尼美舒利诱导人肝癌SMMC-7721细胞凋亡并下调HSP70基因表达

目的:探讨尼美舒利诱导人肝癌SMMC-7721细胞凋亡的作用及其机制。方法:以不同浓度的尼美舒利处理体外培养的人肝癌SMMC-7721细胞,MTT法检测细胞活力,流式细胞术检测细胞凋亡率,RT-PCR和/或Western blot法检测caspase-9和PARP的剪切情况及HSP70的表达水平;通过RNAi技术沉默HSP70基因表达,观察其对细胞凋亡的影响。结果:尼美舒利可抑制人肝癌SMMC-7721细胞生长,诱导细胞凋亡,导致caspase-9和PARP的剪切活化及HSP70的mRNA和蛋白表达下调;在人肝癌SMMC-7721细胞中转染靶向HSP70的siRNA可沉默HSP70表达、剪切活化caspase-9和PARP,进而显著促进细胞凋亡。结论:尼美舒利可诱导人肝癌SMMC7721细胞凋亡,这一作用可能与抑制HSP70表达有关。     

柯里拉京抑制LPS和ATP激活的NLRP3炎症小体和巨噬细胞焦亡

目的 探讨柯里拉京对细菌脂多糖(LPS)联合腺嘌呤核苷三磷酸(ATP)诱导的巨噬细胞内NLRP3炎症小体活化和细胞焦亡的调控作用和机制。方法 采用CCK8试剂检测不同浓度柯里拉京对J774A.1细胞活力的影响;碘化丙啶(PI)染色和乳酸脱氢酶(LDH)释放检测柯里拉京对LPS+ATP诱导的细胞死亡的影响。Western blot法检测细胞上清液中炎症小体活化标志物caspase-1 p20(M_r20 000)和成熟IL-1β(M_r17 000)的表达水平,以及检测细胞内NLRP3、ASC、caspase-1、IL-1β前体(pro-IL-1β)和焦亡执行蛋白GSDMD的表达。ELISA检测细胞培养上清液中IL-1β的水平。活性氧(ROS)荧光探针H2DCFDA染色观察柯里拉京对ROS产生的影响。结果 柯里拉京浓度小于40μmol·L^-1时对细胞活性影响较小。柯里拉京减少LPS+ATP刺激的细胞内PI阳性细胞的比例和LDH的释放。柯里拉京抑制LPS+ATP刺激的巨噬细胞内GSDMD蛋白N末端(GSDMD-NT)的表达,以及...     

小檗碱通过mtROS-NLRP3通路抑制H_(2)O_(2)诱导的巨噬细胞焦亡北大核心CSCD

目的:探究小檗碱(BBR)对过氧化氢(H_(2)O_(2))诱导的巨噬细胞焦亡的影响及mtROS-NLRP3通路在其中的调控作用。方法:以巨噬细胞J774A.1为研究对象,设置正常对照组(control组)、模型组(H_(2)O_(2)作用24 h)、BBR干预组(H_(2)O_(2)+BBR作用24 h)和ROS清除剂NAC干预组(H_(2)O_(2)+NAC作用24 h)。流式细胞术检测各组细胞活性氧簇(ROS)的生成,免疫荧光检测ROS与线粒体的共定位情况,实时荧光定量PCR检测各组细胞NLRP3、IL-1β的基因转录水平,Western blot检测NLRP3蛋白表达量,流式细胞术检测caspase-1的活化及其介导的细胞焦亡率,乳酸脱氢酶(LDH)试剂盒检测各组细胞LDH的释放量,ELISA检测IL-1β分泌水平。结果:与模型组相比,BBR干预后显著减少了H_(2)O_(2)诱导的巨噬细胞线粒体ROS(mtROS)的生成,下调了NLRP3和IL-1β的基因表达水平,减少了NLRP3蛋白的表达,降低了caspase-1活化水平及其介导的细胞焦亡率,同时减少了细胞上清液中LDH和IL-1β的释放。结论:小檗碱可能通过下调mtROS水平进而抑制NLRP3炎症体介导的细胞焦亡以减轻炎症反应。     

