下丘脑神经元L-型Ca~(2 )通道的温度效应

目的 :研究温度对下丘脑神经元电压依赖性L -型Ca2 通道的影响。方法 :神经元的急性分离技术 ,膜片钳细胞贴附式记录方式。结论 :不同温度下 ,单通道电流、电导及开放概率均有明显不同 ,显示L -型Ca2 通道对温度敏感     

大鼠气管平滑肌细胞的分离及L-钙通道的记录

目的建立一种大鼠气管平滑肌细胞急性酶分离法并在分离的细胞上研究其L型钙通道(L-Ca)特性。方法采用链酶蛋白酶分离大鼠气管平滑肌细胞,用膜片钳单通道记录法记录L-Ca通道电流。结果该方法分离过程简单,所获细胞数量多,形态正常,在这些细胞上容易记录到正常的L-Ca通道电流。结论应用本方法易得到单个活性正常的、形态完整的大鼠支气管平滑肌细胞。     

大鼠气管平滑肌细胞的分离及L-钙通道的记录

目的 建立一种大鼠气管平滑肌细胞急性酶分离法并在分离的细胞上研究其L型钙通道(L-Ca)特性。方法 采用链酶蛋白酶分离大鼠气管平滑肌细胞，用膜片钳单通道记录法记录L-Ca通道电流。结果 该方法分离过程简单，所获细胞数量多，形态正常，在这些细胞上容易记录到正常的L-Ca通道电流。结论 应用本方法易得到单个活性正常的、形态完整的大鼠支气管平滑肌细胞。     

大鼠皮层神经元膜片钳单通道记录模型

介绍我室建立的大鼠大脑皮层神经元膜片钳单通道记录模型。方法：大鼠大脑皮层神经元急性分离和膜片单通道记录技术。结果：急性分离的皮层神经元经鉴定成活良好。记录的Ｌ，Ｎ－和Ｔ－型钙通道的单通道电活动与文献报道基本一致。结论：我室建立的膜片钳实验方法是可靠的。     

改良的适合膜片钳试验的血管内皮细胞处理方法

目的 建立一种简便的、适合膜片钳试验的人脐静脉内皮细胞(ECV304)处理方法,并在培养的细胞上观察其钙激活钾通道(Kca)特性.方法 采用改良的内皮细胞培养方法,用单通道记录法记录内皮细胞Kca电流.结果 内皮细胞在光镜下呈梭形,并可以检测到细胞膜上的Kca电流.结论 本方法改良了传统的内皮细胞培养方法,能在较短时间内完成膜片钳通道记录,是一种适合膜片钳试验的处理方法.     

下丘脑神经元L—型Ca^2＋通道的温度效应

目的：研究温度对下丘脑神经元电压依赖性L-型Ca^2 通道的影响。方法：神经元的急性分离技术,膜片钳细胞贴附式记录方式,结论：不同温度下,单通道电流、电导及开放概率均有明显不同,显示L-型Ca^2 通道对温度敏感。     

心肌细胞肿胀激活氯离子通道的单通道特性

目的研究急性分离小鼠心肌细胞肿胀激活氯离子通道的单通道特征.方法采用膜片钳单通道(细胞贴附式和内面向外式)方法,记录急性分离的小鼠心肌细胞暴露于低渗溶液时出现的肿胀激活氯通道电流(ICl.swell).结果等渗状态下,用细胞贴附式记录,多数心肌细胞膜片无通道活动,用低渗溶液灌流细胞,在细胞容积增大的同时,出现单通道电流的激活.该肿胀激活单通道氯电压在-100mV~+100mV均有激活.在电压+100mV时,其单通道电导为(38.1±2.5)pS,开放概率为0.76±0.08,电流-电压曲线显示其反转电位(-34.5±2.8)mV,接近氯离子平衡电位的理论值(ECl=-38.6mV),且反转电位随氯离子浓度的改变而改变.氯通道阻断剂DIDS可逆性阻断该单通道电流.结论小鼠心肌细胞肿胀激活氯通道的单通道电导为(38.1±2.5)pS,电流呈外向整流特征并对DIDS敏感.     

