c-Met在结直肠癌细胞株中的表达及其配体肝细胞生长因子对SW480细胞株增殖和侵袭能力的影响

目的探讨c-Met在结直肠癌细胞株中的表达以及其配体肝细胞生长因子(HGF)对结肠癌SW480细胞系增殖、侵袭能力的影响。方法应用RT-PCR及Western blot技术检测HGF受体c-Met在不同结直肠癌细胞中的表达,筛选出c-Met高表达细胞系;用不同浓度(0、20、40、70 ng/m L)的HGF作用SW480细胞48 h,分别用MTT法、Transwell法检测其对SW480细胞增殖、侵袭能力的影响。结果 1 RT-PCR及Western blot检测结果均表明,c-Met在不同结直肠癌细胞系中均有表达,其中体外培养的结肠癌细胞系SW480中存在c-Met和蛋白高表达。2 MTT实验结果显示,HGF可增强SW480细胞的增殖能力,且在一定范围内随浓度增高作用增强,呈剂量依赖性关系。3 Transwell实验结果显示,HGF处理后的SW480细胞侵袭能力增强。结论 c-Met在结肠癌SW480细胞中存在高表达,HGF可促进结直肠癌细胞的增殖及增加其体外侵袭能力。     

应用RNA干扰下调多药耐药蛋白4表达对结直肠癌细胞照射敏感性的影响

目的探讨多药耐药蛋白4（MRP4）表达对结直肠癌细胞照射敏感性的影响。方法应用慢病毒感染RNA干扰技术（RNAi）稳定下调人结直肠癌细胞株HCT116中MRP4的表达。将HCT116细胞分为未感染任何病毒的细胞株（CON）、加阴性对照病毒感染的细胞株（NC）和加RNAi靶点病毒感染的细胞株（KD）3组,应用实时定量RT-PCR和Western blot分别从RNA和蛋白水平检测MRP4表达变化,以验证RNAi的有效性。4Gy剂量照射后24h,流式细胞术检测细胞凋亡,MTT检测细胞增殖,比较RNAi后HCT116细胞株照射敏感性的差异。结果成功构建并转染慢病毒质粒,获得稳定沉默MRP4表达的HCT116-KD细胞株,HCT116-KD细胞株MRP4mRNA和蛋白表达水平较对照均明显下调（P〈0．05）。照射后24h,KD细胞株凋亡率为（71．7±0．8）％,明显高于CON组[（56．1±0．9）％]和NC组[（59．8±0．8）％]（P〈0．05）。照射后48h和72h,KD细胞增殖能力较对照组明显下降（火0．05）。结论MRP4在结直肠癌细胞中的表达水平与照射耐受显著相关,应用慢病毒感染RNA干扰下调MRP4表达可以增强结直肠癌细胞照射敏感性。MRP4有可能成为预测放疗敏感性的分子标志物。     

泛素特异性蛋白酶39对人结直肠癌细胞增殖的调控研究

目的观察结直肠癌组织中泛素特异性蛋白酶39(USP39)蛋白的表达情况,以及USP39基因敲低对结直肠癌细胞系SW1116和HCT116细胞生长和细胞周期的影响。方法 (1)采用免疫组织化学染色方法检测USP39蛋白在结直肠癌组织中的表达情况。(2)选取结直肠癌SW1116和HCT116细胞系作为研究对象,将细胞分为4组(每组5个复孔):KD-1组和KD-2组,采用慢病毒短发夹RNA(shRNA)敲低肿瘤细胞中USP39基因的表达;shCon组细胞感染阴性对照慢病毒,Con组细胞未接受任何处理。采用四唑盐(MTT)比色法检测细胞的增殖能力,采用流式细胞仪检测细胞的周期分布。结果 (1)免疫组织化学染色结果显示,USP39蛋白在结直肠癌组织中的高表达率高于癌旁组织(P=0.007)。(2)不管是在SW1116细胞还是在HCT116细胞中,第3、4及5天时,KD-1组和KD-2组细胞的增殖能力均明显低于shCon组和Con组(P0.05)。(3)不管是在SW1116细胞还是在HCT116细胞的KD-1组中,G_0/G_1期细胞百分比均较Con组和shCon组降低(P0.05),G_2/M期细胞的百分比和亚G_1期细胞数均增加(P0.05)。结论 USP39蛋白高表达于结直肠癌组织中。结直肠癌细胞系中敲低USP39基因的表达可抑制肿瘤细胞的增殖形成能力,促进肿瘤细胞早期发生凋亡。     