硫化氢通过下调NLRP3/caspase-1信号通路抑制氧化型低密度脂蛋白诱导的血管内皮细胞焦亡

目的:探讨缓释型硫化氢(H2S)供体GYY4137对氧化型低密度脂蛋白(oxLDL)诱导的血管内皮细胞焦亡的抑制作用及其分子机制。方法:以人脐静脉内皮细胞(HUVECs)为研究对象,将其分为空白对照组、GYY4137干预组、oxLDL刺激组和oxLDL+GYY4137干预组。各组HUVECs经不同药物干预指定时间后,采用CCK-8法检测各组细胞活力;使用乳酸脱氢酶(LDH)释放测定和Hoechst 33342/碘化丙啶(PI)双荧光标记检测各组细胞死亡情况;采用亚甲基蓝比色法检测各组细胞中的H2S含量;采用Western blot实验观察各组细胞中细胞焦亡信号通路标志蛋白的表达。结果:oxLDL(50和100 mg/L)可使HUVECs活力显著降低(P0.05或P0.01),LDH释放及PI阳性细胞比例显著增加(P0.05或P0.01),且细胞中NLRP3、caspase-1(p20亚单位)、gasdermin D(GSDMD)、GSDMD-N及白细胞介素18(IL-18)蛋白水平显著升高(P0.05或P0.01),即HUVECs发生焦亡。而GYY4137干预则可降低HUVECs中NLRP3、caspase-1(p20)、GSDMD、GSDMD-N及IL-18蛋白水平(P0.05),抑制oxLDL诱导的细胞焦亡(P0.05),并使细胞活力增强(P0.05)。结论:H2S供体GYY4137可通过下调NLRP3/caspase-1细胞焦亡信号通路而抑制oxLDL诱导的血管内皮细胞焦亡。     

对甲苯磺酰维达列汀抑制巨噬细胞焦亡和促进其凋亡的研究

目的:探讨对甲苯磺酰维达列汀(PV)对脂多糖(LPS)诱导的RAW264.7巨噬细胞焦亡和凋亡的影响,及其可能的抗炎机制。方法:MTT法检测RAW264.7的细胞活力;细胞流式术检测RAW264.7细胞的凋亡;Western blot检测caspase-3和caspase-1蛋白的表达;ELISA检测细胞培养上清液中肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素1β(IL-1β)和IL-6浓度;RT-qPCR法检测NLRP3、caspase-1、GSDMD、IL-1β、IL-18、caspase-11、caspase-3和Bax mRNA的表达。结果:PV显著抑制LPS刺激的巨噬细胞的活力,且呈剂量依赖性,同时促进RAW264.7巨噬细胞的凋亡(P0.01);显著减少巨噬细胞上清液释放TNF-α、IL-1β和IL-6(P0.01);减少caspase-1并增加caspase-3蛋白的表达(P0.01);下调细胞中NLRP3、caspase-1、GSDMD、IL-1β、IL-18和caspase-11并上调caspase-3和Bax mRNA的表达(P0.01)。结论:PV可抑制LPS诱导的RAW264.7巨噬细胞发生细胞焦亡并促进其凋亡,使炎症因子释放减少。     

犀角地黄汤合银翘散通过干预mtROS-NLRP3通路抑制流感病毒感染的巨噬细胞焦亡

目的:探究犀角地黄汤合银翘散(XDY)对流感病毒引起的炎症反应中巨噬细胞焦亡的作用及其机制。方法:将巨噬细胞J774A.1分为正常对照组(正常培养)、模型组(流感病毒PR8感染24 h)、XDY组(PR8感染+XDY作用24 h)、H_2O_2对照组(H_2O_2作用24 h)和H_2O_2+XDY组(H_2O_2+XDY作用24 h)。用乳酸脱氢酶(LDH)试剂盒检测各组细胞LDH的释放量,流式细胞术检测由caspase-1介导的细胞焦亡率,Western blot检测核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3(NLRP3)和gasdermin D N端片段(GSDMD-N)蛋白表达量,ELISA检测白细胞介素1β(IL-1β)分泌水平,激光共聚焦显微镜观察活性氧簇(ROS)与线粒体的共定位和释放情况。结果:流感病毒感染及H_2O_2作用后,巨噬细胞LDH释放和GSDMD-N蛋白表达增多,caspase-1介导的细胞焦亡率升高,同时NLRP3蛋白表达、IL-1β分泌和线粒体ROS(mtROS)生成亦增多;与模型组和H_2O_2对照组相比,XDY可显著减少mtROS生成、NLRP3和GSDMD-N蛋白表达及IL-1β和LDH分泌,降低caspase-1介导的细胞焦亡率。结论:犀角地黄汤合银翘散通过干预mtROS-NLRP3炎症小体通路抑制巨噬细胞焦亡,这可能是其抗流感病毒引起的过度炎症反应的机制之一。     

