一株输血传播病毒新变种的克隆和序列分析

目的从1例不明原因转氨酶升高的病人血清中克隆输血传播病毒(TTV)DNA,并进行序列分析。方法用巢式PCR扩增TTVDNA长片段,连接至pGEM-T载体上,挑选一个克隆(56-B)进行测序。将56-B与GenBank中五株TTV进行氨基酸和核苷酸序列的同源性分析,并用最大似然法进行分子进化分析。结果56-B株与TA278等五株TTV序列的核苷酸同源性分别为42.4%、48.2%、47.9%、49.8%、61.7%,氨基酸序列的同源性更低,但其5'和3'两端非编码区的序列仍然很保守。结论56-B株与其他TTV株之间的同源性很低,有很高的基因异质性,是TT 的一个新变种,代表TTV的一个新的基因型。     

输血传播病毒研究进展

迄目前为止 ,明确的肝炎病毒有甲、乙、丙、丁、戊型肝炎病毒。有报道 ,巳型肝炎病毒 ( AFV)和庚型肝炎病毒 ( HGV)可引起输血后肝炎。 1 997年底 Nishizawa等从输血后肝炎患者的血清中分离出一种甲～庚型病毒之外的与丙氨酸转氨酶异常相关的一种新病毒 ,并命名为输血传播病毒 ( transfu-sion- transmitted virus,TTV) ( 1)。至发现 TTV以来的几年中 ,其基因结构已被鉴定 ,其临床意义尚存在争论。现结合文献将有关研究部分进展综述如下。1　TTV的发现与特征　　Nishizawa等 ( 1)用代表性差异分析法 ( represen-tational difference a…     

输血传播病毒在原发性肝癌患者中的感染状况研究

目的 了解新型肝炎病毒输血传播病毒（ｔｒａｎｓｆｕｓｉｏｎ ｔｒａｎｓｍｉｔｔｅｄ ｖｉｒｕｓ，ＴＴＶ）在原发性肝癌（ＰＬＣ）患者中的感染状况。方法 在ＴＴＶ长的ＯＲＦ保守区设计引物，建立巢式聚合酴链反应（ＰＣＲ）技术，检测了１５１例原发性肝癌患者血清中ＴＴＶ ＤＮＡ。结果 １５１例原发性肝癌患者中有２８例ＴＴＶ ＤＮＡ阳性，阳性率为１８．５％；而同时检测１２５例正常人血清只３例ＴＴＶ阳性，阳性率     

非甲-非庚型肝炎患者血清中输血传播病毒的检测

目的 了解非甲－非庚型肝炎患者血清中输血传播病毒（ｔｒａｎｓｆｕｓｉｏｎ ｔｒａｎｓｍｉｔｔｅｄ ｖｉｒｕｓ,ＴＴＶ）的感染情况及临床特点。方法 用半巢式聚合酶链反应方法检测２０例非甲－非庚型肝炎患者血清中ＴＴＶ－ＤＮＡ,特异性引物位于ＴＴＶ基因组的ＯＲＦ１保守区。结果 ２０例非甲－非庚型肝炎患者中,有５例存在ＴＴＶ感染。ＴＴＶ感染者病程有轻有重,表现为急性无黄疸性肝炎、急性黄疸性肝炎及轻度慢性肝     

输血传播病毒的研究进展

在肝炎的病原学诊断过程中发现,约有１０％～２０％对急慢性输血后肝炎、散发性肝炎、肝硬变和暴发型肝炎仍不能用现有的检测方法检出其病毒学标志［１］,提示可能存在非甲－戊型病毒。１９９５年发现了ＨＧＶ／ＧＢＶ－Ｃ［２］,但越来越多的研究表明,ＨＧＶ并不是非甲－戊型肝炎的主要病原,在肝脏中ＨＧＶ的含量低于血清中的含量［３］,以致缺乏确切的致病性依据［４～６］。１９９７年日本学者Ｎｉｓｈｉｚａｗａ等报道［７］应用代表性分析法（ｒｅｐｒｅｓｅｎｔａｔｉｏｎａｌｄｉｆｆｅｒｅｎｃｅａｎａｌｙｓｉｓ,ＲＤＡ）从…     

输血传播病毒及其对肝脏的致病作用

目的 研究输血传播病毒（transfusion transmitted virus,TTV)在供血员及各型病毒性肝炎中的感染率及对肝脏的致病作用。方法 检测49名供血员和165例肝炎患者血清中的TTV DNA（采用套式PCR技术）。结果 TTV在供血员的感染率为24．5％,病毒性肝炎的感染率分别为：甲25．0％,乙29．3％,乙＋丁23．8％,丙66．7％,戊10．0％,庚80．0％,非甲－非庚36．1％。非甲－非庚肝炎中TTV阳性者的肝损（ALT,SB）与全阴性者相比无显著差异（P＞0．05）。TTV分别和各型肝炎混合感染及各型肝炎病毒单独引起的肝损相比无显著差异（P＞0．05）。结论 TTV在人群中感染较高,尤其在输血后易感。但TTV可能不是非甲－非庚病毒以外造成肝损的主要原因,甲－庚肝炎患者再感染该病毒可能不会进一步加重肝损。     

