新风胶囊对关节炎模型大鼠PTEN / PI3K / AKT 信号通路及血小板活化的影响

目的:观察新风胶囊对佐剂关节炎(AA)大鼠PTEN/PI3K/AKT通路及血小板活化的影响。方法:将大鼠随机分为正常对照(NC)组、模型对照(MC)组、PI3K阻滞剂LY294002(LY294002)组、新风胶囊(XFC)组,每组6只构建AA大鼠模型,每组给药30 d(NC、MC组给予等体积生理盐水),流式细胞术检测血小板微粒标志物,电镜观察血小板超微结构,ELISA法检测血清细胞因子水平,免疫组化、RT-qPCR法检测腹主动脉PDGF,免疫印迹法检测血小板细胞PTEN/PI3K/AKT蛋白变化。结果:电镜观察发现,NC组血小板超微结构完整,胞质α颗粒、线粒体均匀散在分布;MC组血小板结构破坏明显,欠规整,胞质α颗粒、线粒体显著减少;LY294002组血小板细胞外形不规整,少量伪足伸出,胞质可见α颗粒、线粒体分布; XFC组血小板呈椭圆形,状规整,胞质中α颗粒、线粒体较MC组明显增多。与NC组相比,MC组血小板活化物PMPs及血小板参数(PLT、PCT)显著升高(P0.01);血清VEGF、HIF-1α、TNF-α表达明显升高,ES、IL-10表达降低(P0.01);MC组腹主动脉PDGF及PDGF mRNA表达升高(P0.01);血小板细胞PI3K、AKT、p-AKT、BCL-2蛋白表达升高,PTEN、BAD蛋白表达降低(P0.01)。与MC组相比,LY294002组、XFC组PMPs、PLT、PCT、VEGF、HIF-1α、TNF-α、PDGF及血小板细胞PI3K、p-AKT、BCL-2蛋白水平显著降低,血清ES、IL-10水平及PTEN、BAD蛋白升高(P0.05或P0.01)。与LY294002组相比,XFC组血清TNF-α水平降低(P0.05)。结论:新风胶囊通过调节PTEN/PI3K/AKT信号通路平衡改善AA大鼠血小板活化。     

基于PI3K/AKT/FoxO1信号通路探究补阳还五汤对痛风模型大鼠滑膜组织细胞凋亡及炎症反应的影响

目的 基于磷脂酰肌醇3-激酶（PI3K）/蛋白激酶B(AKT)/叉头框转录因子O亚族1(FoxO1)信号通路探究补阳还五汤对痛风模型大鼠滑膜组织细胞凋亡及炎症反应的影响。方法 大鼠分为对照组（灌胃生理盐水）、痛风组（建模+灌胃生理盐水）、西药组（建模+灌胃20 mg/kg苯溴马隆）、补阳还五汤低、高剂量组（建模+灌胃6.5、26.0 g/kg补阳还五汤）和通路激活组（建模+灌胃26.0 g/kg补阳还五汤+腹腔注射0.02 mg/kg PI3K活化物（740Y-P））。测量大鼠关节肿胀度,测定血清尿酸、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-1β(IL-1β)水平,对滑膜组织进行HE染色及TUNEL检测,测定滑膜组织中p-PI3K/PI3K、pAKT/AKT、p-FoxO1/FoxO1、Caspase-3蛋白表达水平。结果 与对照组相比,痛风组大鼠关节肿胀度及血清尿酸、TNF-α、IL-1β水平及滑膜组织中p-PI3K/PI3K、p-AKT/AKT、p-FoxO1/FoxO1蛋白表达水平显著升高（P<0.05）,滑膜组织中细胞凋亡率及Caspase-3蛋白表达水平显著降低（P...     