去甲斑蝥素通过线粒体信号转导途径诱导人肝癌SMMC-7721细胞凋亡

目的:探讨去甲斑蝥素(NCTD)对人肝癌SMMC-7721细胞凋亡的影响及其机制。方法:分别用MTT和AnnexinⅤ/PI法检测NCTD对人肝癌细胞SMMC-7721的生长抑制率和细胞凋亡率。用流式细胞仪检测线粒体膜电位的变化。应用Western blot方法来分析细胞色素c、caspase-3、AIF、Bcl-2和Bax的表达。结果:NCTD对人肝癌细胞SMMC-7721有生长抑制作用,随浓度升高、时间延长作用增强,呈剂量和时间效应关系。用AnnexinⅤ/PI双染色法检测SMMC-7721细胞,随NCTD的剂量增加,细胞凋亡率也增加,呈剂量依赖性。用流式细胞仪检测细胞膜电位,随NCTD的剂量增加,线粒体膜电位也随之下降。应用Western blot analysis方法检测,NCTD可诱导caspase-3和AIF的活化及线粒体细胞色素c释放到胞浆中。并随NCTD的剂量增加,Bax的表达量上升,而Bcl-2的表达量下降。结论:NCTD能显著抑制SMMC-7721细胞增殖,并可通过内源性线粒体信号转导途径诱导细胞凋亡。     

NOD8对LPS诱导巨噬细胞释放NO、TNF-α和IL-1β的影响

 目的： 探讨NOD8对脂多糖（LPS）诱导巨噬细胞释放一氧化氮（NO）、肿瘤坏死因子α（TNF-α）和白细胞介素1β（IL-1β）的影响。方法： pEGFP-C2及pEGFP-NOD8重组质粒分别转染小鼠巨噬细胞RAW264.7,以LPS刺激RAW264.7细胞0、6、12、24 h后,采用Griess reagent法测定观察细胞分泌的NO水平;ELISA法检测IL-1β 和 TNF-α 的含量;荧光法测定活化的caspase-1水平; Western blotting检测NOD8蛋白表达及NF-κB  p65亚基的核转位情况。结果： (1)与转染pEGFP-C2空质粒组比较,转染pEGFP-NOD8质粒组NOD8蛋白表达明显增加。(2) LPS刺激6、12、24 h后,RAW264.7细胞释放NO、IL-1β及TNF-α均明显增加;而在pEGFP-NOD8+LPS组RAW264.7细胞, NO于12、24 h 的释放显著降低,IL-1β于6、12、24 h的释放也明显降低,TNF-α的释放则无明显变化。（3）在LPS刺激6、12、24 h后, RAW264.7细胞caspase-1活化水平均明显升高,胞浆NF-κB p65亚基表达明显减少,表明p65核转位增加;而pEGFP-NOD8+LPS组可显著抑制caspase-1的活化以及NF-κB p65亚基的核转位,差异有统计学意义。结论： NOD8可抑制LPS诱导的巨噬细胞NO与IL-1β释放,其作用机制可能与NOD8抑制caspase-1及NF-κB 的活化有关。     

龙牙楤木多糖诱导人肝癌SMMC-7721细胞凋亡机制研究

目的:探讨龙牙楤木多糖(AEPS)对体外培养人肝癌SMMC-7721细胞凋亡的影响,并探讨其可能的作用机制。方法:荧光显微镜观察细胞形态学变化,流式细胞术(FCM)检测SMMC-7721细胞的凋亡率;Western blot检测不同浓度AEPS作用36小时凋亡蛋白survivin、caspase-3及bcl-2的表达情况。结果:与对照组比较,AEPS不同浓度剂量组Hoechst33258/PI荧光染色出现典型的凋亡形态学改变;FCM检测表明SMMC-7721细胞凋亡率各实验组均明显高于对照组(P0.01),且呈时间剂量依赖性;Western blot显示与对照组相比,各实验组AEPS可显著下调SMMC-7721细胞survivin和bcl-2的表达(P0.01),而caspase-3的表达显著增加(P0.01)。结论:AEPS能明显诱导人肝癌SMMC-7721细胞凋亡,其机制可能与改变凋亡相关基因survivin、caspase-3及bcl-2的表达有关。     

