曲格列酮对肝癌HepG2细胞生长和分化的影响

目的 探讨过氧化物酶体增殖物活化受体(peroxisome proliferator-activated receptor, PPAR)γ激动剂曲格列酮对肝癌HepG2细胞生长和分化的影响.方法 以曲格列酮处理体外培养的肝癌HepG2细胞,MTT法检测细胞增殖,流式细胞仪检测细胞周期,分化标记物E-钙黏蛋白和清蛋白分别用免疫细胞化学和溴甲酚绿法检测,化学发光法检测肿瘤标记物AFP.Western blot检测细胞周期蛋白Dl、c-myc蛋白的表达.结果 曲格列酮以浓度依赖性方式抑制肝癌细胞生长,使细胞周期明显阻滞于G0/G1,并诱导E-钙黏蛋白表达.经曲格列酮处理后,清蛋白分泌量显著增加,AFP明显下降,细胞周期蛋白Dl、c-myc蛋白表达水平下降.结论 曲格列酮可诱导肝癌细胞分化,抑制其生长,其机制可能涉及下调细胞周期蛋白D1和c-myc蛋白表达.     

乙型肝炎病毒X基因在体内外对肝癌细胞增殖活性的影响

目的 探讨乙型肝炎病毒x(HBx)基因对肝癌细胞增殖活性的影响。方法将携带HBx基因的表达质粒pHA-HBx转染HepG2肝癌细胞,G418筛选阳性细胞克隆,RT-PCR鉴定HBx基因的整合及表达;通过细胞计数,观察HBx基因对肝癌细胞生长曲线和倍增时间的影响;流式细胞术检测细胞周期的变化;^3H-TdR掺入法检测细胞增殖活性;裸鼠接种观察HBx基因在体内对肝癌细胞增殖的影响。结果HBx基因在体内外对HepG2细胞的增殖活性均有明显影响,细胞生长曲线左移,倍增时间缩短;G0／G1。期细胞减少,S期和G2／M期细胞增多;转染后的细胞^3H-TdR掺入率较对照组增高;转HBx基因的裸鼠移植瘤的生长速度较对照组细胞明显加快。结论HBx基因在体内外均可提高肝癌细胞的增殖活性,增加肝癌细胞的恶性表型,加速肿瘤生长。     

腺病毒介导MDA-7/IL-24选择性杀伤肝癌 细胞HepG2的研究

目的 ：观察MDA-7/IL-24基因对肝癌的选择性杀伤作用，为肝癌的基因治疗提供理论基础。 方法 ：将携带人MDA-7/IL-24基因的腺病毒Ad.mda-7感染人正常肝细胞L02和肝癌细胞HepG2;用RT-PCR法观察MDA-7/IL-24基因的表达;ELISA方法检测细胞培养上清液中MDA-7/IL-24蛋白的浓度;4甲基偶氮唑蓝染色法（MTT）及Hoechst染色观察MDA-7/IL-24对肝癌细胞的生长抑制和杀伤作用;Annexin-V和PI双染后流式细胞仪检测2种细胞的凋亡;用流式细胞仪检测细胞周期。 结果 ：复制缺陷型腺病毒能介导外源基因MDA-7/IL-24在肝癌细胞株HepG2和正常细胞L02中的高效表达;细胞培养上清液中有MDA-7/IL-24蛋白的表达; MDA-7/IL-24能明显抑制肝癌细胞生长并可促进肝癌细胞的凋亡;MDA-7/IL-24阻滞肝癌细胞于G2/M期，能选择性杀伤肝癌细胞而对正常的肝细胞无阻滞作用和毒性作用。结论 ：复制缺陷型重组腺病毒载体Ad.mda-7能介导MDA-7/IL-24基因在人肝癌细胞中高效表达，促使细胞增殖阻滞及诱导肿瘤细胞凋亡，选择性地杀伤肝癌细胞HepG2，而对正常肝细胞L02无任何毒性作用。     

