白血病过继免疫治疗时外周血T淋巴细胞诱导培养后的克隆性变化

本研究分析白血病细胞免疫时自体树突细胞（DC）和多种细胞因子诱导外周血淋巴细胞后T细胞克隆性的变化。采集21例化疗缓解后行细胞免疫治疗的白血病患者的骨髓和外周血,加入细胞因子培养,获得树突细胞（DC）和激活T细胞。用RT—PCR扩增代表T细胞克隆性的T细胞受体β链可变区（T—cellreceptorβvariable region,TCRBV）,用TCRBV基因扫描的方法观察培养前后T细胞克隆的特征性变化;对T细胞克隆的TCRBV进行序列分析。流式细胞术（FCM）检测CD3＋、CD4＋、CD8＋、CD56＋和CD4＋CD25str＋FOXP3＋,确定其细胞毒T细胞、辅助T细胞、调节T细胞和NK—T细胞的比例变化。结果表明：临床缓解后的白血病患者的T细胞呈寡克隆分布,分属在24个TCRBV家族中一些TCRBV基因家族的淋巴细胞克隆消失,仅少数保持多克隆分布,其中TCRBV24基因家族均为克隆性的分布（100％）。分析患者的TCRBV24基因序列特征时发现,3例在CDR3区共用motifVAG,2例共用GGG,表明这些TCRBV24有可能识别同一抗原,其中1例（例5）患者除TCRBV24在CDR3区有motifGGG外,TCRBV8也有GGG,也可能会识别同一抗原。外周血淋巴细胞经过13天的体外抗原和细胞因子培养后,培养前出现的一些寡克隆以及克隆完全缺失的状态随即出现了明显变化,培养后都出现完整多克隆分布。将培养前后T细胞进行流式细胞术分析显示,培养后淋巴细胞数目为培养前的3．38±1．20倍,CD3＋数培养前为（71．1±11．8）％细胞,培养第13天后为（95．4±3．2）％,明显增加;C1M＋数培养前为（26．7±11．4）％,培养第13天后为（27．0±13．1）％,无明显变化（P〉0．01）;CD8＋数培养前为（35．7±12．9）％,培养第13天后为（55．5±13．8）％,明显增加（P〈0．01）;CD3＋CD56＋数培养前为（3．1±1．6）％,培养第13天后为（9．8±6．1）％,增加2倍多（P〈0．01）;CIM＋CD25str＋FOXP3＋数培养前为（0．12±0．1）％,培养第13天后为（0．22±0．18）％（P〈0．01）。结论：T淋巴细胞诱导培养方法的主要作用是促进CTL和NK细胞增殖,缓解后白血病患者体内淋巴细胞群往往呈寡克隆增殖,一些克隆会共用同样的TCRBVCDR3模体,识别同样的抗原,细胞因子联合诱导与DC共培养后淋巴细胞恢复多克隆免疫状态,产生以CTL和NK—T为主的效应细胞。     

CD3AK细胞与肿瘤的过继免疫治疗

CD3AK细胞是继LAK细胞之后又一广泛研究的更为有效的抗肿瘤细胞．CD3单抗与IL-2协同作用，诱导T细胞扩增，增强细胞毒活性．体内转输CD3AK细胞，能降低肿瘤的转移和生长．CD3AK细胞体外扩增迅速，体内，外抗肿瘤效能显著优于LAK细胞．而且无需大剂量外源性IL-2维持其活性．显示了广泛的应用前景．     

CIK细胞过继性免疫治疗中晚期消化道肿瘤的护理

目的:评估细胞因子诱导的杀伤细胞(CIK细胞)过继免疫疗法治疗中晚期消化道肿瘤的临床疗效及护理。方法:按常规方法采集细胞,分离培养,12～15d收获。对56例患者采用CIK细胞静脉输注治疗,同时加强不良反应的观察和护理。结果:消化道肿瘤患者经CIK细胞治疗后生活质量有了不同程度的提高。治疗过程中的主要不良反应是发热,占治疗人数的57.14%,所有患者均顺利完成治疗。结论:CIK细胞治疗肿瘤是一种安全有效的方法,能有效改善患者全身状况,提高患者的生活质量。回输过程中做好心理护理、胃肠道反应及其他副反应的观察护理,可保证整个疗程的顺利进行。     

白血病异基因造血干细胞移植复发后的过继免疫治疗

异基因造血干细胞移植后白血病复发是导致移植失败的首要原因。如何防治复发是移植领域研究的重点和难点。供体淋巴细胞输注(DLI)是移植后复发防治中首选的过继免疫治疗手段。本文就DLI效应的可能机制、DLI治疗时机和策略、DLI疗效的影响因素、DLI剂量与方式、常见并发症以及优化的DLI策略等进行综述。     