肺炎支原体经ROS激活NLRP3炎性体诱导RAW264.7细胞分泌IL-1β

 目的: 观察肺炎支原体(Mycoplasma pneunoniae,Mp)促进NLRP3炎性体的活化及下游促炎性细胞因子白细胞介素-1β(IL-1β)的表达是否与活性氧簇(ROS)有关。方法: 预先用5 mmol/L ROS清除剂N-乙酰半胱氨酸(NAC)预处理RAW264.7细胞30 min,用10 MOI Mp分别感染RAW264.7细胞4、8、16和24 h。流式细胞术检测细胞内ROS水平;real-time PCR法检测细胞NLRP3、ASC和caspase-1 mRNA的表达;Western blot 法检测NLRP3、ASC和caspase-1 p20的蛋白水平;ELISA法检测细胞上清液IL-1β的分泌水平。结果: 与正常组比较,感染后4、8、16和24 h模型组ROS生成显著增加(P< 0.01);感染后8、16和24 h模型组NLRP3、ASC和caspase-1 mRNA的表达显著增加 (P<0.01),感染后16和24 h NLRP3、ASC和caspase-1 p20的蛋白水平上调(P<0.01),感染后24 h 细胞上清液IL-1β含量显著增加(P< 0.01);与模型组比较,NAC组在上述相应时点ROS生成降低,NLRP3、ASC和caspase-1 mRNA的表达下调,蛋白水平下降,细胞上清液IL-1β的含量减少。结论: Mp可能通过刺激RAW264.7细胞生成ROS而激活NLRP3炎性体。     

PTEN对缺氧复氧心肌H9c2细胞凋亡、氧化损伤及免疫炎症因子水平的影响

目的:研究第10号染色体缺失的磷酸酶及张力蛋白同源物(PTEN)对缺氧复氧条件下心肌H9c2细胞凋亡、氧化损伤及免疫炎症因子水平的影响。方法:用H9c2细胞构建缺氧复氧模型。细胞转染PTEN小干扰RNA(siRNA)和阴性对照siRNA,缺氧复氧处理后,RT-PCR和Western blot分别测定细胞中PTEN的mRNA和蛋白水平。MTT法测定细胞活力,流式细胞术测定细胞凋亡,用黄嘌呤氧化法测定细胞中超氧化物歧化酶(SOD)活性,用硫代巴比妥酸法测定丙二醛(MDA)含量,用二硝基苯肼法测定培养液上清中乳酸脱氢酶(LDH)活性,ELISA测定培养液上清中肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素1β(IL-1β)和白细胞介素6(IL-6)水平,Western blot法测定细胞中cleaved caspase-3、Bax和Fas L的蛋白水平。结果:缺氧复氧处理后H9c2细胞中PTEN的mRNA和蛋白水平均明显升高(P 0. 05)。转染PTEN siRNA后的细胞中PTEN的mRNA和蛋白水平明显下降(P 0. 05)。缺氧复氧处理后H9c2细胞活力下降,凋亡率升高,细胞中cleaved caspase-3、Bax和Fas L的蛋白水平升高,MDA水平也升高,SOD活性下降,培养液上清中LDH、TNF-α、IL-1β和IL-6的水平升高(P 0. 05),而下调PTEN可以部分拮抗缺氧复氧对H9c2细胞活力、凋亡率、MDA水平、SOD水平及培养液上清中LDH、TNF-α、IL-1β和IL-6水平的影响。结论:下调PTEN可以减轻缺氧复氧诱导的心肌H9c2细胞氧化损伤,减少H9c2细胞凋亡,降低TNF-α、IL-1β和IL-6的水平。     

