一起大肠埃希菌和副溶血弧菌复合型食物中毒实验室检测

目的对重庆市永川区茶山竹海街道桂花村村民小组发生的一起食物中毒进行调查检测,为该起食物中毒提供依据。方法根据流行病学调查,采集血液样本进行血常规、荧光定量PCR筛查,并用国标法进行致病菌培养及生化鉴定。结果综合流行病学资料和实验室检测结果,证实该起食物中毒是由O86:K61(B7)致病性大肠埃希菌和副溶血弧菌混合感染引起的复合型细菌性食物中毒。结论采用将血常规、荧光定量PCR筛查联合运用的方法,可快速确定检测方向,降低漏检几率,减少人力投入,提高检出率,大大提升突发公共卫生事件的处置速度和处置效果。     

实时荧光定量PCR在副溶血性弧菌食物中毒检测中的应用探讨

目的:应用荧光定量PCR方法快速筛检副溶血性弧菌等食物中毒病原菌,以提高检测速度,与GB培养法比较,探讨两法的符合性和应用价值。方法:采用高度特异、敏感的实时荧光PCR作为初筛方法,用GB方法进行细菌分离培养,用ATB对分离到的病原菌进行鉴定。结果:21份食物中毒病人大便标本实时荧光定量PCR检出副溶血性弧菌特异性DNA核酸阳性18份,GB细菌培养检出18株副溶血性弧菌,两法的阳性符合率一致,检出率均为85.71%。结论:能用实时荧光定量PCR检测食物中毒中的病原菌。与GB培养法相比明显缩短检测周期,报告检验结果及时率提高,达到快速、及时的目的,在食物中毒事件中能更及时查明病因,对临床治疗、流行病学调查和食物中毒处置发挥积极作用。     

实时荧光定量PCR技术在副溶血性弧菌快速检测中的应用

目的:建立副溶血性弧菌荧光定量PCR检测方法,应用于食品、食物中毒样本的快速检测。方法:食品样本先选择性增菌,取上层液提取DNA,粪样直接提取DNA,用实时荧光定量PCR方法进行检测,并与常规培养法进行比较。结果:用实时荧光定量PCR检测食品54份,食物中毒粪样12份,检测阳性食品21份、粪样9份,检测结果与培养法比较,阳性检出率分别为食品38.9%、31.5%;粪样均为75.0%。结论:副溶血性弧菌的实时荧光定量PCR检测方法具有快速、灵敏的优点。     

实时荧光PCR在食源性致病菌食物中毒应急处置中的应用

目的探讨实时荧光PCR在食源性致病菌食物中毒快速应急检测中的应用价值。方法对一起食物中毒进行流行病学调查,采集患者、相关食品、厨房工作人员和厨具拭子等标本,对前增菌液进行食源性致病菌实时荧光PCR快速筛查,同步进行分离培养。结果该事件39名聚餐人员中共有22人发病,罹病率达59.5%,对采集的36份标本进行实时荧光PCR和分离培养,其中8份患者标本和3份食品标本副溶血性弧菌实时荧光PCR阳性,并相应分离出11株血清型为O3∶K6的副溶血性弧菌。结论本次食物中毒是由冰鲜海鱼中的副溶血性弧菌污染熟食品而引起的,实时荧光PCR快速、特异、灵敏,可为食物中毒快速处置提供依据。     

实时荧光PCR法快速分离食源性致病菌

目的建立快速的食源性沙门菌和志贺菌检测方法,以提高对该菌的检验速度和准确性,为公共卫生,食源性致病菌监测,突发性群体性食物中毒事件提供技术支持。方法采用实时荧光PCR法和培养法对40份不同类食品进行沙门菌和志贺菌的检测,并对分离的菌株进行血清分型和定量检测,比较两种方法的特异性,灵敏度,准确性。结果采用实时荧光PCR法检测40份样本,其中8份沙门菌核酸阳性,阳性率20%;采用培养法检测这40份样本,4份样品分离出沙门菌,阳性率10%,且4份样品经核酸检测均为阳性,32份核酸阴性样本采用培养法检测,均未分离到沙门菌和志贺菌。结论实时荧光PCR法结合传统分离培养法适宜食品中沙门菌,志贺菌的快速筛查鉴定及食物中毒等突发事件的快速诊断。     

荧光定量PCR技术快速检测食物中副溶血性弧菌

目的 应用荧光定量PCR技术,实现对副溶血性弧菌食物中毒的快速检测.方法 根据副溶血性弧菌的基因保守区设计特异性引物和Taqman探针,建立荧光定量PCR技术,同时验证方法的敏感性和特异性,并与普通PCR、常规培养法进行比较.结果 用荧光定量PCR技术检测副溶血性弧菌,其检测灵敏度为1.5 CFU/ml,其敏感性比普通PCR高10倍,比常规培养法高1000倍.且快速简便,特异性强,从核酸提取至完成检测最快能在2～3h内完成,而常规培养需3～4d.通过对发生的4起食物中毒96件样品的检测,证实该方法可以使阳性检出率从常规法的40.62％提高至47.92％.结论 建立的荧光定量PCR技术特异性强,敏感性高,操作简便快速,适用于副溶血性弧菌食物中毒的快速检测.     

