低温保存成骨细胞复合生物活性玻璃陶瓷修复兔下颌骨缺损

目的 观察经低温保存的兔骨膜源性成骨细胞(POBs)的生物学特征,及其与生物活性玻璃陶瓷(BGC)体外复合后修复颌骨缺损的能力。方法 将经鉴定的幼兔骨膜源性成骨细胞置入液氮罐中保存,取冻存6个月的细胞做生物学鉴定,并进行体外培养扩增,然后与BGC复合培养,植入兔下颌骨缺损处,对照组为植入单纯BGC组。术后第2、4、8、12周取材,行X线摄片及组织学检查,观察复合材料的成骨能力。结果 复苏的成骨细胞仍具有典型的成熟成骨细胞的生物学特征,与BGC复合植入体内后,能继续生长增殖并形成骨组织,能较快较好地修复骨缺损。结论 利用冻存复苏的成骨细胞进行组织工程学研究是可行的,细胞与材料复合所形成的组织工程化骨,可望在骨组织的修复与重建中得到更加广泛的应用。     

兔骨髓基质干细胞培养及鉴定

目的：对新西兰大白兔骨髓基质干细胞（BMSCs）进行体外培养及扩增,观察其原代及传代细胞的生长特点及生物学特点,获得足够量的细胞用于材料细胞相容性实验。方法：骨髓髓腔冲洗获得新西兰大白兔幼兔股骨骨髓,用全骨髓培养法进行体外培养获得BMSCs,胰酶消化传代,用条件培养基培养传代细胞。逐日倒置显微镜观察细胞生长情况,对传代细胞进行HE染色和碱性磷酸酶（ALP）染色。结果：幼兔骨髓基质干细胞体外培养生长良好,原代细胞约2周汇成单层,传代后1周左右长满瓶底。HE染色光镜下观察见兔骨髓基质干细胞为单核细胞,细胞呈梭形或不规则长多边形,传代细胞碱性磷酸酶染色呈强阳性。结论：兔骨髓基质干细胞的体外增殖能力强,可诱导为成骨细胞,可作为骨缺损材料细胞相容性研究的受试细胞。并且可以作为骨组织工程的种子细胞。     

磷灰石-多孔纤维素复合物与成骨细胞相容性的研究

目的制备磷灰石- 多孔纤维素复合物,评价该复合物的细胞相容性。方法通过化学修饰将磷酸根接枝于天然多孔纤维素玉米芯表面,经预矿化处理后,在模拟体液中进行仿生矿化,X线衍射检测磷灰石- 多孔纤维素复合物表面磷灰石微晶的形成,扫描电镜（SEM）观察复合物表面形貌。体外分离培养扩增乳鼠颅盖骨成骨细胞,经传代培养作为种子细胞接种于复合物表面进行培养。采用MTT和碱性磷酸酶（ALP）活性检测及SEM观察细胞在复合物表面生长、增殖与分化情况。结果仿生矿化后玉米芯表面形成了磷灰石晶体。成骨细胞在磷灰石- 多孔纤维素复合物表面吸附、铺展,具有较好的增殖及合成ALP的能力。结论磷灰石- 多孔纤维素复合物与成骨细胞具有良好的相容性,在仿生构建骨再生材料方面具有潜在的价值。     

nHACP／CF材料与成骨细胞体外复合培养的实验研究

目的:检测甲壳素纤维增强多孔胶原基骨组织工程支架材料(nHACP/CF)对成骨细胞附着增殖的影响,为骨组织工程支架材料的选择提供实验依据.方法:原代培养大鼠成骨细胞,将第3代细胞与nHACP/CF材料体外复合培养.碱性磷酸酶(ALP)染色对成骨细胞进行鉴定;将不同浓度成骨细胞接种到nHACP/CF支架上,通过检测ALP活性测定最佳接种浓度;通过扫描电镜观察和各培养时点细胞增殖率及ALP活性检测,评价nHACP/CF材料对成骨细胞的影响.采用SPSS11.5软件包对测定结果进行单因素方差分析.结果:大鼠成骨细胞ALP染色阳性.统计分析表明,6×105/ml为细胞最佳接种浓度;大鼠成骨细胞能在nHACP/CF材料上附着、增殖,其生长及功能不受抑制.结论:nHACP/CF材料是大鼠成骨细胞附着生长的良好载体.     

