蛇毒纤溶酶的分离纯化及其溶栓作用

目的获得大量高纯度的蛇毒纤溶酶并进行药效实验。方法用离子交换柱色谱和单克隆抗体亲和色谱技术进行纯化 ,用体外和半体内血栓模型研究其抗血栓作用。结果得到纯度为 95 %以上的纤溶酶。结论纯化后的蛇毒纤溶酶具有显著的抑制血栓形成的作用     

链霉菌产生的新型纤溶酶的纤溶性质和溶栓作用

目的旨在进一步确证纤溶活性的蛋白酶SW-1的溶栓作用和性质。用体外加热平板法、试管凝块法和在体内对大鼠静脉血栓溶解及对纤溶因子的作用等实验,发现SW-1在体外可直接降解纤维蛋白,而无激活纤溶酶原的作用。在体内,SW-1对大鼠静脉血栓有显著的溶解效果,与同剂量尿激酶的溶栓作用相当。给药(iv)30min后,SW-1引起大鼠血浆中纤溶酶、纤溶酶原水平提高,纤维蛋白原水平下降,而对组织型纤溶酶原激活剂(t-PA)、α₂-纤溶酶抑制剂无显著影响。提示SW-1是一种具有纤溶活性的蛋白酶,而不是纤溶原激活剂。     

出血性蛇毒纤溶酶

蛇毒纤溶酶是一种新型溶栓药,其溶栓效果已得到认可,但其致出血性限制了其临床应用。为解决这一难题,国内外学者对这类纤溶酶的结构特点和纤溶机制等方面做了详尽的研究,揭示了其与传统溶栓药不同的出血机制,并相应地提出了一些可能的解决方案。     

纤溶酶的提取及其理化性质与溶栓作用的研究

以鲜蚯蚓为实验材料,解剖取消化管前1/3部位,加10倍生理盐水捣碎制成匀浆,离心制成纤溶酶粗提取液。采用纤维蛋白平板法测试纤溶酶的活力,研究不同温度、PH值对纤溶酶活力的影响。实验证明58℃,PH8.0纤溶酶活力量强。并将其这一特性用于溶栓丸的制作工艺中。     

蛇毒纤维蛋白溶解酶综述

蛇毒中存在着能直接溶解纤维蛋白的酶类。对这类酶的深入研究,不仅有助于阐明蛇伤中毒的病理机制,而且为其应用开发提供了理论基础。自1976年Ouyang和Huang首次从尖吻蝮蛇毒中获得纯化的纤维蛋白溶解酶(以下简称纤溶酶)以来,迄今已从不同科属的至少15种蛇毒中获得了25种以上的纯化纤溶酶,并对其分子结构、酶学特性及其出血活性的关系进行了深入地研究。现就这些方面的研究进展作一简要综述。     

白眉蝮蛇蛇毒纤溶酶的分离纯化

目的用白眉蝮蛇蛇毒分离纯化纤溶酶。方法利用离子交换层析、亲和层析、分子筛层析技术进行分离纯化纤溶酶。结果得到了电泳纯的纤溶酶,其相对分子质量为24000。结论该工艺可以快速地分离纯化白眉蝮蛇蛇毒纤溶酶：     

蛇毒纤溶酶注射液的临床研究

蛇毒纤溶酶注射液是以东北白眉蛇蛇毒为原料,采用现代生物技术制备的单组分溶栓制剂。为了确认该品的安全性与有效性,在动物试验的基础上进行了临床研究,结果如下。1. 资料与方法1.1病例的选择所有患者均为急性脑血栓患者,发病72小时之内,年龄在45～75岁,CT除外脑出血。排除病例:药物或食物过敏史者;脑或全身出血性疾病患者;伴有心房纤颤或严重心功能不全者;血压高于26/14kpa(195/105mmHg)的严重高血压患者;消化道溃疡者;严重肝肾功能障碍者;正在或病前一周内使用过抗血小板聚集剂或抗纤溶剂者。血小板低于8万/mm3者;重度失语、痴呆、精神…     

蛇毒纤溶酶原激活剂的研究进展

蛇毒是含有多种生物活性蛋白质和多肽的混合物,其中一些蛋白可作用于人的凝血系统。蛇毒纤溶酶原激活剂是具独特活性的蛇毒丝氨酸蛋白酶,具有较长的半衰期,可专一性地裂解人Glu-纤溶酶原的Arg^561-Val^562肽键,使之变成有活性的纤溶酶,从而发挥溶栓作用。该文主要对蛇毒纤溶酶原激活剂的结构特点和作用机制进行了阐述,旨在为新型溶栓剂的研究提供方向。     