重组腺相关病毒介导的MDA-7基因对人肝癌细胞的选择性凋亡诱导效应

目的 探讨PEG启动子调控腺相关病人毒介导的黑色素瘤分化相关基因MDA-7对肝癌细胞的选择性凋亡诱导效应.方法 以重组腺相关病人毒rAAV-PEG-MDA-7表达系统感染人肝癌细胞株HepG2细胞和正常人肝细胞株LO2细胞,Westerm Blot检测转染细胞内MDA-7蛋白,MTT法检测细胞增殖抑制率,流式细胞术分析细胞周期、Annexin-Ⅴ、线粒体跨膜电位(△Ψm),RT-PCR检测bcl-2基因mRNA.结果 重组腺相关病毒rAAV-PEG-MDA7可特异性转染HepG2细胞,MDA7蛋白在HepG2细胞中高效表达,并呈时间依赖性;重组腺相关病毒rAAV-PEC-MDA-7可抑制HepG2细胞增殖并诱导其凋亡,细胞周期分析处于G0/G1期细胞百分比明显增多,处于G2/M期的细胞减少,并且可见到较明显的凋亡峰的形成,从24 h开始Annexin-Ⅴ阳性细胞比例增多,△Ψm降低,抗凋亡基因bcl-2 mRNA表达降低.而重组腺相关病毒rAAV-PEG-MDA-7对LO2细胞无类似效应.结论 构建出的重组腺相关病毒rAAV-PEG-MDA-7表达系统可选择性抑制肝癌细胞增殖和诱导其凋亡,其诱导凋亡机制受到bcl-2家族经线粒体途径的调节.     

miR-144CCNB1信号调节通路在肝癌增殖、迁移和侵袭作用及相关机制的研究

目的探讨microRNA-144细胞周期蛋白B1(miR-144CCNB1)信号调节通路在肝癌增殖、迁移和侵袭作用及其相关机制。方法以2011年1月~2016年1月我院收治的100例肝癌患者的肝癌组织和癌旁组织为研究标本,采用荧光定量PCR(qRT-PCR)法检测肝癌及其癌旁组织的miR-144表达和CCNB1蛋白表达情况,采用RNA干扰技术沉默CCNB1基因,并将靶向CCNB1的siRNA转染至肝癌细胞系HepG2和QGY-7703中,检测其对肝癌细胞生长、迁移和侵袭的生物学行为的影响。结果肝癌组织中miR-144表达较癌旁组织明显下调,CCNB1蛋白在肝癌组织的表达水平较癌旁组织明显上调,miR-144高表达者预后无瘤生存期较其低表达者明显长,而CCNB1蛋白低表达者无瘤生存期明显长于其高表达者,差异有统计学意义(P0.05);与未处理者和阴性对照模拟物相较,转染CCNB1 siR肝癌细胞CCNB1蛋白表达水平明显下降;与未处理和阴性对照模拟物相较,转染CCBN1 siR HepG2细胞凋亡百分明显升高,转染CCNB1 siR HepG2细胞增殖能力明显下降,转染CCNB1siR HepG2细胞迁移能力明显降低;与阴性对照模拟物和未处理细胞相较,转染CCNB1-siR QGY-7703细胞克隆团数(成瘤能力)明显减少。结论 miR-144CCNB1信号调节通路在肝癌增殖、迁移和侵袭中发挥重要作用,其可能机制为miR-144负向调控CCNB1表达,从而影响肝癌细胞增殖、凋亡、迁移等生物学行为,为肝癌治疗的新靶点提供理论依据。     

肝细胞癌高表达新基因BC047440功能的研究

目的探讨肝细胞癌高表达新基因BC047440在肝癌形成中的作用。方法通过DOTAP^TM脂质体介导的转染技术，将BC047440基因反义真核表达载体导入HepG2肝癌细胞，经G418筛选，获得稳定表达BC047440反义基因的HepG2肝癌细胞，采用半定量RT—PCR检测反义基因对转染细胞的内源性BC047440基因抑制效果，噻唑蓝（MTT）比色法观察转染细胞生长曲线及流式细胞术比较细胞周期的变化。结果转染BC047440反义基因的肝癌细胞内源性BC047440基因受到有效抑制，细胞生长速度明显减慢，细胞周期中G1期细胞比例明显增高。结论肝细胞癌高表达基因BC047440可能是一个新的肝癌相关基因，在肝癌中的异常高表达可能对肝癌的发生发展具有一定的促进作用。     