DC-CIK细胞过继免疫治疗肿瘤患者的护理进展

DC-CIK生物免疫治疗是继手术、放射治疗、化疗之后肿瘤患者可选择的第四大治疗模式。DC-CIK是肿瘤免疫治疗的两个重要部分。前者DC细胞,又称树突状细胞(den-dritic cells,DC),是体内摄取、加工,呈送抗原的最重要的专职抗原呈递细胞,它呈递抗原的能力最强,是巨噬细胞的10～100倍,且是唯一可以活化初始T细胞的抗原呈递细胞。CIK细胞,即细胞因子诱导的杀伤细胞,是外周淋巴细胞在体外经     

DC—CIK细胞过继免疫治疗恶性肿瘤的护理体会

目的：总结树突状细胞一细胞因子诱导的杀伤细胞（DcCIK细胞）过继细胞免疫治疗恶性肿瘤的护理效果。方法：DC—CIK过继细胞免疫治疗护理流程化。治疗护理后无1例患者出现不良反应,63例中有51例出现食欲增加,32例睡眠和体力改善,18例疼痛患者中有13例疼痛减轻,33例化疗放疗毒副反应不同程度减轻,有效地提高了患者的生活质量。结论：用DC—CIK细胞过继免疫治疗恶性肿瘤患者能有效提高细胞免疫的治疗效果。     

CIK细胞过继免疫治疗过程中输液器选择的研究

细胞因子激活的杀伤细胞(CIK)治疗作为免疫治疗的一个分支,目前已被广泛应用于临床。由于CIK细胞是一类非主要组织相容性复合物和非T细胞受体限制性的免疫活性细胞,因此其杀伤肿瘤的作用不受肿瘤类型限制。由于CIK细胞不良反应少,杀瘤作用明确,目前已应用于肝癌等多种实体肿瘤的治疗。CIK细胞的回输要求严格无菌,输液器的选择也应该     

体外培养DC-CIK细胞过继免疫治疗恶性肿瘤的护理

[目的]总结体外培养树突状细胞调节和细胞因子诱导的杀伤细胞（DC-CIK）过继免疫治疗恶性肿瘤的护理措施。[方法]对12例恶性肿瘤病人行DC-CIK细胞过继免疫治疗,同时加强心理护理、不良反应的预防及护理等。[结果]12例病人均顺利完成DC-CIK细胞过继免疫治疗,5例病人出现寒战、发热,1例出现皮肤瘙痒、皮疹,经处理均好转。[结论]加强恶性肿瘤病人行DC-CIK细胞过继免疫治疗的护理是治疗成功的关键。     

HLA-肽四聚体和过继性免疫疗法与巨细胞病毒疾病

背景:抗病素药物能减少早期的巨细胞病毒疾病,但有较强的毒性和引起晚期巨细胞病毒疾病发生的可能.为了更好地防治臣细胞病毒疾病,研究细胞毒性T淋巴细胞控制巨细胞病毒再活化的作用是很关键的,荧光HLA肽四聚体是一个很好的工具,被用来监测移植受者的巨细胞病毒特异细胞毒性T淋巴细胞的恢复.目的:探讨 HLA-肽四聚体和过继性免疫疗法在治疗巨细胞病毒疾病中的作用.方法:由第一、二作者检索2003/2009PubMed数据库及万方数据库有关移植后巨细胞病毒特异细胞毒性T淋巴细胞检测、抗病毒药物应用、HLA肽四聚体应用、过继性免疫治疗作用的文献,英文检索词为"HLA-peptide tetramers,cvtomegalovirus,specific CTL,adoptive immunotherapy",中文检索词为"HLA肽四聚体,巨细胞病毒,特异细胞毒性T淋巴细胞,过继性免疫治疗".排除重复性研究,纳入29篇归纳总结.结果与结论:用巨细胞病毒特异细胞毒性T淋巴细胞进行的过继性免疫治疗是非常完美的策略,然而,产生这些细胞是昂贵和耗时的,因此治疗不是在每个移植中心都能进行.用HLA肽四聚体从巨细胞病毒血清阳性供者外周血中选择巨细胞病毒特异细胞毒性T淋巴细胞是非常有希望的策略,使过继性免疫疗法更容易进行.     

