CircNRIP1调节miR-193b-3p/STMN1轴对胃癌细胞顺铂耐药性的影响

目的:探究CircNRIP1调节miR-193b-3p/STMN1轴对胃癌细胞AGS顺铂(DDP)耐药的影响。方法:培养AGS与AGS/DDP细胞,比较两种细胞增殖抑制率以及CircNRIP1、mi R-193b-3p、STMN1表达情况;将AGS/DDP细胞分为AGS/DDP组、sh NC组、sh CircNRIP1组、sh CircNRIP1+inhibitor NC组、sh CircNRIP1+mi R-193b-3p inhibitor组,测定各组AGS/DDP细胞增殖抑制率、凋亡率、侵袭能力以及STMN1蛋白水平;测定mi R-193b-3p与CircNRIP1、STMN1靶向关系。结果:与AGS细胞比较,AGS/DDP细胞CircNRIP1、STMN1 m RNA与蛋白水平升高,细胞增殖抑制率、miR-193b-3p降低(P<0.05);与AGS/DDP组相比,sh CircNRIP1组细胞增殖抑制率、凋亡率、mi R-193b-3p升高,侵袭细胞数、CircNRIP1、STMN1 m RNA与蛋白减少(P<0.05);与sh CircNRIP1组相比,sh CircNRIP1+miR-193b-3p inhibitor组细胞增殖抑制率、凋亡率、miR-193b-3p降低,侵袭细胞数、CircNRIP1、STMN1 m RNA与蛋白升高(P<0.05);miR-193b-3p与CircNRIP1、STMN1均存在靶向关系。结论:沉默AGS/DDP细胞中CircNRIP1表达,可靶向mi R-193b-3p/STMN1抑制AGS/DDP细胞增殖、侵袭,促进AGS/DDP细胞凋亡,实现AGS/DDP细胞对DDP耐药的逆转。     

DADS胃癌细胞中NADPH氧化酶的作用及其调控机制

目的:探讨二烯丙基二硫(DADS)对胃癌细胞NADPH氧化酶活性的影响及其机制。方法:用DADS作用于胃癌AGS细胞后,检测细胞NADPH氧化酶活性与mi R-34a的表达,以及SrcGab1-Shp2通路的活性,期间采用不同的干预,分析NADPH氧化酶、mi R-34a、Src-Gab1-Shp2通路之间的关系。结果:DADS作用后,AGS细胞NADPH氧化酶活性以及mi R-34a表达均明显升高(均P0.05),而DADS升高NADPH氧化酶活性的作用被添加Src激酶抑制剂PP2所取消;DADS或mi R-34a作用后,AGS细胞Src、Gab1、Shp2 m RNA的表达均明显降低(均P0.05),且DADS作用后,AGS细胞中磷酸化Src、Gab1、Shp2蛋白水平明显降低(均P0.05)。结论:DADS能升高NADPH氧化酶活性,该作用可能与其上调mi R-34a表达,从而抑制Src-Gab1-Shp2通路活性有关。     

miR-137与胃癌侵袭能力的关系研究

目的:探讨胃癌组织mi R-137的表达及其与胃癌细胞侵袭能力间的关系。方法:用q RT-PCR检测胃癌组织与癌旁组织mi R-137的表达,分析mi R-13表达与胃癌临床病理特征的关系;分别用q RT-PCR与Transwell侵袭实验检测3种胃癌细胞(AGS、SGC7901、BGC823)及正常胃黏膜细胞(GES1)mi R-137的表达与穿膜。结果:胃癌组织中mi R-137表达量明显低于癌旁组织(P<0.05),mi R-137表达与胃癌患者T分期有关,T分期越高mi R-137表达量越低(P<0.05);各胃癌细胞mi R-137表达量均低于正常胃黏膜细胞,且胃癌细胞侵袭力越强胃癌细胞mi R-137表达量越低(P<0.05);穿膜细胞数与mi R-137表达量之间呈明显负相关(r=-0.8881,P<0.05)。结论:胃癌组织mi R-137表达降低,且mi R-137表达量越低提示胃癌细胞侵袭能力越强。     