BANCR调控VEGF-C/VEGFR-3通路促进胰腺癌微淋巴管生成

目的研究BANCR在胰腺癌中的表达及其对淋巴管生成作用机制。方法实时荧光定量PCR(qPCR)检测胰腺癌细胞(SW1990、PANC-1)及人胰腺导管上皮细胞(HPDC)中BANCR的表达;应用siRNA干扰胰腺癌细胞BANCR的表达,将转染后的胰腺癌细胞与人真皮淋巴管内皮细胞(HDLEC)进行3D共培养,并统计微淋巴管密度(MLVD)。应用qPCR检测转染后的BANCR-siRNA组和空载质粒NC组胰腺癌细胞中VEGF-C、VEGFR-3 mRNA的相对表达量。结果与HPDC的1.02±0.222相比,胰腺癌细胞PANC-1和SW1990中BANCR显著高表达,分别为10.03±3.356、10.37±1.459(P0.001)。干扰BANCR表达后BANCR-siRNA组的胰腺癌细胞MLVD较NC组显著降低(SW1990:3.87±1.767 vs 18.00±6.130,P0.001;PANC-1:5.27±2.631 vs 16.80±3.764,P0.001)。且BANCR-siRNA组中VEGF-C及VEGFR-3转录水平较NC组显著下调(VEGF-C:1.35±0.926 vs 6.97±3.677,P=0.011;VEGFR-3:0.98±0.635 vs 2.88±1.422,P=0.026)。结论 BANCR在胰腺癌细胞中表达上调,并可能通过调控VEGF-C/VEGFR-3通路促进胰腺癌淋巴管生成和淋巴结转移,有望为胰腺癌的诊治提供新靶点。     

基因芯片检测c-Met表达对结直肠癌侵袭和转移的机制研究

目的研究c-Met基因下调后对结直肠癌侵袭和转移的影响机制。方法在SW480细胞中敲低c-Met基因,通过基因芯片筛选差异基因,对差异基因进行功能聚类分析,通过IPA分析细胞信号通路和相关的差异基因相互作用网络以及相关基因与上游调控分子间的作用关系。选取被抑制的信号通路中的相关基因进行qPCR验证。结果敲低c-Met后,SW480细胞中上调基因数目399个,下调基因数目286个。聚类分析热图提示:c-Met敲低后,对SW480细胞的基因表达水平产生了明显影响;IPA通路分析表明:HGF信号通路被抑制,且c-Met敲低后,IPA相互作用网络提示:HGF通路中的AKT2、PIK3CA及MAP2K4下调;qPCR验证上述基因亦下调,与芯片结果相符。结论 c-Met可能通过对HGF通路中AKT2、PIK3CA及MAP2K4的调控影响了结直肠癌的侵袭、转移。     

CDX2基因干扰对人结肠癌细胞在裸鼠体内生长的影响

目的:探讨CDX2基因表达对结肠癌细胞生长的影响。方法:将体外转染CDX2-shRNA慢病毒、空慢病毒载体及无转染的人结肠癌细胞系SW480和HT29接种到裸鼠皮下,制备皮下移植瘤模型,观察各组移植瘤的生长情况,28d后处死裸鼠,剥取移植瘤称重,并分别用免疫组化、Westernblot检测各组移植瘤组织Ki-67与CDX2的表达。结果:与各自空白对照组(无转染的SW480或HT29细胞移植)比较,两个干扰组(转染CDX2-shRNA慢病毒的SW480或HT29细胞移植)移植瘤生长速度均明显加快、移植瘤质量明显增加(SW480:679.11mgvs.379.36mg;HT29:715.78mgvs.427.07mg),瘤组织Ki-67蛋白表达水平明显升高、CDX2蛋白表达明显下调(均P0.05)。两个阴性对照组(转染空慢病毒载体的SW480或HT29细胞移植)的各指标与各自空白对照组间均无明显差异(均P0.05)。结论:抑制CDX2基因的表达能促进人结肠癌细胞的裸鼠体内的生长,故CDX2可能是一种重要的抑癌基因。     

