的显微描述,小样品分析和试管试验进入快速自动定量分析体系。当代物理科学、化学、数学等     

许旺细胞检测与鉴定方法的新进展

许旺细胞在周围神经损伤修复过程中起着重要作用,为保证高质量、高数量、高纯化度的许旺细胞,本篇将对许旺细胞的精确检测和鉴定的新进展作以综述。许旺细胞的检测、鉴定技术正日臻完善,不断提高,但仍缺乏系统性。许旺细胞的活性检测可分为MTT法,显微分光光度和显微图像分析技术,H3-胸腺嘧啶核苷测定,以及DNA受损程度的测定（单细胞凝胶电泳）。此外,许旺细胞的鉴定分为形态学观察和免疫学鉴定两种。上述各种技术的主要目的是让许旺细胞更有效的在人工组织修复损伤的周围神经再生方面发挥作用,并在功能和特点上进一步完善。     

银杏叶提取物EGb761对阿米卡星所致离体豚鼠耳蜗外毛细胞内钙和运动性变化的影响

利用激光共聚焦成像系统和荧光探针Fluo 3/AM监测离体单个豚鼠耳蜗外毛细胞 (OHC)内游离钙浓度 ([Ca2 + ]i)的变化 ,以及显微摄像记录OHC的运动情况 ,发现阿米卡星 (AK ,4 .76g·L- 1)使OHC[Ca2 + ]i 显著下降 ,伴随着细胞可逆性的缩短变粗 ,恢复后 ,细胞仍比正常短胖 ,胞膜折皱 ,核固缩 .银杏叶提取物EGb761(0 .2g·L- 1)在AK前或后加入均不能中断 [Ca2 + ]i 下降及细胞收缩这一过程 ,但可以使AK所致的极低 [Ca2 + ]i 回升 .此外 ,EGb761可以改善AK对OHC形态的不可逆损伤 .结果提示 ,AK所致的 [Ca2 + ]i 下降可破坏OHC慢运动 ,而EGb761对AK所致OHC损伤有一定拮抗作用 .     

氧化苦参碱诱导人乳腺癌细胞MCF-7凋亡的实验研究

目的　研究氧化苦参碱对MCF 7细胞的诱导凋亡作用机制。方法　用光学显微镜、电子显微镜、激光共聚焦显微镜、流式细胞仪和DNA凝胶电泳等技术观察细胞凋亡。结果　实验显示氧化苦参碱作用于体外培养的MCF 7细胞可诱导发生凋亡 ,凋亡细胞表现为细胞固缩 ,核染色质聚集或碎裂、胞质空泡化等 ;DNA电泳可见DNA梯形条带 ;激光共聚焦显微镜示DNA含量下降 ,流式细胞仪检测sub G1峰在G1期前出现 ,S期细胞比例增高。结论　氧化苦参碱对体外培养MCF 7细胞生长有抑制作用 ,机制与通过阻止细胞周期的进程 ,启动细胞自身调控程序 ,诱导肿瘤细胞凋亡有关     

飞秒激光辅助的角膜内皮移植术围手术期护理

<正>对于角膜内皮病变的患者来说,传统的手术方式是行穿透性角膜移植术(PKP),然而这种手术方式创伤较大,且术后发生排斥反应的风险较高。随着医疗技术的进步,角膜内皮移植术(EKP)已经成为角膜内皮病变的首选术式[1]。飞秒激光作为一种脉冲式红外线激光,具有精度高,安全性好等优点,飞秒激光辅助的角膜内皮移植术可精确切割角膜组织,实现植片与植床的个体化制作,切割组织的厚薄深度更易控制。为角膜内皮移植术的实施     

肌层浸润性膀胱癌微环境调控异质性蛋白质组学研究

目的构建肌层浸润性膀胱癌肿瘤微环境蛋白质表达谱,并探讨生物通路改变在肿瘤异质性中的决定性作用。方法 1按照不同的转移风险收集浸润性膀胱癌患者临床标本,激光捕获显微切割获得纯化的间质细胞;2同位素标记相对和绝对定量(i TRAQ)技术和二维液相色谱串联质谱鉴定蛋白质表达谱;3生物信息学方法进一步分析鉴定差异表达蛋白质,并从生物通路层面揭示癌发生机制。结果不同转移风险组中配对癌间质/正常上皮间质标本中鉴定出差异表达蛋白1049个,其中分别有510、549、548个显著差异表达的蛋白质分别在低危、中危、高危转移组中表达(高、低转移风险组与正常组比值设定为≥1.5或≤0.667)。通路分析显示差异表达蛋白主要位于KEGG通路中,包括:聚合黏附、系统性红斑狼疮、细胞外基质受体相互作用途径。结论本研究验证了肿瘤微环境在调节癌异质性中起到了关键性作用。生物通路的改变决定肌层浸润性膀胱癌的恶性表型。     

23G微创玻璃体切割的手术配合

现代玻璃体切割手术始于20世纪70年代,随着眼科医学的发展及显微手术器械的更新,23G微创玻璃体切割手术较传统20G玻璃体切割手术,具有手术切口小、手术时间短、术后反应轻、恢复快、手术适应范围广等优势[1,2]。本文探讨23G微创玻璃体切割的手术配合,报道如下。资料与方法1.一般资料2012年5月-2014年10月开展23G微创玻璃体切割手术治疗760例(760眼)患     

经尿道输尿管镜钬激光碎石术中的护理配合

钬激光是利用稀有元素钬为激光介质固态脉冲式激光,在水中有很高的吸收系数,钬激光治疗机产生波长为2100nm的钬激光,经导光纤传输系统在病变部位进行烧灼、凝固、汽化、切割而达到诊断和治疗的目的,具有无切口、创伤小、安全高、病人痛苦小,术后恢复快等优点[1]。     

复杂性视网膜脱离玻璃体切割术后护理

随着眼科显微手术技术迅速发展,以往用常规手术方法难以治愈的复杂性视网膜脱离,现在通过玻璃体切割视网膜显微手术,并行眼内填充而获得满意的疗效。而术后护理决定着手术是否完全成功。本文通过对１１６例玻璃体切割术治疗的复杂性视网膜脱离患者术后护理要点总结如下...     

Manoalide对除生长因子诱导的血管内皮细胞凋亡的影响

目的：研究ｍａｎｏａｌｉｄｅ对除去生长因子（ａＦＧＦ和血清）而诱导的血管内皮细胞凋亡的影响。方法；通过细胞形态观察，ＤＮＡ凝胶电泳及荧光显微术通过细胞形态观察，ＤＮＡ凝胶电泳及荧光显微术等方法确定ｍａｎｏａｌｉｄｅ对细胞凋亡的抑制或促进作用。结果：去向除ａＦＧＦ和血清的培养液中加低浓度的ｍａｎｏａｌｉｄｅ（１－４μｍｏｌ．Ｌ＾－１）培养细胞４８ｈ，细胞的脱壁和ＤＮＡ片断化受到抑制，ｍａｎｏａｌｉｄ