特异诱导脐血CD8+抗白血病细胞毒淋巴细胞的研究

微小残留病灶(minimal residual disease,MRD)的存在是导致白血病复发的主要根源,特异性免疫治疗能有效地清除MRD,其中的策略之一就是诱导并回输白血病特异性的细胞毒性T淋巴细胞(cytotoxic T lymphocyte,CTL).本实验的目的是研究脐血能否在体外诱导生成CD8+ CTL,所生成的CD8+ CTL能否特异性杀伤白血病细胞,从而确定脐血淋巴细胞的利用价值及用于特异性免疫治疗的可行性.通过联合细胞因子体外诱导脐血单个核细胞(mononuclear cells,MNC)分化为树突状细胞(dendritic cells,DC),同时负载U937冻融抗原;成熟DC刺激同源的脐血T淋巴细胞成为CTL,经MACS磁珠分选出CD8+ CTL.用倒置显微镜、扫描电镜及流式细胞仪等方法检测DC,四甲基偶氮唑蓝(methyl thiazolyl tetrazolium,MTT)法测定杀伤活性.结果显示,10份人脐血标本均可培养出形态典型、功能成熟的DC.3组效应细胞CD8+ CTL、CD8- CTL和T淋巴细胞(TL)组在相同效靶比(40∶1)对U937细胞株的杀伤率分别为(66.36±12.43)%、(34.47±8.19)%和(15.79±4.64)%,以CD8+ CTL组最高;效靶比为40∶1时,CD8+ CTL对U937细胞株的杀伤率(66.36%)高于对K562细胞株的杀伤率(41.97%)(P＜0.05);而CD8- CTL对U937细胞株和K562细胞株的杀伤率无显著差异(P＞0.05).结论用负载U937白血病细胞株抗原的成熟脐血DC可使脐血淋巴细胞诱导产生特异性的CD8+ CTL;CD8+ CTL对U937白血病细胞株的杀伤活性强于CD8- CTL的作用;CD8+ CTL对U937白血病细胞株杀伤具有特异性.     

混合造血干细胞移植联合过继免疫治疗对急性髓系白血病的疗效

本研究探讨混合造血干细胞移植(mix-HSCT)后给予单倍体相合供体淋巴细胞输注(hiDLI)加白介素2(IL-2)对急性髓系白血病(AML)患者的疗效。mix-HSCT即自体外周血造血干细胞与单倍体相合异体骨髓造血干细胞混合移植,49例AML患者在完全缓解期采用全身照射加VEMAC预处理方案后,接受了mix-HSCT。所有患者均经过化疗加G-CSF方法动员自体外周血造血干细胞,或供者骨髓造血干细胞未经过G-CSF动员。试验组33例患者在造血恢复后给予hiDLI+IL-2治疗1-8次。对照组16例患者造血恢复后未做特殊治疗。随访时间>3年。结果表明:所有患者均获得造血重建,无1例发生移植物抗宿主病(GVHD)。两组患者中性粒细胞≥0.5×109/L的中位时间分别为14(12-18)d和14(11-16)d,白细胞数≥4.0×108/L的中位时间分别为17(16-22)d和18(16-20)d,血小板数≥50×108/L的中位时间分别为25(24-29)d和25(23-26)d。移植后16-21 d时显示恢复期骨髓象。试验组有9例形成混合嵌合体(46XX/46XY),持续存在时间3-12个月,随访显示存活21例,长期无病存活率为63.6%。对照组中有3例形成混合嵌合体(46XX/46XY),持续存在时间3-6个月,随访显示存活7例,长期无病存活率为50.0%。结论:mix-HSCT后应用hiDLI+IL-2治疗对AML患者的造血功能恢复正常、长期无病生存可能有积极作用。     