CXCR4 RNA干扰序列筛选及对结肠癌细胞SW480生长的影响

目的筛选细胞表面趋化因子受体（CXCR4） RNA干扰高效序列,探讨其对SW480细胞生长的影响。方法采用RT-PCR和Western blot方法选择最有效的CXCR4 RNA干扰序列,流式细胞术分析转染该序列后SW480细胞生长情况。结果 sihCXCR4-3序列可使CXCR4 RNA相对含量仅为SW480组的5.4%,CXCR4蛋白相对表达量为18.95%。sihCXCR4-3组细胞数[（0.92±0.06）×105]低于SW480细胞组[（1.38±0.04）×105,P=0.0050]及NCsihCXCR4组[（1.28±0.05）×105,P=0.0256];相对SW480组和NCsihCXCR4组,sihCXCR4-3组的抑制率分别为33.03%及28.00%。sihCXCR4-3组G1期百分率明显低于SW480细胞组[（59.5±0.57）%vs.（74.11±0.54）%,P=0.0167];S期百分率高于SW480组[（23.85±0.24）%vs.（14.62±0.46）%,P=0.0305]和NCsihRNA组[（17.63±0.48）%,P=0.0013]。结论 sihCXCR4-3序列可高效沉默CXCR4基因表达,抑制SW480细胞生长。     

SRPK1基因对膀胱癌细胞生物学行为的影响及机制研究

目的观察丝氨酸/精氨酸蛋白特异性激酶1(SRPK1)对膀胱癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响, 并进一步探究其分子机制。方法利用Oncomine癌症数据库分析SRPK1基因在膀胱癌组织及正常膀胱组织中的表达;构建SRPK1特异的慢病毒干扰质粒(sh1和sh2)和阴性对照质粒(NC), 包装慢病毒颗粒, 分别感染T24细胞和5637细胞。设空白对照组(T24和5637)、阴性对照组(T24/NC和5637/NC)、干扰组1(T24/sh1和5637/sh1)和干扰组2(T24/sh2和5637/sh2);采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)和Western blot检测各组细胞中SRPK1 mRNA和蛋白水平的表达变化;采用CCK-8法检测各组细胞增殖能力的变化;采用Transwell细胞迁移和侵袭实验检测各组细胞迁移和侵袭能力的变化;采用Western blot检测各组细胞上皮间质转化(EMT)及AKT通路相关蛋白表达变化。结果 Oncomine癌症数据库中SRPK1 mRNA在膀胱癌组织中的表达明显高于正常膀胱组织(P<0.001)。通过qRT-PCR和Western blot检...     

RNA干扰survivin联合X线放射对大肠癌SW480细胞的影响

目的探讨RNA干扰技术和X线放射处理对大肠癌细胞survivin基因表达的影响。方法合成靶向人survivin基因的siRNA,转染大肠癌细胞SW480,联合或不联合放射治疗。检测转染前后及放射前后细胞survivinmRNA的表达;细胞抑制率及凋亡率,细胞周期分布,细胞survivin蛋白的表达。结果转染survivinsiRNA后的SW480细胞survivin mRNA及蛋白的表达明显低于对照组;SW480细胞转染survivinsiRNA 48 h后G2/M期细胞达(20.90±2.62)%,survivinsiRNA联合放射处理组细胞生长抑制率达59.8%,FCM显示survivinsiRNA联用放射处理组细胞凋亡率达(35.72±1.07)%。结论靶向survivin的siRNA能有效抑制大肠癌细胞SW480 survivin基因的表达,引起大肠癌细胞SW480 G2/M周期阻滞,抑制大肠癌细胞SW480的生长并能诱导其凋亡,并对大肠癌细胞SW480具有放射增敏作用。     

