细胞焦亡与原发性肝癌研究进展

细胞焦亡是一种不同于凋亡、自噬的程序性细胞死亡方式。其特征是在Gasdermin介导下,细胞膜发生破裂,之后释放细胞内容物和促炎因子,进而导致细胞死亡。细胞焦亡炎症通路包括由Caspase-1活化的经典通路和Caspase-4/-5/-11介导的非经典通路。细胞焦亡与原发性肝癌(primary liver cancer,PLC)的发生、发展联系密切,该文就细胞焦亡的发生机制及其在PLC的早期诊断、治疗、预后及药物开发等相关领域中的研究进展作简要综述。     

柠檬苦素对人肝癌细胞SMMC-7721的体外抑制作用

目的:探讨柠檬苦素(limonin)对人肝癌细胞株SMMC-7721的体外抑制作用。方法:采用四唑盐(MTT)比色法观察不同浓度柠檬苦素对人肝癌细胞株SMMC-7721增殖的影响;绘制细胞株SMMC-7721的生长曲线观察柠檬苦素对其增殖的影响。结果:MTT结果显示,不同浓度柠檬苦素对SMMC-7721细胞生长均有一定抑制作用,且除1.25μg.mL-1浓度外,同一时间各浓度组与对照组相比均有统计学差异(P<0.05);柠檬苦素浓度为1.25-80μg.mL-1,对SMMC-7721细胞48小时的抑制率为3.86%-71.06%,且48小时IC50值为24.42±5.27(19.15?29.69)μg.mL-1;生长曲线结果提示,柠檬苦素对SMMC-7721细胞的抑制作用呈明显时效和量效关系。结论:柠檬苦素对人肝癌细胞株SMMC-7721的增殖具有抑制作用。     

陡脉冲电场对体外人肝癌细胞SMMC-7721的诱导凋亡作用

为研究陡脉冲电场的诱导凋亡作用,以体外人肝癌细胞SMMC-7721为实验对象,采用Annexin V-FITC/PI双染色并利用流式细胞术检测磷脂酰丝氨酸(PS)外翻,采用琼脂糖凝胶电泳检测DNA降解片段化.实验发现,陡脉冲电场能有效(P<0.05)地使PS外翻,并且微秒级陡脉冲(μsSPEF)比纳秒级陡脉冲(nsSPEF)更有效(P<0.05);陡脉冲电场能使DNA降解片段化,且nsSPEF比μsSPEF更有效.实验结果表明,陡脉冲电场能有效诱导体外人肝癌细胞凋亡,其机理与陡脉冲电场非热效应及其频谱特性有关.μsSPEF主要作用于细胞膜,而可能通过外源性通路诱导细胞凋亡;nsSPEF主要作用于细胞核和线粒体等胞内细胞器,可能通过内源性通路诱导细胞凋亡.实验结果为陡脉冲电场杀伤肿瘤细胞的机制和参数选择提供了依据.     

细胞焦亡研究进展

细胞焦亡是一种新发现的依赖于Gasdermin蛋白家族成孔活性的细胞程序性炎症坏死,在抵抗外部病原体入侵和感知内源危险信号中发挥着不可替代的作用,其形态学特征、发生及作用机制与细胞凋亡等典型细胞死亡方式有显著不同。焦亡由炎症小体激活Caspase-1的经典细胞焦亡途径和胞质LPS激活Caspase-4/5/11的非经典细胞焦亡途径而诱发。本文就近年来细胞焦亡的发现和命名、形态学和分子特征、分子机制和焦亡相关的疾病进行综述,为疾病预防诊断及临床药物的靶向治疗提供理论依据和现实的可行性。     

肝癌SMMC-7721细胞中侧群细胞分选及其生物学特性的研究

目的: 分选肝癌SMMC-7721细胞中的侧群(SP)细胞并分析其生物学特性。方法: 采用流式细胞荧光激活分选(FACS)技术将SMMC-7721细胞分为SP细胞和非侧群(NSP)细胞2个亚群。细胞生长曲线法和平板克隆法比较SP细胞和NSP细胞的增殖能力和克隆形成能力;Transwell法检测SP细胞和NSP细胞的迁移及侵袭能力;流式细胞术分析细胞周期及细胞凋亡率;裸鼠体内成瘤实验比较SP细胞和NSP细胞的致瘤性。结果: SMMC-7721细胞中分选出的SP细胞比例为(9.2±0.2)%。SP细胞中G₀/G₁期细胞比例高于NSP细胞,凋亡率低于NSP细胞(P＜0.05);SP细胞的增殖速度、克隆形成能力、体外迁移和侵袭能力均明显高于NSP细胞(P＜0.05);裸鼠成瘤实验显示SP细胞的致瘤能力明显高于NSP细胞。结论: 肝癌SMMC-7721细胞中的SP细胞可能富集了肝癌干细胞。     