白血病肿瘤相关抗原特异性细胞毒T细胞的体外扩增及杀伤功能的实验研究

目的:探索体外扩增白血病肿瘤相关抗原特异性细胞毒T细胞(tumor-associated antigen-specific cytotoxic T lymphocytes,TAA-CTL)的可行性,并验证其特异性杀伤作用。方法:采用密度梯度离心法分离出健康志愿者外周血单个核细胞,诱导培养树突状细胞(dendritic cells,DC)并负载白血病相关抗原WT1、PRAME、NY-ESO-1混合多肽,然后与自体T淋巴细胞共培育,扩增出TAA-CTL。用流式细胞术检测TAA-CTL表型及多种细胞因子的分泌率,细胞毒实验检测TAA-CTL对负载肿瘤相关抗原的自体靶细胞的杀伤力。结果:1体外诱导培养的TAACTL扩增倍数为3.81±1.61;流式细胞术检测其中CD3+细胞平均为(97.22±0.71)%,CD3+CD4+占(41.47±27.08)%,CD3+CD8+占(56.40±11.15)%,CD3-CD56+占(0.50±0.31)%,CD19+仅占(0.14±0.20)%,与对照组细胞表型分析比较差异无统计学意义(P0.05)。2流式细胞术检测经抗原刺激后TAA-CTL分泌的胞内细胞因子,CD8+TAA-CTL分泌的IFN-γ和TNF-α水平分别为(27.67±2.21)%和(34.2±0.71)%,CD4+TAA-CTL分泌的IFN-γ和TNF-α分别为(21.6±2.55)%和(9.97±3.44)%;对照组CD8+CTL分泌的IFN-γ和TNF-α水平分别为(1.36±0.04)%和(5.58±0.03)%,CD4+CTL分泌的IFN-γ和TNF-α分别为(0.91±0.06)%和(1.60±0.07)%,均明显低于TAA-CTL组,其差异有统计学意义(P0.01)。TAA-CTL在效靶比为5∶1、10∶1、20∶1和40∶1时对负载TAA的自体靶细胞的杀伤率分别为(26.85±5.25)%、(60.55±2.45)%、(67.4±3.60)%和(77.00±1.00)%,对未负载TAA的自体靶细胞未见明显杀伤作用(P0.05)。结论:来源于健康志愿者的外周血单个核细胞体外可以成功诱导扩增出TAA-CTL并具有特异性杀伤功能。     

自体活化脾细胞输注后T细胞亚群及PBMC细胞活性的临床观察

目的：细胞因子诱导的杀伤细胞具有可以快速增殖、高效和抗瘤谱广的特点。但是有关该细胞在肿瘤患者临床应用的报道甚少。本文旨在探讨自体脾细胞经黄芪皂甙（Astragalus Saponin）和小剂量rIL-2活化后过继免疫治疗对肝癌伴有脾功能亢进的患者免疫功能的影响。方法：16例患者均接受肿瘤切除、脾脏切除、皮下肝动脉泵埋入术和自体活化脾细胞过继免疫治疗。患者于手术前、后及过继免疫治疗后采集外周血Ficoll-Hypaque gradient分离单个核细胞，流式细胞仪检测CD44＋、CD44＋／CD8＋和NK细胞水平；MTT法检测PBMC细胞活性。结果：患者手术前、后CD44＋、CD44＋／CD8＋和NK细胞水平明显低于过继免疫治疗后（P〈0．01），而CD8＋细胞水平明显高于过继免疫治疗后（P〈0.01）；自体活化脾细胞过继免疫治疗后PBMC细胞活性明显高于手术前、后（P〈0．05）。结论：自体活化脾细胞过继免疫治疗可有效地提高患者的细胞免疫功能，且无副作用，对肝癌伴脾亢患者是一安全而有效的治疗方法。     

Immunotherapy for autoimmune and inflammatory renal diseases

Immune-mediated renal disease (IMRD) accounts for 20 – 30% of the cases of end stage renal failure. It frequently occurs in the context of multi-system autoimmune disorders, including systemic lupus erythematosus (SLE) and primary systemic vasculitis. Current therapies are partially effective and comprise the combination of steroids with an immunosuppressive, such as cyclophosphamide. Their toxicity contributes to the morbidity and mortality of these disorders, and long-term treatment is necessary to prevent relapse. There is a clear need for better-targeted, more effective and less toxic therapy. Advances in our understanding of the immunopathogenesis of inflammatory autoimmune renal disease have identified potential targets for newer agents and have improved the monitoring of therapeutic responses. Recent experience with newer therapies in IMRD is reviewed. This has typically involved small, non-randomised, open-label trials and has addressed reversible features of disease activity. Larger, randomised comparisons to standard therapy are needed along with assessment of long-term efficacy and safety.     