RNA干扰ANXA5表达对人胆管癌细胞QBC939的增殖和侵袭的影响

目的:探讨膜联蛋白A5(ANXA5)对人胆管癌细胞QBC939增殖、凋亡、迁移和侵袭的影响。方法:构建3个沉默QBC939细胞ANXA5的shRNA质粒(ANXA5-sh1/2/3)和1个阴性对照质粒,慢病毒包装质粒后感染QBC939细胞,流式细胞仪检测感染效率。病毒感染QBC939细胞后,Western blotting检测细胞的ANXA5蛋白表达情况;流式细胞仪检测细胞周期和凋亡率变化;划痕实验和Transwell实验评估QBC939细胞迁移和侵袭能力的变化。结果:干扰组(KD)细胞中的ANXA5蛋白水平显著低于空白组(BC)和阴性对照组(NC)细胞中的ANXA5蛋白水平。与NC组和BC组细胞相比,KD组细胞中G0/1细胞的百分比和凋亡率增高,而细胞增殖活性降低。KD组细胞中的细胞迁移和侵袭能力也低于NC和BC组细胞。结论:RNA干扰QBC939细胞的ANXA5表达后,明显抑制其增殖、侵袭和诱导凋亡的作用。     

siRNA靶向抑制GHR对人结肠癌SW480细胞增殖的影响

目的利用小分子干扰RNA(siRNA)技术抑制人结肠癌SW480细胞人生长激素受体(GHR)基因的表达,观察GHR基因沉默对SW480细胞增殖的影响。方法设计特异性siRNA,构建针对人GHR真核质粒的表达载体(pcDNATM6.2-GW/EmGFP-siRNA-GHR),用电转染法转染人结肠癌SW480细胞,培养48~72 h后,用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测细胞增殖活性;Western Blot检测GHR蛋白表达;实时荧光定量PCR(qPCR)方法检测GHRmRNA水平变化。结果转染siRNA后,与对照组相比,转染组细胞增殖速率、GHR的蛋白表达量、GHRmRNA水平均明显降低(均P<0.05)。结论构建的pcDNATM6.2-GW/EmGFP-GHRsiRNA能有效地下调SW480细胞中GHR的表达,从而抑制SW480细胞的增殖。     

人结肠癌细胞中高尔基磷蛋白3表达与Wnt信号通路的关系

目的:探讨人结肠癌细胞中高尔基磷蛋白3(GOLPH3)基因表达与Wnt信号通路活性的关系。方法:用RT-PCR方法检测4种人结肠癌细胞(HCT116、HT29、SW480、SW620)中GOLPH3mRNA的表达,选取GOLPH3高表达的细胞株行GOLPH3基因干扰,用RT-PCR检测干扰效果,然后用TOPFlash报告基因、平板克隆实验、Western blot法分别检测干扰后细胞Wnt信号通路活性、增殖活性以及GOLPH3与β-catenin表达的变化。结果:4种结肠癌细胞中SW620细胞的GOLPH3mRNA相对表达量最高;SW620细胞转染GOLPH3siRNA后GOLPH3 mRNA的相对表达量明显降低(P0.001);与未处理的SW620细胞比较,转染GOLPH3siRNA的SW620细胞Wnt通路转录活性明显降低(0.342 vs.1.000,P0.001)、癌细胞集落形成数明显减少(82.333 vs.207.333,P0.001)、GOLPH3与β-catenin蛋白表达均明显降低(0.260 vs.1.00;0.182 vs.1.00,均P0.001)。结论:人结肠癌细胞中GOLPH3的高表达可增加Wnt/β-catenin细胞信号通路活性,从而促进细胞增殖。结肠肿瘤;高尔基磷蛋白3;Wnt信号通路     