p27^kipl高表达对前列腺癌PC-3细胞增殖和侵袭转移的影响

目的探讨外源性人p27kip1的高表达对前列腺癌PC-3细胞增殖和侵袭能力的影响.方法利用携带人p27kip1基因的腺病毒(Ad-p27kip1)体外转染人前列腺癌PC-3细胞,逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)、Western印迹法分别检测目的基因不同水平的表达,通过细胞生长试验、流式细胞仪分析技术以及Boyden小室法检测PC-3转染前后细胞增殖、细胞周期、细胞凋亡和细胞体外侵袭力的变化.以Ad-X-gal病毒作为对照.结果 RT-PCR、Western印迹法检测转染Ad-p27kip1后PC-3细胞的p27kip1-mRNA(320bp)、p27蛋白(27×103)表达阳性,转染后对PC-3细胞的生长有抑制作用,出现明显的G0-G1期阻滞,早期细胞凋亡率有所增加,与对照组比较差异有显著性,Boyden小室法检测转染后体外侵袭力受到明显抑制.结论重组腺病毒介导的人p27kip1基因在体外对前列腺癌细胞系PC-3的细胞增殖和侵袭力有明显抑制作用,可望作为前列腺癌基因治疗的有效工具.     

miR-106a-5p在胃癌细胞和胃癌组织中的表达及其调控靶基因信号通路富集分析

目的检测mi R-106a-5p在胃癌细胞和胃癌组织中的表达并分析其表达与胃癌患者临床病理特征的关系,并采用生物信息学方法分析其靶基因及其富集的信号通路。方法采用实时荧光定量PCR法检测mi R-106a-5p在正常胃黏膜上皮细胞GES-1和不同分化程度的胃癌细胞AGS(高分化)、MKN-28(中分化)、HGC-27(未分化)、MGC-803(低分化)、BGC-823(低分化)、MKN-45(中分化)及SGC-7901(中分化)和组织(58例胃癌组织及其相应的距离癌灶5 cm以上且经HE染色证实均无癌细胞的癌周组织)中的表达,采用mir WALK网站数据库的预测软件预测其靶基因并选择3个以上软件支持的靶基因,运用DAVID 6.7软件在线富集选择的靶基因参与的信号通路。结果与正常胃黏膜上皮细胞GES-1比较,mi R-106a-5p在不同分化程度的胃癌细胞AGS、SGC-7901、MKN-45、MGC-803、BGC-823及HGC-27中的表达量明显上调(P0.010或P0.001),而在MKN-28细胞中未见上调(P0.050)。与相应的癌旁组织比较,mi R-106a-5p在胃癌组织中的表达量在36例中表达上调(即高表达),在18例中表达下调(即低表达),4例变化不明显。mi R-106a-5p在胃癌组织中表达与淋巴结转移(P=0.003)和侵犯深度(P=0.034)有关,而与胃癌患者的年龄、性别、组织学分化程度、TNM分期、淋巴管侵犯、血管侵犯及Borrmann分型无关(P0.050)。生物信息学分析结果提示,mi R-106a-5p的靶基因富集存在于与肿瘤相关的31个信号通路中。结论 mi R-106a-5p在胃癌细胞系及胃癌组织中高表达并与淋巴结转移以及浸润深度有关,其有可能作为一具备潜在研究价值的癌基因。     

microRNA-199b-5p在尤文肉瘤细胞系中的功能研究

目的探讨microRNA-199b-5p(mi R-199b-5p)在尤文肉瘤细胞系中的功能,分析其作用机制,以期为临床生物学治疗提供理论依据。方法取人尤文肉瘤细胞系A673、TC252,分别以mi R-199b-5p寡核苷酸片段(mimic)及其阴性对照(mimic control)转染,作为实验组及对照组。实时荧光定量PCR检测mi R-199b-5p m RNA相对表达量,并与MSCs比较;细胞计数试剂盒8法检测mi R-199b-5p对细胞增殖的影响;流式细胞术法检测对细胞周期及凋亡的影响。双荧光报告基因实验初步检测mi R-199b-5p可能作用的靶基因,Western blot验证靶基因。结果实时荧光定量PCR检测示,对照组A673细胞及TC252细胞中的mi R-199b-5p m RNA相对表达量与MSCs相比均显著下降(P0.05),与实验组对应细胞相比亦显著下降(P0.05)。与对照组对应细胞相比,实验组处于G1期细胞明显增多,S期细胞明显减少,比较差异均有统计学意义(P0.05);而两组G2/M期细胞无明显差异(P0.05)。实验组细胞凋亡率与对照组对应细胞相比显著增高(P0.05)。双荧光报告基因实验检测mi R-199b-5p可能作用的靶基因是细胞周期调节蛋白1(cyclin-L1,CCNL1)和c-Kit。Western blot检测显示,与对照组对应细胞相比,实验组CCNL1和c-Kit蛋白相对表达量明显下调,差异均有统计学意义(P0.05)。结论 mi R-199b-5p能抑制尤文肉瘤细胞增殖,阻滞细胞周期转换,促进细胞凋亡,其抑制作用是通过靶向CCNL1和c-Kit实现的。     