经输血传播病毒的前瞻性调查

目的了解我国供血员、受血者中经输血传播病毒（ＴＴＶ）感染率,及经输血传播ＴＴＶ的发生率。方法对１３０例输血者进行ＴＴＶ以及ＨＢＶ和ＨＣＶ血清标志物检测,其相应的供血者也检查ＴＴＶ。结果３４０例供血员中有３６例（１０．６％）可检测到ＴＴＶ－ＤＮＡ。１３０例受血者输血前有１１例（８．５％）ＴＴＶ阳性,其余１１９例输血后有１８例ＴＴＶ转为阳性,在他们的供血中至少可查到一份ＴＴＶ阳性。４６例输血后肝炎病毒感染者中,其中有４５例为ＨＣＶ感染（包括７例与ＴＴＶ混合感染）,２例为ＨＢＶ感染（包括与ＨＣＶ、ＴＴＶ混合感染各１例）。ＴＴＶ与ＨＢＶ混合感染以及７例ＴＴＶ与ＨＣＶ混合感染中有３例的受血者ＡＬＴ＞９０Ｕ／Ｌ,但是１０例单纯ＴＴＶ感染者,仅有２例伴有轻微的ＡＬＴ增高。结论供血员及住院病人中有较高的ＴＴＶ感染率,单纯ＴＴＶ感染与ＡＬＴ显著升高似乎并无关联。     

输血传播病毒及其对肝脏的致病作用

目的研究输血传播病毒(transfusion transmitted virus, TTV)在供血员及各型病毒性肝炎中的感染率及对肝脏的致病作用.方法检测49名供血员和165例肝炎患者血清中的TTV DNA(采用套式PCR技术).结果 TTV在供血员中的感染率为24.5%,病毒性肝炎中的感染率分别为:甲25.0%,乙29.3%,乙+丁23.8%,丙66.7%,戊10.0%,庚80.0%,非甲～非庚36.1%.非甲～非庚肝炎中TTV阳性者的肝损(ALT,SB)与全阴性者相比无显著差异(P＞0.05).TTV分别和各型肝炎混合感染及各型肝炎病毒单独引起的肝损相比无显著差异(P＞0.05).结论 TTV在人群中感染率较高,尤其在输血后易感.但TTV可能不是非甲～非庚病毒以外造成肝损的主要原因,甲～庚肝炎患者再感染该病毒可能不会进一步加重肝损.     

部分人群中输血传播病毒的检测

目的 了解部分人群是否有输血传播病毒（ＴＴＶ，Ｔｒａｎｓｆｕｓｉｏｎ Ｔｒａｎｓｍｉｔｔｅｄ Ｖｉｒｕｓ）感染。方法 利用半套式ＰＣＲ方法对慢性乙肝患者，慢性丙肝患者，血液透析者，健康人群中ＴＴＶ的感染状况进行了筛选。结果 ２４０例慢性乙肝患者中发现２例ＴＴＶ阳性，１００例慢性丙肝患者中发现４例ＴＴＶ阳性。２０例血液透析者和１００例健康人群中都未发现ＴＴＶ感染。结论 慢性丙肝患者比慢性乙肝患者有较     

Detection and sequence analysis of TT virus in hemodialysis patients

in l997, a novel DNA virus, transfusion transniit-ted virus (TTV), was discovered by means of represen-tational difference analysis (RDA) in JapanI']. Subse-quently, a series of investigation rcvealed that it ndghtbe the pathogen of some cryPtogcnic hepatitis. This pre-sent stUdy is to investigate thc prcv;1lcnce of TTV infec-tion in hemodialysis (HD) patients.MATERIALS AN'D METHODSSerum Human sera were randomly collected from69 HD patients (male 34, tbmale 35, mean agc 46.7tl2…     

献血员中TT病毒感染的检测及序列分析

目的： 研究ALT正常的献血员中TTV(transfusion transmitted virus) 的感染情况,探讨TTV感染的传播途径和致病性。方法： 设计TTV保守区域的特异性引物,聚合酶链反应(PCR)方法检测120例ALT正常的献血员,对1例TTV DNA阳性标本（TTVD026）进行PCR产物测序,并与已知TTV核苷酸序列比较同源性。结果： 120例ALT正常献血员中有20例为TTV DNA阳性,感染率为16.7％。同源性分析表明TTVD026与TA278,GH1,TTVCHN1和TTVCHN2的核苷酸同源性分别为99％,99％,99％和89％。结论： ALT正常的献血员中存在TTV的感染; TTVD026与TTV TA278,GH1,TTVCHN1和TTVCHN2可能属于同一个基因型;输血可能是TTV传播的主要途径。     

