二甲双胍联合紫杉醇对人乳腺癌细胞凋亡及AMPK信号通路的影响

目的:探索二甲双胍联合紫杉醇对乳腺癌MCF-7细胞活力和凋亡的影响及其可能的机制。方法:采用不同浓度(2、5、10、20、40和80 mmol/L)二甲双胍作用于体外培养的MCF-7细胞,MTT法检测细胞的活力。采用2 mmol/L二甲双胍和2. 4 mg/L紫杉醇单独或联合处理细胞,并加入一磷酸腺苷活化的蛋白激酶(AMPK)信号转导通路抑制剂compound C。实验分为对照组、二甲双胍组、紫杉醇组、联合组和联合+compound C组;流式细胞术检测细胞的凋亡率,采用RT-qPCR和Western blot法检测Bax、Bcl-2和caspase-3的mRNA和蛋白表达量,Western blot检测AMPK和P21蛋白的表达量。结果:不同浓度二甲双胍(2、5、10、20、40和80 mmol/L)显著抑制乳腺癌细胞的活力(P 0. 05),且具有一定浓度依赖性。与对照组相比,2 mmol/L二甲双胍和2. 4 mg/L紫杉醇单独或联合均可显著抑制细胞活力并诱导其凋亡(P 0. 05),显著下调Bcl-2水平(P 0. 05),上调Bax和caspase-3水平(P 0. 05),促进AMPK和P21蛋白表达。联合使用的效果优于单独使用。加入AMPK抑制剂可削弱此作用。结论:二甲双胍联合紫杉醇可抑制乳腺癌MCF-7细胞活力,诱导其凋亡。此作用与激活AMPK信号转导通路并调节细胞凋亡信号通路有关。     

唑来膦酸抑制U937细胞增殖及诱导凋亡

目的:研究唑来膦酸(ZOL)对人类急性髓系白血病细胞U937的增殖抑制及促凋亡作用。方法:CCK-8法检测不同时间ZOL对U937细胞的生长抑制率;流式细胞术检测ZOL对U937细胞周期的影响;Annexin V-PI法及Hoechst 33342法检测ZOL作用前后细胞凋亡情况变化,JC-1检测ZOL对U937细胞线粒体膜电位变化的影响;克隆形成实验检测U937细胞克隆形成能力;Western blot法检测ZOL对U937细胞周期和凋亡相关蛋白的变化。结果:CCK-8结果显示ZOL可以抑制U937细胞的活力,并呈时间-剂量依赖性;Annexin V-PI及Hoechst33342结果显示ZOL可以促进U937细胞凋亡,且呈时间-剂量依赖性;JC-1结果显示ZOL可以明显降低U937细胞线粒体膜电位;PI法证实ZOL将U937细胞周期阻滞在S期,克隆形成实验证实0.2 mmol/L ZOL可以完全抑制U937细胞的克隆形成能力;Western blot结果显示ZOL作用于U937细胞48 h后细胞周期相关蛋白p21表达显著增强,促凋亡蛋白Bax表达增强,抑凋亡蛋白Bcl-2表达明显减弱。结论:ZOL抑制U937细胞的增殖和克隆形成主要是由于抑制了细胞周期相关蛋白表达,同时ZOL可以促进U937细胞凋亡,这种作用主要是通过调节线粒体凋亡途径相关蛋白来实现的。     

槲皮素对U937细胞系抑制增殖和诱导凋亡作用的研究

目的 探讨黄酮类化合物槲皮素（Que）对人类单核细胞白血病U937细胞系的抑制增殖和诱导凋亡的作用。方法 应用MTT法检测不同浓度槲皮素对U937细胞的增殖抑制作用；AO／PI荧光染色后倒置荧光显微镜下观察细胞形态学变化；琼脂糖凝胶电泳测定细胞DNA的片段化；应用流式细胞仪检测细胞凋亡率及细胞周期分布。结果槲皮素能明显抑制U937细胞增殖，并存在剂量-效应关系和时间-效应关系；诱导U937细胞出现凋亡所具有的形态学和生化特征；随着槲皮素浓度升高，凋亡细胞和坏死细胞比例增加；将细胞特异性地阻滞在S期，出现凋亡峰。结论 槲皮素能抑制U937细胞增殖，诱导细胞凋亡，并具有细胞周期特异性。     

