DENV-2感染的HUVECs与调节性T细胞相互作用对主要炎性细胞因子产生的影响北大核心CSCD

目的研究人原代脐静脉内皮细胞（primary human umbilical vein endothelial cells,HUVECs）被登革病毒2型（DENV-2）感染后,与调节性T细胞（regulatory T cells,Treg）共培养,HUVEC与Treg细胞相互作用对各自主要炎性细胞因子的影响。方法用密度梯度离心法从人浓缩白细胞分离外周血单个核细胞（peripheral blood mononuclear cell,PBMC）,磁珠阴性分选Treg细胞,流式细胞术检测CD4＋CD25＋CD127＋细胞纯度。HUVECs经DENV-2感染后,用Transwell与Treg细胞共培养,对照组用鞘氨醇-1-磷酸（sphingosine-1-phosphate, S1P）1型特异性受体激动剂CYM-5442预处理24 h去除药物后感染病毒,并与Treg细胞共培养,real-time RT-PCR分别检测HUVECs的IL-6、IL-8、TNF-α和Treg细胞的IL-10、TGF-β的mRNA转录水平;双抗体夹心ELISA法检测培养上清中上述细胞因子表达。结果感染后HUVECs中DENV-2 NS1基因转录水平逐渐上升,在24 h达到峰值（3.03±0.26,P〈0.01）后下降。流式细胞术检测经免疫磁珠阴性分选的Treg细胞纯度为（84.3±0.5）%。DENV-2感染后HUVECs的IL-6、IL-8、TNF-α mRNA转录均有上调,感染后24 h IL-6、IL-8、TNF-α的mRNA转录量分别为16.64±2.64、26.80±5.81和5.25±0.42,而未感染组的转录水平分别为1.70±0.68、1.68±0.74、1.45±0.15,与Treg共培养后上述细胞因子在各时间点的转录有所降低,但仍高于未感染DENV-2的对照组。CYM-5442预处理后被感染的HUVECs IL-6、IL-8、TNF-α的mRNA转录水平显著下降;共培养的Treg细胞所产生的IL-10、TGF-β也下调。结论被DENV-2感染的原代HUVECs能增强Treg细胞IL-10与TGF-β的分泌,同时Treg细胞产生的抑制性细胞因子能降低被感染的HUVECs炎性细胞因子的产生。     

登革病毒域型引起原代HDMECs 通透性变化机制的初步研究

目的:了解登革病毒域型(Dengue virus Type 2,DENV-2)感染原代人真皮微血管内皮细胞(Primary Human dermal micro-vascular endothelial cells,pHDMECs)引起细胞通透性改变的机制。方法:用103 TCID50 的DENV-2 感染pHDMECs;于4、8、12、24、48 h Real time-PCR、免疫荧光法及流式细胞术检测DENV-2 NS1 部分序列及蛋白;Transwell 法检测细胞通透性;Real time -PCR 和双抗体夹心ELISA 法检测IL-6 和IL-8 的变化;流式细胞术检测24、48、72 h 细胞凋亡。结果:DENV-2 感染的pHDMECs 病毒NS1 基因相对表达上调,但未检测到病毒NS1 蛋白;DENV-2 感染的pHDMECs 通透性在24、48 h 显著升高;pHDMECs 被感染72 h 后凋亡也无明显变化; IL-6 和IL-8 mRNA 分别在8、24 h 相对表达上调[IL-6:(2.490.5)倍,P<0.05;IL-8:(6.82±1.69)倍,P<0.05];对照组和感染组分泌的IL-6 于8 h 分别为(869.6±50.7)、(1 248.8±86.9)pg/ ml,P<0.05;IL-8 于48 h 分别为(967.6±156.6)、(1 331.0±86.3)pg/ ml,P<0.05。结论:DENV-2 能感pHDMECs;pHDMECs 被DENV-2 感染后,细胞的通透性增加与凋亡无关,与促炎性细胞因子IL-6 和IL-8 明显上调关系密切。     