Bio-oss骨粉对大鼠成骨细胞体外成骨效能的影响

目的 研究大鼠成骨细胞与。Bio-oss骨粉体外复合培养对成骨细胞成骨效能的影响，探讨Bio-oss作为骨组织工程支架材料的组织相容性。方法 采用原代骨髓基质干细胞(MSCs)培养技术及定向诱导培养技术获得大鼠成骨细胞，分为实验组与对照组。实验组细胞与Bio-oss骨粉复合培养，对照组细胞单独培养。比较两组成骨细胞形态学特点、碱性磷酸酶(ALP)活性、贴壁率、增殖活力及蛋白含量。结果 成骨细胞与Bio-oss骨粉复合培养后，细胞形态、增殖活力、成骨效能(ALP活性、蛋白含量)与单纯成骨细胞培养无明显差异。结论 Bio-oss骨粉能满意模拟天然骨支架，可作为骨组织工程中较理想的支架材料。     

松质骨支架与成骨细胞生物相容性的实验研究

目的：观察松质骨支架对成骨细胞的粘附、生长、增殖的影响,为骨组织工程支架的选择提供实验依据.方法：采用Ficoll梯度离心法得到兔骨髓基质干细胞,经诱导培养为成骨细胞并通过相差显微镜观察、Ⅰ型胶原免疫组化法染色、四环素染色确认为成骨细胞;采用物理化学方法对猪松质骨进行处理得到猪松质骨支架,与成骨细胞体外复合培养,通过扫描电镜观察猪松骨材料对成骨细胞生长、粘附的影响.结果：骨髓基质干细胞经条件培养基诱导培养后已分化为成骨细胞,与松质骨支架联合培养1d后可见细胞附着于材料表面,但数量不多,细胞呈圆球形,7d后细胞生长密集,似葡萄状粘附于脱矿猪松质骨的孔壁上,细胞呈不规则圆球形,表面有丰富的绒毛状突起,细胞间有伪足样突起相连但分布不均.细胞相互融合,可见细胞遮盖微孔间隙.结论：松质骨材料具有良好的细胞相容性,可用作骨组织工程的支架材料.     

成骨细胞超低温冻存前后生物学功能变化的研究

目的 观察超低温（液氮,-196 ℃）冻存对幼兔骨髓来源的成骨细胞体外培养的生长特性和生物学功能的影响。方法 自幼兔骨髓获取基质干细胞,体外诱导分化并培养 扩增,部分细胞进行液氮冻存,对冻存前后细胞的形态变化、增殖情况、克隆形成率、碱性磷酸酶（ALP）的合成能力、蛋白质合成能力及体外矿化能力进行对比观察,综合比较低温冻存对细胞功能的影响。结果 冻存复苏细胞的增殖有一定的时间延后性,其大体形态与冻存前基本一致,超微结构略有变化;复苏细胞仍保持典型的成熟成骨细胞的特征,具有较强的合成ALP及蛋白质的能力,两组细胞无统计学差异（P>0.05）;复苏细胞的体外矿化能力无明显变化。结论 超低温保存成骨细胞对其
生物学功能影响甚微,利用复苏细胞进行骨组织工程方面的研究是可行的。     

人颌骨骨膜成骨细胞复合异体部分脱钙骨的成骨实验研究

目的　研究人颌骨骨膜来源的成骨细胞接种于异体部分脱钙骨内组织工程化成骨的可行性。方法　从人颌骨骨膜分离培养成骨细胞 ,观察其体外生长情况 ,将扩增的人成骨细胞接种到异体部分脱钙松质骨支架内 ,体外和裸鼠体内培养 ,观察成骨细胞在支架孔隙内粘附、生长和成骨情况。结果　人颌骨骨膜来源的成骨细胞体外生长良好 ,细胞在异体部分脱钙松质骨支架内能正常的粘附、生长 ,裸鼠皮下培养 2月后 ,支架材料内异位形成岛状的新生骨组织。结论　人颌骨骨膜成骨细胞接种于异体部分脱钙骨内能够组织工程化新生骨组织     

大鼠脂肪干细胞体外定向诱导分化为成骨细胞的研究

目的：研究脂肪组织来源干细胞（adipose tissue-derived stem cells，ADSCs）在体外分离培养、诱导分化为成骨细胞的能力，探讨其作为骨组织工程种子细胞的可行性。方法：从SD大鼠腹股沟脂肪垫分离出脂肪组织，通过Ⅰ型胶原酶消化法获取原代ADSCs，适时传代。逐日倒置显微镜下观察细胞形态及增殖特征。第3代细胞用成骨诱导培养基向成骨细胞诱导分化，并进行碱性磷酸酶染色、VonKossa染色及免疫细胞化学染色鉴定成骨细胞特性。结果：从大鼠脂肪组织中分离培养出ADSCs，体外形态类似成纤维细胞，增殖迅速。在地塞米松、抗坏血酸、β-甘油磷酸钠及1，25-（OH）2 VitD，诱导下，ADSCs表现出成骨细胞特性：ALP活性显著增高，Von Kossa染色出现钙化结节，OC、Ⅰ型胶原免疫细胞化学染色阳性。结论：ADSCs易于分离培养，体外扩增迅速，经矿化诱导后可分化为成骨细胞，可作为骨组织工程的种子细胞。     