一个新的基因转录本的克隆及序列分析

目的：筛选与精子发生和(或)睾丸发育相关的基因。方法：将不同发育阶段(胚胎和成人)的睾丸组织cDNA探针与人睾丸cDNA芯片进行杂交，通过杂交信号的比较，筛选出差异表达的基因。结果与结论：经测序发现该基因全长1316bp，包含1个1056bp的开放阅读框，编码351个氨基酸。生物信息学序列分析表明，它是p44S10基因家族的一条新的转录本基因，该基因的氨基酸序列编码一26S蛋白酶体调控亚基，在进化中高度保守，提示了该基因在生物体中的重要作用。     

一株鸭乙型肝炎病毒DHBV全基因的克隆和序列分析

目的 从本地樱桃谷鸭血清中克隆鸭乙型肝炎病毒(DHBV)DNA，并进行序列分析。方法 用PCR扩增HBV全基因．连接至T载体上，挑选克隆进行测序分析，与GenBank中16株：DHBV全基因组进行同源性比较，并进行分子进化树分析。结果 24-18与16株DHBV基因组比较，核苷酸同源性介于89．4%-99．3％之间，各开放阅读框氨基酸同源性比较显示差异显地方位于P区。结论 24-18属于DHBV西方基因型中的一个亚型。     

献血者中TTV感染情况调查及部分序列分析

目的调查了解淮阴地区献血者中一种新的肝炎相关病毒——TTV的感染情况.方法用巢式聚合酶链反应(nest-PCR)技术对淮阴地区220名专业献血者进行血清中输血传播病毒(TTV)的检测,并在PUC18中对其开放读码框2(ORF2)基因进行了克隆.结果序列分析表明,该序列与国内外发现的TT病毒AB008394(日本株)、AF079173(中国河北株)对应位置核苷酸同源性为98%和97%,献血者中TT病毒阳性率为18%.结论病毒ORF2基因高度保守,献血者中有较高的TTV感染率.     

膜荚黄芪苯丙氨酸解氨酶基因的克隆与序列分析

目的 对膜荚黄芪苯丙氨酸解氨酶基因进行克隆及序列分析。方法 应用RT-PCR和cDNA末端快速扩增法,以膜荚黄芪根总RNA为模板克隆PAL基因。结果 所克隆的膜荚黄芪苯丙氨酸解氨酶基因命名为AmPAL,Genbank登录号为EF567076。序列分析表明,AmPAL全长为2 650 bp,含有一个完整的2 154 bp开放读码框。AmPAL是植物苯丙氨酸解氨酶家族的一个新成员,推测其编码718个氨基酸的多肽,相对分子质量为7.805×104,等电点为5.96,与豆科植物已知的PAL氨基酸序列的同源并且相似性都大于80%。结论 首次成功地从膜荚黄芪中克隆出了PAL基因,为有效利用该基因调控药用植物苯丙烷代谢途径奠定了基础。     

Epstein-Barr病毒RPMS1基因的克隆及其编码区序列分析

目的：克隆Epstein—Barr(EB)病毒的RPMS1基因，并分析其编码区序列的变异情况。方法：从7例高发区鼻咽癌组织中分别提取总RNA，以RT—PCR扩增出RPMS1基因编码序列，克隆入pGEM—T载体，构建重组质粒pGEM—T／RPMS1，重组质粒经PCR、BamHⅠ和HindⅢ双酶切鉴定，并进行序列测序。结果：成功克隆了高发区鼻咽癌的RPMS1基因，该基因编码序列第151nt发生G→A替换，导致相应第51位氨基酸由天冬氨酸变为天冬酰氨。该变异位于DNA第Ⅴ外显子的155849nt，变异频率为6／7。结论：高发区鼻咽癌EB病毒RPMS1基因的编码序列存在变异；RPMS1基因可能参与高发区鼻咽癌的发生。     

一株鸭乙型肝炎病毒DHBV全基因的克隆和序列分析

目的 从本地樱桃谷鸭血清中克隆鸭乙型肝炎病毒(DHBV)DNA,并进行序列分析。方法 用PCR扩增DHBV全基因,连接至T载体上,挑选克隆进行测序分析,与GenBank中16株DHBV全基因组进行同源性比较,并进行分子进化树分析。结果 24-18与16株DHBV基因组比较,核苷酸同源性介于89.4%~99.3%之间,各开放阅读框氨基酸同源性比较显示差异显著地方位于P区。结论 24-18属于DHBV西方基因型中的一个亚型。