醋酸铅对人股动脉内皮细胞凋亡及天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶-3表达的影响

目的探讨醋酸铅对人股动脉内皮细胞凋亡和天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶-3（caspase-3）活性的影响。方法醋酸铅染毒人股动脉内皮细胞后,用Hochest 33258染色法检测细胞形态学变化,用细胞免疫化学法检测caspase-3、P53、Bax、Bc l-2的表达;用流式细胞仪检测细胞凋亡率。结果经10μmol/L醋酸铅处理24、48 h后,Hochest 33258-PI染色显示醋酸铅组细胞呈凋亡形态学改变。动脉内皮细胞的细胞免疫化学结果都显示醋酸铅组的caspase-3、P53和Bax阳性表达升高,而Bc l-2的阳性表达下降。其流式细胞仪检测结果表明醋酸铅组细胞凋亡率较对照组显著升高（P〈0.05）。结论醋酸铅可促进动脉内皮细胞凋亡,其机制可能与capase-3的活化有关。     

醋酸铅对小鼠星形胶质细胞的凋亡作用

目的探讨醋酸铅对小鼠星形胶质细胞的凋亡作用,为进一步研究铅对血—脑屏障的损伤提供理论基础。方法用不同浓度醋酸铅(0、5、10、20、40μmol/L)染毒对数生长期小鼠星形胶质细胞C8(6、12、24、48 h)后,MTT法检测细胞生长情况;倒置相差显微镜观察细胞形态;分光光度计检测细胞上清液中乳酸脱氢酶(LDH)活力、丙二醛(MDA)含量,了解细胞损伤程度;免疫组化检测P53、Bax、Bcl-2的表达;PI-Hoechst33342染色、流式细胞仪检测细胞凋亡率。结果不同浓度醋酸铅染毒不同时间,各染毒组细胞生长活力较对照组明显降低(P0.01),并存在浓度与时间依赖关系;醋酸铅(5、10μmol/L)染毒24 h组,形态学观察细胞密度较对照组降低,突触缩短变细,细胞间连接减少;培养上清液中染毒组LDH、MDA含量较对照组明显升高(P0.01),P53、Bax表达上升,Bcl-2表达降低;PI-Hoechst33342双重染色和流式细胞仪检测显示,染毒组细胞凋亡率较对照组明显升高。结论醋酸铅可明显抑制小鼠星形胶质细胞生长,并通过Bax/Bcl-2比值升高促使凋亡,进而影响血—脑屏障。     

醋酸铅对小鼠星形胶质细胞凋亡及Caspase-3表达影响

目的 探讨醋酸铅对小鼠星形胶质细胞凋亡和Caspase-3表达的影响.方法 10 μmol/L醋酸铅处理小鼠星形胶质细胞24、48 h后,采用Hoechst33258染色法观察细胞形态学变化;聚合酶链反应(PCR)、细胞免疫化学法测定Caspase-3的转录与表达水平;流式细胞仪检测细胞凋亡率.结果 经10μmol/L醋酸铅处理24、48 h后小鼠星形胶质细胞呈凋亡形态学改变.Caspase-3转录与表达水平升高,醋酸铅组细胞凋亡率与对照组比较,差异有统计学意义(P＜0.01).结论 醋酸铅可促进小鼠星形胶质细胞凋亡,Carpase-3参与了凋亡过程.     

醋酸铅对人股动脉内皮细胞超微结构及凋亡相关蛋白Caspase-3表达的影响

目的探讨醋酸铅对人股动脉内皮细胞超微结构及凋亡相关蛋白Caspase-3表达的影响。方法实验设染毒组,10、20μmol/L醋酸铅处理体外培养的人股动脉内皮细胞24 h后,用透射电镜观察细胞超微结构的变化;细胞免疫化学法、Western blot法检测Caspase-3的表达;流式细胞仪检测细胞凋亡率。设不加醋酸铅为对照组。结果经染醋酸铅24 h后电镜观察发现染毒组细胞染色质固缩、边移,核质间隙增宽,20μmol/L醋酸铅染毒组凋亡小体形成;细胞免疫化学、Western blot结果显示醋酸铅组的Caspase-3阳性表达较对照组明显升高;流式细胞仪检测发现醋酸铅染毒组细胞凋亡率较对照组显著升高（P〈0.05）。结论醋酸铅可诱发人股动脉内皮细胞凋亡,其机制可能与Capase-3的活化有关。     