RNAi抑制PSA表达对前列腺癌22RV1细胞增殖和侵袭力的影响

目的 研究PSA表达对去势抵抗性前列腺癌22RV1细胞增殖和侵袭的影响.方法 构建含有针对PSA基因特异性短发夹RNA(shRNA,分别为shPSA1、shPSA2、shPSA3、shPSA4)和阴性对照序列(NC)的慢病毒载体并由慢病毒颗粒包装后,分别感染去势抵抗性前列腺癌22RV1细胞并筛选稳定表达PSA特异性shRNA的shPSA1-、shPSA2-、shPSA3-、shPSA4-和表达NC序列的NC-22RV1细胞.分别应用实时荧光定量聚合酶链反应和Western blot检测shRNA对22RV1细胞中PSA mRNA及蛋白表达的影响;采用CCK-8法、Transwell侵袭试验和流式细胞术检测PSA基因沉默后的22RV1细胞增殖、侵袭和凋亡情况.结果 与NC-22RV1细胞相比,shPSA3-22RV1细胞的基因和蛋白表达水平的沉默效果最好;shPSA2组在24、48、72 h的吸光度值分别为(0.1564±0.0225)、(0.2438±0.0358)、(0.3641±0.0205),shPSA3组分别为(0.1069±0.0120)、(0.1588±0.0192)、(0.2534±0.0289),与NC组比较差异均有统计学意义(P<0.01);shPSA1、shPSA2、shPSA3组侵袭力分别为NC组的77.35%(P=0.002)、54.35%(P<0.001)、42.21%(P<0.001);shPSA2、shPSA3组凋亡率分别为(27.97±4.28)%(P=0.001)、(43.03±3.19)%(P<0.001),高于NC组[(16.77±0.59)%].结论 PSA具有促进去势抵抗性前列腺癌22RV1细胞的增殖和侵袭效应,抑制PSA表达后前列腺癌22RV1细胞凋亡增加.     

RNA干扰靶向抑制磷脂酰肌醇3-激酶P85α蛋白表达对结直肠癌细胞周期和细胞凋亡的影响

目的探讨RNA干扰靶向抑制磷脂酰肌醇3-激酶（P13K）P85α蛋白表达对结直肠癌细胞周期与细胞凋亡的影响。方法设计4条shRNA干扰载体及1条阴性对照载体．分别稳定转染结直肠癌SW480细胞。采用Western blot筛选出对P13K P85α蛋白抑制效率最高的shRNA干扰片段．然后通过PI标记法和Annexin V—FITC标记法分别检测干扰后SW480细胞周期和细胞凋亡情况。结果转染shRNA／324后．SW480细胞P13K P85α蛋白降低最为显著．抑制率为90％。选择该干扰片段进行后续实验。干扰组与对照组SW480细胞的G1期细胞数量分别占（62．4±2．7）％和（51．2±3．5）％;S期细胞数量占（23．9±1．7）％和（34．1±3．4）％;氟尿嘧啶所诱导的细胞凋亡率为（11．1±3．7）％和（1．4±0．6）％;上述差异均有统计学意义（P〈0．05）。结论P13K P85α蛋白表达下降可引起结直肠癌SW480细胞周期阻滞,细胞凋亡增加：PI3K P85α可能成为结直肠癌基因治疗的新靶点。     

LncRNA PCGEM1对结肠癌SW480细胞增殖与侵袭的影响

目的 :探讨lncRNA PCGEM1对结肠癌SW480细胞的增殖与侵袭的影响。方法 :培养人结肠癌SW480细胞,将结肠癌细胞系SW480细胞分成3组进行处理,即空白对照组:不转染慢病毒;阴性对照组:转染无序序列慢病毒载体;试验组:转染沉默lncRNA PCGEM1序列慢病毒载体。荧光定量PCR(RT-PCR)检测RNA表达,CCK-8试剂盒、Transwell和AV-PI试剂盒检测增殖、侵袭与凋亡。结果:lncRNA PCGEM1沉默表达慢病毒载体的滴度为1×10~8TU/mL。RT-PCR结果显示:试验组与阴性对照组相比,lncRNA PCGEM mRNA表达较低,差异有统计学意义(q=8.141,P0.05);Caspase-3 mRNA和Caspase-9 mRNA的表达具有同样的表达趋势(P0.05)。Transwell实验结果显示,3组之间差异有统计学意义(F=21.982,P0.05),试验组和阴性对照组比较差异有统计学意义(q=4.223,P0.05)。CCK-8检测结果显示,3组差异有统计学意义(F=21.214,P0.05),试验组与阴性对照组比较差异有统计学意义(q=5.272,P0.05)。AV-PI检测结果显示,3组比较差异有统计学意义(F=31.009,P0.05),试验组与空白载体病毒组比较差异有统计学意义(q=9.131,P0.05)。结论:lncRNA PCGEM1在结肠癌细胞中高表达。沉默lncRNA PCGEM1表达可以抑制结肠癌细胞增殖和侵袭,促进凋亡。     

