荧光免疫层析定量检测髓过氧化物酶方法的建立

目的：通过荧光免疫层析技术初步建立MPO荧光免疫层析定量检测方法。方法：采用羧基荧光微球，利用EDC一步法偶联标记抗体，对过程中EDC量、标记蛋白量与标记时间、保护液进行研究，选出最佳条件，并对线性范围、灵敏度、精密性等进行性能评价。结果：确定偶联过程中EDC 160 μg，标记蛋白125 μg、标记1.5 h；线性范围3.125~600 ng/ml，最低检出限0.9 ng/ml；精密性质控品(高、中、低)批内、批间变异系数均小于10%；通过与国外试剂盒（ELISA法）检测比对45份临床血清，相关性良好，R2=0.979 5。结论：成功建立荧光免疫层析快速定量检测MPO的方法，为冠心病的辅助诊断提供一种技术手段。     

HPV16/18 E6蛋白荧光免疫层析联合检测方法的建立

目的建立宫颈上皮细胞中人乳头瘤病毒(HPV)16/18型E6蛋白的荧光免疫层析联合定量检测方法。方法采用荧光免疫层析原理和双抗体夹心法,制备荧光免疫层析联合检测试纸条,并对线性范围、精密性、特异性等性能指标进行评价。结果实现了对HPV16/18 E6蛋白的联合定量检测;HPV16 E6蛋白线性范围为2.0~200 ng/ml,HPV18 E6蛋白线性范围为2.0~200 ng/ml;与鳞状细胞癌抗原(SCCa)、人附睾蛋白4(HE4)无明显交叉反应;批内CV均小于10%,批间CV均小于15%,平均回收率分别为102.4%和98.1%;检测经临床病理确诊的宫颈癌样本46份、癌前病变CINⅢ样本38份及健康样本52份,本方法敏感性分别为91.3%、84.2%,特异性达到100%。结论初步建立了联合定量检测HPV16/18 E6蛋白的荧光免疫层析方法,为临床筛查宫颈癌提供一种新的检测手段。     

人乳腺珠蛋白荧光免疫层析检测方法的建立

目的:建立外周血中人乳腺珠蛋白(hMAM)荧光免疫层析快速定量检测方法.方法:采用双抗体夹心法制备免疫层析试纸条,并评价线性范围、精密性、特异性等性能指标.结果:实现了外周血中hMAM定量检测,线性范围0.312～20 ng/ml,批内变异系数均小于10％,批间变异系数均小于15％,平均回收率102.6％,与癌胚抗原(...     

铁蛋白时间分辨荧光免疫层析法的建立及临床应用

建立铁蛋白(FER)时间分辨荧光免疫层析检测法(TRFIA-POCT)并进行临床应用。将FER抗体和兔IgG包被在硝酸纤维素膜(NC膜)上,以荧光微球标记抗FER单克隆抗体及兔IgG分别作为检测线和质控线制备荧光免疫层析试纸条。FER-TRFIA-POCT的灵敏度为0.5ng/ml;批内CV为3.2%~4.6%,批间CV为3.8%~5.2%;平均回收率为100.5%;热稳定性好;与电化学发光分析技术(ECLIA)比对,相关系数达0.8898。正常参考值范围男性为90~350ng/ml,女性为30~260ng/ml。本法建立的FER-TRFIA-POCT是一个快速高灵敏和可靠的检测。     

建立联合检测人附睾蛋白4、糖类抗原15-3荧光层析方法

目的:建立联合检测HE4、CA15-3荧光免疫层析的方法。方法:采用双抗体夹心法与荧光免疫层析相结合,联合检测HE4、CA15-3,并对检测时间、线性范围、最低检出限、精密性等指标进行评价。结果:检测时间15 min,HE4和CA15-3线性范围分别为15.6～1 500 pmol/L和7.8～500 U/ml;最低检出限分别为14.33 pmol/L和5 U/ml;批内与批间精密性均小于15%;准确率均在90%以上;与罗氏电化学发光法平行检测60份临床样本,相关系数均在95%以上。结论:初步建立了定量联合检测血清中HE4、CA15-3的荧光免疫层析检测方法,有较好的临床应用前景。     

