去甲斑蝥素对Burkitt淋巴瘤Raji细胞株生物学特性的影响

目的:探讨去甲斑蝥素(nor-cantharidin,NCTD)对Raji细胞的增殖抑制及周期阻滞作用。方法:通过台盼蓝拒染法观察NCTD对Raji细胞及外周血单个核细胞(perip heralblood mononuclear cells,PBMC)的增殖抑制情况;甲基纤维素集落形成法观察NCTD对Raji细胞自我更新能力的影响;流式细胞仪检测Raji细胞周期变化。结果:NCTD抑制Raji细胞增殖,具有剂量时间依赖性(P<0.05),但是对单个核细胞增殖无影响(P>0.05);NCTD显著抑制Raji细胞的集落形成能力(P<0.05),NCTD使Raji细胞G2/M期细胞增多,G0/G1期细胞和S期细胞减少。结论:去甲斑蝥素能抑制Raji细胞增殖并产生G2/M期阻滞,且对Raji原始干祖细胞有抑制作用,有可能成为一种新的抗瘤制剂作用于人Burkitt淋巴瘤。     

和厚朴酚联合吉西他滨协同抑制 Burkitt 淋巴瘤细胞增殖和促凋亡作用简

本研究旨在探讨和厚朴酚（Honokiol,HNK）与吉西他滨（Gemcitabine,GEM）联合应用对Burkitt淋巴瘤细胞株Raji细胞增殖和凋亡的影响.应用CCK-8法检测HNK和GEM单用及联合应用对Raji细胞增殖的抑制作用;采用流式细胞术检测两种药物诱导Raji细胞凋亡情况及细胞周期的变化;以Western blot法检测BCL-2抗凋亡蛋白水平的变化.结果表明,HNK与GEM联合后,细胞生长抑制明显高于HNK和GEM单药组（P＜0.01）,具有时间和浓度依赖性;细胞凋亡比例均较各单药组增多,差异具有统计学意义（P＜0.01）,两药联合后大部分细胞被阻滞在G0/G1期,S期细胞减少;细胞内抗凋亡蛋白BCL-2水平在联合组比在各单药组表达量下降,差异具有统计学意义（P＜0.01）.结论：HNK联合GEM具有协同抑制Burkitt淋巴瘤Raji细胞增殖并诱导其凋亡的作用,协同机制可能与两药联合后更多细胞发生G0/G1期阻滞,并抑制抗凋亡蛋白BCL-2的活化有关.     

神经酰胺通过JNK/c-Jun信号通路诱导胶质瘤细胞自噬性死亡

目的探讨神经酰胺对胶质瘤细胞87-MG和U251自噬性死亡的作用及机制。方法采用MTT和流式细胞的方法检测不同浓度神经酰胺刺激87-MG和U251细胞后细胞存活和凋亡的改变;电镜和Western blotting技术检测自噬和JNK/c-Jun信号通路的改变,JNK药理性抑制剂SP600125特异性抑制JNK通路,观察其对神经酰胺诱导自噬死亡的影响。结果神经酰胺刺激24 h后,87-MG和U251存活呈现时间依赖性下降(P0.05);相应的细胞死亡数目剂量依赖性升高(P0.05),但凋亡性死亡比例较低;神经酰胺刺激后镜下观察到的自噬小体计数,LC3B/LC3A和Beclin-1的表达以及JNK/c-Jun的磷酸化程度都增加(P0.05)。提前给予SP600125抑制JNK信号通路的活性后,可以阻断神经酰胺诱导的细胞自噬性死亡(P0.05)。结论神经酰胺可诱导胶质瘤细胞87-MG和U251出现自噬性死亡,机制可能与JNK信号通路的活化有关。     