冬凌草甲素增强巨噬细胞对凋亡的U937细胞的吞噬作用

目的：研究具有诱导肿瘤细胞凋亡活性的冬凌草甲素，促进巨噬细胞对因凋亡的肿瘤细胞的吞噬作用。 方法： DNA凝胶电泳检测UV照射（2.4 J/cm2, 4 min）的人组织淋巴瘤U937细胞凋亡；Giemsa染色，Hoechst 33258染色，镜下检测计数吞噬作用。 结果： UV照射（2.4 J/cm2, 4 min）诱导U937细胞发生凋亡，琼脂糖凝胶电泳可见凋亡典型的DNA梯带。2.7 μmol·L^-1的冬凌草甲素具有增强U937分化的巨噬细胞对UV照射诱导凋亡的U937细胞的吞噬作用，并呈时间剂量依赖性，但对非特异性荧光颗粒的吞噬效果较弱。加入抗TNFα和抗IL-1β的抗体，培养12 h, 吞噬增强作用明显受抑制。冬凌草甲素在人外周血来源的巨噬细胞吞噬凋亡的U937细胞过程中同样发挥增强吞噬的效果。 结论： 冬凌草甲素可特异地增强巨噬细胞对凋亡的U937细胞的吞噬作用，其吞噬机制是通过诱导巨噬细胞TNFα和IL-1β的释放。     

替米沙坦抑制U937细胞增殖及诱导凋亡

目的:探讨替米沙坦对U937细胞株的生长抑制及凋亡诱导作用。方法:分别以不同浓度的替米沙坦处理人类急性髓系白血病细胞U937;以CCK-8法检测不同浓度替米沙坦对U937细胞的生长抑制作用;以集落形成实验观察不同浓度替米沙坦对U937细胞集落形成能力的影响;以Annexin V-PI双染法及Hoechst 33342染色法检测不同浓度替米沙坦作用前后U937细胞凋亡程度的变化;以流式细胞术检测U937细胞表面抗原CD11b的阳性表达率,瑞氏染色后倒置显微镜进行细胞形态学观察,了解U937细胞的分化情况;以Western blot法检测不同浓度替米沙坦作用U937细胞后凋亡相关蛋白表达量的改变。结果:CCK-8实验结果证实替米沙坦呈时间和剂量依赖性抑制U937细胞的生长;集落形成实验显示低剂量替米沙坦可以完全抑制U937细胞的集落形成能力;Annexin V-PI双染法及Hoechst 33342法结果证实替米沙坦可以诱导U937细胞凋亡;细胞表面抗原流式检测术及瑞氏染色结果证实替米沙坦可以促进部分U937细胞分化;Western blot实验结果证实替米沙坦作用于U937细胞72 h后,促凋亡相关蛋白cleaved PARP及cleaved caspase-3蛋白的水平明显增高。结论:替米沙坦可以抑制细胞增殖以及诱导U937细胞部分分化,并通过caspase依赖的凋亡途径触发U937细胞凋亡。     