桔梗皂苷D介导PI3K/AKT/mTOR信号通路调控子宫内膜癌细胞株ECC-1增殖、侵袭和迁移

目的 探讨桔梗皂苷D介导磷酸肌醇-3-激酶（PI3K）/蛋白激酶B(AKT)/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白（mTOR信号通路调控子宫内膜癌细胞株ECC-1增殖、侵袭和迁移作用。方法 将人子宫内膜癌细胞株ECC-1分为对照组,桔梗皂苷D低、中、高剂量组（9μmol/L、18μmol/L、36μmol/L）,PI3K抑制剂（PQR309）组（1μmol/L）,PI3K激动剂（IGF-1）组（100 mg/L）。培养48 h后,四甲基偶氮唑蓝、侵袭小室和划痕实验分别检测细胞增殖、侵袭和迁移活性;实时定量聚合酶链反应和蛋白免疫印迹法检测细胞PI3K、AKT、mTOR、c-Myc、细胞周期蛋白激酶6(CDK6)、E-钙黏蛋白（E-cadherin）、波形蛋白（Vimentin）、锌指转录因子（Snail）信使核糖核酸（mRNA）和蛋白表达及p-PI3K、p-AKT、p-mTOR水平。结果 与对照组比,IGF-1组细胞侵袭细胞数和细胞划痕愈合率上升,PI3K、AKT、mTOR mRNA和蛋白表达及p-PI3K、p-PI3K/PI3K、p-AKT、p-AKT/AKT、p-mTOR、p-mTOR/mTOR水...     

KDR调节PI3K/AKT/mTOR信号通路对宫颈癌增殖、迁移和侵袭的影响

目的 探讨激酶插入区受体（KDR）调节磷脂酰肌醇3-激酶（PI3K）/蛋白激酶B(AKT)/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白（mTOR）信号通路对宫颈癌增殖、迁移和侵袭的影响。方法 通过实时荧光定量PCR实验和免疫组织化学染色测定人宫颈癌组织和其癌旁组织中KDR的表达。体外培养HeLa细胞,随机分为对照组、KDR siRNA组、KDR siRNA阴性对照组、KDR siRNA+740 Y-P(PI3K激活剂)组,分组转染后,通过MTT实验、平板集落形成实验检测各组HeLa细胞增殖;通过Hoechst 33258染色检测各组HeLa细胞凋亡;通过划痕实验、Transwell实验分别检测各组HeLa细胞迁移及侵袭;通过免疫荧光染色检测各组HeLa细胞Bax、Bcl-2表达;通过免疫印迹实验检测各组HeLa细胞上皮间充质转化相关蛋白（Claudin-1、ZO-1、Vimentin、E-cadherin）、KDR蛋白及PI3K/AKT/mTOR通路相关蛋白（p-PI3K/PI3K、p-AKT/AKT、p-mTOR/mTOR）表达。结果 与癌旁组织相比,宫颈癌组织中KDR mRNA表达和KDR阳性表达率明...     

IL-18对BALBc小鼠结直肠癌肝转移模型PI3K/AKT信号通路相关蛋白表达水平的影响

目的 探讨白介素18(IL-18)对BALBc小鼠结直肠癌肝转移模型PI3K/AKT信号通路相关蛋白表达水平的影响.方法 选取60只BALBc小鼠,采用随机数字表法将小鼠分为:空白对照组、低、中、高剂量IL-18组,每组15只;除空白对照组外各组采用脾内种植法构建结肠癌肝转移小鼠模型,低剂量、中剂量、高剂量IL-18组分别于构建前或构建后注射(20、40和80μg/kg)的IL-18结合蛋白(IL-18BP);检测各组小鼠转移灶大小、数目、质量;采用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测各组小鼠血清和腹水中IL-18水平;采用蛋白质印记法及免疫组化检测各组小鼠结直肠癌肝转移组织中E-cadherin、N-cadherin表达;采用蛋白质印记法检测PI3K/Akt信号通路相关蛋白表达情况.结果 相比空白对照组,低剂量IL-18组小鼠腹水IL-18水平、血清IL-18水平、N-cadherin阳性率、p-AKT蛋白相对表达、PI3K蛋白相对表达水平显著升高,E-cadherin阳性率显著降低(P<0.05),总AKT蛋白相对表达差异无统计学意义(P>0.05);相比低剂量组,中剂量组小鼠瘤体积、转移灶数量、瘤重、腹水IL-18水平、血清IL-18水平、N-cadherin阳性率、p-AKT蛋白相对表达、PI3K蛋白相对表达水平显著升高且高剂量组上述指标高于中剂量组(P<0.05);相比低剂量组,中剂量组E-cadherin阳性率显著降低,且高剂量组上述指标低于中剂量组(P<0.05),低、中、高白介素18组总AKT蛋白相对表达差异均无统计学意义(P>0.05).结论 IL-18可以通过激活型PI3K/AKT信号通路促进BALBc小鼠结直肠癌的转移及生长.     