人淋巴瘤Raji细胞系中的边缘细胞:淋巴瘤干细胞存在之可能

背景:已有研究提示急性白血病、多发性骨髓瘤中肿瘤干细胞富集于SP细胞中,且免疫表型及生物学特性相比于主群细胞存在明显的异质性。而关于淋巴瘤淋巴瘤干细胞的研究报道甚少。目的:检测人淋巴瘤Raji细胞系中是否存在SP细胞,分选该群细胞后观察其与非SP细胞在分化抗原和P-糖蛋白表达以及细胞周期方面的差异,探讨淋巴瘤干细胞存在的可能性。方法:Hoechst-33342染色细胞后运用带紫外激发光的流式细胞仪进行Raji细胞系SP细胞的检测及分选。观察不同质量浓度维拉帕米对SP细胞抑制的程度,选择最佳抑制浓度。分选后分别检测SP和非SP细胞P-糖蛋白、分化抗原CD34,CD19,CD20,CD5表达以及细胞周期,并进行对比。结果与结论:Raji细胞系中存在SP细胞,比例在2%左右,当维拉帕米质量浓度为50mg/L时能被完全抑制。SP和非SP细胞CD20阳性表达率分别为18.2%和93.6%,CD5阳性表达率分别为78.0%和22.2%;P-糖蛋白表达差异无显著性意义,但SP中阳性细胞的平均荧光强度强于非SP细胞。提示Raji细胞系中SP与非SP细胞在分化程度、多药耐药性方面具有明显的差异,SP细胞是具有明显"异质性"的细胞亚群。据此可初步推测,Raji细胞系的构成也类似肿瘤干细胞分级组成模式,而淋巴瘤干细胞则有可能富集于SP亚群中。     

顺铂诱导Daudi细胞增殖抑制中分化抑制因子3的表达分析

目的 探讨Id3在顺铂诱导人Burkitt’s B淋巴瘤细胞（Daudi）增殖抑制和凋亡中的作用。方法 应用顺铂处理人Daudi细胞,台盼蓝染色法检测不同浓度的顺铂对Daudi细胞生长的抑制作用;流式细胞仪（FCM）分析细胞周期和凋亡率;用RT-PCR检测顺铂处理后Id3、Id2、钙调素（CaM）基因表达水平变化。结果 Daudi细胞增殖抑制率随顺铂浓度的增加而增加;2μg／ml的顺铂作用24h后,Daudi细胞表现出G1期阻滞,S期和G2／M期细胞比例下降;Annexin V／PI双染法和FCM结果表明,顺铂可诱导Daudi细胞发生凋亡;RT-PCR结果表明,顺铂处理Daudi细胞可导致Id3 mRNA的表达增加,而Id2、CaM mR-NA无明显变化。结论 Id3基因的上调表达可能在顺铂抑制Daudi细胞增殖、诱导细胞凋亡中发挥作用。     

人淋巴瘤Raji细胞系中的边缘细胞：淋巴瘤干细胞存在之可能

背景：已有研究提示急性白血病、多发性骨髓瘤中肿瘤干细胞富集于SP细胞中,且免疫表型及生物学特性相比于主群细胞存在明显的异质性。而关于淋巴瘤淋巴瘤干细胞的研究报道甚少。目的：检测人淋巴瘤Raji细胞系中是否存在SP细胞,分选该群细胞后观察其与非SP细胞在分化抗原和P-糖蛋白表达以及细胞周期方面的差异,探讨淋巴瘤干细胞存在的可能性。方法：Hoechst-33342染色细胞后运用带紫外激发光的流式细胞仪进行Raji细胞系SP细胞的检测及分选。观察不同质量浓度维拉帕米对SP细胞抑制的程度,选择最佳抑制浓度。分选后分别检测SP和非SP细胞P-糖蛋白、分化抗原CD34,CD19,CD20,CD5表达以及细胞周期,并进行对比。结果与结论：Raji细胞系中存在SP细胞,比例在2%左右,当维拉帕米质量浓度为50mg/L时能被完全抑制。SP和非SP细胞CD20阳性表达率分别为18.2%和93.6%,CD5阳性表达率分别为78.0%和22.2%;P-糖蛋白表达差异无显著性意义,但SP中阳性细胞的平均荧光强度强于非SP细胞。提示Raji细胞系中SP与非SP细胞在分化程度、多药耐药性方面具有明显的差异,SP细胞是具有明显＂异质性＂的细胞亚群。据此可初步推测,Raji细胞系的构成也类似肿瘤干细胞分级组成模式,而淋巴瘤干细胞则有可能富集于SP亚群中。     