血管紧张素转换酶基因多态性与纤溶系统的关系

目的 研究血管紧张素转换酶(ACE)基因多态性与纤溶系统之间的关系.方法 选择冠心病、高血压患者126例和健康对照者66例,分别检测ACE基因及多态性,测定血浆中D-二聚体(dD)、凝血酶原时间(PT)、纤维蛋白原(Fg)、凝血酶时间(TT)、活化部分凝血活酶时间(APTT)各值.结果 ①疾病组dD、Fg、APTT水平明显高于对照组(P<0.05),而PT、TT水平明显低于对照组(P<0.05).②基因DD型疾病组dD、Fg水平明显高于ID、Ⅱ型组(P<0.05),而PT、TT、APTT水平明显低于ID、Ⅱ型组(P<0.05),差异有统计学意义.③ ACE基因多态性与dD、Fg浓度间显著正相关(r值分别为0.671、0.702,P<0.01);与PT、TT、APTT浓度间存在显著负相关(r=-0.648、-0.683、-0.653,P<0.001).结论 ACE基因DD型和D等位基因与纤溶系统有关,I等位基因则无关.     

Batroxase, a new metalloproteinase from B. atrox snake venom with strong fibrinolytic activity

The structures and functional activities of metalloproteinases from snake venoms have been widely studied because of the importance of these molecules in envenomation. Batroxase, which is a metalloproteinase isolated from Bothrops atrox (Pará) snake venom, was obtained by gel filtration and anion exchange chromatography. The enzyme is a single protein chain composed of 202 amino acid residues with a molecular mass of 22.9 kDa, as determined by mass spectrometry analysis, showing an isoelectric point of 7.5. The primary sequence analysis indicates that the proteinase contains a zinc ligand motif (HELGHNLGISH) and a sequence C₁₆₄I₁₆₅M₁₆₆ motif that is associated with a “Met-turn” structure. The protein lacks N-glycosylation sites and contains seven half cystine residues, six of which are conserved as pairs to form disulfide bridges. The three-dimensional structure of Batroxase was modeled based on the crystal structure of BmooMPα-I from Bothrops moojeni. The model revealed that the zinc binding site has a high structural similarity to the binding site of other metalloproteinases. Batroxase presented weak hemorrhagic activity, with a MHD of 10 μg, and was able to hydrolyze extracellular matrix components, such as type IV collagen and fibronectin. The toxin cleaves both α and β-chains of the fibrinogen molecule, and it can be inhibited by EDTA, EGTA and β-mercaptoethanol. Batroxase was able to dissolve fibrin clots independently of plasminogen activation. These results demonstrate that Batroxase is a zinc-dependent hemorrhagic metalloproteinase with fibrin(ogen)olytic and thrombolytic activity.     

黑眉蝮蛇蛇毒纤溶酶的纯化及其性质研究

目的从黑眉蝮蛇蛇毒中纯化出无出血毒的纤溶酶。方法用DEAE-Sepharose FF阴离子交换树脂、CM-sepharose FF阳离子交换树脂和Sephacryl S-100凝胶过滤树脂三步分离方法,从黑眉蝮蛇蛇毒中纯化出一种纤溶酶活性成分。结果经SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳检测为单一蛋白质,相对分子质量为31 800,小鼠皮下注射无出血反应。该酶与纤维蛋白原保温15 min能迅速水解Bβ(β)链,随后缓慢水解Aα(α)链,而对γ(γ-γ)链无影响。结论此工艺可以快速纯化黑眉蝮蛇蛇毒纤溶酶。     

五步蛇毒纤溶酶FⅡ对LPS诱导的肾纤维蛋白沉积的作用

目的观察五步蛇毒纤溶酶FⅡ对LPS诱导的兔肾纤维蛋白沉积的作用。方法用脂多糖(LPS)诱导的兔肾血栓模型作为本实验的研究方法。生理盐水作阴性对照组;尿激酶作阳性对照组。兔肾组织学检查及测定血浆FDP含量以观察五步蛇毒纤溶酶FⅡ对兔肾纤维蛋白沉积的溶解作用。结果阴性对照组,给药2、6h后,兔肾组织有大量的纤维蛋白的沉积,FDP含量分别为(7821±479)%和(8427±621)%;阳性对照组,给药2、6h后,肾组织有少量纤维蛋白的沉积,FDP含量分别为(13334±427)%和(21017±542)%。FⅡ分别以01mg·kg-1·h-1(低)、03mg·kg-1·h-1(中)、06mg·kg-1·h-1(高)3个剂量滴注。低剂量组的兔肾组织有纤维蛋白的沉积,但比阴性对照组减少;中剂量组的兔肾组织有少量纤维蛋白的沉积;高剂量组的兔肾组织几乎无纤维蛋白的沉积;血浆FDP含量在低、中和高剂量组均比阴性对照组增加,并有量效关系(P<005)。结论步蛇毒纤溶酶FⅡ对LPS诱导的兔肾纤维蛋白沉积有良好的降解作用。     