IL-8通过激活PI3K/AKT通路促进结肠癌细胞增殖、迁移和侵袭

为研究IL-8对结肠癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响并探讨其作用机制,应用免疫组织化学法检测结肠癌组织和正常癌旁组织中IL-8的表达;MTT法检测不同浓度IL-8处理或抑制PI3K/AKT信号通路后结肠癌细胞SW480的增殖情况;Western blotting检测IL-8处理后SW480细胞中p-AKT、t-AKT蛋白的表达;Transwell法检测抑制PI3K/AKT通路或IL-8处理后SW480细胞的迁移和侵袭能力。结果显示,与癌旁组织相比,结肠癌组织中IL-8的表达水平明显提高;IL-8处理后SW480细胞的增殖、迁移和侵袭能力明显增加,且PI3K/AKT通路异常激活;抑制PI3K/AKT通路可逆转IL-8对SW480细胞增殖、迁移和侵袭的促进作用。由此IL-8可促进结肠癌细胞增殖、迁移和侵袭,其机制可能与激活PI3K/AKT通路有关,可为IL-8在结肠癌中的治疗提供参考。     

低强度脉冲超声通过PI3K/AKT/mTOR信号通路抑制骨肉瘤细胞的增殖

目的:阐述低强度脉冲超声（LIPUS）对骨肉瘤细胞增殖的调控作用和机制,探索低强度脉冲超声治疗骨肉瘤的潜在价值。方法:在时间梯度实验中,将MG-63细胞分为LIPUS组和Control组,对LIPUS组加载1、6、12、18和24 h的低强度脉冲超声,CCK-8检测各组细胞增殖活力,Western Blots检测24 h低强度脉冲超声对PI3K/AKT/mTOR信号通路的影响。在机制实验中,将MG-63细胞分为Control组、LY294002组、LIPUS组和LIPUS+740Y-P组,对各组施加对应的干预措施后使用CCK-8检测各组细胞增殖能力,Western Blots检测各组增殖相关蛋白PCNA和Cyclin D1的表达情况。所有数据重复3次后使用单因素方差分析统计。结果:加载低强度脉冲超声18和24 h后,LIPUS组的细胞增殖活力较对照组显著降低（P<0.010, P<0.001）,这些结果表明LIPUS可抑制MG-63细胞的增殖。LIPUS可抑制p-PI3K、p-AKT和p-mTOR的表达（P<0.001）,即抑制PI3K/AKT/mTOR信号通路的激活,而不影响PI3K、AKT和mTOR的表达。使用LIPUS就如同使用PI3K的抑制剂（LY294002）一样,可以抑制MG-63细胞的增殖（P<0.001）,在使用PI3K的激动剂740Y-P后,可逆转LIPUS对MG-63细胞增殖的抑制（P<0.001）。这些结果表明LIPUS可以通过抑制PI3K/AKT/mTOR信号通路的激活来抑制骨肉瘤细胞的增殖。结论:低强度脉冲超声通过PI3K/AKT/mTOR信号通路抑制骨肉瘤细胞的增殖,它可能是单独或联合放化疗治疗骨肉瘤的有效方法之一。     