DENV-2 诱导HUVECs 自噬和影响细胞活力的研究

目的:通过利用登革域型病毒(DENV-2)感染原代人脐静脉内皮细胞(HUVECs)后,研究病毒诱导HUVECs 产生自噬和对细胞活力的影响。方法:利用DENV-2 NGC 株感染HUVECs,Real-time PCR 检测HUVECs 中DENV-2 NS1 基因部分系列的表达,给予自噬诱导剂雷帕霉素(RAPA)和自噬抑制剂氯喹(CQ)预处理观察细胞自噬通量变化,激光共聚焦显微镜观察自噬体形成;CCK-8 检测细胞活力;Western blot 检测自噬通量标志性蛋白LC3、P62 的蛋白表达量。结果:DENV-2 感染HUVECs 组病毒NS1 基因在各时间点均有表达;被感染的HUVECs 在24 h 时细胞活力下降不明显,36、48 h 细胞活力分别下降至未处理组82.46%和78.47%,差异具有显著统计学意义(P<0.05);HUVECs 被DENV-2 感染后,LC3-Ⅱ蛋白量表达明显增高,自噬底物P62 表达明显降低,36、48 h 时间点相较未处理组具有统计学意义(P<0.05),与RAPA 处理组结果相似(P>0.05)。CQ 处理组LC3-Ⅱ及P62 蛋白量表达均明显升高,36、48 h 时间点相较未处理组具有显著性差异(P<0.05)。HUVECs被DENV-2 感染36 h,激光共聚焦显微镜观察到LC3-Ⅱ表达明显高于未处理组,自噬诱导剂RAPA 处理HUVECs 后,LC3-Ⅱ表达明显增加,自噬强度更加明显。DENV-2 与CQ 联合处理组相较DENV 单独处理组,36 h 细胞活力下降了13.61%,差异具有显著统计学意义(P<0.05)。结论:DENV-2 感染可抑制HUVECs 的生长;而DENV-2 诱导HUVECs 产生的自噬却有利于HUVECs 的存活。     

高丽参提取液对大鼠自身免疫性脑脊髓膜炎的保护作用

目的:探讨高丽参提取液(Korean red ginseng extract,KRG)对实验性自身免疫性脑脊髓膜炎(EAE)的治疗作用及相关免疫调节机制。方法:取SD 大鼠30 只,随机分为空白对照组、模型组(实验性自身免疫性脑脊髓炎模型)和实验组(高丽参提取液治疗),每组10 只,对EAE 大鼠进行神经功能评分及体重测量,通过病理学HE 染色和免疫组化观察25 d 脑和脊髓炎症浸润,流式细胞术检测大鼠脊髓和淋巴结CD4+ 、CD4+ / IFN-β+(Th1)、CD4+ / IL-17+(Th17)和CD4+ / Foxp3+ T 细胞数量,实时荧光定量q-PCR 检测大鼠脊髓和淋巴结IFN-β、IL-17、IL-23 和Foxp3 mRNA 水平的表达。结果:治疗组大鼠神经功能评分明显改善,体重明显增加;与模型组比较,实验组神经症状和病理改变减轻;与模型组相比,治疗组中大鼠脊髓和淋巴结 CD4+ 、CD4+ / IFN-β+ 、CD4+ / IL-17+ T 细胞数量减少,而CD4+ / Foxp3+ T 细胞数量增多(P<0.05);大鼠脊髓和淋巴结IFN-β、IL-17、IL-23 mRNA 表达下降,而Foxp3 mRNA 表达增加(P<0.05)。结论:高丽参提取液通过调节免疫系统的CD4+ 、CD4+ / IFN-β+ 、CD4+ / IL-17+和CD4+ / Foxp3+ T 细胞数量和CD4+ T 细胞分泌细胞因子的水平对EAE 起保护作用。     

IL-34 对类风湿关节炎髓系树突状细胞表型的影响

目的:探讨IL-34 对类风湿关节炎(RA)患者单核细胞向髓系树突状细胞(DC)分化的诱导作用,及其在分化过程中对细胞表型的影响。方法:采集RA 患者外周血,Ficoll 密度梯度离心法获得PBMC,培养4 h 后将贴壁细胞分别用GM-CSF+IL-4、IL-4、IL-4+IL-34 刺激3 d,流式细胞术检测CD83、CD86 和CD14 的表达水平;再将GM-CSF+IL-4 刺激3 d 后的细胞加入TNF-α和(或)IL-34 培养4 d,流式细胞术检测CD83、CD86 和(或)CD14 的表达水平。结果:(1)IL-34+IL-4 诱导后CD83、CD86 表达水平较IL鄄4 单独作用明显上调(P<0.01),CD14 表达无差异(P>0.05);IL-34+IL-4 诱导CD86、CD14 表达水平较GM-CSF+IL-4 刺激组下降(P<0.05),CD83 表达无差异(P>0.05)(2)GM-CSF+IL-4+IL-34 诱导CD83、CD86 表达水平较GM-CSF+IL-4+TNF-α组低(P<0.05),但与GM-CSF+IL-4 刺激组对比CD83、CD86 表达水平差异无统计学意义(P>0.05)。(3)GM-CSF+IL-4+TNF-α+IL-34 诱导DC CD83 表达水平较GM-CSF+IL-4+TNF-α刺激组低(P<0.05),但两组CD86、CD14 表达差异无统计学意义(P>0.05)。结论:IL-34 在不成熟DC 诱导过程中发挥一定作用,效应略弱于GM-CSF;IL-34 对成熟DC诱导作用不显著,但参与了不成熟DC 的维持。     