Netrin-1对高糖诱导的肾小管上皮细胞损伤的影响

目的:研究netrin-1对高糖诱导的肾小管上皮细胞损伤的影响。方法:用高糖培养人肾小管上皮HK-2细胞,real-time PCR和Western blot测定细胞中netrin-1的表达水平。用过表达netrin-1慢病毒感染HK-2细胞,检测其对高糖环境下HK-2细胞中netrin-1表达的影响。流式细胞术测定细胞凋亡,Western blot测定cleavedcaspase-3蛋白水平,2,4-二硝基苯肼法检测培养液中乳酸脱氢酶(LDH)活性,硫代巴比妥酸法检测培养液中丙二醛(MDA)含量,ELISA法测定培养液中白细胞介素1β(IL-1β)和肿瘤坏死因子α(TNF-α)含量。结果:高糖处理后的HK-2细胞中netrin-1的mRNA和蛋白水平均明显下调(P 0.05)。过表达netrin-1慢病毒能够上调高糖环境下HK-2细胞中netrin-1的表达水平(P 0.05)。高糖可促进肾小管上皮细胞分泌IL-1β和TNF-α,提高细胞培养液中LDH和MDA的水平(P 0.05),使肾小管上皮细胞的caspase-3活化并诱导细胞凋亡;上调netrin-1的HK-2细胞经高糖诱导后,细胞分泌的IL-1β和TNF-α减少,细胞中活化的caspase-3蛋白水平降低,培养液中LDH和MDA水平降低,细胞凋亡减少(P 0.05)。结论:上调netrin-1减轻高糖诱导的肾小管上皮细胞氧化损伤和炎性损伤,减少细胞凋亡。     

氧糖剥夺/复氧所致细胞焦亡在肺微血管内皮细胞损伤中的作用

目的:探讨氧糖剥夺/复氧(OGD/R)是否导致人肺微血管内皮细胞(HPMVECs)焦亡及其在细胞损伤中的作用.方法:采用HPMVECs复制OGD/R细胞模型,模拟体外循环中HPMVECs缺血/再灌注过程.将细胞分为对照(control)组(正常培养)、OGD/R组(OGD 8 h+恢复12 h)及VX-765(casp...     

SO_2衍生物通过NLRP3炎症小体促进气道上皮细胞炎症发生

目的:观察二氧化硫(SO_2)衍生物亚硫酸钠和亚硫酸氢钠对支气管上皮细胞NLRP3炎症小体活化的影响。方法:使用不同浓度的SO_2衍生物作用于支气管上皮细胞16HBE,通过流式细胞术检测细胞内活性氧簇(ROS)的生成,Western blot检测细胞内NLRP3和caspase-1 p20蛋白水平,ELISA检测细胞上清中白细胞介素1β(IL-1β)的分泌水平,结合细胞毒性实验(MTT)确定2 mmol/L为SO_2衍生物的实验浓度。采用RNA干扰技术沉默16HEB细胞NLRP3基因及ROS清除剂N-乙酰半胱氨酸(NAC)预处理16HBE细胞,通过流式细胞术检测细胞内ROS, Western blot和ELISA分别检测NLRP3和caspase-1 p20蛋白表达及IL-1β分泌水平。结果:与对照组比较, 2 mmol/L和4 mmol/L SO_2衍生物组细胞内ROS水平、 NLRP3和caspase-1 p20蛋白表达及细胞上清液中IL-1β水平明显升高(P0.05)。与2 mmol/L SO_2衍生物组比较,NLRP3 siRNA组细胞内的NLRP3和caspase-1 p20蛋白水平明显降低(P0.05),且细胞上清液中IL-1β的浓度明显下降(P0.05),ROS无明显变化;NAC组NLRP3和caspase-1 p20蛋白水平及IL-1β浓度均明显下降(P0.05)。结论:SO_2衍生物激活支气管上皮细胞NLRP3炎症小体,促进IL-1β生成。     