逆转录病毒介导的p16基因治疗原发性肝癌的实验研究

目的 调查转入野生型p16cDNA对肝细胞性肝癌细胞生物学行为的影响。方法 构建p16基因的逆转录病毒表达载体pCLXSN-p16。完成病毒包装后，分别感染p16表达阴性与阳性的肝癌细胞株，并筛选出各自稳定表达株，观测转基因后外源P16蛋白的表达及肿瘤细胞的生长情况。并检测肿瘤细胞的凋亡与生长周期。结果 我们包装产生的pCLXSN-p16假病毒具有感染肿瘤细胞并表达外源P16蛋白的功能，p16表达阴性的细胞SNU-449转入野生型p16基因后，细胞生长速度明显减慢，G0-G1期细胞明显多于转基因前，而p16表达阳性的细胞HepG2.2.15，转入外源p16cDNA后，其生长状况及细胞周期则未见明显改变，就SNU-449与HepG2.2.15细胞株而言，转入p16cDNA后，其生长状况及细胞周期则未见明显改变，就SNU-449与HepG2.2.15细胞株而言。转入p16cDNA均未能诱导细胞凋亡。结论 转入外源p16基因可抑制P16蛋白表达阴性的肝癌细胞的生长。     

Bcl-2家族蛋白在Ad．mda-7介导HepG2细胞凋亡中的变化

目的 观察Bcl-2家族蛋白在Ad．mda-7介导HepG2细胞凋亡中的变化，初步探讨Ad．mda-7介导肝癌细胞的凋亡机制。方法将携带人MDA-7／IL-24基因的腺病毒转染HepG2和ID2，通过四甲基偶氮哩蓝染色法（MTr）及Hoechst染色观察MDA-7／IL-24对肝癌细胞HepG2和正常肝胚细胞ID2的生长抑制和杀伤作用。AnnexinV和PI双染后流式细胞仪检测细胞的凋亡。蛋白免疫印迹法（Western blot）检测Bcl-2家族蛋白的变化。结果Ad．mda-7能明显抑制肝癌细胞HepG2的生长，但对正常肝胚细胞ID2没有明显抑制增殖作用。Hoechst染色和流式细胞仪提示Ad．mda-7能明显诱导肝癌细胞HepG2细胞的凋亡，但对正常肝胚细胞ID2没有明显毒副作用。Westernblot说明抑制凋亡的蛋白Bcl-2和Bcl-xl的表达在HepG2明显下降，在ID2中则没有变化；而促凋亡蛋白Bax在HepG2和ID2都升高。结论Ad．mda-7转染HepG2后，促凋亡（Bax）与抑凋亡蛋白（Bcl-2和Bcl-xl）的比率发生改变，进而发生凋亡。     

乙型肝炎病毒x蛋白促进裸鼠人肝癌模型的VEGF表达

目的探讨乙型肝炎病毒x蛋白(HBx)促进肝癌细胞增殖的作用机制。方法将编码HBx基因全长的表达质粒pHA-HBx转染肝癌HepG2细胞,用G418筛选阳性克隆;采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)鉴定HBx基因在HepG2细胞基因组的整合;分别用转染HBx基因前后的细胞建立肝癌裸鼠模型,观察两组裸鼠肿瘤组织生长增殖状况;采用免疫组织化学染色方法检测两组裸鼠肿瘤组织中VEGF的表达。结果 HBx基因成功整合入肝癌HepG2细胞基因组;转染HRx基因前后的两组HepG2细胞在裸鼠体内的接种成瘤率均为100％;转染HBx基因的肿瘤生长速度较未转染组明显加快;接种8周后,转染组肿瘤体积(2．86±0．34)cm3,未转染组为(2．48±0．22)cm3,两组间差异有统计学意义(t=1．905,P<0．05);转染组肿瘤组织中VEGF的表达较对照组明显增强(x2= 7．66,P<0．01)。结论 HBx可促进裸鼠肝癌组织VEGF表达,增加肝癌细胞的增殖活性,加速肿瘤组织生长。     