组织蛋白酶S表达降低致肝癌细胞凋亡的机制研究

目的:探讨组织蛋白酶S(Cathepsin S,Cat S)表达降低后对肝癌细胞凋亡的影响及其机制。方法:选择2种肝癌细胞系MHCC97-H、Bel-7402,将肝癌细胞分为对照组、Con sh RNA组、Cat S sh RNA组。慢病毒介导的Cat S sh RNA转染肝癌细胞48 h后,Western blot检测Cat S表达变化;Annexin V/PI双染流式测细胞凋亡;Western blot检测内源性凋亡相关蛋白Bax、Bcl-2表达变化;Western blot检测外源性凋亡相关蛋白Fas、Fas-L表达变化。结果:在肝癌细胞MHCC97-H、Bel-7402中,Cat S sh RNA可显著降低肝癌细胞中Cat S表达(P0.01);Cat S表达降低后,凋亡细胞显著增多(P0.01);内源性促凋亡蛋白Bax表达升高(P0.01),抗凋亡蛋白Bcl-2表达降低(P0.01);外源性促凋亡蛋白Fas-L表达明显增强(P0.01),Fas表达无明显变化(P0.05)。结论:Cat S可同时通过内源性及外源性凋亡途径对肝癌细胞的凋亡进行调控。     

肝细胞生长因子和c-Met在胃癌组织中的表达及其意义

目的 分析肝细胞生长因子(HGF)和c-Met与胃癌生物学行为和预后的关系。方法 采用HGF、C-Met、Lyve-1和CD34对58例胃癌组织作免疫组织化学染色并计数,结合胃癌的临床病理资料作相关统计学分析。结果胃癌组织中HGF和c-Met表达明显上调,其微血管密度(26±10)和微淋巴管密度(24±9)均高于胃溃疡组织[(20±4)、(12±4)],差异均有统计学意义(P＜0.01);有淋巴转移的胃癌组织中HGF和c-Met的阳性表达率分别为86％和80％,高于无淋巴转移的胃癌组织(57％、36％),差异均有统计学意义(P＜0.05);有远处转移的胃癌组织中HGF和c-Met阳性表达率分别为100％和94％,高于无远处转移的胃癌组织(71％、60％),差异均有统计学意义(P＜0.05);HGF和c-Met表达与肿瘤是否有淋巴转移、远处转移和微血管密度、微淋巴管密度之间有明显的正相关关系(P＜0.01);HGF、c-Met阳性和阴性组的生存率之间比较差异有统计学意义(P=0.09、P＜0.01);肿瘤侵袭深度、有无淋巴转移、有无远处转移、胃癌的HGF、c-Met表达和微血管密度、微淋巴管密度均是影响胃癌预后的独立因素(P＜0.05)。结论 HGF和c-Met与胃癌的发生发展和预后密切相关,可以作为反映胃癌生物学行为和判断预后的有效指标。     

