黄芪多糖对LPS 诱导流产大鼠子宫巨噬细胞的影响及机制研究

目的:探讨黄芪多糖对细菌脂多糖(LPS)诱导流产大鼠子宫巨噬细胞的影响及机制。方法:36 只妊娠大鼠根据随机数字法分为对照组、模型组(LPS 处理组)和黄芪多糖组(LPS+黄芪多糖处理组),每组12 只。采用免疫组织化学染色法测定各组大鼠子宫CD14+巨噬细胞,采用酶组织化学法测定子宫非特异性酯酶阳性(α-NAE+ )细胞,采用酶联免疫吸附测定(ELISA)法测定子宫单核细胞趋化蛋白(MCP-1)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)含量。结果:对照组、模型组、黄芪多糖组大鼠胚胎吸收率和流产率比较差异有统计学意义(P<0.05),模型组和黄芪多糖组大鼠胚胎吸收率和流产率高于对照组,黄芪多糖组大鼠胚胎吸收率和流产率低于模型组。模型组和黄芪多糖组大鼠环肌外层、环肌内层和功能层CD14+ 巨噬细胞和α-NAE+巨噬细胞高于对照组(P<0.05),黄芪多糖组大鼠环肌外层、环肌内层和功能层CD14+ 巨噬细胞和α-NAE+ 巨噬细胞低于模型组(P<0.05)。模型组和黄芪多糖组大鼠MCP-1、TNF-α含量高于对照组(P<0.05),黄芪多糖组大鼠MCP-1、TNF-α含量低于模型组(P<0.05)。结论:黄芪多糖通过影响子宫巨噬细胞对LPS 诱导的大鼠流产具有保护作用,其机制可能为黄芪多糖抑制MCP-1 生成,MCP-1 调节巨噬细胞的分布和数量,阻止TNF-α过量生成,从而对子宫局部免疫微环境发挥调节作用。     

槲皮素对细菌脂多糖诱导流产小鼠子宫蜕膜巨噬细胞功能的影响

目的:探讨槲皮素对细菌脂多糖(LPS)诱导流产小鼠的免疫抑制机制及其保胎作用。方法:将孕鼠随机分为对照组和实验组,对照组为PBS处理组,实验组分别为LPS流产模型组、槲皮素处理组、槲皮素+LPS处理组。每组小鼠分别在末次注射后的1、3、6、12、24h脱颈椎处死,剖腹取其子宫,观察妊娠结果。免疫组织化学方法检测CD14~+巨噬细胞数量和CD14表达量,ELISA方法检测肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)的含量。结果:模型组小鼠流产率和胚胎吸收率均为100%,槲皮素+LPS处理组流产率降低为40%,胚胎吸收率降至36.18%。与对照组相比,槲皮素+LPS组小鼠子宫蜕膜组织CD14~+巨噬细胞数量、CD14表达量、TNF-α和MCP-1的含量均显著增加。与模型组相比,槲皮素+LPS组小鼠各时间点CD14~+巨噬细胞数量及CD14表达量、TNF-α和MCP-1的含量均显著降低。结论:槲皮素通过抑制MCP-1的生成,从而阻止巨噬细胞向子宫内膜迁移,并且下调CD14的表达,减少TNF-α的分泌,是其对抗LPS诱导流产的免疫作用机制之一。     

红藤对LPS诱导流产小鼠的保胎作用及子宫巨噬细胞的影响

目的:探讨红藤对细菌脂多糖(LPS)诱导流产小鼠的保护作用及其免疫药理机制。方法:昆明种小鼠55只,随机分为对照组(A组,10只)和实验组。实验组又分为LPS处理组(B组)、红藤处理组(C组)、红藤及LPS双处理组(D组),每组各15只。观察妊娠结果,并用酶组织化学、免疫组化、ELISA方法检测子宫非特异性酯酶阳性(α-NAE+)、CD14+、CD204+巨噬细胞和TNF-α的变化。结果:小鼠流产率在B组为100%(P<0.01),胚胎吸收率为100%(P<0.01);而D组流产率降低为13.33%,胚胎吸收率降至12.56%;孕鼠子宫α-NAE+、CD14+巨噬细胞数量,B组子宫各部位与A组相比均显著增多(P<0.01);D组环肌外侧与A组相比显著增多(P<0.01),但环肌内侧、功能层无明显变化,C、D组CD204+巨噬细胞数量与A组、B组相比均显著增多(P<0.01);子宫TNF-α含量B组与A组相比显著增加(P<0.01),而D组接近正常水平。结论:红藤可以对抗LPS所致的小鼠流产,通过影响孕鼠子宫巨噬细胞的数量、分布和亚群,抑制TNF-α的分泌,是其保护胚胎正常发育的机理之一。     