下调miR-21 抑制PI3K / AKT 信号通路对白血病细胞增殖凋亡的影响

目的:探讨miR-21 对白血病K562 细胞增殖凋亡的影响及对PI3K/ AKT 信号通路的调控作用。方法:将K562 细胞分为对照组、miR-21 NC 组和miR-21 干扰组,对照组不做处理,后两组采用阳离子脂质体LipofectamineTM2000 转染miR-21 inhibitor 和miR-21 negative control。转染48 h 后,利用实时荧光定量(qRT-PCR)检测各组细胞中miR-21 mRNA 的表达情况,采用MTT 比色法检测miR-21 对细胞增殖率的影响,流式细胞仪检测miR-21 对细胞周期和凋亡率的影响,蛋白质免疫印迹法(Western blot)检测miR-21 对各组细胞中PI3K/ AKT 信号通路相关蛋白PI3K、AKT 和p-AKT 表达的影响。结果:miR-21 干扰组中细胞的miR-21 mRNA 表达水平和细胞的存活率较对照组和miR-21 NC 组均明显降低;与对照组和miR-21 NC 组比较,流式细胞仪检测miR-3 干扰组中G0/ G1 期所占细胞比例明显升高,S 期细胞所占比例明显下降,细胞的凋亡率明显升高。Western blot 检测p-AKT 的表达水平较对照组和miR-21 NC 组明显下降,但PI3K 和AKT 蛋白的表达水平变化不大。结论:下调miR-21 能够抑制白血病K562 细胞的增殖,促进其凋亡,其作用机制可以与抑制PI3K/ AKT 信号通路有关。     

下调Girdin基因表达对肺癌细胞增殖凋亡、免疫因子IL-8和TNF-α及顺铂化疗敏感性的研究

目的:探讨下调微丝附着梁蛋白(Girdin)基因表达对肺癌细胞增殖凋亡、免疫因子IL-8和TNF-α及顺铂化疗敏感性的影响。方法:以人胚肺成纤维细胞MRC5作为对照细胞,RT-PCR及Western blot分别检测Girdin在PC9、SPC-A-1、H322、H1299、A549肺癌细胞中的表达; SPC-A-1细胞分为空白对照组、阴性对照组、Girdin-siRNA组、顺铂组和Girdin-siRNA+顺铂组,各组细胞培养48 h,Western blot检测Girdin-siRNA转染SPC-A-1细胞的效果; MTT法检测各组细胞活力;流式细胞术检测各组细胞凋亡率; RT-PCR检测IL-8和TNF-α的mRNA表达; Western blot检测增殖相关蛋白细胞增殖核抗原(PCNA)、凋亡相关蛋白含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶3(Caspase-3)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)及PI3K/AKT信号通路磷脂酰肌醇-3激酶(PI3K)和磷酸化的丝氨酸苏氨酸激酶(p-AKT)的蛋白表达。结果:肺癌细胞中Girdin的mRNA及蛋白表达均明显高于在MRC5细胞表达(P0. 05); Girdin-siRNA转染SPC-A-1细胞后Girdin的表达显著降低(P0. 05);与空白对照组比较,Girdin-siRNA组和顺铂组OD值及IL-8、TNF-α、PCNA、PI3K、p-AKT的表达均显著降低,细胞凋亡率及Caspase-3和Bax表达均显著升高(P0. 05); Girdin-siRNA+顺铂组OD值及IL-8、TNF-α、PCNA、PI3K、p-AKT的表达均显著低于Girdin-siRNA组和顺铂组,细胞凋亡率及Caspase-3和Bax表达均显著高于Girdin-siRNA组和顺铂组(P0. 05)。结论:抑制肺癌细胞Girdin表达可通过降低癌细胞增殖、诱导细胞凋亡和提高免疫增强乳腺癌顺铂化疗敏感性,对细胞增殖凋亡的机制可能与下调PI3K/AKT信号通路有关。     

