PCR技术在鉴定阳性重组子中的应用

介绍了采用ＰＣＲ技术在人粒细胞集落刺激因子（ｈＧ－ＣＳＦ）、人促红细胞生成素及中国人γ－干扰素（ｈＩＦＮ－γ）ｃＤＮＡ重组质粒的构建过程中快速鉴定阳性重组子的方法。经ＰＣＲ扩增鉴定为阳性的重组子，提取质粒ＤＮＡ经重组位点相应的ＤＮＡ内切酶双酶切鉴定表明，全部含有插入片段。     

聚合酶链反应快速检测钩端螺旋体

以四株不同型别的致病性钩端螺旋体ＤＮＡ为模板进行聚合酶链反应(ＰＣＲ),建立了钩端螺旋体快速检测方法。在此基础上,先后对流行期15例早期疑似血清进行ＰＣＲ快速检测,结果7例阳性,与经防疫部门及临床确诊的7例患者完全符合,阳性率为100%。而常规方法(显微镜凝集试验)只检出5例阳性。结果表明,ＰＣＲ用于钩端螺旋体病的早期诊断,快速、准确。聚合酶链反应快速检测钩端螺旋体@范钦@曹东林@刘静宇     

PCR技术诊断结核病41例体会

ＰＣＲ技术诊断结核病４１例体会武警山东总队医院检验科张耀进,韩宝莱（济南２５０１０１）关键词ＰＣＲ,ＤＮＡ,结核菌,凝胶电泳聚合酶链式反应（ＰＣＲ）是近年来开展的一项新技术,应用ＰＣＲ检测结核菌ＤＮＡ具有快速、敏感、特异等优点,克服了传统的涂片法阳性...     

联合应用D21S11,IFNAR位点定量PCR快速诊断先天愚型

为了探讨定量ＰＣＲ方法在分子水平对先天愚型基因诊断意义，本实验以ＳＴＲ（Ｄ２１Ｓ１１ＩＦＮＡＲ）做为遗传标记，合成特异引物对１１例正常人（６例外周血，５例羊水）及２８例先天愚型患者外周血进行同位素标记ＰＣＲ扩增后定量分析，结果显示在Ｄ２１Ｓ１１位点１１例正常人中１０人呈ＤＮＡ含量为１∶１关系的两条带，１人为１条带。２８例患者中２４人呈ＤＮＡ含量为２∶１的两条带，３人为ＤＮＡ含量为１∶１∶１关系的三条带，１人为１条带。在ＩＦＮＡＲ位点５例为纯合子，其余均为杂合子。实验表明Ｄ２１Ｓ１１和ＩＦ ＮＡＲ位点多态是对先天愚型基因诊断很有应用价值的遗传标记，应用定量ＰＣＲ的方法可在２４ｈ内对先天愚型做出快速、准确的产前及临床基因诊断。     

聚合酶链反应快速诊断白色念珠菌菌血症

目的：应用聚合酶链反应（ＰＣＲ）技术诊断白色念珠菌菌血症。方法：设计的引物特异性扩增编码白色念珠菌细胞色素Ｐ４５０Ｌ１Ａ１的基因，其长度为２４３ｂｐ。ＥＤＴＡ抗凝血用去污剂溶解，用ＤＮａｓｅＩ去除人体白细胞和污染的细菌ＤＮＡ；念珠菌的细胞壁用溶胞酶消化并用ＳＤＳ和蛋白酶Ｋ裂解。用酚／氯仿／异戊醇提取模板ＤＮＡ。用ＰＣＲ技术扩增。结果：与细菌、病毒及人体细胞ＤＮＡ无非特异扩增。检出血中白色葡萄的阈值     

PCR快速筛选质粒cDNA文库方法的建立

目的　建立一种快速、有效地筛选质粒ｃＤＮＡ 文库的方法—ＰＣＲ 法。方法　将质粒ｃＤＮＡ文库重组子进行矩阵排列,然后用特异引物进行ＰＣＲ 逐级筛选以获得目的克隆。结果　经两轮筛选（约１ 周的时间）获得４ 株阳性克隆。结论　ＰＣＲ 矩阵筛库法不仅适用于常规ｃＤＮＡ 克隆的筛选,还适用于筛选较短的ｃＤＮＡ片段,比常规的筛库方法更为灵敏、特异、高效。     