登革病毒Ⅱ型引起原代HDMECs通透性变化机制的初步研究

目的:了解登革病毒Ⅱ型(Dengue virus Type 2,DENV-2)感染原代人真皮微血管内皮细胞(Primary Human dermal micro-vascular endothelial cells,p HDMECs)引起细胞通透性改变的机制。方法:用103TCID50的DENV-2感染p HDMECs;于4、8、12、24、48 h Real time-PCR、免疫荧光法及流式细胞术检测DENV-2 NS1部分序列及蛋白;Transwell法检测细胞通透性;Real time-PCR和双抗体夹心ELISA法检测IL-6和IL-8的变化;流式细胞术检测24、48、72 h细胞凋亡。结果:DENV-2感染的p HDMECs病毒NS1基因相对表达上调,但未检测到病毒NS1蛋白;DENV-2感染的p HDMECs通透性在24、48 h显著升高;p HDMECs被感染72 h后凋亡也无明显变化;IL-6和IL-8 mRNA分别在8、24 h相对表达上调[IL-6:(2.49±0.5)倍,P0.05;IL-8:(6.82±1.69)倍,P0.05];对照组和感染组分泌的IL-6于8 h分别为(869.6±50.7)、(1 248.8±86.9)pg/ml,P0.05;IL-8于48 h分别为(967.6±156.6)、(1 331.0±86.3)pg/ml,P0.05。结论:DENV-2能感染p HDMECs;p HDMECs被DENV-2感染后,细胞的通透性增加与凋亡无关,与促炎性细胞因子IL-6和IL-8明显上调关系密切。     

CD4~+CD25~+调节T细胞对内皮细胞炎性因子分泌的影响

目的:探讨CD4+CD25+调节性T细胞(Tregs)对氧化型低密度脂蛋白(ox-LDL)诱导人脐静脉内皮细胞(HU-VECs)VCAM-1、MCP-1、IL-6表达的影响。方法:磁性细胞分离器(MACS)分离CD4+CD25+T细胞及CD4+CD25-T细胞。在ox-LDL作用下,将内皮细胞分别与anti-CD3mAb激活的CD4+CD25+T细胞,CD4+CD25-T细胞共培养24小时。分别应用流式细胞术、ELISA、real-timePCR测定Tregs对ox-LDL诱导损伤HUVECs炎性因子VCAM-1、MCP-1、IL-6表达的影响。应用Transwell小室及中和抗体实验观察Tregs作用于HUVECs的具体机制。结果:与对照组比较,Tregs细胞可显著抑制ox-LDL诱导损伤HU-VECs炎性因子VCAM-1、MCP-1、IL-6的表达;被Transwell隔离或加入中和性抗体anti-IL-10/anti-TGF-β后,Tregs对HUVECs的抑制作用可被部分逆转。结论:Tregs细胞可显著抑制ox-LDL诱导损伤HUVECs炎性因子的表达,其作用机制既依赖于细胞直接接触,又依赖于细胞因子。     