CD28分子在系统性红斑狼疮患者Tc/Ts淋巴细胞上异常表达的研究

目的：研究CD28^＋、CD8^＋CD28^＋、CD8^＋CD28^-淋巴细胞在系统性红斑狼疮（SLE）患者外周血淋巴细胞中的表达情况.方法：应用CD3CD4CD8三标抗体和CD8CD28双标抗体对SLE患者淋巴细胞进行标记,用流式细胞仪测定CD3^＋、CD3^＋CD4^＋、CD3^＋CD8^＋、CD28^＋、CD8^＋CD28^＋和CD8^＋CD28^-淋巴细胞的表达.结果：SLE患者外周血CD3^＋淋巴细胞明显高于健康对照组（P＜0.05）.CD4/CD8T淋巴细胞比例明显倒置（P＜0.01）,CD3^＋CD8^＋淋巴细胞比健康对照组显著增加（P＜0.01）,其中以CD8^＋CD28^-的T淋巴细胞增加为主（P＜0.01）,而CD8^＋CD28^＋淋巴细胞增加不明显（P＞0.05）,SLE患者外周血CD28^＋T淋巴细胞比健康对照组明显降低（P＜0.05）.结论：SLE患者存在明显的T细胞功能失调.CD28^＋、CD8^＋CD28^＋（Tc）、CD8^＋CD28^-（Ts）T淋巴细胞在SLE的发病机制和组织损伤中起重要作用.     

Distinct role of antigen-specific T helper type 1 (Th1) and Th2 cells in tumor eradication in vivo.

The role of T helper type 1 (Th1) and Th2 cells in tumor immunity was investigated using Th cells induced from ovalbumin (OVA)-specific T cell receptor transgenic mice. Although Th1 cells exhibited stronger cytotoxicity than Th2 cells, both cell types completely eradicated tumors when transferred into mice bearing A20 tumor cells transfected with the OVA gene (A20-OVA). Th1 cells eradicated the tumor mass by inducing cellular immunity, whereas Th2 cells destroyed the tumor by inducing tumor necrosis. Both Th1 and Th2 cells required CD8(+) T cells to eliminate tumors, and neither of these cells were able to completely eliminate A20-OVA tumors from T and B cell-deficient RAG2(-/-) mice. Mice cured from tumors by Th1 and Th2 cell therapy rejected A20-OVA upon rechallenge, but CD8(+) cytotoxic T lymphocytes were induced only from spleen cells prepared from cured mice by Th1 cell therapy. Moreover, we demonstrated that Th1 and Th2 cells used distinct adhesion mechanisms during tumor eradication: the leukocyte function-associated antigen (LFA)-1-dependent cell-cell adhesion step was essential for Th1 cell therapy, but not for Th2 cell therapy. These findings demonstrated for the first time the distinct role of antigen-specific Th1 and Th2 cells during eradication of established tumors in vivo.     

Essential and Partially Overlapping Role of CD3γ and CD3δ for Development of αβ and γδ T Lymphocytes

CD3γ and CD3δ are two highly related components of the T cell receptor (TCR)–CD3 complex which is essential for the assembly and signal transduction of the T cell receptor on mature T cells. In gene knockout mice deficient in either CD3δ or CD3γ, early thymic development mediated by pre-TCR was either undisturbed or severely blocked, respectively, and small numbers of TCR-αβ⁺ T cells were detected in the periphery of both mice. γδ T cell development was either normal in CD3δ^−/− mice or partially blocked in CD3γ^−/− mice. To examine the collective role of CD3γ and CD3δ in the assembly and function of pre-TCR and in the development of γδ T cells, we generated a mouse strain with a disruption in both CD3γ and CD3δ genes (CD3γδ^−/−). In contrast to mice deficient in either CD3γ or CD3δ chains, early thymic development mediated by pre-TCR is completely blocked, and TCR-αβ⁺ or TCR-γδ⁺ T cells were absent in the CD3γδ^−/− mice. Taken together, these studies demonstrated that CD3γ and CD3δ play an essential, yet partially overlapping, role in the development of both αβ and γδ T cell lineages.     

免疫介导再生障碍性贫血小鼠骨髓T细胞表面CD28、CTLA4水平检测及其意义

目的 研究免疫介导再障小鼠骨髓T细胞CD28、CTLA4的表达及其意义.方法 建立免疫介导再障小鼠模型,取再障和正常组小鼠骨髓单个核细胞（BMNC）,在终浓度为15μg/mL植物血凝素（PHA）条件下培养,于0h和48h分别用双色免疫荧光标记流式细胞术对T细胞CD28、CTLA4的表达进行分析.结果 PHA刺激培养48h后正常组和再障组T细胞CD28、CTLA4的表达较刺激前均明显升高（P〈0.01）;而且再障组刺激培养前后T细胞CD28的表达均显著高于同期正常组（P〈0.01）,但CTLA4的表达与同期正常组相比虽略有升高,但差异无显著性（P〉0.05）.结论 再障T细胞激活及其激活潜能增强,免疫分子CD28、CTLA4在骨髓中的表达异常可能参与了再障T细胞的免疫功能紊乱.