糖尿病与细胞焦亡

细胞焦亡是不同于坏死与凋亡的另一种细胞死亡形式。对于机体而言细胞焦亡有助于维持内环境稳态,但是过度的细胞焦亡会引发机体疾病状态,糖尿病就是其中之一。糖尿病前期、糖尿病的代谢产物和肠道菌群变化会引起细胞焦亡的发生,而细胞焦亡进一步促使胰岛β细胞数量减少和胰岛素靶器官的胰岛素抵抗形成,加重糖尿病病情的发展和并发症的发生。以细胞焦亡为基础的治疗方法虽然越来越被关注,但有待进一步研究。     

白藜芦醇对TRAIL诱导人肝癌细胞SMMC-7721凋亡的影响研究

目的研究肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体（TRAIL）诱导人肝癌细胞株SMMC-7721凋亡作用及白藜芦醇对TRAIL的增敏效果。方法培养SMMC-7721细胞,同步化后,分成对照组、TRAIL干预组、Res＋TRAIL干预组,作用24h后,收集细胞,用流式细胞仪进行凋亡分析。结果对照组SMMC-7721细胞的凋亡率为3．02％±0．17％,TRAIL干预组凋亡率为8．55％±1．46％,Res＋TRAIl。干预组中25μmol·l-1、50μmol·l-1、100μmol·l-1。凋亡率分别为8．61％±1．41％、20．72％±1．33％、27．19％±1．43％。TRAlL干预组、Res＋TRAIL干预组与对照组相比,差异均有显著性（P〈0．01）。Res＋TRAIL干预组（5μmol·l-1、100μmol·l-1白藜芦醇）与TRAIL干预组相比,差异均有显著性（P〈0．01）;而Res＋TRAIL干预组（25μmol·l-1白藜芦醇）与TRAIL干预组比较差别无显著性（P〉0．05）。结论本研究表明’FRAIL对SMMC-7721细胞有凋亡诱导作用;白藜芦醇对TRAIL诱导人肝癌细胞SMMC-7721凋亡有致敏作用,且呈剂量依赖关系。     

RNAi沉默Beclin 1基因对维生素K3损伤人肝癌细胞SMMC-7721的影响

目的： 探讨应用RNAi技术沉默Beclin 1基因对维生素 (vitamin K3,Vit K3)引起的人肝癌SMMC-7721细胞损伤的影响。方法: 应用真核细胞转染技术将Psilencer 3.1-siRNA-Beclin 1重组质粒转入人肝癌SMMC-7721细胞,同时分别设立转染空质粒阴性对照组和转染试剂阴性对照。于48 h后收集细胞,分别提取细胞总RNA及总蛋白,通过RT-PCR和Western blotting检测Beclin 1基因表达。应用40 μmol/L Vit K3作用Beclin 1-siRNA细胞株,Hoechst 33342染色检测细胞凋亡率。结果: 与对照组相比,siRNA重组质粒明显降低Beclin 1 mRNA水平,抑制其蛋白表达。40 μmol/L Vit K3作用人肝癌SMMC-7721细胞Beclin 1 mRNA表达明显高于对照组,细胞凋亡率增加(P<0.01）;而Beclin 1-siRNA细胞株,Beclin 1 mRNA表达显著低于对照组,与40 μmol/L Vit K3作用组相比细胞凋亡率显著增加(P<0.01)。结论: Psilencer 3.1-siRNA-Beclin 1转染人肝癌SMMC-7721细胞后,可有效抑制Beclin-1 mRNA和蛋白的表达,抑制Vit K3引起的Beclin 1依赖性细胞自噬信号通路的激活,促进细胞凋亡。     

