CXCR2对胃癌细胞侵袭、迁移及凋亡的影响

目的 :探究CXC类趋化因子受体2(C-X-C motif chemokine receptor, CXCR2)对胃癌细胞侵袭、迁移及凋亡等生物学特性的影响。方法:取人胃癌MGC80-3细胞和SGC-7901细胞。转染建立CXCR2过表达细胞,质粒瞬时转染和RNA干扰建立敲减细胞。蛋白质印迹实验研究蛋白质相关细胞表型变化。通过transwell侵袭及迁移实验、增殖实验(cell counting kit-8, CCK8)、流式细胞实验AnnexinⅤ-PI双染法以及实时定量PCR等进行细胞功能、增殖、凋亡以及CXCR2 mRNA表达的检测。结果:胃癌细胞过表达CXCR2后其侵袭、迁移能力显著增强(P0.05),凋亡率显著降低(P0.01)。CXCR2下调后抑制胃癌细胞的侵袭、迁移能力(P0.05),凋亡率显著升高(P=0.02)。CXCR2过表达的胃癌细胞中Akt的磷酸化水平显著上调。Akt磷酸化水平与凋亡抑制蛋白Bcl-2的表达水平相一致。结论:CXCR2上调后增强胃癌细胞的侵袭、迁移及抗凋亡能力。胃癌细胞中CXCR2的抗凋亡能力与CXCR2/Akt/Bcl-2通路相关。     

TPM4对人胰腺癌细胞侵袭和迁移的影响

目的 探讨原肌球蛋白4(TPM4)对人胰腺癌细胞侵袭和迁移的影响。方法 采用qRT-PCR检测人正常胰腺导管上皮细胞(HPDE)和人胰腺癌细胞系(ASPC-1、BXPC-3、MIA PaCa-2、PANC-1、SW1990)中TPM4 RNA表达量。采用siRNA或过表达慢病毒感染胰腺癌细胞(MIA PaCa-2、PANC-1),通过qRT-PCR、Western blotting检测各组细胞TPM4的表达,划痕实验及Transwell实验检测各组胰腺癌细胞侵袭和迁移能力。结果 GEPIA数据库中胰腺癌组织TPM4表达明显高于正常胰腺组织(P<0.05),qRT-PCR分析TPM4 RNA在胰腺癌细胞系中表达均高于HPDE(P<0.0001)。与对照组相比,在MIA Paca-2和PANC-1中过表达TPM4促进了胰腺癌细胞侵袭迁移能力(均P<0.01),而敲低TPM4胰腺癌细胞侵袭迁移能力则明显减弱(均P<0.01)。结论 TPM4在胰腺癌细胞中呈现高水平表达,可能在胰腺癌中发挥着癌基因的作用,其并可促进胰腺癌细胞迁移及侵袭能力。     

miR-519d在胰腺癌细胞中的表达及其作用

目的:探讨miR-519d在胰腺癌细胞中的表达及作用。方法:用qRT-PCR检测miR-519d在胰腺癌细胞系AsPC-1、BxPC-3、Capan-2、Panc-1及正常胰腺导管上皮细胞系HPDE6-C7中的表达。将Panc-1细胞分别转染miR-519d过表达质粒(miR-519d组)与阴性对照质粒(阴性对照组),以无处理的Panc-1细胞为空白对照组,用MTT法、Transwell实验、Western blot分别检测转染后细胞的增殖和侵袭能力、凋亡情况以及X连锁凋亡抑制蛋白(XIAP)的表达。结果:各胰腺癌细胞系中miR-519d相对表达量均明显低于正常胰腺导管上皮细胞系HPDE6-C7(均P0.05);与空白对照组比较,miR-519d组细胞增殖能力降低(培养72 h后明显降低)、凋亡率明显升高、侵袭能力明显减弱、XIAP蛋白表达量明显降低(均P0.05);阴性对照组各项指标与空白对照组差异均无统计学意义(均P0.05)。结论:miR-519d在胰腺癌细胞中表达下调,miR-519d表达下调有增强胰腺癌细胞增殖和侵袭能力、降低凋亡的作用,该作用可能与其调节XIAP蛋白的表达有关。     