miR-526b在胰腺癌中的表达及作用

目的:探讨mi R-526b在胰腺癌中的表达与作用。方法:用q RT-PCR法检测mi R-526b在52例胰腺癌和癌旁组织,以及在4种胰腺癌细胞系(Bx PC-3、SW1990、PANC-1和As PC-1)和正常胰腺导管上皮细胞系(HPDE6-C7)中的表达。将胰腺癌细胞分别转染mi R-526b模拟物、mi R-526b抑制物及阴性对照序列后,采用CCK-8、Transwell实验和流式细胞术分别测定细胞增殖、侵袭与凋亡情况。生物软件和双荧光素酶报告基因法分析mi R-526b潜在靶基因,并用Western blot和q RT-PCR法及相关性分析验证。结果:mi R-526b在胰腺癌组织中表达量明显低于癌旁组织,在4种胰腺癌细胞系中的表达量均明显低于人正常胰腺导管上皮细胞(均P0.05)。胰腺癌细胞转染mi R-526b模拟物后,增殖能力明显降低、细胞凋亡率明显升高、侵袭能力明显减弱,而转染mi R-526b抑制物后则呈反向变化(均P0.05)。分析结果显示XRCC5是mi R-526b靶基因;胰腺癌细胞转染mi R-526b模拟物后,XRCC5的m RNA和蛋白表达均明显下调,mi R-526b抑制物后则均明显上调(均P0.05);胰腺癌组织中mi R-526b和XRCC5 m RNA表达水平呈显著负相关(r=-0.456,P0.05)。结论:mi R-526b在胰腺癌中下调表达,mi R-526b低表达可促进胰腺癌细胞增殖、侵袭并抑制凋亡,机制可能与上调其靶基因XRCC5的表达有关。     

胃癌细胞中长链非编码RNA CCAT2的表达及其作用

目的:探讨长链非编码RNA(lnc RNA)CCAT2在胃癌细胞中的表达及其作用。方法:用q RT-PCR检测胃癌细胞系AGS、Hs746T和BSG823及正常胃黏膜上皮细胞GES-1中CCAT2的表达,将胃癌AGS细胞分别转染CCAT2si RNA(si-CCAT2组)与阴性对照si RNA(阴性对照组)后,以无转染的AGS细胞为空白对照,CCK-8法检测细胞的增殖情况,并分别用流式细胞术分、细胞划痕和Trans well实验、Western blot检测si-CCAT2组与阴性对照组的凋亡情况、迁移和侵袭能力以及凋亡相关蛋白的表达。结果:各胃癌细胞系中CCAT2相对表达量均明显高于正常胃黏膜上皮细胞GES-1(均P0.05);转染后72、96h,si-CCAT2组的增殖能力明显低于空白对照组与阴性对照组(均P0.05),而阴性对照组与空白对照组各时间点增殖能力均无明显差异(均P0.05);与阴性对照组比较,si-CCAT2组细胞凋亡率明显升高、划痕愈合率明显降低、侵袭细胞数明显减少(均P0.05);P53、caspase-8、Bax蛋白表达上调,Bcl-2表达下调(均P0.05)。结论:CCAT2在胃癌细胞中高表升高,敲低其表达可抑制胃癌细胞的增殖及迁移与侵袭能力,机制可能与其调控凋亡相关蛋白的表达有关。     