二甲双胍对人肝癌细胞Bel-7402增殖与凋亡的影响

目的:研究二甲双胍抑制人肝癌细胞Bel-7402增殖及调亡的影响,并初步探讨其机制。方法:体外培养人肝癌细胞株Bel-7402,以不同浓度的二甲双胍(10mM、20mM、40mM)干预细胞48h。采用MTT法检测药物对细胞增殖的影响;采用Hoechst 33258荧光染色法和流式细胞术检测细胞凋亡;Real-time PCR检测caspase-3、bax和bcl-2的mRNA水平表达。结果:与对照组相比,不同浓度的二甲双胍作用于Bel-7402细胞48h后,MTT结果显示对细胞增殖有明显抑制作用(P0.05);Hoechst 33258荧光染色法显示凋亡细胞明显增多;流式细胞术分析显示二甲双胍可明显诱导Bel-7402细胞凋亡,晚期凋亡率分别为3.76%,8.96%和18.67%;caspase-3、bax和bcl-2的mRNA表达水平均上调(P0.05);以上结果均具有浓度依赖性。结论:二甲双胍能抑制Bel-7402细胞增殖并诱导其凋亡,其机制可能与caspase-3、bax和bcl-2的mRNA表达水平改变有关。     

野生型p53基因导入对U937细胞分化、凋亡和CD36受体表达的影响

目的： 研究野生型p53基因重组腺病毒载体（AdCMV-p53）导入对U937细胞分化、凋亡和清道夫受体CD36表达的影响。 方法： AdCMV-p53导入U937细胞后，用细胞计数、细胞周期分析、台盼蓝染色排除法计数细胞悬液中的活细胞数目和NBT还原反应观察其对U937细胞生长、分化的影响；RT-PCR、免疫荧光和流式细胞分析检测AdCMV-p53导入对CD36表达的影响。 结果： AdCMV-p53可以高效导入U937细胞，野生型p53基因导入促进U937细胞向巨噬细胞分化，台盼蓝染色发现实验组阳性细胞数（64.6±9.2）%较对照组（14.2±5.5）%明显增多，吞噬能力增强；NBT还原反应实验组（49.7±12.6）%较对照组（6.3±1.8）%升高。RT-PCR和流式细胞分析检测，野生型p53基因导入使得CD36 mRNA转录增强，CD36蛋白表达增加。 结论： 野生型p53基因能影响细胞分化和凋亡，并上调清道夫受体CD36的表达，对于动脉粥样硬化的预防和基因治疗具有潜在意义。     

槲皮素对U937细胞系抑制增殖和诱导凋亡作用的研究

目的探讨黄酮类化合物槲皮素(Que)对人类单核细胞白血病U937细胞系的抑制增殖和诱导凋亡的作用.方法应用MTT法检测不同浓度槲皮素对U937细胞的增殖抑制作用;AO/PI荧光染色后倒置荧光显微镜下观察细胞形态学变化;琼脂糖凝胶电泳测定细胞DNA的片段化;应用流式细胞仪检测细胞凋亡率及细胞周期分布.结果槲皮素能明显抑制U937细胞增殖,并存在剂量-效应关系和时间-效应关系;诱导U937细胞出现凋亡所具有的形态学和生化特征;随着槲皮素浓度升高,凋亡细胞和坏死细胞比例增加;将细胞特异性地阻滞在S期,出现凋亡峰.结论槲皮素能抑制U937细胞增殖,诱导细胞凋亡,并具有细胞周期特异性.     

二甲双胍对大鼠脊髓损伤后内质网应激和细胞凋亡的影响

目的:研究二甲双胍(MET)对大鼠脊髓损伤(SCI)后内质网应激(ERS)和细胞凋亡的影响,探讨二甲双胍对SCI的保护作用及机制。方法:成年雌性SD大鼠随机分为3组,分别是假手术组(Sham组)、单纯脊髓损伤组(SCI组)和二甲双胍干预组(MET组)。采用Allen方法制备大鼠SCI模型,MET组和SCI组大鼠建模后,立即腹腔注射MET(50 mg·kg~(-1)·d~(-1))或等量生理盐水,连续处理7天后,取脊髓组织,用实时定量PCR检测各组脊髓组织中葡萄糖调节蛋白78 (GRP78),CCAAT/增强子结合蛋白同源蛋白(CHOP)和半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶-12(caspase-12)的mRNA水平,免疫印迹检测各组脊髓组织中GRP78、CHOP、caspase-12和active caspase-3的蛋白水平,免疫荧光染色检测各组脊髓组织中GRP78、CHOP和caspase-12的蛋白水平,TUNEL染色法检测各组脊髓组织中细胞凋亡水平,BBB评分检测大鼠SCI后运动功能情况。结果:与Sham组相比,SCI组中GRP78、CHOP和caspase-12的mRNA和蛋白水平明显升高,activecaspase-3蛋白表达和细胞凋亡数目明显增加,BBB评分明显降低;与SCI组相比,MET组中GRP78、CHOP和caspase-12的mRNA和蛋白水平明显降低,active caspase-3蛋白表达和细胞凋亡数目明显减少,BBB运动评分明显升高。结论:二甲双胍可以抑制大鼠SCI后细胞凋亡,促进后肢运动功能恢复,其机制可能与抑制ERS有关。     