TSA抑制人胰腺癌PANC1细胞生长的实验研究

目的研究去乙酰化转移酶抑制剂TSA对人胰腺癌PANC-1细胞生长的影响及其作用机制。方法用不同浓度的TSA处理PANC-1细胞。MTT法检测肿瘤细胞的增殖;流式细胞仪分析细胞凋亡及细胞周期;Western免疫印迹及荧光定量RT-PCR分析抗凋亡基因bcl-2和肿瘤抑制基因p21WAF1/CIP1的表达。结果TSA作用于PANC-1细胞能明显抑制细胞的增殖,且具有明显的剂量依赖性;TSA处理72 h的PANC-1细胞其早期凋亡率明显提高(P0.05),G0/G1期细胞比例显著升高(P0.05),S期细胞比例显著降低(P0.05)。TSA在转录和翻译水平上能明显下调bcl-2的表达(P0.05),上调p21WAF1/CIP1的表达(P0.05)。结论TSA可以通过诱导胰腺癌细胞的凋亡和周期阻滞而抑制癌细胞生长;其发生机制可能与下调抗凋亡基因bcl-2和上调肿瘤抑制基因p21WAF1/CIP1的表达有关。     

miR-567在胰腺癌细胞中的表达及其作用机制

目的:探讨miR-567在胰腺癌细胞中的表达及其作用。方法:采用qRT-PCR检测正常胰腺导管上皮细胞系HPDE6-C7及胰腺癌细胞系Panc-1、AsPC-1、HPAC、BxPC-3中miR-567表达。Panc-1细胞转染miR-567过表达慢病毒载体后,分别用CCK-8法、流式细胞术、划痕愈合实验、qRT-PCR、Western blot法检测细胞增殖、凋亡及迁移能力,以及KPNA4 mRNA与蛋白的表达、凋亡相关蛋白表达的变化。结果:miR-567在胰腺癌细胞系Panc-1、AsPC-1、HPAC、BxPC-3中的表达水平均明显低于正常胰腺导管上皮细胞系HPDE6-C7(均P0.05);miR-567慢病毒转染Panc-1细胞后,增殖能力明显减弱,凋亡率明显增加,划痕愈合率明显降低、KPNA4 mRNA与蛋白表达明显下调、而caspase-3及Bax蛋白表达明显上调(均P0.05)。结论:miR-567在胰腺癌细胞中表达降低,升高其表达可抑制胰腺癌细胞的生长与迁移能力,其机制可能与下调KPNA4并上调凋亡相关蛋白表达有关。     

Fyn诱导Bcl-X选择性剪切调控胰腺癌细胞凋亡的机制研究

目的:明确非受体酪氨酸激酶Fyn在胰腺癌侵袭转移中的作用;探究Fyn是否参与Bcl-X基因的选择性剪切的调控,并阐明其分子机制。方法:对三种侵袭转移能力不同的胰腺癌细胞进行Fyn激酶活性测定,明确Fyn活性与胰腺癌侵袭转移能力之间的关系。将携带激酶活性缺失的KD-Fyn(Kinase Dead-Fyn)的腺病毒转染Bx PC3胰腺癌细胞,Transwell侵袭实验、TUNEL法分别检测抑制Fyn活性前后Bx PC3侵袭能力以及凋亡水平的改变。RT-PCR检测Bcl-X基因两种剪切体比例的变化。结果:转染KD-Fyn以后,Fyn激酶活性明显下降,降低至正常水平的1/2以下。抑制Fyn活性,转染组穿膜细胞数由原来的108±14降为54±7,明显降低了Bx PC3胰腺癌细胞侵袭运动能力,促进凋亡。RT-PCR证实,抑制Fyn活性明显改变了凋亡相关基因Bcl-X的选择性剪切方式。Bcl-X(s)/Bcl-X(L)的剪切比例由0.57±0.08改变为2.12±0.15。在裸鼠成瘤实验中,转染Fyn的裸鼠成瘤能力为100%(12/12),而转染KD-Fyn的裸鼠成瘤能力降低为16.7%(2/12),抑制Fyn活性可以明显抑制Bx PC3胰腺癌细胞在裸鼠中的成瘤能力。结论:抑制Fyn的激酶活性,可以下调胰腺癌细胞的侵袭转移能力,而这种作用是通过影响Bcl-X基因选择性剪切方式改变,进而影响胰腺癌细胞凋亡实现的。     