紫杉醇对Daudi细胞增殖活性与表面超微结构的影响

目的:研究紫杉醇对Burkitt淋巴瘤细胞株Daudi细胞凋亡的影响.方法:用原子力显微镜(AFM)分析细胞膜超微结构的改变,CCK8法检测Daudi细胞增殖活性,流式细胞术(FCM)测定凋亡率.结果:AFM显示紫杉醇可引起细胞形貌的改变,正常Daudi细胞呈圆形,表面较光滑:紫杉醇处理后,Daudi细胞坍塌,细胞表面粗糙、凹凸不平.紫杉醇对Daudi细胞的增殖具有抑制作用,且呈时间浓度依赖性.FCM检测示Daudi细胞凋亡率各实验组均明显高于对照组(P<0.05),呈浓度依赖性.结论:紫杉醇可改变细胞膜超微结构,抑制Daudi细胞的增殖,促进其凋亡.     

地塞米松对三氧化二砷诱导淋巴瘤细胞凋亡与NF-κB活化及相关基因表达的影响

目的　研究三氧化二砷(As2O3 )诱导淋巴瘤细胞凋亡与核因子κB(NF κB)活化以及血管内皮生长因子(VEGF)、基质金属蛋白酶9(MMP9)表达的关系,并观察地塞米松(Dex)抑制NF κB活化对As2O3诱导淋巴瘤细胞凋亡及VEGF、MMP9表达的影响。方法　采用流式细胞仪AnnexinⅤFITC法检测Raji细胞凋亡;采用免疫组织化学方法半定量分析Raji细胞NF κB、VEGF、MMP9表达的动态变化。结果　As2O3同时具有诱导Raji细胞凋亡[凋亡率为(39. 2±1. 3)% ]和NF κB活化的作用; 1. 0μmol/LDex能显著增加1 . 0μmol/LAs2O3诱导Raji细胞凋亡(增加率为77. 5%,P<0. 05)和抑制As2O3诱导Raji细胞NF κB活化(抑制率为28. 0%,P<0. 05)的作用,VEGF、MMP9变化与NF κB一致。结论　As2O3诱导Raji细胞凋亡的同时活化NF κB,VEGF、MMP9表达亦随之增强;Dex在抑制As2O3诱导Raji细胞NF κB活化的同时增强其诱导细胞凋亡的作用,VEGF、MMP9的表达也相应下降。     

抗CD20单克隆抗体诱导B淋巴瘤细胞株凋亡的实验研究

本研究探讨抗CD20单克隆抗体体外诱导B淋巴细胞株凋亡情况及其可能的作用机制。体外培养Daudi、Ramos、Namalwa和Raji细胞,采用XTT法测定细胞增殖抑制率;用流式细胞术测定细胞凋亡;Western blot测定Daudi、Ramos、Raji和Namalwa细胞经Rituximab 20μg／ml作用24小时后Bcl-2的表达情况。结果表明：抗cD20单克隆抗体对Daudi、Raft和Namalwa淋巴瘤细胞有轻度的抗增殖作用,对Ramos细胞无抗增殖作用,抗增殖作用与单克隆抗体作用浓度无关。抗CD20单克隆抗体对4株细胞无明显诱导凋亡作用,抑制率在3％-10％之间波动。Na—malwa和Raji细胞株经抗CD20单克隆抗体作用24小时后,Bcl-2蛋白表达下调。结论：单药抗CD20单克隆抗体对Daudi、Namalwa和Raji细胞株有轻度抗细胞增殖作用,但与作用浓度和作用时间无明显相关。单药抗CD20单克隆抗体对Daudi、Namalwa、Raji和Ramos细胞株有微弱的诱导凋亡作用。Namalwa和Raji细胞株经抗CD20单克隆抗体作用24小时后Bcl-2表达下调,这可能是抗CD20单克隆抗体增敏细胞毒药物作用的机制之一。     