敲减TLR4表达减少LPS诱导的胰腺腺泡AR42J细胞分泌炎症因子

目的:研究Toll样受体4(TLR4)对脂多糖(LPS)诱导的胰腺腺泡AR42J细胞分泌炎症因子的影响。方法:用LPS处理大鼠胰腺腺泡AR42J细胞,real-time PCR和Western blot测定细胞中TLR4表达的变化。将携带TLR4 siRNA的慢病毒感染AR42J细胞,给予LPS处理,real-time PCR和Western blot检测干扰效率,MTT法检测细胞活力,二硝基苯肼法测定乳酸脱氢酶(LDH)的漏出率,ELISA法检测细胞分泌白细胞介素1β(IL-1β)和肿瘤坏死因子α(TNF-α)的水平,硫代巴比妥酸法测定上清中丙二醛(MDA)的含量,用黄嘌呤氧化法测定上清中超氧化物歧化酶(SOD)活力,比色法检测谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)和过氧化氢酶(CAT)的活性。结果:LPS处理后的AR42J细胞中TLR4的mRNA和蛋白水平明显升高(P0.01)。携带TLR4 siRNA的慢病毒可以明显下调LPS刺激下AR42J细胞中TLR4的mRNA和蛋白水平(P0.01)。LPS处理后的AR42J细胞活力降低,LDH漏出率升高,细胞分泌的IL-1β和TNF-α增多,培养上清中MDA含量升高,SOD、GSH-Px和CAT活性降低(P0.01)。敲减TLR4表达可以提高LPS刺激下AR42J细胞的活力,降低细胞的LDH漏出率及分泌IL-1β和TNF-α的水平,减少细胞培养液中MDA的含量,提高SOD、GSH-Px和CAT的水平(P0.01)。结论:LPS诱导胰腺腺泡AR42J细胞TLR4表达,敲减其表达可以减少LPS诱导的AR42J细胞分泌IL-1β、TNF-α等炎症因子,减轻氧化损伤。     

酪醇诱导肝癌细胞NQO1酶基因表达增加及细胞增殖的抑制

目的:研究酪醇诱导肝癌细胞Ⅱ相脱毒酶NAD(P)H:醌氧化还原酶-1(NQO₁)基因表达情况和对细胞增殖的影响以及两者之间的关系。方法:肝癌细胞SMMC-7721接种后24h经β-酪醇处理24h,分别测定NQO₁酶活性,mRNA表达和细胞增殖情况。NQO₁酶活性采用微孔板直接测定法,诱导结果用NQO₁酶比活性=NQO₁酶活性/细胞数;mRNA水平的变化采用定量RT-PCR;细胞增殖采用结晶紫显色法。结果:NQO₁酶活性诱导上,酪醇大于60mg/L时有明显的剂量效应关系,且每一浓度点(60mg/L,70mg/L,80mg/L,90mg/L)与空白组比较均有显著差异(P＜0.05),80mg/L的酪醇与80μmol/L的β-NF(阳性对照)诱导的酶比活性相当;mRNA表达量存在剂量依赖性增加(r=0.824,P＜0.05),且与酶比活性存在明显的相关性(r=0.951,P＜0.01);酪醇在70mg/L-100mg/L范围内,其抑制细胞增殖的能力随着浓度的增加而增加。另外,细胞增殖与酶比活性呈负相关(r=-0.410,P＜0.01)。结论:酪醇在培养肝癌细胞SMMC-7721上能使NQO₁酶活性与mRNA表达量诱导性增加,同时酪醇能抑制细胞的增殖,这种增殖抑制与酶活性诱导增加有关。     

SGK1抑制剂EMD638683对膀胱出口梗阻小鼠肾组织细胞焦亡的作用及机制研究

目的:确定小鼠膀胱出口梗阻(bladder outlet obstruction,BOO)模型引起下尿路梗阻介导的肾脏炎性损伤;研究血清和糖皮质激素调节激酶1(serum and glucocorticoid-regulated kinase 1,SGK1)抑制剂EMD638683抗梗阻性肾病炎症的作用机制,探讨SGK1与NLRP3-caspase-1-IL-1β/细胞焦亡(pyroptosis)通路诱导细胞损伤的关系。方法:构建小鼠BOO模型,HE染色观察肾组织病理变化及炎症细胞浸润,PAS染色观察肾脏的组织病变,Masson染色法检测肾小管的胶原沉积,免疫组化法和Western blot法检测NLRP3、caspase-1、F4/80、gasdermin D-N末端片段(GSDMD-N)、IL-1β和SGK1的表达。醛固酮(aldosterone,ALD)处理小鼠肾小管上皮细胞(mouse renal tubular epithelial cells,mRTECs),EMD638683进行干预,Western blot法检测NLRP3、caspase-1、IL-1β、SGK1及GSDMD-N的表达水平;ELISA法检测各组细胞上清液IL-1β含量。结果:梗阻3周的小鼠肾脏中HE染色观察到炎症细胞浸润,PAS染色出现肾脏组织病变,Masson染色检测到肾小管间质有胶原沉积。与正常组小鼠比较,梗阻3周小鼠组NLRP3、caspase-1、F4/80、GSDMD-N、IL-1β和SGK1含量显著升高(P<0.05或P<0.01)。细胞实验中,与正常组比较,ALD组NLRP3、caspase-1、IL-1β、SGK1及GSDMD-N含量显著升高(P<0.05或P<0.01);与ALD组相比,ALD加EMD638683组NLRP3、caspase-1、IL-1β、SGK1及GSDMD-N含量显著减少(P<0.05或P<0.01)。结论:成功构建小鼠BOO模型引起下尿路梗阻介导的肾脏炎性损伤;EMD638683通过抑制NLRP3-caspase-1-pyroptosis通路阻断细胞焦亡,从而发挥抗炎作用。     