醋酸铅对体外培养人肾小球系膜细胞超微结构的影响

目的探讨醋酸铅对人肾小球系膜细胞(human renal mesangial cells,HRMC)超微结构的影响。方法醋酸铅处理HRMC后,Giemsa染色法观察细胞形态学变化;透射电镜观察细胞超微结构的变化;DNA梯(DNA Ladder)实验检测醋酸铅对HRMC基因组的影响;流式细胞仪检测细胞凋亡率。结果 10μmol/L醋酸铅染毒HRMC 24、48h后,Giemsa染色显示出细胞成凋亡形态学改变。透射电镜观察细胞胞质内出现空泡,核固缩,核膜结构模糊,并出现凋亡小体。HRMC基因出现较为明显的DNA损伤现象。流式细胞仪检测细胞凋亡率较对照组明显升高(P<0.05)。结论醋酸铅可促进HRMC凋亡,影响肾脏正常功能。     

铅致原代培养海马神经元凋亡及Bcl-2、Bax、p53和NOS1基因表达的影响

目的观察铅对原代培养海马神经元的致凋亡作用并初步探讨其机制。方法原代培养乳大鼠海马神经元,不同浓度的醋酸铅(50、100和200μg/ml)染毒后,Giemsa染色观察铅诱导海马细胞凋亡的形态学改变,流式细胞仪检测铅诱导海马神经元的凋亡率,免疫细胞化学染色观察各浓度组细胞Bcl-2、Bax和p53表达,激光扫描共聚焦显微镜定量分析各浓度组神经元胞浆中游离Ca2+的平均荧光强度。结果Giesma染色观察发现一定浓度醋酸铅作用于海马神经元后出现凋亡的形态学改变,且与剂量相关;流式细胞术检测结果铅浓度分别为50、100、200μg/ml作用细胞24h后,可致海马神经元凋亡率增加,与对照组相比均有统计学意义(P<0.01);免疫细胞化学染色结果表明Bcl-2蛋白表达随染铅剂量增大而减少,染色强度逐渐降低,Bax、p53表达随染铅剂量增大而上调,与对照组相比,细胞积分光密度(IOD)值有统计学意义(P<0.01);激光共聚焦显微镜检测结果显示随着醋酸铅剂量的增大,细胞内液Ca2+浓度也随着增大,醋酸铅3个浓度组的平均荧光强度均显著高于正常对照(P<0.01),并有剂量反应关系。结论铅可诱导海马神经元不同程度的凋亡,提示细胞内Ca2+浓度升高可能与铅致海马神经元损伤和诱导其凋亡有重要关系。推测铅在一定浓度范围内可能影响海马神经元在学习记忆等功能的正常发挥。     

乙酸铅对人星形胶质细胞超微结构及凋亡相关蛋白天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶-3表达的影响

为探讨乙酸铅对人星形胶质细胞超微结构及凋亡相关蛋白天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶-3(Caspase-3)表达的影响,将处于对数生长期人星形胶质细胞(细胞密度约5×103个/ml)分别暴露于0(对照)、10、20μmol/L乙酸铅,培养24 h后,采用倒置相差显微镜观察细胞的形态学变化,采用透射电镜观察细胞超微结构的变化,采用流式细胞仪检测细胞凋亡率,采用细胞免疫化学法检测Caspase-3的表达,采用Western blot法检测细胞中Caspase-3表达量。结果显示,显微镜下观察发现,乙酸铅染毒人星形胶质细胞变小、变圆,细胞间隙变大,细胞部分脱落。透射电镜观察发现,乙酸铅染毒细胞胞质内出现空泡,核固缩,核膜结构模糊,线粒体数目减少、空泡化。流式细胞仪检测结果表明,乙酸铅染毒组细胞凋亡率高于对照组,差异有统计学意义(P0.05)。细胞免疫化学法和Western Blot法检测结果显示,乙酸铅染毒人星形胶质细胞Caspase-3表达量均高于对照组,并且表达量随着染铅剂量增加而升高。提示乙酸铅可诱发人星形胶质细胞凋亡,其机制可能与Capase-3的活化有关。     