过表达IDO可增强大鼠骨髓间充质干细胞免疫抑制作用

探讨过表达IDO的大鼠骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cell,BMSC)免疫抑制调节作用机制。通过慢病毒转染体系构建过表达IDO大鼠BMSC并加入基因开启剂。采用体外共培养方式共分12组,检测CD40、CD86、CD80、MHCⅡ、CD274、CD45RA、CD45RA+CD45RB、OX62、Treg、CD4、CD8表达;利用液相芯片检测IL-1α、IL-4、IL-1β、IL-2、IL-10、IFN-γ、IL-18、TGF-β1、TGF-β2、TGF-β3的变化情况。结果显示各组与DC单独培养48h后,共培养组中过表达IDO-BMSC+DC培养组中DC表达CD40、CD86、CD80、MHCII、CD45RA、CD45RA+CD45RB、OX62是降低的,而CD274的表达是升高的,说明过表达IDO提高了BMSC对DC的免疫抑制作用;各组与T细胞单独培养48h后,共培养组中过表达IDO-BMSC+T细胞培养组中T细胞中Treg数量是升高的,CD4+T细胞的变化无明显规律性,但CD8+T细胞是降低的,说明过表达IDO-BMSC可调节CD8+T细胞并可以促进Treg的表达;当将各组BMSC+DC+T细胞培养48h后,可见:共培养组中悬浮细胞表达CD40、CD86、CD80、MHCⅡ、CD45RA、CD45RA+CD45RB、OX62是降低的,而CD274是升高的,再次说明过表达IDO提高了BMSC对DC的免疫抑制作用,而Treg数量增加,CD4+T细胞的变化无明显规律性,但CD8+T细胞是降低的,再次说明IDO能调节CD8+T细胞并可促进Treg的表达;各组培养48h后的上清液进行液相芯片检测,可见IDO-BMSC+DC+T细胞培养组上清中IL-1α、IL-4、IL-1β、IL-2、IFN-γ、IL-18减低,IL-10、TGF-β1、TGF-β2、TGF-β3表达量升高。综上,过表达IDO的BMSC可以通过有效调节DC、T细胞水平及细胞因子分泌,从多免疫途径进行免疫抑制调节。     

正常人外周血TCRVα24+ NKT细胞体外活化特性观察

目的:探讨正常人外周血自然杀伤T(NKT)细胞的数量以及体外活化后表达CD69、IFN-γ和IL-4的规律并与CD3⁺ T细胞进行比较。方法:取正常成人外周血,直接三色荧光标记后溶血获取有核细胞,或以佛波醇酯(PDB)+离子霉素(Ion)刺激并培养6h,经三色荧光标记后溶血并获取有核细胞,以流式细胞术分析NKT细胞和T细胞的数量以及表达CD69和IL-4、IFN-γ的情况。结果:NKT细胞约占外周血T淋巴细胞总数的(1.34±0.42)%(x±s);PDB+Ion活化6h后NKT细胞CD69表达率为(96.71±1.33)%,明显高于对照组(11.47±2.86)%(P＜0.05);同样条件下CD3⁺T细胞CD69表达率分别为(98.60±0.47)%和(1.07±0.45)%(P＜0.05);当莫能菌素(monensin)存在时以PDB+Ion刺激6h后,IL-4阳性NKT细胞的百分比为48.62±2.44,明显高于对照组31.57±3.31(P＜0.05);IFN-γ阳性NKT细胞百分比为46.65±11.91,也高于对照组13.45±6.29(P＜0.01)。CD3⁺T细胞在刺激后表达IL-4和IFN-γ均明显升高,但IL-4表达率远远低于NKT细胞;而且对照组CD3⁺T细胞两种细胞因子表达率都明显低于NKT细胞。结论:正常成人外周血含有少量的NKT细胞,这些细胞IL-4和IFN-γ的表达率明显高于CD3⁺T细胞,是特定微环境里的重要免疫调节细胞。     

CD4~+CD25~+调节性T细胞对内皮细胞抗原提呈功能的影响及机制

目的:探讨CD4+CD25+调节性T细胞(Treg)对内皮细胞抗原提呈功能的影响及机制。方法:磁性细胞分离器(MACS)分离CD4+CD25+T细胞及CD4+CD25-T细胞。在ox-LDL作用下,HUVECs与CD4+CD25+T细胞共培养,24小时后收集HUVECs。应用流式细胞术测定HUVECs抗原提呈分子(HLA DR,CD86,CD80)的表达,Cell Counting Kit-8法(CCK-8)测定HU-VECs刺激CD4+CD25-T细胞增殖的能力,Transwell小室实验初步探讨Treg作用于HUVECs的具体机制。结果:与对照组比较,Treg可显著抑制HUVECs抗原提呈分子的表达及刺激T细胞增殖的能力。用Transwell隔离后,与or-LDL刺激组比较,HU-VECs抗原提呈分子表达及其刺激T细胞增殖的能力无明显变化。结论:Treg可显著抑制HUVECs抗原提呈能力,其作用机制可能为下调CD86的表达,且依赖细胞直接接触。     

The S1P1 receptor-selective agonist CYM-5442 reduces the severity of acute GVHD by inhibiting macrophage recruitment