孕酮对小鼠子宫巨噬细胞数量及膜受体CD14、CD204表达的影响

目的 探讨孕酮对子宫巨噬细胞数量及其膜受体CD14、CD204表达的影响,以及孕酮和巨噬细胞在子宫局部免疫中的作用。 方法 1. 25只正常非孕鼠随机分为空白对照组、阴性对照组和低、中、高3个不同浓度孕酮处理实验组,每组5只。低、中、高浓度实验组每天分别皮下注射0.4mg、2.0mg、4.0mg孕酮,阴性对照组注射等体积芝麻油,连续注射5d;空白对照组不做任何处理。2.孕4d和5d小鼠各15只,分别随机分为空白对照组、阴性对照组和实验组,每组5只。实验组分别于当天早晨皮下注射4mg孕酮,阴性对照组注射等体积芝麻油,空白对照组不做任何处理。以上各组均于末次注射后6h取子宫,通过非特异性酯酶（α-NAE）染色和免疫组织化学检测子宫α-NAE⁺ 、CD14⁺ 、CD204⁺巨噬细胞的变化。 结果 与对照组相比,注射孕酮后,非孕鼠子宫内膜、肌层和外膜的αNAE⁺及CD14⁺巨噬细胞极显著减少（P<0.01）,并与剂量呈正相关,但未检测到CD204⁺巨噬细胞;孕4d、5d小鼠子宫α-NAE⁺ 、CD14⁺ 、CD204⁺巨噬细胞均显著增多（P<0.01）。 结论 孕酮可通过调节巨噬细胞数量、分布及膜受体的表达影响子宫局部免疫状态,替代途径活化的巨噬细胞可能介导了妊娠期母胎免疫耐受的维持。     

益母草碱对LPS诱导小鼠腹腔巨噬细胞炎症反应的调控作用

目的研究益母草碱对脂多糖(LPS)诱导小鼠腹腔巨噬细胞炎症反应的调控机制。方法 MMT法检测巨噬细胞活性;Griess法检测NO的释放量;ELISA法检测IL-1β、IL-6、TNF-α的释放量;qRT-pCR法检测iNOS、MCP-1、IL-1β、IL-6、TNF-α、TLR2、TLR4、MyD88、NF-κB的mRNA的表达量。结果益母草碱极显著提高了巨噬细胞的MTT活力(P<0.01);益母草碱能显著促进巨噬细胞NO和IL-1β、TNF-α的释放(P<0.05,P<0.01)。在LPS刺激下,巨噬细胞极显著提高了NO、IL-1β、IL-6、TNF-α的释放(P<0.01),而益母草碱能显著抑制由LPS刺激造成的NO、IL-1β和IL-6、TNF-α的过度释放(P<0.05,P<0.01)。与LPS组比较,益母草碱+LPS组中TLR2的mRNA表达无显著变化(P>0.05),而TLR4、My D88、NF-κB的m RNA表达量显著下调(P<0.01)。结论益母草碱对LPS诱导的小鼠腹腔巨噬细胞的炎症反应具有调控作用,机制可能与其能够...     