氨茶碱对淋巴瘤细胞系增殖与凋亡的影响及机制探讨

为探讨磷酸二酯酶（phosphodiesterase，PDE）抑制剂在淋巴瘤细胞增殖与凋亡中的作用及机制，研究了非选择性PDE抑制剂氨茶碱（aminophylline，AM）对Burkitt淋巴瘤细胞系Raji的影响。采用MTT检测，光学显微术，电镜术及膜联蛋白V染色观察细胞增殖、细胞凋亡的形态学变化及凋亡率；用流式细胞术和RT-PCR技术检测细胞周期，周期蛋白B1和Bcl-2的表达及线粒体跨膜电位的变化。结果显示，氨茶碱对Raji细胞增殖呈浓度依赖性抑制作用；形态学观察发现随氨茶碱浓度增加，细胞体积明显缩小，核固缩，核染色质核膜下聚集，出现凋亡小体；细胞涂片显示，核染色质凝聚、核碎裂；电镜观察有典型凋亡细胞；膜联蛋白V染色显示氨茶碱诱导Raji细胞凋亡率增加，线粒体跨膜电位（Δφm）呈浓度依赖性下降；流式细胞术及RT-PCR显示氨茶碱下调Bcl-2蛋白及mR-NA的表达；细胞周期分析显示经氨茶碱处理的细胞出现S期阻滞、细胞周期蛋白B1表达下调。结论：氨茶碱可通过S期阻滞抑制细胞增殖、下调Bcl-2的表达及降低线粒体膜电位而诱导Raji细胞凋亡。     

体外Rituximab增敏吉西他滨/长春瑞宾细胞毒作用的实验研究

本研究探讨抗CD20单抗利妥昔(Rituximab,RTX)对Gemcitabine和Navelbine的化疗增敏作用及其可能的作用机制。体外培养Daudi、Ramos、Namalwa和Raji细胞,采用XTT法测定细胞增殖抑制率,计算出各自的IC50;比较Gemcitabine或Navelbine单药及Gemcitabine或Navelbine分别与RTX两药协同作用的IC50;用Western blot测定Daudi、Ramos、Raji和Namlwa细胞经RTX20μg/ml作用24小时后抗凋亡蛋白BCL-2的表达情况。结果表明:单药抗CD20单克隆抗体对4株细胞无明显诱导凋亡作用,抑制率在3%-10%之间波动。RTX可使Gemcitabine或Navelbine对Daudi、Namalwa和Raji细胞株的细胞毒作用有明显增强;在Namalwa和Raji细胞株经RTX作用24小时后,BCL-2蛋白表达下调。结论:RTX对新一代细胞毒药物Gemcitabine或Navelbine有明显的细胞毒增敏作用。Namalwa和Raji细胞株经RTX作用24小时后BCL-2表达下调,这可能是RTX增敏细胞毒药物的机制之一。     

西达本胺对人B淋巴瘤细胞株的作用及其机制研究

本研究旨在探讨组蛋白去乙酰化酶抑制剂(HDACI)西达本胺对3种B淋巴瘤细胞株Raji(Burkitt淋巴瘤)、Maver及Z-138(套细胞淋巴瘤)的抑制增殖和诱导凋亡的作用及其机制。以不同浓度的西达本胺及不同时间作用于体外培养的3种B淋巴瘤细胞,采用CCK-8法检测细胞的增殖;流式细胞术检测细胞的凋亡及线粒体膜电位;Western blot方法检测细胞内组蛋白H3、H4乙酰化水平及caspase-3蛋白的表达。结果表明,西达本胺可抑制这3种B淋巴瘤细胞的增殖,其抑制作用具有一定的时间和浓度依赖性,尤其能较早较快地抑制Z-138细胞的增殖;另外,西达本胺还可诱导3种B淋巴瘤细胞发生凋亡并引起细胞线粒体膜电位下降,Maver及Z-138细胞对西达本胺较Raji细胞更为敏感;西达本胺可以提高细胞内组蛋白H3、H4乙酰化水平及Maver和Z-138细胞的caspase-3活性。结论:西达本胺能够抑制B淋巴瘤细胞株的增殖,诱导细胞凋亡,其机制可能与西达本胺上调组蛋白H3、H4乙酰化水平,触发线粒体凋亡途径及活化caspase-3有关。     