二甲双胍对成纤维样滑膜细胞增殖及炎性细胞因子分泌的影响

目的:探讨二甲双胍对类风湿关节炎(RA)成纤维样滑膜细胞(FLS)增殖及分泌炎性细胞因子的影响。方法:取我院行关节镜手术治疗的RA患者关节滑膜组织,采用改良组织块法培养原代FLS,用不同浓度二甲双胍(10、20、30μmol/L)干预FLS细胞,分别记为小剂量、中剂量、高剂量组,以常规养的FLS细胞为对照组。采用CCK-8法检测各组细胞处理24h、48h、72h后细胞增殖情况,采用ELISA检测各组细胞处理72h后上清液中促炎细胞因子:肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-17(IL-17)、白细胞介素-6(IL-6)和抗炎细胞因子:白细胞介素-10(IL-10)水平,比较组间各指标水平的差异。结果:与对照组相比,72h后,中剂量组、高剂量组FLS增殖水平均降低(P<0.05);高剂量组上清液中TNF-α、IL-6、IL-17水平降低,IL-10水平升高(P<0.05)。结论:高剂量二甲双胍具有抑制FLS增殖和促炎细胞因子分泌、促进抗炎细胞因子分泌的作用,对治疗RA具有一定的应用价值。     

芹菜素对小鼠T淋巴细胞体外增殖、细胞周期和凋亡的影响

目的:研究芹菜素(AP)对小鼠T 细胞体外增殖、细胞周期和凋亡的影响.方法:无菌分离小鼠淋巴结和胸腺细胞,MTT 法检测不同浓度(25、50、100、150、200 μmol/L)的AP 对多克隆刺激剂刀豆蛋白A(ConA)诱导的T 细胞增殖的影响,PI 染色结合流式细胞术(FCM)分析细胞周期的分布,Annexin V-FITC/PI 双染色结合FCM 检测AP 对T细胞凋亡的影响,以及AP与地塞米松(DEX)共同作用下T 细胞凋亡的变化,并用MTT 法检测该药物浓度对T细胞的毒性作用.结果:25～200 μmol/L AP对T细胞无药物毒性作用,并明显抑制ConA诱导的T 细胞增殖(P<0.01),使细胞周期停滞在G0/G1期,且呈剂量依赖关系;各浓度AP对T细胞凋亡均具有抑制作用,并明显抑制DEX诱导的T细胞凋亡(P<0.01),且呈剂量依赖关系.结论:在一定浓度范围内,AP 明显抑制ConA诱导的小鼠T细胞体外增殖,使细胞周期停滞G0/G1期,并明显抑制T 细胞凋亡.     

Effects of tea constituents on cell cycle progression of human leukemia U937 cells

Tea and tea constituents are known to induce apoptosis in a variety of cancerous cells, suggesting their beneficial effects as chemopreventive agents. Previous studies have shown that low molecular weight constituent catechins and high molecular weight fractions of tea have the apoptosis-inducing activity, but that their action mechanisms may be different. Since cell cycle arrest is known to be one of the underlying mechanisms of apoptosis, we examined the effects of these tea constituents on cell cycle progression of human leukemia U937 cells. The results showed that the high molecular weight fractions of green tea and black tea caused G2/M arrest associated with up-regulation of p21/Waf1, but that epigallocatechin gallate, a major component of green tea catechins, gave little effects of cell cycle progression and p21/Waf1 expression. Thus, the present results suggest the difference in the apoptosis-induction mechanism between the two types of tea constituents.     