FTY720, an agonist for four of the five known sphingosine-1-phosphate (S1P) receptors, has been reported to inhibit acute graft-versus-host disease (aGVHD). Because FTY720 functions through multiple S1P receptors, the mechanism of action through one or more of these receptors may account for its side effects. Thus, more selective S1P receptor modulators are needed to evaluate the roles of different S1P receptors and their therapeutic efficacies. In this study, we investigated the effect of an S1P₁-selective agonist, CYM-5442, on the progression of aGVHD. We showed that CYM-5442 significantly inhibited but did not prevent aGVHD. CYM-5442 did not affect the infiltration of the donor T cells into the target organs, while the number of macrophages in GVHD organs was significantly reduced by CYM-5442 treatment. In vivo proliferation assays showed that the proliferation of macrophages was not suppressed by CYM-5442. Further studies using human endothelial cells demonstrated that CYM-5442 treatment downregulated CCL2 and CCL7 expression in endothelial cells, therefore reducing the migration of monocytes, from which tissue macrophages originate. Our data demonstrate the therapeutic efficacy of an S1P₁-selective agonist in aGVHD and its possible mechanism of action. The results suggest that further investigations are needed regarding CYM-5442 as a potential therapeutic regimen for aGVHD.     

MicroRNA-7 在CD4+ T 细胞体外活化中的表达及意义

目的:观察microRNA-(miR-)在体外活化CD4+ T 细胞中表达的变化,初步探讨其意义。方法:采用免疫磁珠分选法(MACS)获得FVB 小鼠脾脏中CD4+ CD62L+ T 细胞,经抗CD3/ CD28 抗体刺激后,Real-ime PCR 检测miR- 7达水平,FACS 检测活化膜分子CD69 的表达变化;进一步观察刺激不同时间点CD4+ T 细胞中miR-7表达的变化;观察ERK 抑制剂PD98059 处理后,CD4+ T 细胞活化下miR-7表达的变化,同时CCK8 法检测细胞增殖变化,FACS 检测CD69 和CD62L 分子的表达变化;最后, Real-time C 检测各组细胞中IL-7、IL-10 和IFN鄄酌等细胞因子表达水平变化。结果:与对照组相比,抗CD3/ CD28 抗体刺激后,CD4+ CD62L+ T 细胞中miR-7 表达水平显著上调,CD69 分子的表达明显增加(P<0.05);与刺激0 h 组和24 h 组相比,48 h 组和72 h 组miR-7 的表达水平显著上调(P<0.05);PD98059 处理组中,CD4+ T 细胞的miR-7 表达水平显著下降(P<0.05),同时,活化膜分子CD69 的表达比例明显降低(P<0.05);最后,细胞表达IL-6、IL-10 和IFN 的水平均显著减弱(P<0.05)。结论:miR-7 在活化的CD4+ T 细胞中明显上调,并与ERK 信号相关,为后续探讨miR-7 在CD4+ T 细胞功能中的作用提供了前期实验基础。     

骨髓间充质干细胞对重症哮喘患儿外周血Th17/Treg的免疫调节作用

 目的：探讨骨髓间充质干细胞（MSCs）在体外对重度哮喘患儿外周血辅助性T细胞17（Th17）和CD4+ CD25+ 调节性T细胞（Treg）的免疫调节作用。方法：体外分离、培养和鉴定MSCs。MSCs经丝裂霉素处理后按不同比例（1∶1、1∶2、1∶10和1∶20）与哮喘患儿外周血T淋巴细胞（TLC）直接接触共培养,检测各组MSCs 对TLC的增殖调节作用。选取上述1∶2比例共培养体系和单独TLC培养体系,ELISA法分别检测Th17的效应分子白细胞介素17（IL-17）和Treg效应分子转化生长因子β（TGF-β）水平,qRT-PCR法检测转录因子维甲酸相关孤儿核受体（RORC）及叉头框蛋白3（Foxp3）mRNA表达水平。结果：MSCs可显著抑制重度哮喘患儿TLC增殖,且随着MSCs数量的增加,抑制作用增强。MSCs+TLC共培养组Th17转录因子RORC mRNA和效应因子IL-17表达较TLC组下降,同时TGF-β表达增高,而Treg细胞调控基因Foxp3 mRNA表达无明显改变。结论：MSCs在体外可能通过抑制Th17分化及IL-17的分泌,同时上调TGF-β的表达,进而有效改善哮喘患儿的Th17/Treg失衡状态。     