生长激素释放肽通过抑制PI3K/AKT/mTOR信号通路影响自发性高血压大鼠m TOR和Caspase-3表达

目的研究生长激素释放肽通过抑制PI3K/AKT/mTOR信号通路对自发性高血压大鼠mTOR、Caspase-3表达的影响。方法选择自发性高血压清洁级雄性大鼠12只为研究对象,根据随机数字表将患者分为两组,分别为观察组和对照组,适应性喂养3周后,13周龄起,观察组给予皮下注射生长激素释放肽,对照组每日给予注射相同剂量生理盐水,4周后观察两组大鼠尾动脉舒张压,临床生化指标、血清PI3K、AKT、m TOR、Caspase-3表达水平以及心肌细胞凋亡系数之间的差异。结果 4周后,观察组大鼠尾动脉舒张压明显下降,对照组大鼠舒张压之间的差异不存在统计学意义,且随着治疗的延长,观察组大鼠血压明显下降(P0.05);观察组大鼠临床生化指标BUN、Cr、MDA明显下降,SOD水平明显上升(P0.05);观察组大鼠PI3K、AKT、mTOR、Caspase-3明显降低(P0.05);观察组大鼠AI(2.67±0.98)%明显低于对照组(4.01±1.03)%。结论生长激素释放肽通过抑制PI3K/AKT/m TOR信号通路,降低大鼠机体氧化应激反应,降低血清PI3K、AKT、m TOR、Caspase-3表达水平,改善大鼠血压。     

PTTG抑制PI3K/AKT信号通路诱导皮肤鳞状细胞癌细胞凋亡的机制

目的探讨垂体肿瘤转化基因(pituitary tumoRtransforming genes,PTTG)对皮肤鳞状细胞癌细胞活力、凋亡及PI3K/AKT信号通路的影响。方法将设计合成的PTTG特异性siRNA(si-PTTG)转染人皮肤鳞癌细胞系A431(si-PTTG组),无干扰作用siRNA(NC组)及未转染的空白细胞(空白组)作为对照组,LY294002作为PI3K/AKT信号通路的抑制剂。通过MTT法、Annexin V-FITC/PI细胞凋亡检测试剂盒及ROS检测试剂盒分别检测细胞活力、凋亡率和ROS含量。Western blot法检测PTTG、AKT、p-AKT、Cyclin D1和Bax蛋白表达。结果si-PTTG转染A431细胞后,PTTG表达明显降低(P<0.05)。与空白组比较,si-PTTG组和LY294002组细胞活力明显降低,凋亡率明显升高,si-PTTG组ROS含量明显升高,p-AKT和Cyclin D1蛋白表达明显降低,Bax蛋白表达明显升高(P<0.05)。A431细胞转染si-PTTG,并用LY294002处理,细胞活力明显低于LY294002组,凋亡率高于LY294002组(P<0.05)。结论沉默PTTG表达可抑制皮肤鳞状细胞癌细胞活力,诱导细胞凋亡,其机制与细胞ROS水平增高及PI3K/AKT通路抑制有关。     

蛇床子素调控PI3K/AKT通路对膀胱癌细胞增殖、侵袭、迁移与凋亡的影响

目的 探讨蛇床子素调控PI3K/AKT/mTOR信号对膀胱癌T24细胞增殖、侵袭、迁移、凋亡的影响.方法 用不同浓度的蛇床子素处理人膀胱癌T24细胞,计算IC50浓度.采用CCK-8方法检测蛇床子素对T24细胞增殖的影响,采用Transwell实验检测蛇床子素对细胞迁移和侵袭的影响,采用流式细胞仪检测蛇床子素对T24细胞凋亡的影响,采用Western blot方法检测抗凋亡蛋白及PI3K/AKT/mTOR信号通路相关蛋白表达水平.结果 蛇床子素抑制T24细胞增殖的IC50为42.4μmol/L.42.4μmol/L蛇床子素处理24、48、72h后,T24细胞增殖能力显著降低(P＜0.05).42.4μmol/L蛇床子素处理24h后,T24细胞的迁移能力和侵袭能力降低、细胞凋亡率升高(P＜0.05);T24细胞中p-AKT、p-mTOR、P70与Cyclind1蛋白表达水平降低(P＜0.05);抗凋亡蛋白Bcl-2表达降低,促凋亡蛋白Bax和Caspase-3蛋白表达升高(P＜0.05).结论 蛇床子素可通过调控PI3K/AKT/mTOR信号通路抑制膀胱癌T24细胞增殖、迁移和侵袭,促进凋亡.     