新型多孔HA/PDLLA支架体外细胞相容性的实验研究

目的:研究新型多孔羟基磷灰石/聚乳酸(HA/PDLLA)支架材料的体外细胞相容性。方法:贴壁法培养兔骨髓基质细胞(bone marrow stromal cells,BMSCs),经体外矿化诱导培养、扩增后,与实验组 A(含2%HA 的 HA/PDLLA)、实验组 B(含4%HA 的 HA/PDLLA)及对照组(PDLLA)分别进行体外复合培养;并通过定性及定量检测细胞在材料表面的粘附能力、增殖活力,验证细胞材料复合体的成骨活性,比较分析各组支架材料之间的差异。结果:兔 BMSCs在三组支架材料的表面均能生长,经体外诱导后在支架材料的表面形成钙结节,实验组 A 与 B 细胞的粘附及增殖能力均强于对照组(P<0.05)。结论:兔 BMSCs 与新型多孔 HA/PDLLA 支架材料有良好的细胞相容性。     

体外培养狗骨髓基质细胞在牙根上生长的超微结构

目的：探讨体外培养的骨髓基质细胞及其与牙根复合后的生长特性，为牙周组织工程载体材料的选择提供实验依据。方法：分离纯化的狗骨髓基质细胞与牙根复合体外培养，分别在相差显微镜和扫描电镜下动态观察细胞及其与牙根复合生长的形态变化。结果：骨髓基质细胞在牙根上贴附生长、增殖良好，功能正常。结论：牙根与骨髓基质细胞具有良好的生物相容性，可能成为牙周组织工程的载体材料选择。     

磷酸三钙与珊瑚羟磷灰石细胞相容性的实验研究

目的　探讨磷酸三钙 (TCP)、珊瑚羟磷灰石 (CHA)与骨髓基质细胞的生物相容性 ,为用组织工程方法修复牙周组织缺损提供依据。方法　将骨髓基质细胞分别与TCP、CHA复合体外培养 ,进行形态学观察、细胞增殖、矿化能力测定。结果　骨髓基质细胞能在TCP、CHA上贴附、生长 ,其增殖功能不受影响 ,矿化能力亦无明显变化。结论　TCP、CHA具有良好的生物相容性 ,可作为骨髓基质细胞的载体应用于牙周组织工程研究。     

Bio-oss胶原与骨髓基质细胞相容性的实验研究

目的：探讨Bio-oss胶原与骨髓基质细胞（bone marrow stromal cells,BMSCs）的生物相容性,为用组织工程技术修复牙周缺损提供理论依据。方法：体外培养恒河猴BMSCs,将BMSCs与Bio-oss胶原复合进行体外培养。用激光扫描共聚焦显微镜检测细胞与材料的黏附,MTT法检测细胞的增殖,并行碱性磷酸酶（ALP）活性测定。采用SAS6.12软件包对所得数据进行t检验。结果：BMSCs能黏附于Bio-oss胶原上;MTT结果显示,在2d、5d时,对照组和实验组间无显著性差异（P〉0.05）,8d时,两组间有显著性差异（P〈0.05）;在各时间点,对照组和实验组间ALP活性均无显著性差异（P〉0.05）。结论：Bio-oss胶原与恒河猴BMSCs有良好的生物相容性,可作为组织工程材料应用于牙周骨缺损的修复。     