一种新型海洋纤溶酶体外抗凝与溶栓作用研究

目的对本实验室制备的一种相对低分子质量新型海洋纤溶酶的体外抗凝和溶栓作用进行初步评价,为进一步的动物实验研究打下基础。方法以pH7.4的生理盐水作阴性对照,以蚓激酶作阳性对照,在体外研究新型海洋纤溶酶对Wistar大鼠和家兔新鲜血液的抗凝集和血栓溶解作用。结果该新型海洋动物纤溶酶具有显著的血栓溶解作用,并具有一定的抗凝血效果,从血栓中释放的血细胞形态较使用蚓激酶优。结论该新型海洋纤溶酶具有潜在的应用价值。     

溶栓剂的研究进展

本文介绍了血栓形成原因与溶栓机制，阐述了溶栓剂的发展过程和开发前景，为研究安全、高效、低廉的溶栓药物指明了方向。     

纤溶酶与低分子肝素钙治疗不稳定型心绞痛的临床研究

目的观察纤溶酶与低分子肝素钙治疗不稳定型心绞痛(UAP)患者的临床疗效。方法入选UAP患者90例,随机分为对照组(30例)、纤溶酶组(30例)和低分子肝素钙组(30例)。治疗前后观察心绞痛疗效和心电图及心率、血压、纤维蛋白原(FIB)、血清C反应蛋白(CRP),观察患者药物不良反应、出血倾向、肝肾功能。结果纤溶酶组的总有效率高于低分子肝素钙组(P<0.05)。纤溶酶组发作次数和发作间期优于低分子肝素钙组(P<0.05)。在降低FIB方面,纤溶酶组优于低分子肝素钙组(P<0.05)。结论纤溶酶可明显改善UAP患者的心绞痛症状,且不良反应少。     

白唇竹叶青蛇(Trimeresurus albolabris)毒降纤酶的分离纯化以及性质

目的从白唇竹叶青蛇(T.albolabris)毒中分离纯化无出血作用的降纤活性组分,探讨其理化性质及部分生物功能。方法用DEAE-SephadexA-25,SephadexG-100和CM-SephadexC-50三步色谱法进行分离纯化。SDS-PAGE和HPLC鉴定其纯度和相对分子质量,平板法测定其降纤活性。结果从白唇竹叶青蛇毒中分离纯化获得单一的降纤组分,能迅速水解纤维蛋白原或纤维蛋白原Aα链,缓慢水解Bβ链,而对γ链无作用,SDS-PAGE鉴定其相对分子质量为56000。EDTA能抑制其纤维蛋白原水解活性,而PMSF、β-巯基乙醇对其活性无影响,提示该组分为单链α金属蛋白酶。结论从白唇竹叶青蛇毒中分离纯化得到1种无出血作用且降纤活性强的新蛇毒降纤酶。     

The effect of the fibrinolytic enzyme FIIa from Agkistrodon acutus venom on acute pulmonary thromboembolism

Aim:

To evaluate the effects of the fibrinolytic enzyme FII_a from Agkistrodon acutus venom on acute pulmonary thromboembolism (APT) in animal models.

Methods:

Both rabbit and dog APT models were used. For the rabbit APT model, the thrombi weight before and after administration was measured. Central venous pressure (CVP) and mean arterial pressure (MAP) were measured before and 15, 30, 60, and 120 min after the injection of the blood clot. Partial thromboplastin time (APTT), prothrombin time (PT), platelet count, and fibrinogen concentration were measured using auto analyzers. Plasminogen activity was measured based on chromogenic substrates. In the dog APT model, pulmonary blood flow was recorded using pulmonary angiography.

Results:

Intravenous administration of FIIa (0.1–5.0 mg/kg) improved the APT-induced hemodynamic derangements and reduced thrombi weight. The angiography evidence also showed that the pulmonary emboli had almost disappeared after FII_a infusion. FII_a (0.1, 0.5, or 1.0 mg/kg) did not impair the coagulation pathways, although very high doses of FII_a (5.0 mg/kg) could stimulate the production of plasminogen and result in impairment of the pathways.

Conclusion:

FII_a could effectively protect against APT via degradation of thrombi with less activation of plasminogen, and may provide a novel fibrinolytic enzyme for targeting the main pathological processes of the disease.     

海洋假单胞菌纤溶酶的体外溶栓实验研究

目的确证血纤维蛋白溶酶的体外溶栓作用。方法用血纤维蛋白平板法、体外血块溶解实验研究该酶的纤溶特点及对血块的溶解作用。结果可直接水解血纤维蛋白 ,溶栓活性同蝮蛇抗栓酶类似 ,但对红细胞形态没有影响。结论血纤维蛋白溶酶是一种直接纤溶酶 ,有较强的纤溶活性