薯蓣皂苷对卵巢癌细胞体外转移活性及PI3K/AKT通路的影响

目的 探讨薯蓣皂苷对卵巢癌细胞生物学行为以及对PI3K/AKT通路的影响。方法 将卵巢癌细胞分为对照组、薯蓣皂苷组和PI3K/AKT通路抑制剂组，CCK-8实验检测细胞增殖能力；细胞划痕实验分析细胞迁移能力；Transwell实验分析细胞侵袭能力；流式细胞术分析细胞凋亡率；蛋白免疫印迹实验分析细胞PI3K/AKT通路蛋白的表达情况。结果 与对照组比较，薯蓣皂苷组和抑制剂组细胞的增殖能力、迁移和侵袭能力显著降低，凋亡率增加，p-PI3K和p-AKT蛋白表达水平降低。结论 薯蓣皂苷通过抑制PI3K/AKT信号通路抑制卵巢癌细胞的增殖、侵袭和迁移能力，并促进卵巢癌细胞凋亡。     

前列腺素D2受体调节PGD2诱导的人气道黏液高分泌

目的研究前列腺素D2(PGD2)通过D类前列腺素受体2(DP2)对人气道上皮细胞黏液分泌的效应及其作用机制。方法用PGD2刺激人气道上皮16HBE细胞,以DP2拮抗剂AZD6430、DP1拮抗剂BWA868C及三磷酸肌醇蛋白激酶(PI3K)抑制剂LY294002为干预因素,将细胞分为对照组、PGD2刺激组、PGD2刺激+AZD6430组、PGD2刺激+BWA868C组、PGD2刺激+LY294002组。ELISA检测细胞中肿瘤坏死因子(TNF)-α、白介素(IL)-4和IL-13的蛋白含量,激光共聚焦技术检测细胞内黏蛋白(MUC)5AC含量;Western blot检测DP2、DP1、PI3K和磷酸化AKT(p-AKT)表达水平;实时荧光定量PCR检测TNF-α、IL-4、IL-13和MUC5AC mRNA表达水平。结果 PGD2刺激后MUC5AC、TNF-α、IL-4、IL-13、DP2、PI3K和p-AKT表达显著高于对照组(P0.05);AZD6430拮抗组中MUC5AC、TNF-α、IL-4、IL-13、PI3K及p-AKT表达较PGD2刺激组明显减弱(P0.05);LY294002组TNF-α、IL-4、IL-13和MUC5AC表达较PGD2组亦显著减弱(P0.05)。结论 PGD2激活人气道上皮细胞的DP2受体,活化PI3K/AKT引起黏液高分泌。     

荔枝核总皂苷对脂多糖诱导的神经细胞损伤的影响研究

目的:探讨荔枝核总皂苷(LSS)对脂多糖(LPS)诱导的PC12细胞活力、细胞凋亡率及免疫因子的影响及机制。方法:3. 75、7. 5、15、30、60 mg/L的LSS处理PC12细胞24 h,MTT检测细胞存活率;随机将PC12细胞分为对照组(细胞不做任何处理)、LPS处理组(1 mg/ml的LPS处理PC12细胞24 h)、LSS处理组(3. 75 mg/L的LSS处理细胞24 h后,再用1 mg/ml的LPS处理PC12细胞24 h)。MTT及流式细胞术分别检测细胞存活率及凋亡率; H2DCFHDA荧光探针检测ROS含量;Western blot检测PI3K/AKT信号通路PI3K、p-AKT和下游cycyin D1、Bax及免疫抑制因子HIF-1α和VEGF的蛋白表达。结果:3. 75 mg/L和7. 5 mg/L的LSS对PC12细胞存活率的影响与0 mg/L LSS比较差异无统计学意义(P0. 05),而15 mg/L、30 mg/L和60 mg/L的LSS均能显著降低PC12细胞存活率,与0 mg/L LSS比较差异具有统计学意义(P 0. 05)。选择3. 75 mg/L的LSS为研究对象;与对照组比较,LPS组细胞存活率显著降低,细胞凋亡率显著升高,ROS含量显著升高,PI3K、p-AKT和cycyin D1的蛋白表达显著降低,Bax、HIF-1α和VEGF的蛋白表达显著升高(P0. 05)。与LPS组比较,LSS组细胞存活率显著升高,细胞凋亡率显著降低,ROS含量显著降低,PI3K、p-AKT和cycyin D1的蛋白表达显著升高,Bax、HIF-1α和VEGF的蛋白表达显著降低(P0. 05)。结论:LSS可提高PC12细胞存活率,降低细胞凋亡,提高免疫,其机制与激活PI3K/AKT信号、提高细胞ROS水平及抑制HIF-1α和VEGF的表达有关。     