凋亡基因表达与FGR胎盘细胞凋亡的相关性研究

目的:探讨凋亡相关基因P53、Bc l-2和Bax在两组胎盘细胞中的表达情况及与胎儿宫内生长受限(FGR)病因的相关性。方法:应用免疫组化法检测凋亡相关基因P53、Bc l-2和Bax在两组胎盘细胞中的表达情况。结果:①Bc l-2、Bax的表达强度在FGR组与对照组间差异有统计学意义(P<0.05),P53的阳性率及表达强度在FGR组与对照组间差异无统计学意义(P>0.05);②Bc l-2、Bax、P53的阳性率及表达强度在FGR组中的FGR不伴有PIH组及FGR伴有PIH组两组间差异无统计学意义。结论:①正常孕妇和FGR患者胎盘组织中均有细胞凋亡,但FGR患者胎盘细胞凋亡较多,这可能是引起FGR发生的重要病理过程;②FGR胎盘细胞凋亡可能是非P53依赖性的,由Bax、Bc l-2介导的细胞凋亡。     

姜黄素对高糖诱导的INS-1细胞凋亡的影响

目的观察姜黄素对高糖诱导的INS-1胰岛β细胞凋亡的作用,探讨其抗糖尿病作用的可能机制。方法流式细胞术检测细胞凋亡情况;透射电子显微镜观察INS-1细胞的形态学变化;采用激光共聚焦和流式细胞术检测INS-1细胞线粒体膜电位的变化;用Western blotting法检测Bcl-2、Bax蛋白的表达量。结果姜黄素浓度为10μmol/L抗凋亡作用效果最为明显(P0.05)。与正常组相比,模型组INS-1细胞凋亡率明显升高(P0.05),形态发生改变,线粒体膜电位降低,Bcl-2蛋白表达明显降低(P0.05),Bax蛋白表达明显升高(P0.05),Bcl-2/Bax比值降低。与模型组比较,姜黄素改善凋亡的INS-1细胞的形态,提高线粒体膜电位,降低Bax蛋白表达(P0.05),增加Bcl-2蛋白表达(P0.05),Bcl-2/Bax比值升高。结论姜黄素改善高糖诱导的INS-1细胞凋亡状态,其抗凋亡机制与线粒体途径有关。     

PPARγ的配体罗格列酮诱导肝癌细胞凋亡的实验研究

[目的] 观察过氧化物酶体增殖物激活受体γ(PPARγ)的配体罗格列酮(RSG)对肝癌细胞凋亡的影响.[方法] 体外培养人肝癌HepG2细胞,将HepG2细胞分为对照组和RSG不同浓度(25、50.100、200 μmol·L-1)加药组.应用流式细胞仪检测RSG不同浓度对肝癌细胞ItepG2凋亡率的影响;应用Hoechst33258荧光染色观察细胞凋亡形态学变化;实时荧光定量PCR方法观察Bcl-2、Bax的mRNA表达变化;免疫细胞化学法检测Bcl-2、Bax、PPARγ的蛋白表达. [结果] 流式细胞仪和荧光染色法显示RSG诱导肝癌HepG2细胞凋亡,凋亡率与浓度呈正相关;RSG干预后,Bcl-2的mRNA及蛋白在肝癌细胞中表达下调,Bax的mRNA及蛋白在肝癌细胞中表达均上调. [结论] .RSG依赖激活PPARy能在体外诱导肿瘤细胞凋亡,其机制可能是通过下调抗凋亡基因Bcl-2表达以及上调促凋亡基因Bax而实现的,提示PPARγ可能是肝癌治疗的一个新分子靶点.     