整合素αvβ6在胃癌AGS细胞增殖和凋亡中的作用

目的：研究整合素αvβ6在胃癌AGS细胞增殖和凋亡中的作用。方法：用单克隆抗体10D5封闭AGS细胞表面αvβ6功能,并采用10D5的阴性对照剂鼠IgG2a处理细胞作为阴性对照。MTT法检测细胞增殖,流式细胞仪检测细胞凋亡,Westernblot检测caspase-3蛋白的表达情况。结果：用10D5封闭αvβ6后,10D5组AGS细胞的存活率较对照组和IgG2a组下降,而凋亡率和caspase-3的表达水平则增加,差异均有统计学意义（P〈0.05）。IgG2a组与对照组相比差异无统计学意义（P〉0.05）。结论：整合素αvβ6表达促进胃癌AGS细胞增殖并抑制其凋亡。     

曲古抑菌素A诱导膀胱癌细胞p27kip1、XIAP表达的实验研究

目的 观察组蛋白去乙酰化酶(HDAC)抑制剂曲古抑菌素A(TSA)对体外培养膀胱癌细胞生长情况及相关基因(p27kip1、XIAP)表达的影响,并探讨其可能的作用机制.方法 采用MTT法检测不同浓度TSA(100、200、400、800nmol/L)对人膀胱癌BIU-87细胞生长的影响;流式细胞术(FCM)检测TSA处理后膀胱癌细胞周期分布的变化及对膀胱癌细胞凋亡的影响;Western blot检测TSA作用BIU-87细胞后p27kip1、XIAP蛋白表达的变化.结果 TSA体外能明显抑制BIU-87细胞的生长,且抑制作用呈明显的剂量、时间依赖性.FCM检测示处理后膀胱癌细胞阻滞于G0-G1期,Western blot结果示TSA处理能显著诱导p27kip1蛋白的表达和显著抑制XIAP蛋白的表达.结论 TSA可通过诱导细胞凋亡,使细胞阻滞于G1期而发挥体外抗膀胱癌作用,其作用机制可能涉及相关基因(p27kip1、XIAP)表达的调控.     

microRNA-451对人脑胶质瘤细胞株A172增殖和凋亡的影响

目的 观察microRNA-451(miR-451)对胶质瘤细胞株A172增殖和凋亡的影响.方法 合成寡核苷酸miR-451拟似物(miR-451 mimics)转染A172细胞,实时聚合酶链反应(Real-time PCR)检测转染后miR-451的表达,Western blot法检测蛋白表达,应用流式细胞术、噻唑蓝(MTT)比色法和Annexin Ⅴ法评价miR-451对A172细胞生长、增殖和凋亡的影响.结果 与对照组比较,miR-451 mimics转染组细胞miR-451表达升高＞6倍;Western blot法显示癌基因AKT1表达下降到(43.81±5.20)%、Cyclin D1(56.09±3.40)%和bcl-2(63.49±3.70)%,抑癌基因p27表达升高到(145.51±6.70)%;细胞周期G0/G1期细胞增多达17.4%,出现G0/G1期阻滞;MTT法分析显示细胞生长受抑＞35%;Annexin Ⅴ法检测显示细胞凋亡明显升高＞15%.结论 miR-451可抑制人脑胶质瘤细胞生长和增殖,诱导细胞凋亡,具有抑瘤作用.     

microRNA-124对胃癌细胞增殖与凋亡的影响及其与PI3K/Akt信号通路的关系

背景与目的:研究显示,microRNA-124(miR-124)在多种肿瘤中发挥抑癌基因的功能,并且在胃癌细胞及组织中表达下调,在胃癌的发生发展中发挥重要调控作用。本研究探讨miR-124对人胃癌细胞增殖、凋亡的影响及其与PI3K/Akt信号通路的关系。方法:用qRT-PCR检测人胃癌细胞系MGC803、AGS、MNK-45、SGC-7901和人正常胃黏膜上皮细胞GES-1中miR-124的表达。用miR-124模拟物(miR-124模拟物组)及miR-124阴性对照序列(阴性对照组)分别转染至MGC803细胞后,用CCK-8法及细胞克隆实验检测MGC803细胞增殖情况,流式细胞术检测细胞凋亡,Western blot检测PI3K、Akt、p-PI3K和p-Akt蛋白水平,qRT-PCR检测PI3K和Akt mRNA 表达。结果:与人正常胃黏膜上皮细胞GES-1比较,miR-124在各胃癌细胞中的表达均明显降低(均P0.05)。与阴性对照组比较,miR-124模拟物组转染后的OD450值与细胞克隆形成数均明显降低(P0.05);细胞凋亡率明显增加(P0.05);PI3K/Akt信号通路中关键分子PI3K、Akt、p-PI3K和p-Akt蛋白水平明显降低(均P0.05),PI3K和Akt基因表达水平也明显降低(均P0.01)。结论:miR-124表达的下调可促进胃癌细胞的增殖、抑制其凋亡,该作用机制可能与PI3K/Akt信号通路活化有关。     

