VD3结合蛋白的分离纯化

目的：纯化VD3结合蛋白（DBP）。方法：利用DBP的相对分子质量及电荷性质，分别用阳离子交换剂、阴离子交换剂和凝胶过滤等分离目的蛋白,SDS-PAGE鉴定纯度，并进行活性分析。结果：分离到相对分子质量为58000的蛋白质，SDS－PAGE呈单一区带。结论：成功分离纯化出DBP。     

VD_3结合蛋白的分离纯化

目的 :纯化VD3 结合蛋白 (DBP)。方法 :利用DBP的相对分子质量及电荷性质 ,分别用阳离子交换剂、阴离子交换剂和凝胶过滤等分离目的蛋白 ,SDS PAGE鉴定纯度 ,并进行活性分析。结果 :分离到相对分子质量为 5 80 0 0的蛋白质 ,SDS PAGE呈单一区带。结论 :成功分离纯化出DBP。     

妊娠相关血浆蛋白-A的纯化与鉴定

目的:建立人妊娠血浆相关蛋白A(PAPP-A)的纯化与鉴定方法.方法:利用DEAE-Sephdex CL-6B离子交换和Heparin-sepharose CL-6B亲和层析进行分离纯化,变性SDS-PAGE测定其相对分子质量为200 kD,Western blotting鉴定其特异性.结果:获得相对分子质量为200 kD的蛋白条带,此条带可与妊娠血浆相关蛋白A单克隆抗体发生特异性反应.结论:成功地从孕妇血清中分离得到妊娠血浆相关蛋白A.     

重组血红蛋白的原核表达、纯化和鉴定

目的利用大肠杆菌表达载体,表达血红蛋白(Hb)基因,并进行纯化及鉴定。方法将原核表达载体pHE 2-Hb转化入E.Coli JM109,经IPTG诱导表达;应用阴离子交换层析、阳离子交换层析分级纯化目的蛋白,用Western blot鉴定纯化出的目的蛋白。结果 SDS-PAGE分析表明,表达产物的相对分子质量约为67 kD,与理论值相一致;应用阴离子交换层析、阳离子交换层析分级纯化目的蛋白,Western blot检测表明得到纯度较高的目的蛋白。结论利用大肠杆菌表达系统,获得了较高纯度的目的蛋白,为进一步研究Hb的生物传氧机制研究和以Hb为基础载氧药物的研究提供重要基础和研究依据,并将为血液替代品和相关疾病的治疗研究奠定研究基础。     

重组人甲硫氨酸硫氧化物还原酶的原核表达、纯化及鉴定

目的：表达、纯化并鉴定人甲硫氨酸硫氧化物还原酶(hMsrA)。方法：将含有hMsrA基因的重组质粒转化大肠杆菌，经诱导表达，表达蛋白主要存在于上清中，经破菌、Ni-NTA Agarose亲和层析分离纯化目的蛋白。结果：SDS-PAGE显示纯化的蛋白相对分子质量为26000的单一条带；Western-blot鉴定该纯蛋白有免疫活性；酶活性测定表明，该纯化蛋白具有还原甲硫氨酸硫氧化物的能力。结论：hMsrA能在原核体系中良好表达，经纯化后具有催化活性，为大量制备并进一步研究抗氧化剂在动脉粥样硬化中的作用提供了科学途径。     

人肺腺癌A549细胞株中HSP70多肽复合物的分离与纯化

目的:探讨肺腺癌细胞中热休克蛋白70多肽复合物分离及纯化的方法.方法:采用裂解液裂解、超声破碎、ConA-Sepharose亲和层析、ADP-agarose亲和层析结合DEAE阴离子交换层析方法,从体外培养的热休克(43℃)处理后的人肺腺癌细胞株A549中分离纯化HSP70多肽复合物,通过SDS-PAGE电泳、Western-blot检测获得蛋白.结果:获得蛋白的相对分子质量约为70 000,能与抗HSP70特异单抗结合.结论:采用ConA-Sepharose亲和层析、ADP-agarose亲和层析结合DEAE阴离子交换层析从肺腺癌细胞株A549中可获得高纯度的HSP70多肽复合物,为进一步研究以HSP70多肽复合物为基础的肺癌免疫治疗提供了依据.     

苦瓜子蛋白分离纯化及其理化性质鉴定

目的建立苦瓜子蛋白分离纯化的方法。方法应用阳离子交换色谱和凝胶过滤色谱Hiprep16/10SOURCE30S和HiLoad26/60Superdex75预装柱从苦瓜种仁中分离纯化苦瓜子蛋白。结果分离纯化出14个组分的苦瓜子蛋白,它们均为碱性蛋白质,相对分子质量在(1.3~2.9)×104,等电点在9.3~9.6。结论应用本法能获得供生物活性研究用苦瓜子蛋白组分。     

仓鼠经口给予亚砷酸盐后血浆中砷结合蛋白的纯化

目的：探索用凝胶过滤柱和阴离子交换柱,结合电感耦合等离子质谱仪分离纯化砷结合蛋白,为阐明砷的毒理机制提供技术支持。
方法：通过HPLC-ICP-MS技术,采用KW-803色谱柱、凝胶过滤柱和离子交换柱分离纯化仓鼠血浆中的砷结合蛋白;SDS-PAGE凝胶电泳分析由HPLC-ICP-MS系统凝胶过滤柱和离子交换柱获得的每个蛋白样本。
结果：①仓鼠单次经口给予三价亚砷酸（iAsⅢ）后,运用三步法即利用凝胶过滤、KW-803色谱柱和阴离子交换等色谱柱联用HPLC-ICP-MS,最后纯化得到了仓鼠血浆中砷结合蛋白;②SDS-PAGE凝胶电泳分析由HPLC-ICP-MS系统联用不同凝胶过滤柱和离子交换柱获得的每个蛋白样本,检测到砷结合蛋白分子量大约40~50 kD。
结论：凝胶过滤柱和阴离子交换柱,结合电感耦合等离子质谱仪是分离纯化动物血浆或组织上清砷结合蛋白简便快速的方法。     

人乳腺癌Her-2癌基因蛋白分离纯化的研究

目的：研究乳腺癌细胞中癌基因蛋白Her-2的分离纯化方法。方法：采用裂解液裂解、超声破碎、高速离心、ConA Sepharose亲和层析结合ADP agarose亲和层析方法,从热休克处理后的乳腺癌细胞株中分离纯化出癌基因蛋白Her-2,通过SDS-PAGE电泳及免疫印迹法检测进行蛋白分子质量及性质鉴定。结果：检测结果证明纯化后获得的蛋白复合物中包含相对分子质量为185 KD的蛋白,且能与抗Her-2特异单抗结合。结论：采用本方法可以获得相对纯度较高的Her-2蛋白。     

H_(22)腹水型肝癌患鼠血清中一种高分子量DNA结合蛋白的分离

本实验室曾从艾氏腹水癌患鼠血清和腹水DNA结合蛋白(DBP)中分离纯化出一种高分子量DNA结合蛋白(简称HDBP)。经2-巯基乙醇还原后,用SDS-PAGE测得其分子量为41000,为了研究这种HDBP在患其与类型肿瘤的小鼠血清中是否也存在,我们采用同样的方法从H_(22)腹水型肝癌患鼠血清中,分离纯化出一种分子量较高的DBP,并对其进行了初步鉴定。