miR-526b在胰腺癌中的表达及作用

目的:探讨mi R-526b在胰腺癌中的表达与作用。方法:用q RT-PCR法检测mi R-526b在52例胰腺癌和癌旁组织,以及在4种胰腺癌细胞系(Bx PC-3、SW1990、PANC-1和As PC-1)和正常胰腺导管上皮细胞系(HPDE6-C7)中的表达。将胰腺癌细胞分别转染mi R-526b模拟物、mi R-526b抑制物及阴性对照序列后,采用CCK-8、Transwell实验和流式细胞术分别测定细胞增殖、侵袭与凋亡情况。生物软件和双荧光素酶报告基因法分析mi R-526b潜在靶基因,并用Western blot和q RT-PCR法及相关性分析验证。结果:mi R-526b在胰腺癌组织中表达量明显低于癌旁组织,在4种胰腺癌细胞系中的表达量均明显低于人正常胰腺导管上皮细胞(均P0.05)。胰腺癌细胞转染mi R-526b模拟物后,增殖能力明显降低、细胞凋亡率明显升高、侵袭能力明显减弱,而转染mi R-526b抑制物后则呈反向变化(均P0.05)。分析结果显示XRCC5是mi R-526b靶基因;胰腺癌细胞转染mi R-526b模拟物后,XRCC5的m RNA和蛋白表达均明显下调,mi R-526b抑制物后则均明显上调(均P0.05);胰腺癌组织中mi R-526b和XRCC5 m RNA表达水平呈显著负相关(r=-0.456,P0.05)。结论:mi R-526b在胰腺癌中下调表达,mi R-526b低表达可促进胰腺癌细胞增殖、侵袭并抑制凋亡,机制可能与上调其靶基因XRCC5的表达有关。     

携Jagged 2基因siRNA慢病毒表达载体的构建及其转染对胰腺癌细胞影响

目的:构建携带Jagged 2(JAG2)基因siRNA的慢病毒表达载体,并观察其转染人胰腺癌细胞生物学特性的影响。方法:采用基因重组技术构建若干携JAG2基因siRNA片段的慢病毒表达载体,将其转染经酶解法从胰腺癌组织标本中原代分离的胰腺癌细胞;选择对JAG2基因抑制效率最高的siRNA片段,通过MTT法、流式细胞术、Transwell小室实验观察其转染对原代胰腺癌细胞生长、凋亡、细胞周期及侵袭转移能力的影响。结果:所构建的携JAG2基因siRNA片段的慢病毒表达载体均能不同程度降低原代胰腺癌细胞JAG2 mRNA与蛋白的表达。JAG2 siRNA转染后,胰腺癌细胞的增殖明显降低、凋亡与S期阻滞明显增强、侵袭转移能力明显减弱(均P0.05)。结论:成功构建携JAG2基因siRNA慢病毒表达载体,其转染能有效削弱人胰腺癌细胞的恶性生物学特征。     

转染人高迁移率族蛋白1反义基因对胰腺癌细胞增殖和凋亡的影响

目的　探讨反义高迁移率族蛋白1(HMGB1)基因对人胰腺癌细胞的抑制作用。方法　应用分子克隆技术构建反义HMGB1基因真核表达载体pcDNA3 1/anti HMGB1,用脂质体法将其导入人胰腺癌细胞PANC 1中,经G4 18筛选获得可稳定表达反义HMGB1的人胰腺癌细胞克隆,通过逆转录聚合酶链反应、免疫印迹法和噻唑蓝比色法检测转染4 8h后胰腺癌细胞HMGB1基因表达和体外增殖活性的变化,流式细胞仪检测细胞凋亡及细胞周期情况。结果　获得了pcDNA3 1/anti HMGB1真核表达质粒,pcDNA3 1/anti HMGB1转染可使PANC 1细胞HMGB1mRNA和蛋白表达水平显著降低(P <0 .0 1)、肿瘤细胞增殖能力明显受到抑制(P <0. 0 1) ,并出现细胞周期G1期阻滞、凋亡细胞百分数增加。结论　反义HMGB1基因的表达能有效抑制胰腺癌细胞的体外增殖并促进细胞凋亡。     