桔皮素对人肝癌细胞株SMMC-7721抑制作用的初步研究

目的：探讨桔皮素对人肝癌细胞株SMMC-7721的抑制作用。方法：采用四唑盐（MTT）比色法观察不同浓度桔皮素对人肝癌细胞株SMMC-7721细胞增殖的影响,计算半数抑制浓度IC50;绘制细胞株SMMC-7721的生长曲线观察桔皮素对其增殖的影响。结果：MTT结果显示不同浓度的桔皮素对SMMC-7721的生长均有一定的抑制作用,同一时间,各浓度组与对照组相比均有统计学差异（P〈0．05）;桔皮素浓度为0．24—30μg·mL。时,对SMMC-7721细胞在药物处理72小时后抑制率为3．85％～93．59％,且72小时的IG50为14．69—21．11μg·mL^-1。生长曲线结果提示,桔皮素对SMMC-7721细胞的抑制作用呈明显时效和量效关系。结论：桔皮素能抑制人肝癌细胞株SMMC-7721的增殖。     

去甲斑蝥素通过线粒体信号转导途径诱导人肝癌SMMC-7721细胞凋亡

目的:探讨去甲斑蝥素(NCTD)对人肝癌SMMC-7721细胞凋亡的影响及其机制。方法:分别用MTT和AnnexinⅤ/PI法检测NCTD对人肝癌细胞SMMC-7721的生长抑制率和细胞凋亡率。用流式细胞仪检测线粒体膜电位的变化。应用Western blot方法来分析细胞色素c、caspase-3、AIF、Bcl-2和Bax的表达。结果:NCTD对人肝癌细胞SMMC-7721有生长抑制作用,随浓度升高、时间延长作用增强,呈剂量和时间效应关系。用AnnexinⅤ/PI双染色法检测SMMC-7721细胞,随NCTD的剂量增加,细胞凋亡率也增加,呈剂量依赖性。用流式细胞仪检测细胞膜电位,随NCTD的剂量增加,线粒体膜电位也随之下降。应用Western blot analysis方法检测,NCTD可诱导caspase-3和AIF的活化及线粒体细胞色素c释放到胞浆中。并随NCTD的剂量增加,Bax的表达量上升,而Bcl-2的表达量下降。结论:NCTD能显著抑制SMMC-7721细胞增殖,并可通过内源性线粒体信号转导途径诱导细胞凋亡。     

三氮唑席夫碱衍生物诱导SMMC-7721细胞自相残

目的 分析三氮唑席夫碱衍生物（LH-37）诱导人肝癌细胞（SMMC-7721细胞）自相残的形态特征。 方法 1×10⁴/ml个SMMC-7721细胞,培养在含1×10^-5 mol/L LH-37的培养液内24h、48h,巴氏、瑞氏染色分析细胞结构,免疫细胞化学方法观察激活型Caspase阳性细胞,透射电镜观察自相残细胞超微结构。 结果 常规显微镜下可见自相残的细胞表现为一个细胞被另一个细胞完全包裹,一些被邻近大细胞内在化的细胞由较大的囊泡包裹。LH-37作用SMMC-7721细胞48h,自相残细胞达5.23%,对照组为0.47%,大部分被包裹的小细胞表现为激活型Caspase-3阳性。LH-37作用24h,透射电镜下可见被大细胞包裹的小细胞呈现活细胞特征,至48h,被包裹的小细胞降解甚至只剩下残片。 结论 LH-37能够诱导人肝癌细胞自相残。     

龙牙楤木多糖诱导人肝癌SMMC-7721细胞凋亡机制研究

目的:探讨龙牙楤木多糖(AEPS)对体外培养人肝癌SMMC-7721细胞凋亡的影响,并探讨其可能的作用机制。方法:荧光显微镜观察细胞形态学变化,流式细胞术(FCM)检测SMMC-7721细胞的凋亡率;Western blot检测不同浓度AEPS作用36小时凋亡蛋白survivin、caspase-3及bcl-2的表达情况。结果:与对照组比较,AEPS不同浓度剂量组Hoechst33258/PI荧光染色出现典型的凋亡形态学改变;FCM检测表明SMMC-7721细胞凋亡率各实验组均明显高于对照组(P0.01),且呈时间剂量依赖性;Western blot显示与对照组相比,各实验组AEPS可显著下调SMMC-7721细胞survivin和bcl-2的表达(P0.01),而caspase-3的表达显著增加(P0.01)。结论:AEPS能明显诱导人肝癌SMMC-7721细胞凋亡,其机制可能与改变凋亡相关基因survivin、caspase-3及bcl-2的表达有关。     