人胰腺癌细胞培养上清对树突状细胞TIM-3表达及其功能的影响

 目的: 研究人胰腺癌微环境对树突状细胞(DCs)T细胞免疫球蛋白及黏蛋白-3(TIM-3)表达及其功能的影响,初步探讨肿瘤微环境调节DCs上TIM-3表达的可能机制。方法: 流式细胞术检测肿瘤浸润树突状细胞(TIDC)以及癌旁组织、胰腺癌患者和健康人外周血诱导DCs上TIM-3的表达;观察人胰腺癌细胞培养液上清对健康人外周血单个核细胞经rhGM-CSF和rhIL-4诱导扩增制备DCs上TIM-3表达的影响;酶联免疫吸附法(ELISA)检测TIM-3⁺DCs组和对照组的DCs分别与凋亡胰腺癌细胞Capan-2共培养上清中细胞因子IFN-β和IL-12水平。结果: 胰腺癌组织中TIDC上TIM-3的表达明显高于癌旁组织及患者和健康人外周血的DCs(P<0.01)。人胰腺癌细胞株Canpan-2、SW1990和Panc-1的上清液较人皮肤成纤维细胞Hs27显著上调DCs上TIM-3表达(P<0.05),联合阻断VEGF、IL-10和PGE₂可明显降低Canpan-2细胞上清对DCs上TIM-3的上调作用(P<0.05)。TIM-3高表达DCs组较低表达组分泌的IL-12和IFN-β水平低,而阻断TIM-3后,IFN-β和IL-12水平均升高(P<0.01)。而这种升高趋势可在加入DNase和RNase后消失。结论: 人胰腺癌TIDC上TIM-3表达升高导致其固有免疫功能受损;肿瘤细胞分泌的VEGF、IL-10和PGE₂可能参与TIM-3的表达调控。     

GPIF对免疫损伤小鼠T淋巴细胞膜表面共刺激分子表达的影响

目的：分析羊胎盘免疫调节因子(GPIF)对BALB/c小鼠T淋巴细胞共刺激表面抗原分子表达及其细胞因子分泌的影响，探讨羊胎盘免疫调节因子免疫促进作用机理。方法: 60Coγ-ray辐射所致免疫抑制小鼠连续7 d腹腔注射GPIF，流式细胞分析术分析BALB/c小鼠脾细胞表达CD28+、CD152+单阳性细胞百分率，表达CD4+CD28+、CD8+CD28+、CD4+CD152+、CD8+CD152+双阳性细胞百分率；ELISA法检测小鼠血清IL-2、IFN-γ分泌水平。结果: 羊胎盘免疫调节因子显著提高免疫损伤小鼠脾淋巴细胞CD28+、CD4+CD28+、CD8+CD28+阳性细胞百分率(P<0.05，P<0.01)，降低CD152+、CD4+CD152+阳性细胞百分率(P<0.05，P<0.01)，提高小鼠血清IL-2、IFN-γ分泌水平(P<0.01)。结论: 羊胎盘免疫调节因子的免疫促进作用与其调节T淋巴细胞CD28、CD152共刺激分子通路的活化信号传递，降低T淋巴细胞的功能抑制，促进T淋巴细胞的活化有关。活化的T淋巴细胞分泌细胞因子IL-2、IFN-γ，参与细胞因子介导的免疫网络调节。     

同种异基因移植引流淋巴结及外周血T细胞活化分析

目的:研究同种异基因移植早期局部引流淋巴结和外周血T细胞的活化情况。方法:以小鼠前臂皮下非血管化心肌移植为模型,利用流式细胞术分析前臂引流淋巴结及外周血不同T细胞亚群的CD69表达水平。结果:同种异基因移植后72h,引流淋巴结CD4⁺T细胞和CD8⁺T细胞的CD69表达百分率均明显高于移植前(P＜0.01),且CD8⁺T细胞的表达水平高于CD4⁺T细胞(P＜0.01);各组外周血CD4⁺T细胞和CD8⁺T细胞的CD69表达百分率均无显著差异;局部应用弗氏完全佐剂和全身应用CsA可分别增强和抑制同种异基因移植后CD4⁺T细胞和CD8⁺T细胞的CD69表达(P＜0.05或P＜0.01)。结论:局部引流淋巴结T细胞CD69的表达水平可及时反映受者T细胞对同种异基因抗原的识别情况。