血清淀粉样蛋白A、C 反应蛋白荧光免疫层析联合检测方法的建立

目的:建立一种可同时定量检测人血清中SAA、CRP含量的荧光免疫层析方法。方法:采用双抗体夹心原理制备SAA、CRP联合检测荧光免疫层析试纸条,对标记、包被抗体量进行研究后,对试纸条线性范围、精密性、交叉反应等性能指标进行评价。结果:最终确定SAA、CRP标记量均为20μg,包被浓度分别为2 mg/ml、1.5 mg/ml,SAA、CRP线性范围为0.78～200μg/ml;批内精密性与批间精密性均小于15%,平均回收率分别为101.7%和103.5%;且SAA和CRP两种抗原进行联合检测时无交叉反应,与西门子BN ProSpec~?特定蛋白分析系统上平行检测80份临床血清其相关性良好。结论:初步建立了联合定量检测SAA、CRP的荧光免疫层析方法,为感染性疾病的早期筛查提供一种新的检测手段。     

时间分辨荧光免疫分析法测定人血清α-FP

本文报告应用时间分辨荧光免疫分析技术测定人血清α-FP浓度。研究结果表明,将BAS引入该技术,使方法学稳定性和灵敏度有明显提高。本法批内CV为3.8～5.2％。批间CV为4.80～12.3％,最小检出值<1ng/ml,平均回收率为102.8％。健康成人测定参考值为5.56±5.38ng/ml(±SD)。聚苯乙烯微量滴定孔条经戊二醛处理后可提高包被抗体含量。     

甲状腺过氧化物酶抗体TRFIA技术的建立及临床应用

目的:建立甲状腺过氧化物酶抗体(TPOAb)时间分辨荧光免疫分析(TRFIA)竞争检测法。方法:用TPO抗原包板,用Eu3+标记羊抗鼠IgG做标记物,TRFIA检测人血清中的TPOAb。结果:TPOAb-TRFIA的灵敏度为1.0IU/ml;批内CV为3.2%～5.3%,批间CV为3.6%～5.6%;平均回收率为97.95%;热稳定性好;与电化学发光分析技术(ECLIA)比对,相关系数达0.9861;女性TPOAb测定值显著高于男性(P<0.01),且人群中TPOAb的阳性率女性也显著高于男性;TPOAb的正常值范围为≤32.6IU/ml。结论:本法建立的TPOAb-TRFIA是一个高灵敏和可靠的检测,有助于甲状腺疾病的临床诊断。     

人肌酸激酶同工酶MB(质量法)化学发光免疫分析定量检测方法的建立及性能评价

利用化学发光免疫分析技术,建立一种人肌酸激酶同工酶MB(CK-MB)定量检测方法。采用基于化学发光免疫分析的双抗体夹心法(以纳米磁微粒为固相载体包被抗人CK-MB抗体,以另一抗体交联碱性磷酸酶为标记物)研制CK-MB化学发光免疫定量检测试剂盒。并进行一系列性能评估及临床相关性试验。该检测方法的线性范围为(0.1~300)ng/ml;空白限为0.1 ng/ml;批内精密度和批间精密度均小于5%;准确度:添加回收率在(100±5)%以内;在正常人血清中添加100 ng/ml的CK-BB及10000 ng/ml的CK-MM,对测定结果没有产生影响;当样本中存在高浓度的甘油三酯、血红蛋白、胆红素以及RF和HAMA时测试偏差在±15%范围以内;试剂在37℃放置72h后。稳定性良好,各性能指标均达到要求;相关性试验结果r0.98,一致性结果良好。参考值范围为:(0.42~6.34)ng/ml。本研究建立的CK-MB化学发光免疫分析定量检测方法的各项性能指标均达到了临床检测要求,可用于临床血清CK-MB检测。     

终点法测定缺血修饰白蛋白(IMA)的评价及其应用研究

目的对终点法测定缺血修饰白蛋白(IMA)试剂盒进行性能评价,判断其分析性能是否满足临床要求。方法应用终点法测定血清中的IMA含量,对试剂盒的线性、精密度和准确度做出评价。结果质控品的日内CV分别为:低值血清CV=2.12%,高值血清CV=0.48%;日间CV分别为:低值血清CV=2.46%,高值血清CV=2.73%。连续10次测定2个水平的定值质控,得到低值和高值质控的准确率分别为99.95%和99.98%。回收率为99.50%～105.70%。线性试验表明IMA(R2=0.9999)有很好的线性范围。干扰试验表明,溶血、乳糜和黄疸等干扰因素对于IMA测定影响不大。危重病组和急性冠脉综合征(ACS)组的IMA显著低于健康对照组(P0.01)。结论该商品化缺血修饰白蛋白(IMA)试剂盒符合实验室性能标准,且灵敏、方便、简单,可批量测定,适用于临床检验。IMA的特异性较好,对于ACS的诊断具有重要意义。     