用PFGE方法鉴别分析同时检出副溶血性弧菌和变形杆菌的食物中毒

目的对一起可疑食物中毒的病原菌进行实验室诊断。方法按照国家标准检验方法GB/T4789-2003和WS/T9-1996附录A,对样品进行细菌分离培养,并对检出的两种致病菌分别用实时荧光PCR方法检测毒力基因和用脉冲场凝胶电泳(PFGE)进行分子分型。结果12份患者和食品、环境标本中,分离出4株副溶血性弧菌、7株奇异变形杆菌。检测4株副溶血性弧菌的毒力基因TDH,结果均为阳性;7株奇异变形杆菌的PFGE分型结果为不相关关系。结论结合流行病学资料、病原菌分离鉴定、毒力基因检测和分子分型结果分析,证实这是一起由副溶血性弧菌引起的食物中毒。     

一起由布利丹沙门菌引起食物中毒的调查

目的对一起食物中毒事件进行流行病学调查和病原学检测,为中毒事件处置提供参考依据。方法依据食品微生物学检验相关标准,用荧光定量PCR检测法对可疑样品进行检测。结果共采集并检测样品18份,部分样品检测出布利丹沙门菌(肛拭子7份、三明治1份、加工原料沙拉酱1份)。结论根据实验室检测结果,结合现场流行病学调查和临床表现,判断是一起由布利丹沙门菌污染食品引起的食物中毒事件。应进一步加强食品安全监管,保障食品安全。     

荧光定量聚合酶链反应用于非脊髓灰质炎肠道病毒定性方法的评估

目的在河北省脊灰实验室应用荧光定量聚合酶链反应（PCR）法对非脊髓灰质炎肠道病毒（NPEV）进行定性。方法采用荧光定量PCR法对既往河北省脊灰实验室分离到NPEV进行检测,并将检测结果与中和实验鉴定结果和新流程方法检测结果进行比较分析。结果 75株用中和实验方法定性的NPEV与荧光定量PCR方法检测的符合率为98.7%（74/75）,33株用新检测流程定性的NPEV与荧光定量PCR方法检测的符合率为81.8%。结论荧光定量PCR用于NPEV进行定性的检测方法是可行的。     

多重寡核苷酸连接-聚合酶链式反应-通用基因芯片检测食源性致病菌方法的建立

目的建立一种基于多重寡核苷酸连接-聚合酶链式反应(MOL-PCR)的食源性致病菌通用基因芯片检测方法。方法针对细菌性食物中毒8种常见致病菌,在各自特异性引物之间设计一对首尾相接的上、下游检测探针。采用多重PCR富集靶序列并作为模板,通过多重连接酶检测反应及通用不对称PCR标记,获得大量含标签互补序列(Anti-tag)的荧光标记单链产物,可与芯片上固定的标签序列(Tag)进行杂交检测。结果该方法能特异性地鉴别单一和多重目标菌感染。纯培养物的检测灵敏度为(1.1~8.5)×10~2CFU/mL。对96份食物中毒和临床腹泻样本检测,芯片结果与常规分离与生化鉴定及荧光定量PCR结果一致。结论该方法为快速、准确、灵敏、高通量地鉴定食源性疾病的病原菌提供了一种新型检测平台。     

荧光定量PCR检测在STD检测中的实验研究

目的:探讨不同标本利用荧光定量PCR技术和培养法在检测男性性传播性尿道炎实验室检测中的应用。方法:收集165例泌尿外科门诊患者的尿道分泌物、晨尿标本尿沉渣进行NG、UU、CT的荧光定量PCR的检测,分别与其相应标本类型的培养法相比较。结果:尿道分泌物标本荧光PCR法检测NG、UU、CT的灵敏度大于尿沉渣标本的荧光PCR法,分泌物标本荧光PCR法检测NG、UU、CT的特异性小于尿沉渣标本的荧光PCR法。结论:在急性男性性传播性尿道炎的实验室诊断中,利用尿沉渣标本荧光定量PCR也是一种适用的检测手段。     