线粒体凋亡途径在槲皮素诱导U937 细胞凋亡中的作用研究

目的:观察槲皮素对人急性髓系白血病U937 细胞增殖、凋亡、线粒体膜电位(Δφm),、人B 细胞淋巴瘤因子- 2、人Bcl-2 相关X 蛋白、细胞色素c 表达及半胱氨酸蛋白酶鄄3、半胱氨酸蛋白酶鄄9 活性的影响,探讨线粒体凋亡途径在槲皮素 诱导U937 细胞凋亡中的作用。方法:体外培养U937 细胞,分别以0、10、20、40、80、160μmol/ L 浓度的槲皮素处理24、48 和 72 h,采用细胞计数试剂盒(Cell counting kit-8,CCK-8) 检测槲皮素对U937 细胞增殖的抑制作用;实验随机分为对照组 (Control)、槲皮素10、20 组和40 μmol/ L 组。采用流式细胞仪AnnexinV-FITC/ PI 双染法检测U937 细胞凋亡情况;采用荧光染 料3,3‘-二己基含氧碳菁碘代物[3,3‘-dihexyloxacarbocyanine iodide,DiOC6(3)]染色,流式细胞仪检测U937 细胞的变化; 采用Western blot 检测U937 细胞Bcl-2、Bax、Cytc 表达;采用比色法检测U937 细胞Caspase-3、Caspase-9 活性。结果:槲皮素可 抑制U937 细胞的增殖,抑制率显著升高,且呈时间-剂量依赖性。槲皮素亦可显著抑制U937 细胞凋亡率,与对照组比较(P< 0.01)。槲皮素显著降低U937 细胞驻鬃m,与对照组比较(P<0.01)。槲皮素显著下调U937 细胞Bcl-2 表达,上调Bax 表达,下 调Bcl鄄2/ Bax 比值及上调Cyt c 表达,与对照组比较(P<0.01)。槲皮素显著升高U937 细胞Caspase-3、Caspase-9 活性,与对照 组比较(P<0.01)。结论:槲皮素可显著抑制U937 细胞增殖,线粒体凋亡途径激活是槲皮素诱导U937 细胞凋亡的途径之一。     

Pim-1激酶抑制剂SMI-4a抑制U937细胞增殖并诱导凋亡

目的:研究丝/苏氨酸蛋白激酶Pim-1抑制剂SMI-4a对人类急性髓系白血病细胞株U937的生长抑制、促凋亡作用及其可能机制。方法:CCK-8法检测不同浓度SMI-4a作用不同时间对U937细胞的生长抑制率;Annexin V-PI及Hoechst 33342染色法检测SMI-4a作用前后细胞凋亡情况,集落形成实验检测SMI-4a对U937细胞集落形成能力的影响;Western blot法检测SMI-4a对U937细胞核及细胞浆内β-catenin表达变化及细胞内凋亡相关蛋白的表达变化;免疫荧光法检测β-catenin在细胞内的表达变化。结果:CCK-8结果显示SMI-4a可以抑制U937细胞的活力,并呈时间和剂量依赖性;Annexin V-PI及Hoechst 33342染色结果显示SMI-4a可以促进U937细胞凋亡;集落形成实验证实SMI-4a可以抑制U937细胞的集落形成能力;Western blot实验结果显示SMI-4a作用于U937细胞48 h后细胞浆内的β-catenin表达增加,细胞核内的β-catenin表达减少,细胞内促凋亡蛋白Bax和PARP表达增强,抑凋亡蛋白Bcl-2表达明显减弱;免疫荧光进一步验证了SMI-4a作用后的U937细胞核内的β-catenin表达量明显减少。结论:SMI-4a诱导U937细胞凋亡是通过上调促凋亡基因的表达、下调凋亡抑制基因的表达来实现的。     

Links between apoptosis, proliferation and the cell cycle

Many physiological processes, including proper tissue development and homeostasis, require a balance between apoptosis and cell proliferation. All somatic cells proliferate via a mitotic process determined by progression through the cell cycle. Apoptosis (programmed cell death) occurs in a wide variety of physiological settings, where its role is to remove harmful, damaged or unwanted cells. Apoptosis and cell proliferation are linked by cell-cycle regulators and apoptotic stimuli that affect both processes. This review covers recent developments in the field and examines new evidence of the interconnection between apoptosis and cell proliferation.     