表皮生长因子（EGF）放射免疫分析方法建立及临床应用

目的：研究表皮生长因子（epidermal growth factor,EGF）放射免疫分析方法的建立和临床应用。方法：采用人EGF对豚鼠免疫,获得高比度的抗血清,建立了体外放射免疫分析,并用来检测正常人、肝癌、糖尿病、结肠癌、肺癌、胃癌、子宫肌瘤及卵巢癌患者血清EGF浓度。结果：标准曲线范围（0.2～27）ng/ml;批内和批间（CV）分别为4.6%及8.7%;灵敏度为0.18ng/ml;回收率在95%～104%之间。分别测定正常人、肝癌、糖尿病、结肠癌、肺癌、胃癌、子宫肌瘤及卵巢癌血清EGF浓度,依次为（0.52±0.25）ng/ml,n=74;（1.29±0.58）ng/ml,n=99;（1.91±0.58）ng/ml,n=90;（1.43±0.56）ng/ml,n=90;（1.30±0.47）ng/ml,n=95;（1.25±0.58）ng/ml,n=87;（1.49±0.46）ng/ml,n=44;（1.79±0.60）ng/ml,n=54。病人血清EGF浓度与正常人经统计学处理均P〈0.01,有显著性差异。结论：所建立的EGFRIA能用于临床及科研需要。     

AFP时间分辨荧光免疫分析试剂盒的研制及其临床应用

目的:研制AFP时间分辨荧光免疫分析(TrFIA)试剂盒。方法:采用双抗体夹心法建立AFP-Tr-FIA试剂盒,对反应条件进行优化,并对试剂盒的各项指标进行评价。结果:抗体包被浓度确定为5μg/m l,铕标抗体最佳稀释比为1 50。试剂盒的线性范围为1ng/m l~1210ng/m l,灵敏度为0.41ng/m l,准确度高,批内和批间变异系数分别5.1%~8.8%,6.7%~11.9%。与CA199、CA125、CEA和白蛋白无交叉反应。破坏试验表明试剂在37℃可稳定7d。收集50例肝癌患者和370例健康人血清,用本试剂盒测得肝癌患者血清AFP浓度(557.3ng/m l±322.1ng/m l)显著高于健康人(6.5ng/m l±5.4ng/m l)(P<0.001)。370例正常人血清标本测试该试剂盒的正常参考范围为(0~12.0)ng/m l。本试剂盒检测结果与商用W allac AFP试剂盒检测结果相关系数为0.9988。结论:试剂盒各项指标达到规定的要求,可用于临床血清AFP检测。     

电化学发光法检测鳞状上皮细胞癌抗原的性能验证及与化学发光微粒子法检测的一致性评价

目的对罗氏Cobas e602电化学发光法检测鳞状上皮细胞癌抗原(SCCA)进行性能验证,并对电化学发光法和新产业Maglumi 2000 Plus化学发光微粒子法检测SCCA结果进行一致性评价。方法对电化学发光法检测SCCA的精密度、线性范围、稀释倍数、参考区间进行性能验证。用化学发光微粒子法和电化学发光法同时检测107例血清样本SCCA,对两种方法检测结果进行一致性评价。结果电化学发光法检测SCCA低值和高值的批内 CV 分别为2.4%和3.7%,批间 CV 分别为1.2%和1.6%;在0.32~68.26 ng/mL范围内线性良好, R 2 =0.9997;在1 ∶10和1 ∶20稀释倍数性能良好,临床可报告范围上限达到1400 ng/mL;20名表观健康者均在试剂盒给定的参考区间内(0~2.7ng/mL)。电化学发光法和化学发光微粒子法一致性评价结果显示,组内相关系数ICC=0.836,两种方法总体一致性良好;Bland- Altman偏差分析显示两种方法SCCA结果在低值部分(0~5.0ng/mL)一致性良好,随着SCCA浓度增加,偏差逐渐增大。结论罗氏Cobas e602电化学发光法检测SCCA的精密度、线性范围、稀释倍数、参考区间均符合检测要求。罗氏Cobas e602电化学发光法和新产业Maglumi 2000 Plus化学发光微粒子法检测SCCA在低值部分一致性良好,随着SCCA浓度升高,偏差逐渐增大。     