microRNA-31对AGS人胃癌细胞增殖、迁移及其LRH-1表达的影响

目的 探索microRNA-31 （miR-31） 的高表达对AGS人胃癌细胞生物学行为及其成纤维细胞核受体 （LRH-1） 蛋白表达的影响,并探索miR-31调控胃癌发生和发展的机理。方法 将AGS细胞分为3组,分别给予转染miR-31 （MT组）、转染miR-31阴性对照序列即空脂质体 （NC组） 及滴加PBS溶液 （BC组） 处理。分别采用细胞增殖和细胞毒性试剂盒 （CCK-8试剂盒）、流式细胞仪和Transwell实验检测3组细胞的增殖、凋亡、细胞周期和细胞迁移情况。采用Western blot法检测3组细胞中LRH-1蛋白的表达水平;采用双荧光素酶报告系统检测miR-31的作用位点。结果 CCK-8实验结果显示,转染4 d后,MT组、NC组及BC组细胞A450值的均值分别为1.31、2.26和2.14,MT组较低（P＜0.01）;流式细胞仪检测结果表明,MT组、NC组及BC组细胞凋亡率的均值分别为39.5%、9.3%和10.0%,G1＋S期细胞比例分别为92.54%、73.23%及74.58%,MT组的该2个指标均较高（P＜0.05）;Transwell实验结果表明,MT组的迁移细胞数低于NC组及BC组（P＜0.05）。Western blot结果表明,MT组细胞LRH-1蛋白的表达较BC组和NC组下调（P＜0.01）。结论 上调miR-31的表达对AGS细胞的增殖具有明显的抑制作用,且可促进其凋亡并降低细胞的迁移能力;miR-31可使LRH-1蛋白的表达下调,推测LRH-1基因可能是miR-31参与胃癌发生和发展的靶标之一。     

miR-362-3p的表达及其靶基因与胆囊癌恶性特征的关系

目的:探讨miR-362-3p在胆囊癌中的表达及功能。方法:用qRT-PCR检测手术切除的44例胆囊癌患者手术标本中miR-362-3p的表达,并分析其表达与胆囊癌临床病理特征及预后的关系。miR-362-3p模拟物转染胆囊癌细胞后,分别用MTT法、细胞划痕试验及Transwell侵袭试验观察细胞增殖、迁移及侵袭的改变。通过生物信息学方法及双荧光素酶报告基因试验分析miR-362-3p的靶基因,并采用补救试验验证。结果:miR-362-3p在胆囊癌组织的表达明显低于相应癌旁组织(P0.05)。miR-362-3p的低表达与肿瘤TNM分期、淋巴结转移及远处转移明显有关(均P0.05)。低表达miR-362-3p患者总体生存率较高表达miR-362-3p患者明显降低(P0.05)。转染miR-362-3p模拟物后,胆囊癌细胞的增殖,迁移及侵袭能力明显减弱(均P0.05)。Nemo样激酶(NLK)被确定为miR-362-3p的潜在靶基因,转染NLK过表达载体后,miR-362-3p模拟物对胆囊癌细胞的上述作用被明显逆转(均P0.05)。结论:miR-362-3p在胆囊癌中表达下调,下调的miR-362-3p减少了对靶基因NLK的抑制,从而促进了胆囊癌细胞的增殖、迁移和侵袭。     