适合膜片钳试验的一种外周血嗜酸性粒细胞分离法

目的 建立一种从人群外周血中分离出适合膜片钳试验的外周血嗜酸性粒细胞(EOS)分离方法,并在分离的细胞上观察其K⁺-ca^2-通道特性。方法 采用改良的不连续密度梯度法分离EOS,用膜片钳单通道记录法记录K⁺-ca^2-通道电流。结果 外周血EOS的回收率为(48.2±6.9)%、存活率>99%、纯度为(90.5±1.6)%。EOS形态完整,可检测到其膜上的K⁺-ca^2-通道。结论 该法能短时间内从外周血中分离出高存活率、无细胞损伤的EOS,是一种适于膜片钳试验中分离外周血EOS的方法。     

小鼠脑动脉平滑肌钙激活钾通道基本特性和动力学调控研究

目的采用膜片钳技术记录小鼠脑动脉平滑肌细胞上的大电导钙激活钾通道(BKCa)和自发瞬时外向电流(STOCs),研究了其基本特性以及钙离子对通道动力学的调控。方法采用两步法急性酶分离小鼠脑动脉,得到单个平滑肌细胞。使用200μg/mL两性霉素B为穿孔剂进行穿孔全细胞膜片钳实验,包括全细胞宏观电流记录和STOCs记录,采用inside-out和outside-out构型进行单通道电流记录。结果 BKCa宏观电流和STOCs能够被BKCa的特异性阻断剂IbTX(200nmol)阻断。BKCa单通道具有明显电压依赖性(半数最大激活电压V1/2=78.09mV)、K+选择性和钙敏感性(Ca2+解离常数Kd=0.881μmol),能够被胞外IbTX阻断。胞内Ca2+调控通道动力学特性主要表现为减少了开放时间常数,促进了通道由关闭向开放的转变。结论 BKCa宏观电流和STOCs非常容易记录,单通道活性好,具有BKCa的电生理学特性。小鼠脑动脉平滑肌是研究BKCa功能活动和血管活性药物作用机制的良好实验标本。     

新生大白鼠大脑皮层神经元的培养及其基本电生理学特性研究

目的建立一种较为理想的适用于膜片钳制技术的神经元培养方法,并观察其形态学和电生理学特性.方法改进的神经元原代培养方法及膜片钳单通道记录法.结果采用此方法能获得形态典型的神经元,用膜片钳单通道记录法能记录到两类正常的通道电流(KCa和KATP).结论该培养方法获得细胞数量多,细胞质量高,电生理特性正常.     

大鼠心室肌细胞单通道钙电流的记录及其电生理学特性分析

 目的分离大鼠心室肌细胞,记录大鼠心室肌细胞的单通钙电流,并分析其基本电生理学性质。方法胶原酶法分离大鼠心室肌细胞;应用膜片钳技术细胞贴附式和内膜向外式记录L-型钙通道的电流,并用pClamp10分析软件进行分析。结果分离得到了大鼠心室肌细胞,细胞存活形态良好,呈杆状或柱状,具有清晰的横纹。记录到的L-型钙通道单通道电流,平均电流幅度为（1.13±0.01）pA,电导为19pS,平均开放时间常数为（1.35±0.03）ms,平均关闭时间常数为（46.75±10.04）ms。此外,还记录到了L-型钙通道的Run-down现象。结论本实验分离得到的大鼠心室肌细胞适用于膜片钳单通道记录模式;记录到的L-型钙通道的基本电生理学性质与文献报道相符。     

脑心清及其黄酮成分对海马神经元L型钙通道电流的影响

目的研究脑心清及其黄酮成分对海马神经元细胞L-型Ca^2＋通道活性的影响。方法采用全细胞记录式（whole—cell model）的膜片钳技术记录海马神经细胞L-型Ca^2＋通道电流变化。结果槲皮素、柿叶黄酮、脑心清在5．0～25．0μg／mL浓度下,均能增加海马锥体神经元全细胞L-型钙通道电流（ICa,L）峰值（P〈0．01）,增加最大值分别为61．6％,55．3％,52．0％,可使ICa,L的Ⅰ-Ⅴ相关曲线下移,但没有电压依赖性特征,也不改变钙通道的电学特征。结论脑心清及其黄酮成分对海马神经细胞L-型Ca^2＋通道活性有激活增强作用,有利于神经元细胞内钙稳定,发挥抗缺血再灌注损伤的作用。     

活性氧对神经母细胞株SH-SY5Y细胞L型钙通道电流的影响

①目的 探讨氧自由基导致神经元钙超载的发生机制。②方法 在神经母细胞SH—SY5Y细胞体外培养的基础上，采用全细胞膜片钳技术，观察H2O2对SH—SY5Y细胞L型钙通道电流(ICa,L)的影响。③结果 H2O2能够明显增加峰值ICa,L，且该作用具有浓度依赖性。H2O2使ICa,L的I-V相关曲线下移，但对其形状和最大激活电位无明显影响。④结论 H2O2对L型钙通道有明显增强作用，此可能是其导致神经元钙超载的机制之一。     

Blocking effect of puerarin on calcium channel in isolated guinea pig ventricular myocytes

Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ　ＴｏｉｄｅｎｔｉｆｙｗｈｅｔｈｅｒＰｕｅｒａｒｉｎ（Ｐｕｅｒ）ｈａｓｂｌｏｃｋｉｎｇｅｆｆｅｃｔｓｏｎＬｔｙｐｅｃａｌｃｉｕｍｃｈａｎｎｅｌＭｅｔｈｏｄｓ　ＷｅｕｓｅｄｗｈｏｌｅｃｅｌｌｒｅｃｏｒｄｉｎｇｏｆｐａｔｃｈｃｌａｍｐｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓｔｏａｎａｌｙｓｅｃａｌｃｉｕｍｃｈａｎｎｅｌｃｕｒｒｅｎｔｉｎｖｅｎｔｒｉｃｕｌａｒｍｙｏｃｙｔｅｓｉｓｏｌａｔｅｄｆｒｏｍＬａｎｇｅｎｄｏｒｆｆｇｕｉｎｅａｐｉｇｈｅａｒｔｓｂｙｃｏｌｌａｇｅｎａｓｅＲｅｓｕｌｔｓ　Ｉ…     

L型钙通道α1C亚单位在成年大鼠心脏中的表达

目的 研究L型钙通道α1C亚单位在成年大鼠心脏中的空间表达情况。方法制备成年大鼠心脏冰冻切片，结合大体位置和HE染色结果快速辨认出窦房结、房室结和结后延伸，采用免疫荧光和免疫印迹技术检测L型钙通道α1C亚单位在大鼠窦房结、房室结、结后延伸、右房、右室的表达，用共聚焦显微镜观察其表达部位，通过凝胶成像及图像分析系统对实验结果进行分析。结果荧光呈现点状、斑状或不规则的短线状，主要分布于细胞膜及细胞内的膜性结构，其荧光强度由弱到强依次为窦房结、房室结、结后延伸、右心房、右心室，房室结和结后延伸之间无显著性差异（P〉0．05），其余两两相比均有显著差异（P〈0．05），其中右心房、有心室明显强于窦房结、房室结和结后延伸（P〈0．01）。各部位在相对分子质量200000左右可见一特异性蛋白条带。对蛋白条带进行灰度值分析，结果与免疫荧光相一致。结论L型钙通道α1C亚单位在成年大鼠心脏分布广泛，在不同部位表达量不同，在工作肌组织的表达量明显高于传导组织．提示钙电流在心脏不同部位有不同的分子基础.     

耐钙心肌细胞的分离及其L型钙通道电流观察

目的：建立大鼠心肌细胞分离方法，用于膜片钳实验，并记录L型钙通道电流，方法：基于Langendorff逆行主动脉灌流模型，以经改进的心肌细胞分离技术获得单个耐钙心肌细胞，用膜片钳全细胞方式记录L型钙电流。结果：在灌流所得50％存活单个心肌细胞中约70％为耐钙心肌细胞，并记录到典型的L型钙电流，结论：这种心肌细胞分离技术能获得大量具有正常电生理特性的耐钙心肌细胞，可用于心肌细胞离子通道和信号转导机制的研究。     

缺血再灌注致心律失常大鼠模型钙调蛋白介导的L型离子通道电流的变化

目的：探讨缺血再灌注致心律失常大鼠钙调蛋白（CaM）的变化及其对L型离子通道电流的影响。方法：选取健康SD大鼠48只,以单盲法随机分为4组（n=12）;空白组不做任何处理,模型组以左冠状动脉前降支结扎法制备缺血再灌注致心律失常模型,干预组在制备缺血再灌注致心律失常模型前肌注钙调蛋白抑制剂W-7（100μmol／kg）,假手术组仅进行开胸手术和动脉套线,无结扎。模型制备成功后,取大鼠心脏组织,以免疫印迹法检测L型钙离子通道主要亚型CaV1．2功能决定性亚单位α1C和CaM的表达水平;同时分离大鼠心肌细胞,以膜片钳技术进行L型离子通道电流（ICa,L）测定。结果：模型组大鼠心肌组织的a1C、CaM的表达水平,以及ICa,L均高于空白组和假手术组,差异具有统计学意义（P〈0．05）;较模型组相比,干预组CaM的表达水平和ICa,L均有降低,差异具有统计学意义（P〈0．05）;I—V曲线有所上移,a1C的表达水平比较,差异无统计学意义（P〉0．05）。结论：ICa,L过激所致Ca抖内流和细胞超载为缺血再灌注后心肌损伤和心律失常的重要因素之一,CaM在该病理过程中能够发挥不依赖于L型离子通道表达水平的调节作用,可作为其临床治疗的新靶点。