转染CXCR7重组质粒对膀胱癌5637细胞株增殖和侵袭的影响

目的 探讨转染趋化因子受体CXCR7对膀胱癌细胞株5637增殖和凋亡的影响.方法 构建CXCR7表达质粒转染膀胱癌5637细胞,并通过四甲基偶氮唑蓝盐比色法(MTT)实验和Transwell小室实验与未转染组进行比较.结果 成功构建了CXCR7慢病毒表达载体.与空质粒组相比,转染CXCR7重组质粒能促进膀胱癌5637细胞中CXCR7的表达,通过MTT表明转染重组质粒组加强细胞的增殖能力和Transwell法检测表明穿过的细胞数显著增加,高表达CXCR7能够促进5637细胞的迁移能力.结论 CXCR7的高表达能提高膀胱癌细胞的增殖和侵袭能力,提示CXCR7与膀胱癌的发生、发展有关.     

沉默FAT10基因抑制人胆囊癌GBC-SD细胞增殖、侵袭及迁移

目的探究电转法沉默FAT10基因的表达对人胆囊癌GBC-SD细胞侵袭、增殖及迁移的影响。方法设计及合成靶向FAT10的siRNA序列(FAT10-siRNA)以及阴性对照序列(NC-siRNA),电转法转染至人胆囊癌GBC-SD细胞,分别形成FAT10-GBC-SD、NC-siRNA-GBC-SD细胞。通过RT-PCR、Western blotting检测电转后细胞中FAT10 mRNA与蛋白的表达情况,流式细胞术检验细胞凋亡及周期,迁移,细胞侵袭实验分别测定细胞增殖,划痕愈合实验,CCK-8增殖实验,以及侵袭的能力。结果 FAT10-GBC-SD细胞中FAT10 mRNA和蛋白表达较NC-siRNA-GBC-SD细胞和空载组(Ctrl-GBC-SD细胞组)显著降低。FAT10-GBC-SD细胞的成长速度显著减慢,细胞周期阻止在G0/G1期,S期细胞数减少;与空载组相比,FAT10-GBC-SD细胞的凋亡率显然升高(P0.05),迁移、增殖、侵袭能力明显下降(P0.05)。结论电转法沉默FAT10基因的表达可抑制胆囊癌细胞的迁移、侵袭及增殖能力。     

神经生长因子、趋化因子受体在神经流通浸润型胰腺癌组织中的表达及其临床意义

目的 观察神经生长因子(NGF)和趋化因子受体(CXCR4)在胰腺癌组织中的表达及其对胰腺癌神经浸润的影响.方法 采用S-100免疫组织化学染色和电镜观察45例胰腺癌组织和28例正常胰腺组织中神经浸润情况,应用免疫组织化学SP法和GMIAS2.0图像分析系统测定NGF、CXCR4蛋白在各组中表达的平均灰度值,利用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)分析NGFmRNA、CXCR4 mRNA在各组中表达水平.结果 胰腺癌神经浸润的发生率达到80%,NGF蛋白在神经浸润型、无神经浸润型胰腺癌组织中表达的平均灰度值分别为(203.6800±20.7749)、(129.2200±15.9874),两者差异有统计学意义(P＜0.05).CXCR4蛋白在神经浸润型胰腺癌组织、无神经浸润型胰腺癌组织中表达的平均灰度值分别为(182.3800±18.3524)、(123.3600±15.2737),两者差异有统计学意义(P＜0.05).胰腺癌神经浸润型NGF mRNA表达水平为(0.7719±0.0634),明显高于胰腺癌无神经浸润型(0.2922±0.0288)和正常胰腺组织(0.2123±0.0231,P＜0.01);胰腺癌神经浸润型CXCR4 mRNA表达水平为(0.6892±0.0573),明显高于胰腺癌无神经浸润型(0.2877±0.0255)和正常胰腺组织(0.2076±0.0204),差异均有统计学意义(P＜0.01).结论 NGF、CXCR4在胰腺癌神经浸润过程中发挥重要作用,其机制可能与促进肿瘤细胞侵袭和生长,诱导肿瘤细胞向神经组织作定向运动有关.     