南京市一起斯坦利沙门氏菌食物中毒的病原学检测及溯源分析

目的 对食物中毒事件中所采集样本进行食源性致病菌的分离鉴定,快速查明食物中毒原因并进行同源性分析。方法 应用实时荧光PCＲ技术对一起食物中毒10份可疑食品、2份餐具涂抹样和5份患者粪便进行检测,同时进行病原菌培养分离鉴定,分离菌株采用CLSI 推荐的改良K-B纸片法进行抗生素敏感试验,应用PFGE分型技术进行同源性分析。结果 1份可疑食物和3份患者粪便经实时荧光PCR检测为沙门菌阳性,同时分离到4株斯坦利沙门氏菌,4株沙门氏菌的药敏试验结果一致,PFGE 带型完全一致。结论 本次食物中毒是由斯坦利沙门氏菌污染引起。实时荧光PCR技术能够快速准确地对食物中毒做出病原学诊断,PFGE基因分型技术可对病原菌进行溯源分析,对研究病原菌流行病学规律具有重要意义。     

一起食源性食物中毒事件病原的检测与溯源

目的联合应用荧光定量PCR/RT-PCR及脉冲场凝胶电泳(PFGE),对一起学校突发食物中毒事件进行病原检测和溯源分析,为突发中毒事件的应急处置提供参考。方法采用现场流行病学调查方法对疫情经过进行调查,采集病例粪便/肛拭样本及剩余食品样本,进行细菌学培养、分离和鉴定。提取样本RNA,以荧光定量PCR/RT-PCR检测检测沙门菌、志贺菌、致泻大肠埃希氏菌、副溶血性弧菌、金黄色葡萄球菌诺如病毒核酸。对检出的副溶血性弧菌分离株进行血清学分型及PFGE分子分型分析,以BioNumerics软件进行同源性分析。结果共采集43份样本,经常规培养鉴定和荧光定量PCR/RT-PCR分析,副溶血性弧菌阳性6份,分离株血清型均为O3∶K6,除1株来自食品样本的菌株与其他菌株同源性为52.1%外,其余5株同源性为100.0%。结论本起食物中毒事件是副溶血性弧菌污染导致。实时荧光PCR/RT-PCR方法结合PFGE分型技术可以快速、准确确定和溯源食物中毒的病原。     

荧光PCR和PFGE在副溶血弧菌食物中毒诊断中的应用研究

[目的]探讨荧光PCR和脉冲场电泳（PFGE）在副溶血弧菌食物中毒调查中的应用。[方法]对中毒样品进行荧光PCR检测,副溶血弧菌临床分离株基因组DNA经NotI酶切,通过PFGE获得电泳图谱,利用BioNumerics软件对图谱进行聚类分析。[结果]部分样品荧光PCR检测结果呈阳性,同起食物中毒菌株PFGE图谱一致。[结论]荧光PCR可以快速准确的鉴定病原体。PFGE具有很强的菌株同源性分析能力,适用于食物中毒病原菌学鉴定和传染源溯源。荧光PCR和PFGE在食物中毒的快速诊断中可发挥重要作用。     

荧光PCR方法快速检测食物中毒标本中的金黄色葡萄球菌

目的快速检测食物中毒标本中的金黄色葡萄球菌。方法采集到的肛拭子和剩余食物标本直接进行金黄色葡萄球菌荧光定量PCR检测，并做分离培养。结果从采集到的肛拭子和剩余食物标本分离到金黄色葡萄球菌，而且PCR检测结果阳性。结论金黄色葡萄球菌是此次食物中毒的病原体。     

改良分子信标-实时PCR快速检测志贺菌

目的：建立改良分子信标-实时PCR检测志贺菌的快速方法，应用于志贺菌食物中毒的快速诊断和门诊肠道致病菌的检测。方法：根据GenBank公布志贺菌ipaH基因的保守序列，设计引物和改良分子信标探针，建立实时PCR-改良分子信标检测体系，应用于对志贺菌食物中毒的快速诊断和门诊肠道致病菌的检测。结果：改良分子信标-实时PCR反应体系DNA灵敏度为93fg/μl，菌液灵敏度为64cfu／ml或2cfu／PCR反应体系，无交叉反应。此反应体系检测67株志贺菌，均出现特异的荧光信号。对细菌性食物中毒样本等共657份样品进行志贺菌检测，42份志贺菌实时PCR阳性，其中41份志贺菌细菌培养阳性。从样品处理到检测结果仅需2h～1d时间。结论：改良分子信标-实时PCR检测体系快速、灵敏度高，特异性强，可用于志贺菌食物中毒的快速诊断，为食源性疾病的分子流行病学调查提供新的检测手段，对于提高肠道门诊的工作效率有重要意义。     