交感神经及其递质去甲肾上腺素对小鼠子宫巨噬细胞CD14和CD204表达的抑制作用

目的:研究交感神经在小鼠子宫局部免疫中的作用。方法:昆明种雌性小鼠,实验组连续5d腹膜腔注射6-羟多巴胺(6-OHDA)进行交感神经阻断实验,分别于注射后第1、3、5、7、9、14天取子宫;所有小鼠腹膜腔注射6-OHDA阻断交感神经,之后实验组每天腹膜腔注射5、10、25μg去甲肾上腺素(NE)进行NE处理实验,在注射的第5天取子宫。免疫组织化学检测子宫巨噬细胞膜受体CD14和CD204的表达。结果:与对照组相比,交感神经阻断后子宫内膜、肌层和外膜CD14~+巨噬细胞均显著增多,CD14表达显著上调;对照组和实验组第1天未检测到CD204的表达,其余各组均有CD204的表达,且表达量随着时间推移而增多,第9天达到高峰。各实验组注射NE后,子宫CD14~+、CD204~+巨噬细胞显著减少,CD14、CD204表达显著下调,中、高浓度组下调较明显。结论:交感神经及其递质NE可以通过调节巨噬细胞数量和膜受体CD14、CD204的表达参与子宫局部免疫状态的维持。     

α-MSH对脂多糖诱导小鼠腹腔巨噬细胞CD14和TLR4 mRNA 表达的影响

目的：观察α-黑色素细胞刺激素(α-MSH)对脂多糖（LPS）诱导小鼠腹腔巨噬细胞CD14和TLR4 mRNA表达的影响，探讨α-MSH拮抗LPS的作用机制。方法：用半定量逆转录多聚酶链反应（RT-PCR）的方法检测LPS诱导体外培养的小鼠腹腔巨噬细胞CD14和TLR4 mRNA表达水平和给予α-MSH后对CD14和TLR4 mRNA表达的影响。结果：正常静息小鼠腹腔巨噬细胞只表达少量的CD14和TLR4 mRNA,给予LPS刺激后6 h，两者表达明显强于正常对照（P<0.01），并且其表达量随着LPS刺激时间的增加维持在高水平，24 h达到峰值，在48 h CD14 mRNA的表达降到正常水平，而TLR4 mRNA的表达仍然维持在高水平。在LPS刺激的同时给予α-MSH，CD14和TLR4 mRNA的表达则明显低于LPS组（P<0.05），而且α-MSH这种效应与其使用浓度有关，0.1 nmol/L α-MSH不影响LPS诱导的CD14和TLR4 mRNA的表达，而当α-MSH的浓度达到1、10、100 nmol/L则能显著影响CD14和TLR4 mRNA的表达（P<0.05），但各个浓度组之间的作用没有明显差别（P>0.05）。结论：α-MSH抗LPS的效应可能与其下调LPS信号转导通路关键受体CD14和TLR4 mRNA的表达有关，从而干扰LPS跨膜信号转导，阻碍巨噬细胞活化。     

NOD8对LPS诱导巨噬细胞释放NO、TNF-α和IL-1β的影响

 目的： 探讨NOD8对脂多糖（LPS）诱导巨噬细胞释放一氧化氮（NO）、肿瘤坏死因子α（TNF-α）和白细胞介素1β（IL-1β）的影响。方法： pEGFP-C2及pEGFP-NOD8重组质粒分别转染小鼠巨噬细胞RAW264.7,以LPS刺激RAW264.7细胞0、6、12、24 h后,采用Griess reagent法测定观察细胞分泌的NO水平;ELISA法检测IL-1β 和 TNF-α 的含量;荧光法测定活化的caspase-1水平; Western blotting检测NOD8蛋白表达及NF-κB  p65亚基的核转位情况。结果： (1)与转染pEGFP-C2空质粒组比较,转染pEGFP-NOD8质粒组NOD8蛋白表达明显增加。(2) LPS刺激6、12、24 h后,RAW264.7细胞释放NO、IL-1β及TNF-α均明显增加;而在pEGFP-NOD8+LPS组RAW264.7细胞, NO于12、24 h 的释放显著降低,IL-1β于6、12、24 h的释放也明显降低,TNF-α的释放则无明显变化。（3）在LPS刺激6、12、24 h后, RAW264.7细胞caspase-1活化水平均明显升高,胞浆NF-κB p65亚基表达明显减少,表明p65核转位增加;而pEGFP-NOD8+LPS组可显著抑制caspase-1的活化以及NF-κB p65亚基的核转位,差异有统计学意义。结论： NOD8可抑制LPS诱导的巨噬细胞NO与IL-1β释放,其作用机制可能与NOD8抑制caspase-1及NF-κB 的活化有关。     