核因子-κB、p53及Bcl-2在铅诱导PC12细胞凋亡中的作用

目的探讨核因子κB(NFκ-B),p53及Bcl-2在铅诱导PC12细胞凋亡中的作用。方法应用细胞培养、流式细胞术、RT-PCR、Western Blot的方法分析NFκ-B、p53、Bcl-2基因的表达情况,研究醋酸铅诱导PC12细胞凋亡及其分子机理。结果PC12细胞经不同浓度醋酸铅(100、200和400μmol/L)处理24h后,用流式细胞仪检测其凋亡率(n=3),铅组凋亡率明显高于对照组,改变呈剂量依赖性。差异有显著性(P<0.05)。RT-PCR结果显示NFκ-B p65 mRNA、p53 mRNA转录水平随铅剂量升高而升高(P<0.05),两基因表达的改变呈剂量依赖性。Western Blot结果显示,表明随着铅浓度的增加,Bcl-2蛋白表达逐渐降低。结论铅诱导PC12细胞凋亡的这种效应可能与增强NFκ-B及p53基因的活性、降低Bcl-2基因的活性有关。     

Study on the roles of nuclear factor-kappaB, p53 and Bcl-2 gene in lead acetate induced apoptosis in PC12 cells

OBJECTIVE: To investigate the roles of nuclear factor-kappaB (NF-kappaB), p53 and Bcl-2 gene in lead acetate induced apoptosis in PC12 cells. METHODS: Cell culture, Flow cytometry, RT-PCR and Western Blot were employed to analyze the expression of NF-kappaB, p53 and Bcl-2 gene, and clarify the effect of lead acetate on apoptosis in PC12 cells and related molecular mechanisms. RESULTS: The PC12 cells were exposed to lead acetate at varied concentrations (100 micromol/ L, 200 micromol/L and 400 micromol/L) for 24 hours, Flow cytometry detected that the apoptosis rate of groups treated with lead acetate are higher than that of blank control groups with a dose-effect relationship (P < 0.05). RT-PCR results show that the mRNA expression level of NF-kappaB p65, p53 increased accordingly. Western Blot results show that the protein expression of Bcl-2 gene decreased. CONCLUSION: lead acetate induces apoptosis in PC12 cells, which may be related to activation of NF-kappaB and p53 gene and depression of Bcl-2 gene.     

醋酸铅对原代培养大鼠皮层神经元的毒性效应

目的探讨醋酸铅对体外培养大鼠皮层神经元的毒性效应。方法用不同浓度的醋酸铅(50、100和200μg/ml)染毒后,原代培养乳大鼠皮层神经元,通过中性红染色和PI-Hoechst 33342双染色法观察醋酸铅作用6、12、24和48h对细胞存活的影响;结果PI-Hoechst 33342双染色结果表明,各组醋酸铅染毒12h后,部分细胞出现核固缩,随着醋酸铅浓度的增加和培养时间的延长,出现核固缩细胞增多,呈红色荧光细胞比例增加,凋亡细胞增加。对照组细胞凋亡比例明显低与中浓度和高浓度醋酸铅组P0.05)。中性红染色结果表明,不同浓度醋酸铅作用皮层神经元不同时间后各染铅组细胞活性随时间的延长而降低,但除高醋酸铅染毒组在24和48h较6h差异有统计学意义(P0.05)外,其余差异均无统计学意义(P0.05)。各染铅组细胞活性随染铅剂量的增加而降低,尤其是高铅组与对照组及低铅组相比,差异有统计学意义(P0.05)。结论低、中、高浓度醋酸铅(50、100、200μg/ml)作用皮层神经元12h后细胞存活都明显低于正常对照组,并呈剂量和时间依赖关系。     