Y500R可吸收珊瑚羟基磷灰石人工骨体外成骨细胞相容性研究

目的：探讨Y500R可吸收珊瑚羟基磷灰石作为人工骨支架材料在体外的成骨效能,评价其组织相容性的优劣,为临床应用提供必要的实验依据。方法：采用酶消化法获得小鼠成骨细胞后,分为空白组、实验组和对照组。空白组为小鼠成骨细胞单独培养,实验组和对照组分别为颗粒型Y500R可吸收珊瑚羟基磷灰石、颗粒型羟基磷灰石（HA）与小鼠成骨细胞复合培养。对比小鼠成骨细胞在3组中的生长状况、形态学特征、碱性磷酸酶活性、矿化结节形成等成骨活性指标的差异,并采用扫描电镜观察、对比Y500R人工骨与角孔珊瑚在支架三维结构、孔隙率、孔径及孔的均匀度方面的差异。结果：实验组成骨细胞在成骨活性等指标方面与空白组无显著性差异。扫描电镜下可见Y500R可吸收珊瑚羟基磷灰石的断面呈多孔海绵状结构,微孔呈圆形,排列规则,与天然松质骨结构十分相似。Y500R的三维多孔结构和孔隙率与角孔珊瑚相比,结构类似,在电镜下几乎分不出差异,唯孔径比角孔珊瑚略小,但大小均匀、规则。结论：Y500R可吸收珊瑚羟基磷灰石具有良好的细胞相容性和成骨活性,复合培养不影响成骨细胞的正常生理功能,Y500R可吸收珊瑚羟基磷灰石能够满足组织工程对支架材料的要求,可作为一种新型的骨代用品。     

气电纺聚羟基丁酸酯支架用于大鼠骨髓基质细胞体外培养的研究

目的研究气电纺聚羟基丁酸酯[poly（3-hydroxybutyrate）,PHB]纳米纤维支架的体外生物相容性。方法实验组用PHB纳米纤维支架接种大鼠骨髓基质细胞进行体外培养,对照组用培养板培养孔接种大鼠骨髓基质细胞进行体外培养,通过扫描电镜、四甲基偶氮唑盐比色法以及碱性磷酸酶（alkaline phosphatase,ALP）检测来评价PHB纳米纤维支架对大鼠骨髓基质细胞粘附、增殖活性以及ALP活性的影响。结果气电纺PHB纳米纤维支架材料对大鼠骨髓基质细胞具有良好的亲和性;与细胞培养板相比,气电纺PHB纳米纤维支架材料上的大鼠骨髓基质细胞具有较高的增殖活性及ALP活性。结论气电纺PHB纳米纤维支架有望用作骨组织工程支架材料。     

兔骨髓基质细胞的体外成骨定向诱导培养

目的:体外分离培养兔骨髓基质细胞(bonemarrowstromalcells,BMSCs),并向成骨定向诱导培养,为骨组织工程提供适宜的种子细胞。方法:抽取新西兰白兔的骨髓,体外分离纯化得到BMSCs,并利用条件培养液将其向成骨定向诱导培养、扩增。采用倒置相差显微镜观察细胞增殖分化情况;使用碱性磷酸酶(ALP)和VonKossa染色的方法,鉴定其成骨性能;用MTT法描绘标准细胞浓度-OD值曲线。结果:BMSCs在培养皿中贴壁生长、增殖;经ALP和VonKossa染色证实其有成骨潜能;标准BMSCs细胞浓度-OD值曲线显示细胞浓度和OD值呈线性正相关。结论:可以通过在体外分离纯化骨髓并诱导培养,获得足够数量、有成骨潜能的BMSCs作为骨组织工程的种子细胞。     

hBMP-2基因修饰的组织工程化骨修复兔下颌骨正中缝的实验研究

目的:评价腺病毒介导的人骨形成蛋白-2(Ad-hBMP-2)基因转染的组织工程化人工骨对兔下颌骨正中缝的修复效果。方法:健康成年新西兰大白兔45只,随机分为5组,去除下颌骨正中缝的软组织,分别植入如下人工骨:Ⅰ组,Ad-hBMP-2转染的成骨细胞复合倍骼生(Bioglass)(10只);Ⅱ组,腺病毒介导的增强型绿色荧光蛋白(Ad-EGFP)基因转染的成骨细胞复合倍骼生(10只);Ⅲ组,未转染的成骨细胞复合倍骼生(10只);Ⅳ组,单纯倍骼生(10只);Ⅴ组,空白对照(5只)。于术后第2、4、8、12周末行大体观察、X线检查、组织学检查、新生骨量分析和生物力学测定。应用单因素方差分析和多样本均数两两比较的q(Newman-Keuls)检验对实验结果进行统计学分析。结果:大体观察见,4周时,Ⅰ组的兔下颌骨正中缝被新生骨组织代替,表面有皮质骨生成。X线检查,第4、8周,Ⅰ组的下颌骨正中缝内有明显骨痂形成。新生骨量分析显示,与其他组相比,Ⅰ组的新生骨量最多(P<0.01)。Ⅰ组移植骨的最大抗弯曲负荷、弯曲刚度值显著大于其他各组(P<0.01)。结论:hBMP-2基因修饰的组织工程化人工骨可以较好地修复兔下颌骨正中缝,有可能用于牙槽突裂的骨性修复。