TRPV1激活对内毒素血症小鼠肺组织炎症损伤的影响及机制

 目的：探讨用辣椒素（CAP）激活瞬时受体电位阳离子通道V亚族成员1(TRPV1)对内毒素血症所致肺损伤在炎症反应产生的影响及相关机制。方法：SPF级ICR小鼠108只随机分为6组：正常对照组、CAP对照组、抗辣椒碱（CAPZ）对照组、内毒素血症组、CAP干预组和CAPZ干预组。脂多糖（LPS）经腹腔注射,CAP及CAPZ均在LPS注射前30 min经皮下注射。分别在LPS注射后3 h、8 h和16 h取肺组织,ELISA法检测肺组织TNF-α、IL-6、IL-10、P物质（SP）和降血钙素基因相关肽（CGRP）,Western blotting法检测肺组织Toll样受体4（TLR4）和核内NF-κB的表达水平,光镜下观察肺组织病理学改变。结果：内毒素血症组小鼠3 h、8 h和16 h肺组织TNF-α、IL-6和IL-10水平较正常对照组均显著升高（P<0.05）;CAP干预组各时点肺组织TNF-α和IL-6水平较内毒素血症组显著降低（P<0.05）,而IL-10均明显升高（P<0.05）;CAPZ干预组3 h、8 h和16 h 肺组织TNF-α和IL-6较内毒素血症组显著升高（P<0.05）,而IL-10水平均显著降低(P<0.05)。内毒素血症组和CAP对照组各时间点SP和CGRP较正常对照组均显著升高（P<0.05）,CAP对照组SP和CGRP水平明显低于内毒素血症组（P<0.05）;与同时点内毒素血症组相比,CAP干预组SP和CGRP显著升高（P<0.05）,而CAPZ干预组显著降低（P<0.05）。内毒素血症组小鼠肺组织TLR4和核内NF-κB表达较正常对照组显著升高（P<0.05）;与内毒素血症组相比,CAP干预组和CAPZ干预组小鼠肺组织TLR4表达均无显著差异（P>0.05）,而CAP干预组核内NF-κB表达显著降低（P<0.05）,CAPZ干预组核内NF-κB表达显著升高（P<0.05）。光镜下,CAP对照组和CAPZ对照组较正常对照组病理学变化不明显,内毒素血症组肺组织在8 h和16 h损害明显,CAP干预组较内毒素血症组损害减轻,CAPZ干预组较内毒素血症组肺组织损害加重。结论：TRPV1激活后能显著降低内毒素血症小鼠肺组织TNF-α、IL-6和核内NF-κB水平,升高IL-10水平,提高肺组织SP和CGRP表达,减轻肺组织炎症损伤程度,但不改变肺组织TLR4水平。     

甘氨酸对脂多糖诱导LBP/CD14 mRNA表达的影响

目的内毒素是位于革兰氏阴性杆菌(G-)细胞壁外膜中具有高度生物学活性的以脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)为主的成分.LBP(lipopolysaccharide-bindingprotein)/CD14(clusterofdifferentiation14)系统在识别和调控LPS作用方面起着关键作用.甘氨酸是体内固有的最简单的氨基酸,本教研室在先前的研究中发现甘氨酸对LPS的致热性有良好的拮抗作用,体外研究发现甘氨酸能破坏内毒素的构型,抑制内毒素诱导单核/巨噬细胞分泌TNF、IL-1等细胞因子.本研究是在前面研究的基础上进一步探讨甘氨酸对内毒素体内作用过程的影响,从而为研制有效的内毒素拮抗剂提供理论依据.方法用RT-PCR技术检测大鼠肝组织LBPmRNA表达水平,并在此基础上观察甘氨酸对内毒素诱导大鼠肝组织LBPmRNA表达的影响.用原位杂交方法检测小鼠腹腔巨噬细胞CD14mRNA表达水平,并在此基础上观察甘氨酸对内毒素诱导小鼠腹腔巨噬细胞CD14mRNA表达的影响.结果比较5组大鼠肝组织LBPmRNA的表达水平,内毒素组显著高于其他各组(P＜0.01),甘氨酸拮抗组显著低于内毒素组(P＜0.01),但甘氨酸拮抗组仍高于对照组.比较5组小鼠腹腔巨噬细胞的CD14mRNA表达水平,内毒素组小鼠腹腔巨噬细胞CD14mRNA表达水平显著高于其他各组(P＜0.01),甘氨酸拮抗组显著低于内毒素组(P＜0.01).结论(1)内毒素可诱导大鼠肝组织LBPmRNA的表达.(2)甘氨酸可抑制内毒素诱导大鼠肝组织LBPmRNA的表达.(3)内毒素可诱导小鼠腹腔巨噬细胞CD14mRNA的表达.(4)甘氨酸可抑制内毒素诱导小鼠腹腔巨噬细胞CD14mRNA表达.     