长链非编码RNA-TUC338通过PI3K/AKT信号通路对淋巴瘤细胞迁移和增殖的影响

目的:探讨长链非编码RNA-TUC338对淋巴瘤细胞增殖和迁移的影响。方法:采用荧光定量PCR检测不同淋巴瘤细胞中TUC338表达,磺酰罗丹明B实验检测细胞增殖能力,细胞迁移侵袭实验检测淋巴瘤细胞迁移能力,蛋白免疫印迹实验检测PI3K/AKT信号通路蛋白表达情况。结果:与人正常T淋巴细胞H9相比,淋巴瘤细胞Daudi、U937、BC-3和Raji中TUC338表达水平均明显提高(t=13.277、10.103、16.200和26.687,P=0.002、0.005、0.001和0.000)。与NC-siRNA组相比,TUC338-siRNA组穿过小室细胞数明显减少(t=30.508,P=0.000),p-PI3K和p-AKT蛋白表达量明显下降(t=16.872、18.371,P=0.000、0.000),在24、48和72 h的OD₅₃₀吸光值均明显偏低(P<0.05)。结论:在淋巴瘤细胞中TUC338表达量明显增加,沉默TUC338表达能够有效抑制PI3K/AKT信号通路的激活,进而抑制淋巴瘤细胞的增殖和迁移,在淋巴瘤诊断和治疗中具有潜在应用价值。     

CD40激发对恶性B淋巴细胞体外生物学行为的影响

目的 观察重组人可溶性CD40配体（rhsCD40L)及CD40L基因转染细胞（CD40L-TC）对恶性B淋巴细胞体外生物学行为的影响，探讨rhsCD40L在肿瘤生物治疗中的可能作用。方法 利用基因工程技术获得了rhsCD40L和CD40L-TC，分别与恶性B淋巴细胞株XG2，XG7，U266，8226，Raji及Daudi共同作用，分析了CD40激发对肿瘤细胞的体外增殖（锥虫蓝计数法），细胞周期（碘化丙锭掺入法），细胞表面共刺激分子的表达（免疫荧光标记法）以及细胞凋亡（Anexin-V-ETTC法）的效应。结果 （1）恶性B淋巴细胞株CD40表达呈异质性，XG2高表达CD40，8266，Raji和Daudi中度表达，而XG7和U266不表达CD40。显微镜下观察发现，rhsCD40L(5μg/ml）可引起XG2或Daudi细胞的同型聚集，该效应在作用6-8h后即可出现；与CD40L-TC细胞共育后（肿瘤细胞；CD40L-TC=5：1），XG2，Raji和Daudi细胞可粘附于CD40L-TC表面；（2）rhsCD40L和CD40L-TC均可显著抑制XG2，Raji和Daudi细胞的体外增殖，导致XG2细胞呈现G1期阻滞，而Raji和Daudi细胞阻滞于G2期，并诱导XG2，Raji,Daudi细胞的凋亡，凋亡率分别为：XG2细胞23.3%和18.8%,Raji细胞阻滞于G2期，并诱导XG2，Raji,Daudi细胞的凋亡，凋亡率分别为：XG2细胞23.3%和18.8%,Raji细胞11.6%和8.9%,Daudi14.2%和15.9%;(3)表型分析显示；rhsCD40L/CD40L-TC可明显上调XG2,Raji和Daudi细胞CD95的表达水平以及Raji细胞CD80的表达，而下调Raji细胞CD18的表达。结论 rhsCD40L能直接并显著地抑制恶性B淋巴瘤细胞株Raji,Daudi和多发性骨髓瘤细胞株XG2的体外增殖，诱导其凋亡，并上调Raji细胞免疫共刺激株Raji,Daudi和多发性骨髓瘤细胞株XG2的体外增殖，诱导其凋亡，并上调Raji细胞免疫共刺激分子CD80的表达，具有膜型CD40L的同样生物学功能，故rhsCD40L具有潜在的抗恶性B淋巴细胞肿瘤的作用。     

Notch信号分子在人淋巴瘤细胞中的表达及意义

本研究探讨Notch信号分子在人淋巴瘤细胞中的表达及其意义。选择人B淋巴瘤细胞系(Raji、Maver、Z138)和T淋巴瘤细胞系Jurkat细胞,利用RT-PCR技术检测Notch信号分子在这些细胞中的表达情况;利用流式细胞术检测γ-分泌酶抑制剂DAPT阻断Notch信号后对淋巴瘤细胞凋亡以及细胞周期的影响;利用CCK-8法检测DAPT对淋巴瘤细胞增殖的影响。结果表明:Notch分子在不同淋巴瘤细胞中的表达有所不同,Notch1和Notch2在4种细胞中均有表达,Notch3主要表达于Jurkat细胞,而Notch4仅在Raji细胞中弱表达;另外,Notch下游靶基因Hes1仅表达于Raji和Jurkat细胞。DAPT对Jurkat和Raji细胞的增殖抑制以及凋亡诱导作用比较明显,并将细胞周期阻滞在G1期,但是对Maver和Z138细胞的作用较弱。DAPT可以通过抑制Notch下游靶基因Hes1的表达而发挥作用。结论:Notch信号的异常表达与活化对淋巴瘤细胞的增殖起着重要作用,Notch信号有望成为淋巴瘤治疗的一个新靶点。     