白藜芦醇对糖尿病大鼠血管平滑肌细胞凋亡的影响及其机制研究

目的:探索白藜芦醇对糖尿病大鼠血管平滑肌细胞凋亡的影响及其调控机制。方法:实时定量PCR (qRT-PCR)检测血清中单核细胞趋化蛋白鄄1 (MCP1)、巨噬细胞移动抑制因子(MIF)和白细胞介素18(IL-18)的mRNA 水平;HE 染 色和Masson 染色评价心肌纤维化水平;流式细胞术分析细胞凋亡;蛋白印迹检测Cleaved caspase-3、Cleaved caspase-9、B 淋巴 瘤2 蛋白(Bcl-2)、Bcl-2 相关蛋白X(Bax)、PI3K、p-PI3K、AKT、p-AKT 蛋白表达。结果:白藜芦醇可降低STZ 诱导的糖尿病大 鼠血清MCP-1、MIF 和IL-18 的mRNA 水平并改善心肌纤维化加剧。STZ 诱导糖尿病组血管平滑肌细胞凋亡率明显高于对照 组(P<0.05)。与STZ 诱导糖尿病组相比,STZ+白藜芦醇组血管平滑肌细胞凋亡率明显降低(P<0.05)。而且,白藜芦醇可抑 制STZ 诱导的糖尿病大鼠血管平滑肌细胞Cleaved caspase-3、Cleaved caspase-9 和Bax 蛋白表达,提高Bcl-2 表达(P<0.05)。 与对照组相比,STZ 诱导糖尿病组血管平滑肌细胞中p-PI3K/ PI3K 和p-AKT/ AKT 比率明显降低(P<0.05)。STZ+白藜芦醇组 血管平滑肌细胞p-PI3K/ PI3K 和p-AKT/ AKT 比率明显高于STZ 诱导糖尿病组(P<0.05)。结论:白藜芦醇可通过激活PI3K/ AKT 信号通路抑制STZ 诱导的糖尿病大鼠血管平滑肌细胞凋亡。     

FOXO3a通过PI3K/AKT信号通路介导炎症因子TNF-α抑制滋养细胞的增殖、侵袭及促进细胞发生凋亡

目的探讨炎症因子TNF-α对滋养细胞中FOXO3a表达的影响及FOXO3a在TNF-α对滋养细胞的生物学功能影响中的作用及相关机制的研究。方法 RT-PCR及Western blot实验检测TNF-α是否影响滋养细胞HTR-8/SVneo中FOXO3a的mRNA及蛋白表达;应用siRNA抑制滋养细胞FOXO3a表达,采用CCK-8、Transwell和流式细胞术分别检测滋养细胞的增殖、侵袭和凋亡方面的影响,最后利用Western blot实验检测TNF-α对转染si-FOXO3a的滋养细胞中PI3K/AKT信号通路的影响。结果 TNF-α能够显著促进滋养细胞中FOXO3a的表达;细胞生物学行为实验结果表明TNF-α能够明显抑制滋养细胞的增殖、侵袭能力并促进其发生凋亡,而抑制细胞内FOXO3a的表达可显著削弱上述现象;Western blot实验结果表明TNF-α可明显促进滋养细胞内PI3K/AKT信号通路中p-PI3K、p-AKT蛋白的表达,而抑制细胞内FOXO3a的表达后,TNF-α对PI3K、p-AKT蛋白的促进作用明显被削弱。结论 FOXO3a可以通过PI3K/AKT信号通路介导TNF-α对滋养细胞增殖、侵袭能力抑制并促进其发生凋亡。     