甘露糖敏感型绿脓杆菌制剂对肝癌细胞周期的作用机制研究

目的 探讨甘露糖敏感性绿脓杆菌制剂(pseudomonasaeruginosa mannose sensitive haemagglutination vaccine,PA-MSHA)对肝细胞癌(hepatocellular carcinoma,HCC)细胞周期的作用及其机制.方法 培养人肝癌细胞株MHCC97L及HepG2,以不同剂量的PA-MSHA作用于肝癌细胞.MTT实验检测PA-MSHA对细胞增殖的影响.流式细胞技术检测PA-MSHA对细胞周期的作用.Western blot检测PA-MSHA作用前后细胞周期蛋白Cyclin D1、细胞周期蛋白依赖性激酶2(CDK2)、增殖细胞核抗原(proliferating cell nuclear antigen,PCNA)以及细胞周期蛋白激酶抑制剂p21和p27的表达情况.结果 与对照组相比,PA-MSHA显著抑制MHCC97L和HepG2细胞的增殖,其作用呈剂量及时间依赖性(P＜0.05).PA-MSHA显著诱导肝癌细胞周期阻滞,PA-MSHA作用后G0-G1期和G2-M期细胞比例显著增高,而S期细胞比例则显著下降(P＜0.05).PA-MSHA显著抑制Cyclin D1、CDK2、PCNA蛋白的表达,而促进p21和p27的表达.外源性甘露糖可显著抑制PA-MSHA对肝癌细胞增殖和周期的作用(P＜0.05).结论 PA-MSHA通过调控细胞周期相关蛋白来诱导HCC细胞周期阻滞,抑制细胞增殖.这一作用是通过肝癌细胞表面的甘露糖的介导实现的.     

启动子区甲基化对miRNA-122表达及肝癌细胞增殖和凋亡的影响

目的 探讨DNA甲基化对肝特异性miRNA-122表达调控以及肝癌细胞增殖和凋亡的影响.方法 甲基化测序检测肝细胞中miRNA-122启动子区的甲基化状态.实时定量PCR检测肝细胞中miRNA 122表达水平.流式细胞仪与CCK8检测去甲基化对肝癌细胞增殖和凋亡的影响.结果 与人原代正常肝细胞[(21.9±11.4)％]比较,Huh7、HepG2、QSG-7701细胞系miRNA-122启动子区的甲基化程度[分别为(87.6±9.3)％、(89.0±14.3)％、(69.5±11.5)％],均明显升高(P=0.000),尤其以Huh7、HepG2两种癌细胞系升高最为明显.与人原代正常肝细胞[(2.83×104±3746)]比较,三种细胞系miRNA-122的表达明显下降,其中以Huh7和HepG2两种癌细胞系降低最明显(P=0.007).与空白对照比较,在10 μmol/L的5氮杂-2′-脱氧胞苷作用下,Huh7和HepG2两种癌细胞系甲基化程度明显降低(P=0.038,0.025);而其miRNA-122表达明显升高(P=0.008,0.003).与空白对照组比较,Huh7细胞与HepG2细胞经去甲基化处理后细胞的凋亡均明显增加(P=0.001,0.027).结论 肝特异性miRNA-122的表达受DNA甲基化的明显调控,且与肝癌细胞的凋亡密切相关.miRNA122的甲基化调控可能参与了肝癌的发生和发展.     