Lidocaine-induced apoptosis and necrosis in U937 cells depending on its dosage

Local anesthetics are known to affect a variety of cellular responses other than the action of anesthetics through the Na(+) channel blockade. In this study, we examined the effect of a common local anesthetic lidocaine on the cellular activity and viability of human histiocytic lymphoma U937 cells. The cellular activity and viability were assessed by WST-1 reduction activity and trypan blue exclusion test, respectively. Induction of apoptosis was monitored by DNA ladder formation, reduction of mitochondrial transmembrane potential (DeltaPsim), caspase-3 activity and nuclear morphology. Lidocaine at concentrations below 12 mM induced apoptosis characterized by DNA fragmentation and chromatin condensation dose- and time-dependently. A pan-caspase inhibitor and a caspase-3 inhibitor blocked DNA ladder formation followed by the reduction of cell death. However, the caspase inhibitors did not affect the DeltaPsim, but cyclosporin A inhibited the collapse of DeltaPsim followed by a reduction of cell death. Lidocaine-induced apoptosis was mitochondria- and caspase-dependent, but the collapse of DeltaPsim was independent of caspase activation. At concentrations above 15 mM, lidocaine induced necrosis with early disruption of membrane integrity. These results indicate that lidocaine induced apoptosis and necrosis in U937 cells depending on its dosage.     

肿瘤特异性凋亡基因诱导人淋巴瘤细胞凋亡的机制

目的:研究肿瘤特异性凋亡基因(apoptingene)在诱导人淋巴瘤细胞U937凋亡时,cJun氨基末端激酶(JNK)信号通路的作用。方法:用含有apoptin基因的真核表达载体,瞬时转染体外培养的人淋巴瘤细胞U937。采用流式细胞仪、Westernblot、台盼蓝染色及RTPCR等研究其在不同时间条件下诱导U937细胞凋亡的作用。结果:Apopin基因瞬时转染U937细胞48h,可出现明显的凋亡;而且凋亡细胞的数量与apoptin基因的转染时间有关。诱导后24h,U937细胞中出现磷酸化的JNK蛋白的表达,诱导后48h达高峰;而非磷酸化的JNK蛋白表达无明显变化。结论:Apoptin基因具有诱导U937细胞凋亡的作用。JNK信号通路的激活,可能在apoptin基因诱导肿瘤细胞凋亡过程中发挥着重要作用。     

甘露聚糖结合凝集素诱导人白血病细胞系U937细胞凋亡

目的研究甘露聚糖结合凝集素（MBL）对白血病细胞系U937凋亡的影响。方法不同浓度MBL处理U937细胞后,应用CCK-8法分析细胞增殖情况,Hoechst33258染色观察细胞核及染色质,AnnexinV/PI双染流式细胞术分析细胞凋亡率,real-timePCR和免疫印迹分析凋亡相关基因及蛋白表达。结果 30～50μg/mlMBL培养72h,U937细胞增殖明显受抑,出现不同程度核固缩、核碎裂;随MBL浓度升高或作用时间延长,凋亡细胞数逐渐增多;Fas、Caspase-3mRNA、Fas和FasL蛋白表达量升高,Caspase-3和多腺苷二磷酸多聚酶（PARP）蛋白被剪切激活或失活。结论 MBL可诱导白血病细胞U937细胞凋亡,其机制与上调Fas表达、剪切Caspase-3和PAPR有关。