荧光定量PCR检测肺炎链球菌感染方法的建立

目的 建立Taqman探针法荧光定量PCR检测肺炎链球菌感染的实验室诊断方法.方法 针对肺炎链球菌自溶素基因设计引物及探针,建立荧光定量PCR Taqman探针法检测肺炎链球菌感染.采用肺炎链球菌标准株,构建质粒,用质粒构建标准品,扩增标准品,绘制标准曲线并检验新建荧光定量PCR的敏感性,采用本实验冻存其他菌DNA样本,检测其特异性;采集2015年9月至2015年12月份北京地区家5家医院儿童门诊或病房,诊断为呼吸道感染患儿的咽拭子标本133例,对新建荧光定量PCR法进行临床样本的验证.结果 绘制了荧光定量PCR Taqman探针法检测肺炎链菌感染的标准曲线;新建荧光定量PCR可检测的肺炎链球菌最低拷贝数为10copies/μL;新建荧光定量PCR可成功区分几种病原体DNA,具有较好特异性;采用新建荧光定量PCR检测临床样本132例,其中肺炎链球菌阳性25例,阳性率为18.94%.结论 新建立的荧光定量PCR检测肺炎链球菌感染的实验室诊断方法具有较高的敏感性和特异性,可用于临床样本的检验.     

食品中产气荚膜梭菌α毒素基因快速检测方法的研究

目的建立分子信标荧光PCR体系检测产气荚膜梭菌的快速检测方法,应用于食物中毒快速诊断和食品微生物检验。方法根据GenBank公布的保守序列,针对α毒素基因设计一对引物和分子信标探针,用FAM荧光剂标记探针的5’端,并进行特异性和灵敏度分析,同时以10种细菌作对照。结果分子信标荧光PCR反应体系检测10种细菌,只有产气荚膜梭菌出现特异荧光信号,其他均无荧光信号,而且与其他细菌无交叉反应。对40份食品样品进行检测,3份产气荚膜梭菌PCR阳性,其余样品为阴性,检测仅需2 h。3份阳性样本经传统方法培养,2份有检出产气荚膜梭菌。结论分子信标荧光PCR检测体系快速、灵敏度高,特异性强,可用于产气荚膜梭菌食物中毒的快速诊断和食品污染物及感染性腹泻等监测工作中,为食源性疾病的分子流行病学调查提供新的检测手段。     

数字PCR和荧光定量PCR诊断急性期布鲁菌病的灵敏度比较初步研究

目的　建立用于布鲁菌检测的数字PCR技术,初步用小样本开展研究,比较数字PCR和荧光定量PCR的灵敏度差异,验证数字PCR作为急性期布鲁菌病诊断技术的可行性。方法　选取符合我国急性期布鲁菌病诊断标准的20例患者的血清标本,分别用数字PCR和荧光定量PCR技术进行检测,初步比较2者在急性期布鲁菌病诊断中的灵敏度差异,并分析差异原因。结果　20例急性期布鲁菌病患者血清样本中,数字PCR检测阳性20例,荧光定量PCR检测阳性0例。结论　初步证实在急性期布鲁菌病患者血清标本检测中,数字PCR检测灵敏度高于荧光定量PCR,有良好的临床应用前景,但也存在一定局限性,尚须进一步扩大样本完成实验诊断技术临床研究,并进行多实验室验证。     

实时荧光定量PCR检测O139群霍乱弧菌研究

目的：利用荧光定量PCR技术,建立一种快速、准确、特异检测O139群霍乱弧菌的定量方法。方法：选取O139群霍乱弧菌糖基转移酶基因（LPSgt）作为检测的靶基因,设计引物和TaqMan探针,探针的两端均进行荧光标记。对PCR扩增体系进行优化,进一步评价实时荧光定量PCR方法的特异性、灵敏度、重复性后,对收集的临床样本进行鉴定。结果：本文所建立的实时荧光定量PCR方法可准确、特异的检测和鉴定O139群霍乱弧菌,其他菌株均无阳性结果产生;该方法的灵敏度可达到10 cfu/ml;定量检测的批间和批内的变异系数均小于5%;对85例临床样本进行评价,结果获得9例O139群霍乱弧菌阳性,与常规培养法结果完全一致。结论：本文建立的检测O139群霍乱弧菌实时荧光定量PCR方法快速、准确,结果可靠,实用性强,可对结果进行定量分析,为O139群霍乱弧菌的实验室诊断和现场流行病学调查提供了较好的分析手段。