p27kip1高表达对前列腺癌PC-3细胞增殖和侵袭转移的影响

目的　探讨外源性人p2 7kip1的高表达对前列腺癌PC 3细胞增殖和侵袭能力的影响。方法　利用携带人p2 7kip1基因的腺病毒 (Ad p2 7kip1)体外转染人前列腺癌PC 3细胞 ,逆转录 聚合酶链反应 (RT PCR)、Western印迹法分别检测目的基因不同水平的表达 ,通过细胞生长试验、流式细胞仪分析技术以及Boyden小室法检测PC 3转染前后细胞增殖、细胞周期、细胞凋亡和细胞体外侵袭力的变化。以Ad X gal病毒作为对照。 结果　RT PCR、Western印迹法检测转染Ad p2 7kip1后PC 3细胞的p2 7kip1 mRNA(3 2 0bp)、p2 7蛋白 (2 7× 10 3 )表达阳性 ,转染后对PC 3细胞的生长有抑制作用 ,出现明显的G0 G1期阻滞 ,早期细胞凋亡率有所增加 ,与对照组比较差异有显著性 ,Boyden小室法检测转染后体外侵袭力受到明显抑制。结论　重组腺病毒介导的人 p2 7kip1基因在体外对前列腺癌细胞系PC 3的细胞增殖和侵袭力有明显抑制作用 ,可望作为前列腺癌基因治疗的有效工具。     

p27kip1基因逆转录病毒载体的构建及其对人胃癌细胞系生长抑制作用的研究

目的：研究逆转录病毒介导的p27^kip1基因过度表达对细胞周期和细胞增殖的影响。方法：构建含人p27^kip1基因的逆转录病毒真核表达载体，应用脂质体介导法，将外源性p27^kip1基因转染人胃癌细胞系BGC－823，应用Western blot,FCM等方法，检测p27^kip1蛋白在胃癌细胞内的表达及其对细菌胶殖的影响。结果：获得含人p27^kip1 cDNA的重组逆转录病毒载体，外源性野生型p27^kip1基因整合于胃癌细胞并获稳定表达，细胞生长速度受抑制，同时出现G1期阻滞。结论：构建的p27^kip1重组逆转录病毒能有效介导外源性p27^kip1在人胃癌细胞系中高表达，抑制细胞增殖，为进一步研究以p27^kip1为目的基因的肿瘤基因治疗奠定了基础。     

miR-204对TFAM的靶向调控作用及其对乳腺癌细胞生长与增殖的影响

目的:探讨乳腺癌细胞中miR-204对线粒体转录因子A(TFAM)的靶向调控作用及其与细胞生长、增殖的关系。方法:将人乳腺癌MDA-MB-231细胞分别转染mi R-204模拟物或miR-204抑制物,用real-time PCR和Western blot分别检测mi R-204与TFAM蛋白的表达;构建荧光酶报告基因质粒(mut-TFAM/wt-TFAM),将其与mi R-204模拟物或miR-204抑制物共转染MDA-MB-231细胞后检测荧光酶活性变化;构建pc DNA3.1/TFAM质粒,将其单独或与mi R-204模拟物共转染MDA-MB-231细胞后检测TFAM蛋白表达,并用MTT法和Brd U法检测细胞生长与增殖情况。结果:MDA-MB-231细胞转染mi R-204模拟物后mi R-204的表达明显升高,而TFAM蛋白表达明显降低,转染miR-204抑制物后则呈反向变化(均P0.05)。wt-TFAM与mi R-204模拟物共转染时荧光酶活性明显下降,与mi R-204抑制物共转染时荧光酶活性明显升高(均P0.05)。转染pc DNA3.1/TFAM后,MDA-MB-231细胞的TFAM m RNA及蛋白表达量明显上调,细胞生长与增殖能力明显升高(均P0.05);mi R-204模拟物后,MDA-MB-231细胞在TFAM表达降低的同时,细胞生长与增殖能力明显降低,而与pc DNA3.1/TFAM共转染后其上述作用均被部分抵消(均P0.05)。结论:mi R-204能靶向抑制乳腺癌细胞TFAM的表达,从而抑制乳腺癌细胞的生长与增殖。     