人参皂苷Rh2对肝癌SMMC-7721细胞增殖和细胞骨架的影响

目的: 探讨人参皂苷Rh₂(Rh₂)对人肝癌细胞SMMC-7721细胞生长和细胞骨架的影响。方法: 应用MTT法及流式细胞仪检测不同浓度Rh₂对SMMC-7721细胞增殖的抑制及诱导凋亡作用;激光共聚焦显微镜观察细胞骨架肌动蛋白F-actin的分布状态;整装细胞电镜术观察细胞核基质-中间纤维系统的变化。结果: MTT法和流式细胞仪分析结果分别显示,40 mg/L Rh₂ 作用SMMC-7721细胞4 d时的抑制率及细胞凋亡率明显高于对照组及10、20 mg/L组,显著差异(P＜0.05);激光共聚焦显微镜下,SMMC-7721细胞经Rh₂处理4 d,F-actin分布均匀,细丝排列整齐,数量增多;而对照组细胞F-actin细丝在细胞内排列紊乱,多呈斑点状分布。整装电镜结果显示,与对照组相比,实验组细胞的中间纤维丰富,均匀地满布细胞中,呈网架状连接的结构。结论: Rh₂能有效抑制SMMC-7721细胞的增殖,增加SMMC-7721细胞的凋亡,并且诱导SMMC-7721细胞骨架发生变化。     

三氮唑席夫碱衍生物诱导SMMC-7721细胞分化为多倍体巨细胞

目的 探讨三氮唑席夫碱衍生物(LH-37)诱导SMMC-7721细胞形成多倍体巨细胞的作用.方法SMMC-7721细胞以1×104/ml的浓度接种于含1 X 10-5mol/L LH-37的培养液内72h,流式细胞术分析DNA含量,Hcechst33258和碘化丙啶双染观察细胞死亡,免疫荧光检查微管和核纤层构造,透射电镜观察巨细胞超微结构.结果 LH-37作用SMMC-7721细胞72h,巨细胞明显增加,单核巨细胞和多核巨细胞分别为12.32%和0.92%.可见多核巨细胞子核放射状排列,微管增厚并包裹子核,形成单一的微管组织中心,放射状排列的子核被完整的核纤层分割包绕,大部分多核巨细胞凋亡.单核巨细胞的微管常围绕核膜凝集,同时向细胞膜方向放射状分布,可见异常的有丝分裂和凝集的染色质,电镜下可见一些单核巨细胞凋亡时伴有自吞噬特征.结论 LH-37通过干扰微管动力学,导致多倍体巨细胞增加和延迟性细胞死亡.     

抗人DR5单抗与阿霉素联合对人肝癌细胞SMMC-7721协同杀伤效应

目的：探讨mDRA-6对肝癌细胞系SMMC-7721致凋亡作用，及阿霉素与mDRA-6联合协同杀伤效应与机制。方法：常规培养肝癌细胞SMMC-7721，流式细胞术检测细胞表面DR5的表达率。Hoechst33258染色观察SMMC-7721细胞形态变化；MTT法检测细胞毒性作用；流式细胞术定量分析凋亡细胞率。结果：（1）mDRA-6能够诱导SMMC-7721细胞凋亡，在1.89μg／ml浓度下可杀伤36％的细胞，增加mDRA-6浓度，凋亡作用无明显增加；（2）SMMC-7721细胞对阿霉素敏感，存在浓度依赖性；（3）阿霉紊与mDRA-6联合对SMMC-7721细胞具有协同杀伤作用，2μg／ml的mDRA-6与40ng/ml的阿霉素联合杀伤印％SMMC-7721，Hoechst 33258染色和AnnexinV／PI染色证实杀伤作用是通过细胞凋亡实现的。结论：mDRA-6能够诱导肝癌细胞SMMC-7721凋亡，阿霉素与mDRA-6联合具有协同作用。     

miR-155在中介素促进肝癌细胞增殖中的作用

目的 MicroRNAs(miRNAs)在恶性肿瘤发生发展过程中起到重要作用,小分子多肽中介素(Intermedin,IMD)可促进肝癌细胞的增殖活性。本文探讨了miR-155在中介素促进肝癌细胞增殖中的作用。方法以CCK-8检测试剂盒检测SMMC7721肝癌细胞增殖,实时定量PCR方法检测增殖细胞核抗原PCNA和miR-155的表达。结果与中介素可以呈时间和剂量依赖关系诱导肝癌SMMC7721细胞的增殖,同时可显著上调miR-155mRNA表达水平;而阻断miR-155可在一定程度上抑制由中介素诱导的SMMC7721细胞增殖。结论中介素促肝癌细胞增殖作用可能与上调miR-155表达相关。