Inter Alu PCR技术在鉴定分离人源DNA片段中的应用

目的：探讨ＩｎｔｅｒＡｌｕＰＣＲ技术在筛选鉴定含人ＤＮＡ小鼠转染细胞和分离人源ＤＮＡ片段中的应用。方法：设计人特异性Ａｌｕ引物，通过ＩｎｔｅｒＡｌｕＰＣＲ扩增对转染人基因组ＤＮＡ后回复突变的小鼠细胞进行鉴定筛选；分离插入的人源ＤＮＡ片段；经原位ＰＣＲ鉴定其人源性。结果：应用该技术从８株回复突变株中筛选出６株含特异性人ＤＮＡ；从其中１２号小鼠细胞基因组ＤＮＡ中分离出３条人源ＤＮＡ片段；ＰＣＲ原位杂交确证所分离的ＤＮＡ片段具有人的特异性。结论：ＩｎｔｅｒＡｌｕＰＣＲ技术是应用于筛选鉴定含人ＤＮＡ杂种细胞、分离其中人源插入片段的简便、有效的方法。     

中国人TTV部分基因的克隆及序列测定

目的：了解我国人群中是否存在ＴＴ病毒（ＴＴＶ）感染，分析国内ＴＴ病毒株基因结构特点。方法：用ＰＣＲ方法检测血清标本中ＴＴＶ ＤＮＡ，对ＴＴＶ ＤＮＡ阳性的标本进行序列测定。结果：１０例临床诊断为非甲至非戊型肝炎病人血清标本中，用ＰＣＲ方法检测出５例为ＴＴＶ ＤＮＡ阳性。将其中的一株命名为ＴＴＶＣＨ１（ＴＴＶ中国株１）并进行序列测定，该序列与日本ＴＴＶ部分基因（ＣＬＯＮ２２）相对位置的核苷酸同源性为     

中国大陆庚型肝炎病毒结构区与非结构区部分cDNA基因的序列分析

作者在建立检测庚型肝炎病毒酶免疫和ＰＣＲ技术的基础上，将抗－ＨＣＶ上阳性病人血清经逆转录－巢式ＰＣＲ分离部分ＨＧＶｃＤＮＡ片段，用与ＨＧＶ基因互补的特异寡核苷酸引物进行双脱氧核苷酸链末端终止法－ＰＣＲ直接测序。结果表明，中国大陆ＨＧ－３０２Ⅰ株部分ｃＤＮＡ序列与Ｌｉｎｎｅｎ等报道的ＨＧＢ美国株ｃＤＮＡ序列有极高的同源性。     

PCR技术检测结核性脑膜炎病人脑脊液中的人型结核分支杆菌的研究

采用聚合酶链式反应（ＰＣＲ）技术，检测人型结核分支杆菌。扩增片段为１６５ｂＰ，非结核分支杆菌和其它细菌结果阴性，证实其具有较高的特异性。通过与常规ＤＮＡ制备方法的比较，证明对脑脊液标本煮沸后进行直接扩增，方便、快捷、不影响实验结果。对３３例结核性脑膜炎及２６例非结核性脑膜炎病人的脑脊液进行结核分支杆菌ＤＮＡ检测，并与其它诊断方法进行比较，结果显示：ＰＣＲ的阳性率为：８４．８％（２８／３３），抗酸染色３％（１／３３），抗原检测６０．６％（２０／３３），抗体检测为５４．５％（１８／３３），对照组无１例阳性，表明ＰＣＲ技术在特异性和敏感性方面均优于上述方法，可望成为结脑可靠的诊断手段。     

巢式聚合酶链反应检测幽门螺杆菌方法的建立及临床初步应用

在ＨＰ高度保守的尿素酶Ａ基因内合成两对引物，建立了巢式聚合酶链反应（Ｎ－ＰＣＲ）检测ＨＰＤＮＡ的方法，实验证明有很高的特异性和敏感性，与其它４株肠道菌无交叉反应，最小检出量为１ｆｇＨＰＤＮＡ。对Ｎ－ＰＣＲ反应体系中有关实验条件如Ｍｇ￣２＋浓度、引物浓度、复性温度等进行优化选择，并对酚／氯仿提取法和裂解粗提法两种标本处理方法进行了比较。用建立的Ｎ－ＰＣＲ检测３０例有上消化道症状患者的唾液及８例胃组织标本中ＨＰＤＮＡ，结果阳性率分别为５６．６７％和６２．５０％，５例胃组织标本阳性患者中４例唾液标本亦阳性。实验表明Ｎ－ＰＣＲ是一种敏感特异的检测方法，可用于唾液等标本中ＨＰ的检测。     

用多重及套式PCR同时检测血清中的HBV和HCV方法的建立

首次应用多重及套式ＰＣＲ技术同时检测人血清中的ＨＢＶ和ＨＣＶ。将抽提的ＨＢＶＤＮＡ和（或）ＨＣＶＲＮＡ在含ＡＭＶ逆转录酶、ＴａｑＤＮＡ多聚酶以及ＨＢＶ和ＨＣＶ外套引物的ＰＣＲ缓冲引物的ＰＣＲ缓冲液中进行逆转录后连续进行ＰＣＲ扩增，以第一轮扩增产物为模板，在含ＨＢＶ和ＨＣＶ内套引物的ＰＣＲ反应体系中进行第二轮扩增，产物经电泳后，以ＤＮＡ分子量标志物或已知片段做参考，出现５２３ｂｐ和（或）２６０ｂｐ产     