ELISA 法检测食蟹猴血浆中rhCNB 多肽的方法学评价

目的:酶联免疫吸附法(ELISA)定量测定食蟹猴血浆中rhCNB多肽的方法学评价。方法:利用双抗体夹心ELISA法,对rhCNB多肽的方法学灵敏度、线性范围、精密度与准确度和回收率进行方法学验证。结果:该方法特异性高,在0.195~12.5 ng/ml的线性范围内,线性关系良好,标准曲线方程为Y=15.1X-0.26,R~2=0.996 8,定量下限(LLOQ)为0.195 ng/ml;该方法的批内精密度CV分别为3.55%、1.39%和4.71%;批间精密度CV分别为1.59%、3.2%和3.8%,均5%,准确度在91.9%~108.8%之间,方法回收率在88.5%~108.3%之间,110%,说明该ELISA方法的准确度较高。符合验证要求。结论:双抗体夹心ELISA法灵敏度高、通量大、重复性、准确度及精密度好,可用于生物样品中rhCNB多肽的定量检测。     

TgAb时间分辨荧光免疫分析间接测定法的建立及临床应用

目的建立甲状腺球蛋白抗体(TgAb)时间分辨荧光免疫分析(TRFIA)间接检测法。方法用Tg抗原包板,用铕(Eu3+)标记兔抗人IgG做标记物,间接法TRFIA检测人血清中的TgAb。结果 TgAb-TRFIA的灵敏度为1.0 IU/ml;批内变异系数(CV)为3.1%～3.6%,批间CV为3.3%～3.6%;平均回收率为101.6%;热稳定性好;与电化学发光分析技术(ECLIA)比对,相关系数达0.8945;与临床结果高度相关。结论本法建立的TgAb-TRFIA是一个高灵敏和可靠的检测,有助于甲状腺疾病的临床诊断。     

量子点流式微球技术检测抗胰岛素抗体方法学建立

目的将量子点荧光探针应用于流式微球技术,创建出量子点流式微球技术检测人抗胰岛素抗体的方法并对其偶联率、精密度、线性范围、灵敏度进行初步评价。方法将胰岛素与羧基化微球偶联制备免疫诊断微球,与血清或标准品中人抗胰岛素抗体结合后,加入兔抗人IgG抗体,最后加入生物素化的羊抗兔IgG抗体和链霉亲和素化的量子点,使微球表面呈现荧光,并通过流式细胞仪检测平均荧光强度(mean fluorescent intensity,MFI)并记录。结果羧基化微球偶联胰岛素的性能显著强于空白微球,偶联0.5～3 h为最佳偶联反应时间,偶联成功的免疫诊断微球放置4℃冰箱至少可稳定50 d。微球偶联微球表面所携带荧光MFI与所测抗胰岛素抗体浓度成正比,量子点流式微球技术检测同一标本的灵敏度(3.74 pg/ml)、精密度(8.24%)、线性范围(3.74～5 000 pg/ml)都优于酶联免疫吸附试验所测得灵敏度(24.53 pg/ml)、精密度(12.31%)、线性范围(24.53～2 500 pg/ml)。结论本实验创建的量子点流式微球技术可用于人血清抗胰岛素抗体测定,其检测性能良好。     

PSA、fPSA双标记时间分辨荧光免疫分析临床应用价值

目的 :探讨PSA、fPSA双标记时间分辨荧光免疫分析 (DELFIA)技术在前列腺良恶性疾病诊断中的价值。方法 :采用双标记DELFIA检测 2 3例病理确诊的前列腺癌 (PCa) ,4 0例良性前列腺增生 (BPH)及30例正常对照血清PSA、fPSA水平 ,并与化学发光分析 (Immulite)比较。结果 :PSADELFIA测定结果PCa组(1 5 8 39± 92 5 5ng/ml)高于BPH组 (9 0 0± 1 0 6 1ng/ml)及对照组 (1 1 7± 0 6 9ng/ml) ,三组间比较有极显著性差异 (p <0 0 0 1 )。DELFIA与Immulite两种方法测定结果呈高度正相关关系 (r =0 95 4 ,p <0 0 0 1 )。PSADELFIA敏感性为 1 0 0 % ,特异性为 5 5 0 % ;Immulite敏感性为 1 0 0 % ,特异性为 4 7 5 %。fPSADELFIA测定结果PCa组 (73 8± 93 5 8ng/ml)高于BPH组 (1 5 8± 1 6 7ng/ml)及对照组 (0 31± 0 1 7ng/ml) ;三组间比较均有极显著性差异 (p <0 0 0 1 )。BPH组及对照组两种方法测定结果呈正相关关系 (r =0 94 ,p <0 0 0 1 ) ,PCa组两种方法测定结果亦呈正相关关系 (r =0 5 6 3,p <0 0 1 )。 结论 :PSA、fPSA双标记时间分辨荧光免疫分析一次检测可同时测出PSA及fPSA结果 ,这种分析对前列腺癌的检测有很高的敏感性     