白藜芦醇对TNF-α诱导的离体大鼠肺动脉内皮细胞损伤及MCP-1表达的影响

目的:探讨中药单体白藜芦醇(resveratrol,Res)对肿瘤坏死因子α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)诱导的离体大鼠肺动脉内皮细胞(rat pulmonary artery endothelial cells,RPAECs)中单核细胞趋化蛋白1(monocyte chemoattractant protein-1,MCP-1)的作用。方法:采用组织贴块法培养RPAECs,随机分为空白对照组(control组)、溶剂对照组(solvent组)、TNF-α(10μmol/L)组和Res(50μmol/L)+TNF-α组(Res组),每组又分成1、4和8 h三个时点(n=6),在8 h增加TNF-α+C1142(MCP-1特异性中和抗体)组(C1142组)。采用Western blot方法检测RPAECs中MCP-1蛋白表达,real-time PCR方法检测MCP-1 mRNA表达。结果:C1142可显著减少TNF-α诱导的RPAECs凋亡(P0.05)。相同时点solvent组的MCP-1蛋白和control组比较差异无统计学显著性;TNF-α组的MCP-1蛋白及mRNA较control组增高(P0.05);Res组的MCP-1蛋白及mRNA表达较TNF-α组降低(P0.05)。结论:MCP-1参与TNF-α诱导的RPAECs损伤;Res可降低TNF-α诱导的RPAECs中MCP-1表达,从而减少内皮细胞损伤。     

小柴胡汤联合丹那唑抑制子宫内膜异位症大鼠血管生成的研究

目的:探讨小柴胡汤、丹那唑及二者联合用药对子宫内膜异位症(EM)模型大鼠血管生成因子和异位内膜微血管密度的影响。方法:EM模型大鼠随机分为不用药组(U)、小柴胡汤(XCH)、丹那唑组(D)和联合用药组(S),设假手术组(C)为对照。四周后观察各组异位子宫内膜体积和形态学的变化,计数腹腔液巨噬细胞,放射免疫法测定各组大鼠外周血、腹腔液及巨噬细胞培养液白细胞介素－8(IL－8)、肿瘤坏死因子(TNF-α)的含量,免疫组化法测定血管内皮生长因子(VEGF)在异位内膜中的表达,并通过CD34标记异位子宫内膜血管,测定其微血管密度(MVD)。结果:XCH组、D组和S组异位内膜呈现不同程度萎缩,腺体明显减少,腹腔液巨噬细胞计数减少,XCH组、D组及S组大鼠外周血、腹腔液及巨噬细胞培养液IL－8、TNF-α含量降低,异位内膜VEGF表达减弱,MVD明显减少,其中以S组最为明显。结论:小柴胡汤和丹那唑可以抑制EM模型大鼠异位内膜的血管生成,使异位内膜萎缩,当二者联合用药时,作用更强。     

Cysteinyl leukotrienes induce monocyte chemoattractant protein 1 in human monocytes/macrophages