瘢痕疙瘩Fas基因突变的银染PCR—SSCP检测

以前的研究提示：瘢痕疙瘩成纤维细胞的Ｆａｓ受体可能处于无功能状态。进一步探讨导致无功能Ｆａｓ分子的可能机制。取瘢痕疙瘩,增生性瘢痕患者的组织及外周血标本,ＰＣＲ特异性扩增Ｆａｓ分子外显子９的编码区,扩增产物经银染ＳＳＣＰ筛选,最后可疑阳性的ＰＣＲ标本进行ＤＮＡ测序,经ＰＣＲ－ＳＳＣＰ检测,２０例（２／１０）的瘢痕疙瘩组织中发现异常电泳带,经ＤＮＡ测序证实,这２例突变均为位于Ｆａｓ ｃＤＮＡ的７５５     

TRF检测法在核酸分析中的应用

综述了镧系离子时间分辨荧光检测法在核酸分析技术中的应用概况。介绍了ＤＥＬＦＩＡ系统、ＦＩＡｇｅｎ系统、ＥＡＬＬ系统和ＴＢＰ系统的使用特点，包括时间分辨荧光分析原理、镧系离子标记ＤＮＡ探针和运用时间分辨荧光技术检测ＰＣＲ产物的技术和方法     

TRF检测法在核酸分析中的应用

综述了镧系离子时间分辨荧光检测法在核酸分析技术中的应用概况。介绍了ＤＥＬＦＩＡ系统、ＦＩＡｇｅｎ系统、ＥＡＬＬ系统和ＴＢＰ系统的使用特点，包括时间分辨荧光分析原理、镧系离子标记ＤＮＡ探针和运用时间分辨荧光技术检测ＰＣＲ产物的技术和方法。     

淋球菌PCR基因诊断试剂盒的研制及初步应用

淋球菌ＰＣＲ基因诊断方法特异，敏感，与泌尿生殖道的其它污染菌不产生非特异扩增反应，在淋球菌３．８ｆｇ提取ＤＮＡ可得到明显扩增带。用自制ＰＣＲ诊断试剂盒进行临床检测与菌株鉴定，其标本处理方法简便易行，检出率与培养法符合率高，且整个检测可在３￣４ｈ内完成，适于医院临床应用。     

拉米夫定治疗中国乙型肝炎患者中发现YMDD耐药变异株

为了监测拉米夫定临床治疗过程中耐药性的产生,更好地指导临床用药。采用ＰＣＲ产物克隆后测序的方法,对２０例服用拉米夫定病人进行随访观察,检测其体内乙型肝炎病毒聚合酶基因酷氨酸－蛋氨酸－天门冬氨酸－天门冬氨酸区域变异情况,同时观察其ＨＢＶＤＮＡ定量和肝功能指标变化。     

PCR技术检测慢性牙周炎组织中幽门螺杆菌DNA的临床意义

为探讨慢性牙周炎症组织中是否有幽门螺旋杆菌的存在及其意义。选择６２例慢性牙周炎患者，局麻下在炎症明显处取样本，利用ＰＣＲ技术检测幽门螺旋杆菌ＤＮＡ。结果：实验组６２例中ＨＰ ＤＮＡ阳性２１例，占３３８７％，与对照组相比差异有显著性（Ｐ＜０．０１）。结论：慢性牙周炎的发生，发展及迁延不愈与ＨＰ在口腔内定居及感染有密切关系。     

聚合酶链反应法与荧光免疫法检测沙眼衣原体的比较研究

为了评价聚合酶链反应法（ＰＣＲ）对泌尿生殖道标本中沙眼衣原体的检测结果，每份临床标本进行了ＰＣＲ法和荧光免疫法（ＤＦＡ）平行检测比较。检测临床标本９３例，ＰＣＲ法阳性率为２５．８％，ＤＦＡ法的阳性率为１７．２％（Ｐ＞０．０５）。结果说明ＰＣＲ是一高度特异和敏感的检测方法。     

RAPD技术在生药学研究中的应用

ＲＡＰＤ标记技术是在ＰＣＲ技术的基础上发展起来的一种运用随机引物扩增,寻找多态性ＤＮＡ 片段遗传标记的分子生物学技术,具有操作简便、敏感性高,容易发现ＤＮＡ 的多态性和通用性强等特点;本文介绍了ＲＡＰＤ技术在植物分类、生药鉴定及药材生产等方面的应用进展。