镰刀菌T-2毒素对人急性早幼粒白血病细胞HL60增殖与凋亡的影响

目的研究镰刀菌属真菌产生的倍半萜烯类化合物T-2毒素对体外培养急性早幼粒白血病细胞HL60生长抑制与凋亡诱导的作用。方法体外培养的HL60细胞经0、4、8、16和32μg/ml的T-2毒素处理48h,以MTT法检测T-2毒素对HL60细胞的生长抑制作用;吉姆萨染色观察细胞凋亡形态;流式细胞术(FCM)检测凋亡率;FCM及Western blot检测凋亡相关蛋白Bax、Bcl-2的表达情况。结果 MTT显示T-2毒素对HL60细胞的增殖具有抑制作用,并呈剂量依赖关系。形态学观察显示早幼粒白血病细胞出现明显凋亡形态特征。FCM定量检测表明,T-2毒素各处理组细胞凋亡率均高于对照组,并随T-2毒素浓度升高而增加。FCM和Western blot结果显示,T-2毒素处理后HL60细胞Bax蛋白表达上调,Bcl-2蛋白表达下降。结论T-2毒素可剂量依赖地抑制体外培养的HL60细胞增殖并诱导凋亡。     

姜黄素对小鼠脑缺血再灌注的脑组织中NO含量和Bcl-2、Bax表达的影响

目的通过观察姜黄素对脑缺血再灌注小鼠脑组织中NO含量及Bcl-2、Bax蛋白表达的影响,探讨姜黄素对缺血性脑损伤的神经保护作用及机制。方法 180只雄性健康昆明种小鼠,随机分为A(假手术组)、B(溶剂对照组)和C(姜黄素治疗组)。各组于缺血再灌注后分为3、6、24、48和72 h 5个亚组。采用线栓法建立小鼠局灶性脑缺血再灌注模型。各组于24 h后进行小鼠神经功能学评分:HE染色后于光学显微镜下观察组织学变化;用硝酸还原酶法测定脑组织中NO含量;应用免疫组织化学法检测Bcl-2、Bax蛋白表达水平。结果 24 h神经功能评分B组明显高于A组,C组与B组相比差,异有统计学意义(P0.05)。NO含量B组与A组相比,3、6、24 h差异有统计学意义(P0.05)。C组与B组比较,6、24 h差异有统计学意义(P0.05)。B组随时间延长脑组织中Bcl-2、Bax的表达增加,Bcl-2/Bax的比值下降;C组Bcl-2表达显著增加,降低了Bax的表达。结论姜黄素对脑缺血再灌注性脑损伤具有保护作用,其作用机制可能与降低NO含量及提高Bcl-2蛋白表达水平、抑制Bax蛋白表达减少细胞凋亡来减少脑缺血后迟发性神经元损伤有关。     

曲古菌素A联合全反式维甲酸诱导宫颈癌SiHa细胞凋亡的协同作用

目的:探讨曲古菌素A(TSA)联合全反式维甲酸(ATRA)诱导宫颈癌SiHa细胞凋亡的协同作用及其相关机制。方法:TSA与ATRA联合或者单独作用于SiHa细胞,采用CellTiter 96Aqueous法检测细胞增殖情况,7AAD荧光染色法观察细胞凋亡形态,Annexin V/7AAD法流式细胞术检测细胞凋亡率,Western Blot法检测P53、BCL-2和Caspase-3蛋白的表达变化。结果:细胞增殖实验结果显示TSA联合ATRA对SiHa细胞有显著的增殖抑制作用;7AAD荧光染色结果显示联合用药组细胞凋亡明显增加,出现核碎裂等典型凋亡改变;流式细胞术检测结果显示联合用药组凋亡率显著增高;Western Blot结果显示:与对照组比较,联合用药组中P53和活化性Caspase-3蛋白的表达水平显著升高,而BCL-2蛋白表达水平显著下降。结论:TSA联合ATRA在体外对SiHa细胞具有明显的协同抑制增殖和诱导凋亡作用,推测其机制可能与P53和活化性Caspase-3蛋白表达水平上调、BCL-2蛋白表达水平下调有关。