PI3K/AKT/mTOR信号通路蛋白p-AKT及p-mTOR在胃癌组织中的表达及意义

目的探讨PI3K/AKT/mTOR信号传导通路在胃腺癌中的表达及其与临床病理特征的关系。方法采用免疫组化及Western blot法检测p-AKT及p-mT OR在胃癌(100例)、癌旁(80例)及正常胃黏膜(100例)组织中的表达,并分析两者表达的相关性及与临床病理特征的关系。结果p-AKT在胃癌、癌旁及正常胃黏膜组织中的阳性率分别为72%、30%、24%,p-mT OR在胃癌、癌旁及正常胃黏膜组织中的阳性率分别为77%、51%、19%,均呈降低趋势,与Western blot结果一致。p-AKT、p-mTOR在胃癌组织中的表达与肿瘤分化程度有关。p-AKT及p-mTOR在胃癌组织中的表达呈正相关。结论 PI3K/AKT/mTOR信号传导通路在胃癌组织中过表达,可能对胃癌的生物学行为和预后的评估起一定作用。     

PI3K/AKT信号通路在全肝缺血再灌注大鼠肺损伤中的作用

目的 探讨磷脂酰肌醇-3激酶（PI3K）/AKT通路在大鼠全肝缺血再灌注肺损伤中作用。方法 本实验分两部分。(1)36只大鼠分别于肝缺血前与再灌注后不同时点处死取肺。（2）12只大鼠分成Wortmannin组与模型对照组。分别应用Western blot、原位末端转移酶(TUNEL)法与免疫组化法检测肺AKT、磷酸化AKT（p-AKT）表达、细胞凋亡与增殖细胞核抗原（PCNA）表达。结果（1）与缺血前相比,缺血再灌注后肺细胞凋亡指数显著增高; p-AKT/AKT与PCNA阳性指数呈双相变化;肺病理改变严重。（2）p-AKT/AKT与PCNA阳性指数成正相关;与凋亡指数呈负相关。（3)与模型对照组相比,Wortmannin组p-AKT/AKT与PCNA阳性指数显著降低,细胞凋亡指数显著增高,病理改变加重。结论 PI3K/AKT通路可能通过抑制凋亡、促进增殖对全肝缺血再灌注肺损伤发挥保护作用。     

PI3K/AKT/mTOR在姜黄素抑制食管癌细胞增殖中的作用

目的探讨PI3K/AKT/mTOR在姜黄素(Curcumin,Cur)抑制食管癌细胞(Ec-9706)增殖中的作用。方法食管癌Ec-9706细胞给予0、5、10和20μmol/L姜黄素培养24 h、48 h和72 h后,细胞计数CCK-8法检测食管癌Ec-9706细胞的存活率;流式细胞仪法检测Ec-9706细胞凋亡发生;Real-time法和Western blot法检测食管癌Ec-9706细胞中磷酸化蛋白p-PI3K、p-AKT、mTOR、NF-κB和cleaved-Capase-3 m RNA和蛋白表达水平。结果姜黄素可以显著抑制食管癌Ec-9706细胞的增殖和生长,显著降低Ec-9706细胞的存活率,促进食管癌Ec-9706细胞的凋亡,显著升高Ec-9706细胞的凋亡率,且呈时间剂量反应关系,差异有统计学意义(P0.05)。姜黄素可以显著降低食管癌Ec-9706细胞PI3K、AKT、mTOR m RNA表达和蛋白含量,显著升高NF-κB和cleaved-Capase-3m RNA表达和蛋白含量,且呈时间剂量反应关系,差异有统计学意义(P0.05)。结论姜黄素可有有效抑制食管癌细胞(Ec-9706)增殖,PI3K/AKT/mTOR信号通路在此过程中起到重要的调节作用。