TAp63在胰腺癌中的表达及意义

目的:探讨TAp63在胰腺癌中的表达及其意义。方法:分别real-time PCR和Western blot检测TAp63 m RNA与蛋白在21例胰腺癌及其配对癌旁组织、3种胰腺癌细胞(PANC-1、CFPAC-1、Bx PC3)及正常胰腺细胞(HPDE6-C7)中的表达;用TAp63-si RNA转染PANC-1细胞后,观察TAp63 m RNA与蛋白表达的变化,并用MTT和Brd U法检测转染后PANC-1细胞的增值情况。结果:胰腺癌组织中TAp63 m RNA表达量明显低于癌旁正常胰腺组织(t=2.572,P=0.0158);TAp63m RNA与蛋白在3种胰腺癌细胞株中的表达量均明显低于正常胰腺HPDE6-C7细胞(均P0.05)。与未处理的PANC-1细胞比较,转染TAp63-si RNA后的PANC-1细胞TAp63 m RNA与蛋白明显降低,但细胞增殖与DNA合成能力均明显增强(均P0.05)。结论:TAp63在胰腺癌组织与细胞中表达降低,且表达量越低,细胞生长能力越强。     

赖氨酰氧化酶样蛋白-2对胰腺癌细胞的影响

目的 观察沉默赖氨酰氧化酶样蛋白-2(LOXL2)基因对胰腺癌细胞的影响.方法 利用脂质体法将构建好的LOXL2-短发卡RNA(shRNA)质粒转染到胰腺癌Panc-1细胞中,应用Western blot检测转染前后胰腺癌Panc-1细胞中LOXL2蛋白表达量的变化,Transwell侵袭实验检测胰腺癌细胞的体外侵袭力,MTT法检测胰腺癌细胞的黏附能力.结果 LOXL2-shRNA转染组Panc-1细胞中LOXL2蛋白表达水平(0.32±0.01)、体外侵袭力[(32.2±3.8)个]、黏附率[(75.4±3.2)％]较转染前[1.05±0.05、68.6±3.5、(90.3±2.1)％,P＜0.05]明显降低.结论 沉默LOXL2基因能抑制胰腺癌Panc-1细胞的侵袭能力和黏附能力.     

CTHRC1在胰腺癌中的表达及其意义

目的:观察胶原三股螺旋重复蛋白1(CTHRC1)在胰腺癌组织中的表达及其对胰腺癌细胞生物学行为的影响。方法:采用实时定量PCR(RT-PCR)方法检测40例胰腺患者癌组织与癌旁组织中CTHRC1的表达。胰腺癌Panc28细胞转染pcDNA3.1-CTHRC1或CTHRC1 siRNA后,以未转染的Panc28细胞为对照,采用克隆形成实验检测CTHRC1对胰腺癌Panc28细胞增殖,伤口愈合实验和Boyden小室检测细胞迁移和侵袭能力。结果:RT-PCR结果显示,胰腺癌组织CTHRC1 mRNA表达水平明显高于癌旁组织(P0.05)。与对照组Panc28细胞比较,转染pcDNA3.1-CTHRC1上调CTHRC1后,Panc28细胞克隆形成数明显增加、伤口宽度百分比明显减少、侵袭的细胞数明显增多,而转染CTHRC1 siRNA下调CTHRC1表达后,Panc28细胞以上指标呈反向变化,差异均有统计学意义(均P0.05)。结论:胰腺癌组织在CTHRC1表达升高,CTHRC1可能通过促进胰腺癌细胞的增殖、迁移和侵袭能力而参与胰腺癌的发生与发展。     