Human lymphoblastoid cells produce extracellular matrix-degrading enzymes and induce endothelial cell proliferation, migration, morphogenesis, and angiogenesis

Human lymphoproliferative diseases can be hypothesized to invade locally and to metastatize via mechanisms similar to those developed by a variety of solid tumors, i.e., the secretion of extracellular matrix-degrading enzymes and stimulation of angiogenesis. To assess this hypothesis, Namalwa, Raji, and Daudi cell lines (Burkitt’s lymphoma), LIK and SB cell lines (B-cell lymphoblastic leukemia), CEM and Jurkat cell lines (T-cell lymphoblastic leukemia), and U266 cell line (multiple myeloma) were evaluated for their capacity to produce matrix metalloproteinase-2 and -9, and urokinase-type plasminogen activator. These cell lines were also assessed for their ability: (1) to produce the angiogenic basic fibroblast growth factor and vascular endothelial growth factor; (2) to induce an angiogenic phenotype in cultured endothelial cells, represented by cell proliferation, chemotaxis, and morphogensis; (3) to stimulate angiogenesis in different in vivo experimental models. All cell lines expressed the mRNA for one or both metalloproteinases. Namalwa, Raji, LIK, SB, and U266 cells secreted the active form of both metalloproteinases, while Daudi, CEM, and Jurkat cells produced metalloproteinase-2 but not -9. In contrast, urokinase-type plasminogen activator was secreted only by SB cells. While Raji, LIK, SB, CEM, and Jurkat cells secreted both basic fibroblast growth factor and vascular endothelial growth factor, Daudi and U266 cells produced only the former, and Namalwa cells only the latter. Accordingly, the conditioned medium of all cell lines stimulated cell proliferation and/or chemotaxis in cultured endothelial cells, with the exception of that of Namalwa cells which was ineffective. The conditioned medium of CEM and Jurkat cells induced morphogenesis in cultured endothelial cells grown on a reconstituted basement membrane (Matrigel). Lastly, Namalwa, Raji, LIK, SB, U266, CEM, and Jurkat cells induced angiogenesis and mononuclear cell recruitment in the murine Matrigel sponge model and in a chick embryo chorioallantoic membrane assay. The extent of angiogenesis in both models was strictly correlated with the density of the mononuclear cell infiltrate. The results indicate that human lymphoproliferative disease cells possess both local and remote invasive ability via the secretion of matrix-degrading enzymes and the induction of angiogenesis which is fostered by host inflammatory cells and by an intervening ensemble of angiogenic factors.     

亚砷酸联合蛋白酶体抑制剂硼替佐米诱导人淋巴瘤细胞Raji凋亡的研究

本研究探索亚砷酸、硼替佐米对人Burkitt淋巴瘤细胞系Raji的协同诱导凋亡作用。小剂量亚砷酸、硼替佐米单用以及二者联合分别处理Raji细胞，用台盼蓝拒染法计数活细胞数和细胞生长抑制率；用流式细胞术分析细胞凋亡和周期的变化；以Western blot检测Caspase-3、BCL-2、BAX、JNK2、IκB-α等凋亡相关元件在蛋白水平的变化。结果表明：相比于单用亚砷酸和硼替佐米，以小剂量亚砷酸联合硼替佐米处理Raji细胞后，细胞生长受明显抑制（P〈0．01），细胞凋亡比例增加（P=0.001），但细胞周期未见明显阻滞；在蛋白水平，细胞凋亡相关元件Caspase-3、BAX和IκB-α表达增加，而BCL-2和JNK2表达量下降。结论：小剂量亚砷酸联合硼替佐米能更有效地诱导Raji细胞凋亡，并具有协同作用。该作用可能是通过抑制NF—κB和JNK2通路实现的。