NOX1在TNF-α诱导的肺泡上皮细胞氧化损伤和炎症中的作用研究

目的:探索NADPH氧化酶1(NOX1)在肿瘤坏死因子α(TNF-α)诱导的肺泡上皮细胞A549氧化损伤和炎症中的作用。方法:以real-time PCR和Western blot法测定TNF-α处理后肺泡上皮细胞中NOX1的m RNA和蛋白表达水平。在肺泡上皮细胞中转染NOX1 si RNA及其阴性对照,以TNF-α诱导以后,用real-time PCR和Western blot测定细胞中NOX1水平。硫代巴比妥酸法检测细胞中丙二醛(MDA)含量,黄嘌呤氧化法检测细胞中超氧化物歧化酶(SOD)活性,ELISA法检测细胞培养液中的白细胞介素4(IL-4)、白细胞介素6(IL-6)和白细胞介素1β(IL-1β)含量,流式细胞术检测细胞凋亡率,Western blot检测凋亡蛋白cleaved caspase-3的水平。结果:TNF-α诱导处理后A549细胞中NOX1 m RNA和蛋白水平均升高(P 0. 05),NOX1 si RNA转染可以下调细胞中NOX1的m RNA和蛋白表达(P 0. 05),转染si RNA阴性对照对细胞中NOX1的m RNA和蛋白表达没有影响。TNF-α处理后细胞中MDA含量升高,SOD活性降低,细胞分泌的IL-4、IL-6和IL-1β增多,细胞凋亡率和凋亡蛋白cleaved caspase-3水平均升高,与没有经TNF-α处理的细胞比较,差异有统计学意义(P 0. 05)。下调NOX1的细胞经TNF-α诱导后,细胞中MDA含量降低,SOD活性升高,细胞分泌的IL-4、IL-6和IL-1β减少,凋亡率及凋亡蛋白cleaved caspase-3水平降低,与只经过TNF-α诱导处理的细胞比较,差异有统计学意义(P 0. 05)。结论:TNF-α诱导肺泡上皮细胞表达NOX1。下调NOX1表达可减少细胞氧化损伤和炎症因子分泌,减少细胞凋亡。     

三氧化二砷对肝癌细胞生长抑制作用差异性探讨

目的:观察三氧化二砷对肝癌SMMC-7721和BEL-7402细胞生长抑制作用差异性并且探讨其可能的作用机理。方法: 应用细胞培养和台盼蓝拒染法观察不同时间和不同浓度的三氧化二砷对肝癌细胞SMMC-7721和BEL-7402细胞生长的抑制作用,比较生长抑制率的差异并用谷胱甘肽检测试剂盒测定两种肝癌细胞内谷胱甘肽(GSH)的含量。结果: 三氧化二砷浓度为0.50 μmol/L、作用时间为24 h可显著抑制肝癌细胞系BEL-7402的生长,抑制作用呈时间、剂量依赖性;对SMMC-7721细胞,三氧化二砷浓度为2.00 μmol/L、作用时间为24 h才出现抑制细胞生长作用,二者的生长抑制率存在显著差异,0.25-2.00 μmol/L As₂O₃作用72 h后,BEL-7402细胞的生长抑制率均高于SMMC-7721细胞(P＜0.05)。检测SMMC-7721和BEL-7402细胞内GSH含量分别为(50.8±5.2)μmol/g protein和(18.7±1.4)μmol/g protein,存在明显差异。 结论:三氧化二砷抑制肝癌细胞SMMC-7721和BEL-7402的生长存在显著的差异;BEL-7402细胞对三氧化二砷非常敏感性,可能与其细胞内谷胱甘肽含量较低,细胞的氧化还原解毒系统不足有关。