miR-18a-3p在肝癌中的表达及其调控ADCY1表达对肝癌细胞侵袭及增殖的影响

背景与目的 研究表明多种microRNA（miRNA）可能在肝癌的发生发展中发挥重要作用,其作用机制仍值得进一步研究和探讨。因此,本研究从已报道的肝癌差异表达miRNA中进一步筛选关键miRNA,并验证和探讨其作用机制。方法 从已发表的研究中筛选出肝癌组织及肝癌患者血清/血浆中与正常肝组织及正常血清/血浆中共同的差异表达miRNA;用qRT-PCR在正常肝细胞与肝癌细胞中对筛选出的目标miRNA表达情况进行验证;用过表达和抑制的方法观察目标miRNA对肝癌细胞侵袭能力（Transwell实验）与增殖能力（MTT实验）的影响,以及在30例临床标本中检测目标miRNA的表达并通过KM plotter网站分析其对肝癌患者生存的影响;通过miRDB和GEPIA数据库预测和分析目标miRNA的靶基因,并用逆转实验和双荧光素酶报告实验进一步验证。结果 在肝癌组织（vs.正常肝组织）及肝癌患者血清/血浆（vs.正常人血清/血浆）中共同高表达的miRNA有4个（miR-18a-3p、miR-221-3p、miR-222-3p、miR-224-3p）,共同低表达的miRNA有2个（miR-26a-3p、miR-125b-3p）。qRT-PCR实验证实,与正常肝细胞比较,miR-18a在肝癌细胞中高表达,miR-26a在肝癌细胞中低表达（均P<0.05）。过表达/抑制miR-18a-3p表达能促进/降低肝癌细胞的侵袭及生长能力（均P<0.05）,而过表达/抑制miR-26a-3p对肝癌细胞的侵袭及生长能力影响无不法确定。分析结果显示,ADCY1是miR-18a-3p的靶基因,过表达ADCY1能部分逆转miR-18a-3p对肝癌细胞的上述作用,同时,表达上调的miR-18a-3p能通过结合到ADCY1 mRNA 3''UTR抑制ADCY1的表达。结论 miR-18a-3p可能在肝癌的发生发展中起了关键作用,其在肝癌中表达上调,并能通过抑制下游靶基因ADCY1的表达增强进肝癌细胞的侵袭和增殖能力。     

乙型肝炎病毒x蛋白对人肝癌细胞增殖和凋亡的影响

目的探讨乙型肝炎病毒x蛋白 (hepatitisBvirusxprotein ,HBx)在体内外对人肝癌细胞增殖和凋亡的影响。方法将携带HBx基因的表达质粒 pHA HBx转染HepG2细胞 ,通过检测细胞生长曲线、倍增时间和3 H TdR掺入率观察HBx对细胞增殖活性的影响 ;将整合HBx基因的HepG2细胞接种裸鼠 ,建立表达HBx的人肝癌裸鼠模型 ,用阿霉素进行裸鼠腹腔化学药物治疗 ,观察肝癌组织的生长状况 ;用TUNEL方法检测切除的裸鼠癌标本中凋亡细胞的比例。结果转染HBx基因的HepG2细胞倍增时间为 2 8 5h ,对照组为 32 5h ;3 H TdR掺入率 :转染HBx基因组为 (10 2 1± 78)cpm ,对照组为 (85 9± 6 9)cpm ,转染组细胞明显高于对照组细胞 (t =2 5 4 ,P <0 0 1) ;转染HBx基因的细胞在裸鼠体内形成的癌重量为 (3 10± 0 39) g ,对照组癌重量为 (2 6 1± 0 2 8) g ,两组之间差异有显著意义 (t=2 0 3,P <0 0 5 ) ;裸鼠腹腔化学药物治疗后 ,转染组的癌细胞凋亡为 3 5±0 75 ,对照组为 2 2 5± 6 5 ,转染HBx基因的细胞凋亡明显减少 (χ2 =6 6 9,P <0 0 1)。结论HBx可以提高HepG2细胞的增殖活性 ,促进裸鼠体内肝癌生长 ,对阿霉素诱导的肝癌细胞凋亡具有抑制作用。     

HCCR-2反义核酸对肝癌HepG2细胞的作用

目的 研究反义HCCR-2真核表达载体对肝癌HepG2细胞增殖及凋亡的影响.方法 构建反义HCCR-2真核表达载体(反义载体组),转染肝癌HepG2细胞,G418筛选阳性克隆,同样方法获得空载体pIRES2-EGFP稳定表达的细胞株(空载体组),取肝癌HepG2细胞为对照(肝癌HepG2组),用MTT法、流式细胞仪、透射电镜观察反义HCCR-2转染前后肝癌HepG2细胞生长曲线、细胞周期、细胞凋亡及细胞形态的变化.采用单因素方差分析和χ2检验比较各组差异.结果 反义载体组、空载体组、肝癌HepG2组HCCR-2 mRNA表达水平分别为0.39±0.04、0.62±0.06、0.72±0.03,3组比较差异有统计学意义(F=43.701,P<0.05);细胞凋亡率分别为13.30%、2.51%、2.07%,反义载体组与空载体组、肝癌HepG2组比较,差异有统计学意义(χ2=6.793,8.721,P<0.05);反义载体组细胞生长减慢,阻滞于G0/G1期.结论 HCCR-2反义核酸真核表达载体能抑制HCCR-2 mRNA的表达,促进细胞凋亡,HCCR-2蛋白可能参与肝癌细胞的周期调控,并与细胞的生长增殖有关.     