miRNA-186-5p的表达与结肠癌细胞恶性表型的关系

目的:探究miRNA-186-5p在结肠癌中的表达与功能。方法:用q PCR检测20例配对的结肠癌与其癌旁组织标本,以及正常肠上皮NCM460细胞与不同结肠癌细胞系(HCT-116、HRT-18、HT-29)中miRNA-186-5p的表达;分别用miRNA-186-5p模拟物或阴性对照组序列转染HCT-116细胞后,用CCK-8实验、平板克隆形成实验、划痕实验及Transwell侵袭实验检测细胞增殖、迁移和侵袭情况。结果:miRNA-186-5p在结肠癌组织中的表达明显低于相应癌旁组织中的表达,在各结肠癌细胞系中均明显低于正常肠上皮NCM460细胞(均P0.05);与转染阴性对照序列的HCT-116细胞比较,转染miRNA-186-5p模拟物的HCT-116细胞,细胞增殖能力明显降低、克隆形成数明显减少(114.0个vs.311.7个)、划痕愈合率明显降低(28.7%vs.77.0%)、侵袭细胞数明显减少(119.3个vs.259.7个),差异均有统计学意义(均P0.05)。结论:miRNA-186-5p在结肠癌组织中低表达或缺失,恢复miRNA-186-5p的表达水平能抑制结肠癌细胞的恶性表型,提示miRNA-186-5p在结肠癌中发挥抑瘤作用。     

MiR-29a通过调节HuR影响前列腺癌细胞的生物学行为

目的 研究前列腺癌中miR-29a 对HuR表达的调节，进而影响细胞增殖、迁移、侵袭、凋亡。方法 通过实时荧光定量（qRT-PCR）和免疫印迹法（Western blot）检测在正常前列腺上皮细胞RWPE-1和激素非依赖性前列腺癌细胞PC-3内miR-29a、人抗原R(HuR) mRNA和蛋白的表达水平；miR-29a mimics(模拟剂)、inhibitor（抑制剂）和NC miRNA(对照剂)转染PC-3细胞48 h后检测miR-29a、HuR mRNA和蛋白的表达水平。细胞增殖试剂盒(CCK-8)、迁移和侵袭实验（Transwell小室）、流式细胞术分别检测PC-3细胞被转染后细胞增殖、迁移侵袭、凋亡的改变。结果 与RWPE-1细胞相比，PC-3细胞中miR-29a的表达下调，HuR mRNA和蛋白的上升（P<0.05）。与对照组相比，miR-29a mimics(模拟剂)、inhibitor（抑制剂）转染PC 3细胞后HuR mRNA无改变，但是能够改变HuR蛋白的表达（P<0.05）。MiR-29a能够抑制细胞增殖、迁移、侵袭，促进细胞凋亡（P<0.05）。结论 在前列腺癌PC-3细胞中，miR-29a通过调节HuR蛋白的表达，进而对细胞增殖、迁移、侵袭、凋亡产生影响。     

miR-7-5p抑制胰腺癌细胞放疗后加速再增殖的体外实验研究

目的 研究放疗后濒死胰腺癌细胞（PANC-1）释放的微小RNA-7-5p（miR-7-5p）对存活PANC-1加速再增殖效应的相关机制。方法 通过慢病毒感染,建立荧光素酶标记的PANC-1-LUC胰腺癌细胞放疗后加速再增殖模型。通过RT-qPCR检测miRNA-7-5p的表达水平,流式细胞仪检测细胞周期及凋亡,双荧光素酶法验证miR-7-5p靶基因,Western blotting检测γH2A.X与DDIT4 蛋白的表达情况。结果 miR-7-5p在受辐照PANC-1（10 Gy）濒死细胞上清中表达下调,受辐照PANC-1细胞与存活PANC-1-LUC细胞共培养,可促进放疗后存活PANC-1-LUC细胞加速再增殖及其DNA损伤修复,而上调miR-7-5p可抑制放疗后胰腺癌细胞PANC-1-LUC再增殖。进一步研究表明,miR-7-5p在胰腺癌细胞中通过靶向下调DDIT4通路促进凋亡信号。结论 受辐照胰腺癌细胞可通过下调miR-7-5p促进DDIT4表达,从而抑制细胞凋亡及调控细胞周期再分布来加速再增殖,表明提高miR-7-5p的水平能够提高胰腺癌细胞的放疗敏感性,这将为改善胰腺癌放疗抵抗提供了一种新的思路和方法。