α-龙葵碱通过WNT信号通路抑制曲古抑菌素A-耐药人胰腺癌细胞的上皮-间质转化进程

目的 探究α-龙葵碱对曲古抑菌素A-耐药胰腺癌细胞凋亡、侵袭和迁移能力的影响,探究α-龙葵碱对胰腺癌上皮-间质转化（EMT）的影响。 方法 采用不同浓度的α-龙葵碱（0 μg/mL,2 μg/mL,4 μg/mL和6 μg/mL）处理曲古抑菌素A-耐药胰腺癌细胞,使用Transwell和划痕试验来检测曲古抑菌素A-耐药胰腺癌细胞的迁移和侵袭能力变化。然后,通过RT-PCR和Western blotting检测相关的EMT标记物波形蛋白（vimentin）、E-钙黏蛋白（E-cadherin）、N-钙黏蛋白（N-cadherin）、基质金属蛋白酶2（MMP-2）、β-连环蛋白（β-catenin）、p-β-连环蛋白（p-β-catenin）、Frizzled家族蛋白7（Frizzled7）和糖原合成酶激酶3β（GSK3β）表达情况。结果 与正常对照组（无α-龙葵碱处理）相比,实验组中无毒性剂量下的α-龙葵碱处理后,划痕试验中曲古抑菌素A-耐药胰腺癌细胞的侵袭迁移能力显著降低（P＜0.05）;EMT相关蛋白中,E-钙黏蛋白α表达水平增加（P＜0.05）,N-钙黏蛋白、波形蛋白和MMP-2的表达水平下降（P＜0.05）。此外,实验组中,经α-龙葵碱处理后,曲古抑菌素A-耐药胰腺癌细胞的β-连环蛋白上游基因Fizzled7和GSK3β的表达水平下降（P＜0.05）。结论 本研究结果表明,α-龙葵碱可能通过WNT/β-连环蛋白信号通路来调节曲古抑菌素A-耐药胰腺癌细胞的EMT进程,发挥其抗肿瘤作用。     

甲基化结合域蛋白1调控内质网分子伴侣GRP78对胰腺癌侵袭转移的影响

目的 观察甲基化结合域蛋白1( MBD1)和葡萄糖调节蛋白78( GRP78)在胰腺癌侵袭转移中的作用.方法 检测毒胡萝卜素(Tg)处理后的BxPC-3细胞GRP78的表达及细胞迁移能力的变化;对MBD1-siRNA转染后的BxPC-3细胞MBD1和GRP78的表达、细胞侵袭能力的变化进行分析;免疫组织化学法检测40例胰腺癌组织和15例正常胰腺组织中MBD1和GRP78的表达.结果 Tg处理BxPC-3细胞后,GRP78表达明显上升,细胞的迁移能力增加;MBD1 -siRNA转染Bxpc-3细胞后,MBD1和GRP78的表达同时下降,细胞侵袭力减弱;MBD1和GRP78在胰腺癌中的表达明显高于正常胰腺组织(P＜0.05),两者的阳性表达呈正相关(r =0.594,P＜O.01),并均与淋巴结转移有关(P＜0.05).结论 GRP78可能受到MBD1的甲基化调控,并与胰腺癌的侵袭转移有关.     

长链非编码RNA XIST在胰腺癌中的表达及意义

目的:探讨长链非编码RNAXIST在胰腺癌组织中的表达及其作用。方法:实时定量PCR检测56对胰腺癌及癌旁正常胰腺组织标本中XIST的表达,以及XIST在人胰腺导管上皮细胞(HPDE)及7种胰腺癌细胞系(sPC-3、Bx PC-3、Capan-1、CFPAC-1、Hs766T、Panc-1、SW1990)中的表达,分析XIST表达与胰腺癌患者临床病理因素的关系;在XISTsi RNA干扰XIST高表达的胰腺癌细胞后,分别用MTT法和Brd U实验检测细胞的活力和增殖情况,Westernblot检测细胞中Ki-67、PCNA的蛋白的表达。结果:胰腺癌组织中XIST的表达量明显高于癌旁正常胰腺组织(2.452vs.0.9729,P0.001),且XIST高表达与胰腺癌患者的肿瘤分期(P=0.016)、淋巴结转移(P=0.032)有关。7种胰腺癌细胞系中XIST的表达量均明显高于HPDE细胞(均P0.05),其中SW1990细胞XIST表达量约为HPDE细胞的2.5倍。XISTsi RNA干扰SW1990细胞48h后,与未处理的SW1990细胞比较,细胞的活力(0.812vs.1.215)和增殖能力(0.708vs.1.007)均明显降低,Ki-67(0.467vs.1.027)与PCNA(0.600vs.0.997)的表达均明显下调(均P0.05)。结论:XIST在胰腺癌组织中表达升高,其高表达能促进胰腺癌细胞的生长,机制可能与其上调Ki-67、PCNA表达有关。     