BACKGROUND: Monocytes/macrophages have a cysteinyl leukotriene 1 (CysLT1) receptor, but its function is poorly understood. Objective To elucidate the biological function of the CysLT1 receptor of human monocytes/macrophages. METHODS: We examined the production of TNF-alpha, IL-1beta, IL-2, IL-4, IL-6, IL-8, IL-10, monocyte chemoattractant protein 1 (MCP-1), macrophage colony-stimulating factor (M-CSF), and eotaxin induced by CysLTs (leukotriene (LT)C4, -D4, and -E4) in THP-1 cells, a human monocytic leukaemia cell line, and peripheral blood CD14+ monocytes/macrophages. Moreover, we examined the effect of CysLTs on the expression of beta-chemokine receptor 2B (CCR2B) as the receptor of MCP-1 by Western blot analysis. RESULTS: ELISA revealed that CysLTs induced MCP-1 in THP-1 cells and peripheral blood CD14+ monocytes/macrophages, but not other cytokines. PCR demonstrated that CysLTs increased MCP-1 mRNA expression in THP-1 cells, and Western blotting showed that CysLTs increased the expression of CCR2B in THP-1 cells. Moreover, we demonstrated that pranlukast, a CysLT1 receptor antagonist, blocked MCP-1 production by CysLTs in THP-1 cells almost completely, and partially inhibited MCP-1 release by CysLTs in peripheral blood CD14+ monocytes/macrophages and CCR2B expression by CysLTs in THP-1 cells. CONCLUSION: CysLTs induce MCP-1 and increase CCR2B expression in human monocytes/macrophages.     

血管生成素4对脂多糖诱导的人脐静脉内皮细胞损伤的影响

 目的：观察血管生成素4（Ang-4）对脂多糖(LPS）诱导的人脐静脉内皮细胞（HUVECs）损伤的影响,并探讨其可能的作用机制。方法：EnVision法免疫组化鉴定HUVECs。LPS诱导细胞损伤,不同剂量的Ang-4干预。显微镜下观察细胞形态,MTT法检测细胞活力,ELISA法检测von Willebrand因子（vWF）和肿瘤坏死因子（TNF-α）含量,real-time PCR检测Toll样受体4（TLR4）、核因子κB（NF-κB） p65和TNF-α mRNA含量变化。结果：免疫组化示胞浆内人Ⅷ因子相关抗原呈阳性;与正常组比,LPS组细胞增殖活力降低（P<0.01）,vWF及TNF-α分泌增多(P<0.01),且TLR4、NF-κB p65和TNF-α mRNA表达升高(P<0.01);Ang-4（100 μg/L）组可恢复细胞活力,降低vWF及TNF-α含量(P<0.01),抑制LPS所致TLR4、NF-κB p65和TNF-α mRNA的表达(P<0.01)。结论：Ang-4可拮抗LPS诱导的HUVECs损伤,这可能与抑制TLR4-NF-κB p65-TNF-α信号通路的活化有关。     

SIRT1通过降低NF-κB p65乙酰化减轻高糖应激引起的大鼠肾小球系膜细胞损伤*

 目的： 研究沉默信息调节因子1（SIRT1）对高糖诱导的大鼠肾小球系膜细胞NF-κB p65蛋白乙酰化影响及其保护作用。方法: 培养大鼠肾小球系膜细胞,实验分为5组：正常对照组、甘露醇组、高糖组、白藜芦醇组和SIRT1 RNAi组。MTT比色法检测细胞活性;以实时荧光定量PCR检测SIRT1、单核细胞趋化蛋白1（MCP-1）、血管黏附分子1（VCAM-1）、肿瘤坏死因子α（TNF-α）和转化生长因子β1（TGF-β1）mRNA水平;Western blotting检测SIRT1和NF-κB p65乙酰化蛋白的表达水平,ELISA检测MCP-1、VCAM-1、TNF-α、TGF-β1和丙二醛（MDA）的含量。结果: 高糖刺激使肾小球系膜细胞的活力降低,超氧化物岐化酶（SOD）活性降低,MDA含量增加;SIRT1 mRNA及蛋白表达降低,NF-κB p65蛋白乙酰化水平增高,MCP-1、VCAM-1、TNF-α、TGF-β1 mRNA和蛋白水平增高。白藜芦醇可逆转高糖引起的变化,而沉默SIRT1基因使高糖诱导的系膜细胞NF-κB p56乙酰化水平、MCP-1、VCAM-1、TNF-α、TGF-β1 mRNA和蛋白水平升高。结论: 高糖可降低SIRT1水平,增加炎症因子的表达。SIRT1的激活可使NF-κB 的亚单位RelA/p65去乙酰化,从而抑制炎症因子的产生。SIRT1可作为治疗DN的潜在靶点。     