miR-124靶向调控Notch 1通路影响肝癌细胞的增殖和迁移

[摘 要] 目的 探索微小RNA-124（miR-124）通过Notch1信号通路对肝细胞性肝癌（HCC）细胞增殖和迁移的影响。方法 将肝癌细胞HepG2和人正常肝细胞HL7702作为受试对象。采用实时荧光定量PCR（qRT-PCR）法检测细胞中miR-124的表达。HepG2细胞转染miR-124模拟物（miR-124 mimic）后,CKK-8法检测细胞增殖活性,Transwell法检测细胞迁移能力。Western blotting检测Notch1信号通路表达。结果 在HepG2细胞中,miR-124表达低于人正常肝细胞HL7702[（1.00±0.00） vs （21.32±1.02）;P < 0.05];与对照组（无处理的HepG2细胞）相比,miR-124 mimic转染组中Hep G2细胞增殖明显降低[（0.44±0.01） vs（0.21±0.01）;P < 0.05],细胞迁移能力也降低[（12.00%±2.00%） vs （5.67%±1.52%）;P < 0.05];miR-124过表达可以明显抑制Hep G2细胞内Notch1信号通路蛋白表达[（100.00%±0.00%） vs （36.46%±2.36%）;P <0.05]。结论 本研究显示,miR-124可靶向抑制Notch1表达,进而抑制HCC的增殖和迁移。     

RhoA基因沉默对肝癌HepG2细胞增殖和迁移能力的影响

目的 构建RhoA-siRNA表达载体,研究其对肝癌HepG2细胞肿瘤生物学行为的影响.方法 利用pGenesil-1 质粒构建RhoA-siRNA表达载体,以脂质体法转染至肝癌HepG2细胞中建立稳定细胞系,并分为3组.转染 pGenesil-1-RhoA-siRNA 载体者为HepG2/RhoA-siRNA组,转染随机对照载体者为HepG2/control组,未转染的肝癌HepG2细胞作为HepG2组.Western blot检测RhoA-siRNA对其蛋白表达的抑制情况.分别采用MTT法、细胞划痕损伤和平板克隆形成实验检测转染细胞的增殖、迁移和生长潜能,流式细胞仪检测细胞周期变化.采用单凶素方差分析、x2检验比较各组差异.结果 3组细胞蛋白表达水平比较,HepG2/RhoA-siRNA组RhoA蛋白的表达明显下调(F=178.19,P<0.05).HepG2/control组和HepG2组细胞划痕损伤在48 h内愈合,而HepG2/RhoA-siRNA组则不能愈合.HepG2/RhoA-siRNA组克隆形成率低于HepG2组和HepG2/control组,分别为39%±3%、67%±5%、70%±6%,其差异有统计学意义(χ2=33.34,38.69,P<0.05).RhoA基因沉默显著抑制肝癌HepG2细胞的增殖,细胞周期中G0/G1期细胞数量增多而S期细胞数量减少(F=70.46,76.57,P<0.05).结论 RhoA-siRNA表达载体能抑制肝癌HepG2细胞的增殖和迁移,可为肝癌的基因治疗提供新的方法.     

siRNA沉默Livin基因表达对肝癌细胞HepG2生物学行为的影响

目的：研究应用siRNA沉默Livin基因表达后肝癌细胞HepG2的生物学功能变化。方法：用脂质体lipofectamineTM2000将携带Livin基因的siRNA载体转染至HepG2细胞内,RT—PCR、Westernblot检测转染前后Livin基因mRNA和蛋白质的表达改变;流式细胞技术（FCM）和TUNEL检测转染前后肝癌细胞凋亡变化。结果：RT—PCR及Westernblot检测发现转染siRNA后Livin基因的mRNA和蛋白质表达均明显下降（P〈0．05）;FCM检测发现实验组、阴性对照组和空白组肝癌细胞HepG2在G1期所占比例分别是（58．994-1173）％、（41．85±2．82）％、（41．25±1．24）％,实验组与其他两组比较差异均有统计学意义（P〈0．05）;TUNEL技术检测表明实验组肝癌细胞HepG2凋亡数目明显增加,细胞凋亡率为（67．56±2．56）％,凋亡率明显高于阴性对照组（27．21±12．58）％和空白组（14．09±5．16）％（P〈0．05）。结论：在肝癌细胞HepG2中,Livin基因沉默具有诱导肝癌细胞凋亡、抑制肝癌细胞生长的作用。【关键词】癌,肝细胞·肝癌细胞,HepG2·siRNA·基因,Livin     