时间分辨荧光免疫法测定血清AFP的方法学评价

对时间分辨荧光免疫法(TRFIA)测定血清AFP的方法学予以评价.评价TRFIA法测定AFP的线性范围、灵敏度、精密度、回收率及与ELISA法和RIA法的相关性.结果显示:AFP线性范围1～1000U/mL,检测下限≤0.1 U/mL,批内及批间变异系数分别为2.3%、5.3%,回收率97.85%,与ELISA法及RIA法高度相关,r值分别为0.982与0.991.正常血清AFP参考值0.8～10.5 U/mL.结论:TRFIA测定AFP线性范围宽,稳定性好,灵敏度与准确度高,无放射性污染,是当前免疫分析中有发展前途的一项超微量检测技术.     

新型铕络合物用于HBsAg的时间分辨荧光免疫检测

利用稳定的新型铕荧光络合物BHHCT与Eu3+标记羊抗人HBsAb和Eu3+标记BSA-SA,建立定量测定血清HBsAb的Eu3+-BHHCT-HBsAb-TRFIA法和Eu3+-BHHCT-BSA-SA-TRFIA法.结果表明,这两种方法最低检出值分别为0.2ng/mL和0.05ng/mL,标准曲线范围均为0-100ng/mL,批内变异系数CV均小于10%,后者回收率为85%-115%.用Eu3+-BHHCT-BSA-SA-TRFIA法与ELISA法同时检测118份血清样品,结果表明前者的检出率比后者高.     

荧光免疫层析法定量检测胃蛋白酶原及应用

目的 建立一种一次操作即可同时定量检测胃蛋白酶原Ⅰ及胃蛋白酶原Ⅱ荧光免疫层析的方法,检测人血清中胃蛋白酶原Ⅰ(PGⅠ)及胃蛋白酶原Ⅱ(PGⅡ)的含量,用于辅助诊断慢性萎缩性胃炎和早期胃癌.方法 将鼠抗胃蛋白酶原Ⅰ (PGⅠ)抗体用划线机喷到硝酸纤维素膜表面作为检测线1(T1),将鼠抗胃蛋白酶原Ⅱ(PGⅡ)抗体用划线机喷到硝酸纤维素膜表面作为检测线2(T2),将羊抗兔IgG多克隆抗体喷到硝酸纤维素膜表面作为质控线(C);用荧光素分别标记鼠抗胃蛋白酶原Ⅰ(PGⅠ)抗体、鼠抗胃蛋白酶原Ⅱ(PGⅡ)抗体和兔IgG抗体,将所制得的以上三种抗体荧光素标记物按一定比例混合,均匀喷到玻璃纤维素膜上制得荧光标记物垫;以双抗体夹心法反应模式制备同时定量检测胃蛋白酶原Ⅰ及胃蛋白酶原Ⅱ的荧光免疫层析法试纸条,并使用酶联免疫法试剂进行比对,对方法的线性、精密度、最低检出限、回收率、相关性等方面进行分析.结果 荧光免疫层析法检测胃蛋白酶原Ⅰ及胃蛋白酶原Ⅱ,进行Logistic曲线四参数拟合,R2均为0.99,拟合度较高;精密性CV分别为3.59％、3.40％;荧光免疫层析法与酶联免疫法的相关性较好(PG Ⅰ和PGⅡ分别为r=0.99,r =0.99);最低检出限分别为0.81 ng/mL和0.72ng/mL.结论 所建立的在一个检测条上同时测定胃蛋白酶原Ⅰ(PGⅠ)及胃蛋白酶原Ⅱ(PGⅡ)含量的荧光免疫层析法方法,具有较好的特异性和较高的灵敏度,PG Ⅰ和PGⅡ无相互干扰,结果准确、操作便捷,便于我国基层疾控中心及医疗结构对胃蛋白酶原的检测.