FAT/CD36在高脂喂养小鼠脂肪组织炎症中的作用

目的:探讨脂肪酸转运酶/白细胞分化抗原36(fatty acid translocase/CD36,FAT/CD36)在高脂饮食诱导的小鼠脂肪组织炎症中的作用。方法:将6周龄雄性C57BL/6J小鼠分别随机分为普通饮食组和高脂饮食组,喂养14周后,ELISA测定血清游离脂肪酸(FFA)含量,应用荧光实时定量PCR和Western blotting检测脂肪组织中FAT/CD36及炎症/趋化因子(IL-1β、IL-6、TNF-α、MCP-1、MIP-1)mRNA和蛋白的表达,免疫组织化学染色检测脂肪组织巨噬细胞浸润,比较高脂喂养14周的野生型小鼠和CD36基因敲除小鼠的脂肪组织炎症反应情况。结果:与普通饮食组相比,高脂饮食能增强C57BL/6J小鼠脂肪组织的FAT/CD36及炎症/趋化因子的表达,促进巨噬细胞在脂肪组织的浸润。与高脂饮食喂养的野生型小鼠相比,CD36基因敲除小鼠的脂肪组织炎症因子、趋化因子表达明显降低,脂肪组织巨噬细胞浸润减少。结论:高脂饮食通过上调脂肪组织FAT/CD36的表达激活了脂肪组织炎症。     

肺炎大鼠心肌TNF-α、IL-6mRNA表达及腺苷对其影响

目的:观察金葡菌感染大鼠肺炎时心肌组织TNF-α、IL-6mRNA表达, 以及腺苷对其影响。方法:50只SD大鼠被随机分为5组, 为对照组、肺炎组和腺苷治疗A、B、C组。金葡菌经气管插管注入复制肺炎大鼠模型, 于注菌后第2、3、4d静脉点滴腺苷治疗, 每天90min, 剂量分别为50、100、150μg·kg^-1·min^-1。第5d处死大鼠, 立即取心脏液氮保存, 心肌组织用于病理检测和采用RT-PCR方法检测TNF-α、IL-6mRNA的表达。结果:(1)肺炎组心肌中TNF-α、IL-6mRNA的表达显著高于对照组(均P<0.01);(2)腺苷治疗B、C组心肌中TNF-α、IL-6mRNA的表达低于肺炎组(P<0.01), 且治疗C组心肌IL-6mRNA表达低于治疗B组(P<0.01);而A组心肌中TNF-α、IL-6mRNA的表达与肺炎组无明显差异(P>0.05);(3)腺苷治疗可以减轻心肌的病理损伤(P<0.01)。结论:金葡菌感染大鼠肺炎可致心肌损害, 细胞炎症因子IL-6和TNF-α参与心肌损伤的发生和发展, 外源性腺苷治疗可抑制炎症因子TNF-α、IL-6的分泌, 从而有利于减轻炎症和保护心肌。     

肌肽对脂多糖诱导脑微血管内皮细胞凋亡的保护作用及机制探讨

目的　探讨肌肽对脂多糖（lipopolysaccharides,LPS）引起脑微血管内皮细胞（HBMEC）凋亡的保护作用及机制。 方法　用倒置显微镜观察细胞形态变化;MTT法检测细胞存活率;流式细胞仪检测细胞内的活性氧（ROS）含量及细胞凋亡情况;Western blot法检测NF-κB P65、白细胞介素-1β（IL-1β）和肿瘤坏死因子-α（TNF-α）蛋白表达。 结果　与对照组相比,LPS组细胞存活率略降低（P>0.05）,早期凋亡率明显增加,同时ROS含量、核内NF-κB P65及胞浆IL-1β和TNF-α的含量均显著增加（P<0.05）。与LPS组相比,LPS+肌肽组（10 mmol/L、20 mmol/L、40 mmol/L）凋亡率有明显降低,ROS含量、核内NF-κB P65蛋白量及胞浆IL-1β和TNF-α的含量均不同程度显著降低（P<0.05）。 结论　肌肽可能通过抑制LPS诱导ROS释放,避免NF-κB P65过度激活,进而减少IL-1β和TNF-α分泌,对脑微血管内皮细胞发挥保护作用。