NK 4抑制结肠癌细胞增殖的机制初探

目的探讨肝细胞生长因子及其受体（HGF/c-Met）拮抗剂对结肠癌细胞的作用及其与MEK/ERK信号通路的关系,明确以HGF/c-Met为靶点治疗结肠癌的细胞内信号传导机制.方法分别将HGF及选择性c-Met拮抗剂NK-4作用于结肠癌细胞系LoVo,运用MTT法分别于0,6,12,24h检测细胞增殖状态;流式细胞仪观察两者对细胞凋亡的影响.采用Western blot检测药物作用前后c-Met,p-c-Met,MEK2和p-ERK及其靶基因产物C-myc的表达.结果NK-4组呈剂量依赖性方式抑制结肠癌细胞增殖,促进其凋亡,并使p-c-Met及MEK2/ERK通路相关蛋白表达下调,而HGF组则使其表达上调;同时处理24 h后,空白组与NK-4组（1μg/mL）中p-c-Met,MEK2,p-ERK及C-myc蛋白表达水平比值分别为2.5 8,1.89,1.67和2.21（P＜0.01）,而与HGF（50ng/mL）组相关蛋白比值为0.46,0.71,068和0.58（P＜0.01）.结论选择性HGF拮抗剂NK-4抗结肠癌可能通过阻断MEK2/ERK信号传导通路影响肿瘤细胞增殖与凋亡,以HGF/c-Met为靶点的结肠癌信号通路阻断治疗具有可行性和有效性.     

SNHG20调控miR-495对甲状腺癌生物学行为的影响

目的:探讨长链非编码RNA(lncRNA)核内小RNA宿主基因20(SNHG20)调控微小核糖核酸-495(miR-495)对甲状腺癌生物学行为的影响。方法:qRT-PCR法检测SW579、TPC-1、Nthy-ori3-1细胞中SNHG20、miR-495的表达;将SW579细胞分为CON组、si-NC组、si-SNHG20组、si-SNHG20+miR-NC组、si-SNHG20+miR-495 inhibitor组。检测细胞增殖、凋亡、周期和侵袭情况,细胞MMP-2、E-Cadherin、N-Cadherin蛋白表达情况,验证SNHG20和miR-495的关系。结果:与正常甲状腺上皮细胞相比,甲状腺癌细胞株SNHG20表达升高,miR-495表达降低(P<0.05),且SW579细胞SNHG20表达最高,miR-495表达最低,因此后续使用SW579细胞进行转染实验。SNHG20低表达会降低SW579细胞中SNHG20表达、存活率、侵袭个数以及MMP-2和N-Cadherin蛋白表达,升高细胞中miR-495表达、凋亡率、G0/G1期细胞比例以及E-Cadherin蛋白表达(P<0.05);miR-495抑制剂可减弱SNHG20低表达对SW579细胞增殖、侵袭的抑制作用,SNHG20靶向调控miR-495表达(P<0.05)。结论:低表达SNHG20可通过靶向调节miR-495抑制甲状腺癌细胞恶性生物学行为。     

TrkB影响结肠癌细胞SW620侵袭能力及与ERK信号通路活化关系的研究

目的:探讨干扰结肠癌细胞TrkB蛋白表达及抑制ERK活化对细胞增殖、凋亡和侵袭以及细胞内ERK磷酸化水平的影响。方法:应用特异性TrkB-siRNA瞬时转染及ERK特异性抑制剂处理SW620结肠癌细胞,观察SW620细胞增殖、凋亡和侵袭情况以及细胞内ERK磷酸化水平的变化。结果:特异性siRNA转染高表达TrkB的SW620细胞,TrkB蛋白表达减少,ERK的磷酸化水平降低,且转染组细胞数显著低于对照组(P=0.001),转染组的细胞凋亡率显著高于对照组(P=0.000 1),24 h后侵袭至下层小室的细胞数转染组显著低于对照组(P=0.001);ERK抑制剂明显降低SW620细胞ERK磷酸化水平(P=0.001),而对ERK蛋白表达没有影响,且应用ERK抑制剂作用SW620细胞,对照组和处理组中细胞数没有显著差异(P=0.544),对照组和处理组中SW620细胞的凋亡率差异无统计学意义(P=0.103),但对照组24 h后侵袭至下层小室的细胞数显著高于处理组(P=0.0001)。结论:干扰TrkB蛋白表达能够降低高转移结肠腺癌SW620细胞内ERK磷酸化水平,促进细胞凋亡并抑制细胞增殖和侵袭。同时应用ERK特异性抑制剂也显著抑制细胞侵袭。因此ERK信号转导通路可能与TrkB介导的结肠腺癌细胞抗凋亡和侵袭能力的增加相关,沉默TrkB表达可能成为阻断结肠癌转移的新靶点。