长链非编码RNA HOST2对胰腺癌细胞增殖迁移和侵袭的影响

目的:探讨长链非编码RNA(lncRNA)HOST2对胰腺癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响及机制。方法:qRT-PCR检测正常胰腺上皮细胞系HPDE6-C7及胰腺癌细胞系Panc-1、AsPC-1、BxPC-3、HPAC中lncRNAHOST2表达水平。将Panc-1细胞分别转染siRNA-HOST2(si-HOST2组)和阴性对照序列(阴性对照组)后,用MTT法测定细胞增殖,细胞划痕和Transwell实验测定细胞迁移和侵袭,Westernblot测定上皮-间质转化(EMT)相关蛋白vimentin、Snail、Twist的表达。以无转染的Panc-1细胞为空白对照组。结果:与正常胰腺上皮细胞HPDE6-C7相比,lncRNAHOST2在各胰腺癌细胞系中的表达均明显上调(均P0.05)。与空白对照组比较,si-HOST2组细胞增殖、迁移和侵袭能力均明显减弱,vimentin、Twist1、Snail蛋白相对表达量均明显下调(均P0.05),而阴性对照组上述指标均无明显变化(均P0.05)。结论:lncRNAHOST2在胰腺癌细胞中高表达,且与胰腺癌增殖、迁移和侵袭密切相关,其机制可能与调节EMT相关蛋白的表达有关。     

表皮生长因子介导的NF-κB促进胰腺癌细胞MMP-9表达及侵袭的实验研究

目的 观察表皮生长因子(EGF)对胰腺癌细胞增殖、黏附及侵袭力的影响及其对核因子-κB(NF-κB)和细胞基质金属蛋白酶(MMPs)表达的影响,探讨EGF促进胰腺癌侵袭的相关机理.方法 通过细胞增殖、黏附及侵袭实验,观察在EGF影响下胰腺癌细胞黏附、增殖及侵袭能力变化;通过RT-PCR、MMPs明胶酶谱分析、Western blot及EMSA,检测胰腺癌细胞的MMP-2和MMP-9 mRNA及其蛋白表达以及NF-κB活性变化;并观察NF-κB抑制物吡咯烷二硫代氨基甲酸盐(PDTC)对EGF诱导的胰腺癌细胞NF-κB活性、MMP-9 mRNA及其蛋白表达以及肿瘤细胞侵袭力的变化.结果 EGF能够增强胰腺癌细胞的侵袭能力,具有剂量依赖性(P＜0.05).EGF对胰腺癌细胞的黏附力及增殖力无明显影响.EGF处理后,肿瘤细胞的MMP-9蛋白和mRNA表达明显升高,EGF浓度为50 ng/ml时,肿瘤细胞的MMP-9表达最强,但对MMP-2蛋白和mRNA的表达则无影响.随着EGF浓度的增加,NF-κB活性增强,具有浓度依赖性(P＜0.05).与EGF单独处理相比,经PDTC和EGF共同处理后的胰腺癌细胞NF-κB活性与MMP-9蛋白和mRNA表达均降低;PDTC和EGF共同处理后的胰腺癌细胞侵袭力较EGF单独处理和对照均减弱(P＜0.05).结论 EGF通过激活NF-κB的活性,诱导MMP-9表达,促进胰腺癌细胞的侵袭,而这一过程可以被PDTC抑制.