Rab17蛋白影响HepG2细胞增殖的研究

目的以人肝癌细胞HepG2为研究模型,探讨Rab17蛋白对其细胞增殖的影响。方法通过Western blot技术检测永生化肝细胞系(LO2)和肝癌细胞系(HepG2、SMMC-7721、Bel-7402)中Rab17的蛋白表达水平,再分别将靶向Rab17的小干扰RNA和Rab17过表达质粒转染于HepG2中,观察二者对HepG2细胞增殖以及其相关周期蛋白C-myc、Cyclin D1表达的影响。结果 Western blot结果表明,与永生化细胞系相比较,肝癌细胞系中Rab17表达水平显著降低。在HepG2中沉默Rab17的表达,可以增加周期蛋白C-myc和Cyclin D1的表达,促进其细胞增殖,而过表达Rab17则表现为对HepG2增殖的抑制作用。结论肝癌细胞中Rab17的蛋白表达水平明显低于永生化肝细胞,上调其表达对肝癌细胞的增殖有抑制作用。     

细胞周期素D1反义cDNA治疗肝癌的研究

目的 通过基因反义封闭技术抑制细胞周期素D1（CydinD1）的表达，研究其对肝癌细胞增殖以及成瘤性的影响。方法 以肝癌HepG2细胞株为研究对象，通过转染可表达CyclinD1反义互补脱氧核苷酸（AScDNA）的质粒后，观察CyclinD1反义cDNA对肝癌细胞CyclinD1基因表达、体外增殖活性及裸鼠体内成瘤性的影响。结果 噻唑蓝（MTT）法检测细胞增殖活性显示转染表达反义CydinD1的质粒后，HepG2细胞的增殖受到抑制．抑制作用在48h左右最强；逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）检测显示CyclinD1 mRNA基因的表达明显被抑制；间接免疫荧光检测结果显示CyclinD1蛋白表达显著降低；流式细胞仪检测结果显示G0／G1期的细胞比例增高，G2＋M和S期的细胞比例下降，HepG2细胞周期在G1期被阻滞；裸鼠成瘤试验显示肝癌HepG2细胞的成瘤性受到明显抑制。结论 CyclinD1反义cDNA可以特异性的抑制肝癌HepG2细胞株CyclinD1蛋白的表达，从而调控细胞周期，抑制肝癌细胞增殖及体内成瘤性。CyclinD1反义cDNA对于肝细胞癌的生物治疗具有一定的应用前景。     

miR-96的表达对肝细胞癌细胞迁移和侵袭的影响

目的:探讨miR-96在肝细胞癌(HCC)细胞中的表达及作用。方法:用qRT-PCR测定miR-96在不同HCC细胞系(HepG2、7721、huh7)及正常肝细胞系L02中的表达;将HepG2细胞分别转染miRNA随机序列(阴性对照组)、miR-96模拟物(miR-96模拟物组)和miR-96抑制物(miR-96抑制物组)后,用细胞划痕实验及Transwell细胞侵袭实验分别检测细胞迁移及侵袭能力,qRT-PCR及Western blot分别测定PTPN9 mRNA及蛋白的表达。结果:miR-96在各肝癌细胞系中的相对表达量均明显高于其在正常肝细胞系L02的相对表达量(均P0.01)。与阴性对照组比较,细胞划痕愈合率在miR-96模拟物组明显升高,而在miR-96抑制物组明显降低(均P0.05);侵袭细胞数在miR-96模拟物组明显增多,而在miR-96抑制物组明显减少(均P0.05);PTPN9 mRNA与蛋白相对表达量在miR-96模拟物组均明显下调,而在miR-96抑制物组均明显上调(均P0.05)。结论:miR-96在HCC细胞中表达升高,并可能通过下调PTPN9表达促进HCC细胞的迁移与侵袭。