不同浓度人羊膜匀浆上清液培养大鼠许旺细胞的增殖

背景：许旺细胞是周围神经修复过程的重要细胞,而研究发现人羊膜细胞分泌的多种细胞因子能够促进许旺细胞增殖。 目的：观察不同浓度人羊膜匀浆上清液对鼠许旺细胞(RSC96)生长的影响。 方法：使用含体积分数20%胎牛血清的高糖DMEM培养基原代培养RSC96细胞株,传代至第2代用于实验研究。根据人羊膜匀浆上清液在培养基中的不同体积分数(0,10,15,20,25%)分组。 结果与结论：人羊膜匀浆上清液的总蛋白浓度为675 mg/L,表皮生长因子、碱性成纤维生长因子和血管内皮生长因子浓度分别为(470.625±2.546),(4.121±0.026)和(0.172±0.002) ng/L。在培养第1-7天,10%和15%人羊膜匀浆上清液组的增殖率大于20%和25%人羊膜匀浆上清液组(P < 0.05);10%、15%人羊膜匀浆上清液组显示出促进细胞增殖的作用,而20%、25%人羊膜匀浆上清液组显示出抑制细胞增殖的作用;各实验组的细胞活力与对照组接近(P > 0.05)。提示人羊膜匀浆上清液低浓度时(10%和15%)具有促进RSC96增殖作用,高浓度时(20%和25%)抑制RSC96增殖。 中国组织工程研究杂志出版内容重点：组织构建;骨细胞;软骨细胞;细胞培养;成纤维细胞;血管内皮细胞;骨质疏松;组织工程全文链接：     

破骨细胞骨吸收上清液对骨髓间充质干细胞增殖分化的影响

目的研究破骨细胞骨吸收活动中的分泌产物对骨髓间充质干细胞增殖、分化的影响。方法诱导小鼠脾脏细胞为破骨细胞,用抗酒石酸盐酸性磷酸酶(TRAP)染色。破骨细胞与牛骨磨片共培养,扫描电镜观察骨吸收陷窝。收集骨吸收实验破骨细胞培养上清液作用于小鼠骨髓间充质干细胞(BMSC),MTT法检测BMSC生长曲线;成骨诱导后钙化结节茜素红染色法检测BMSC成骨能力;成脂诱导后油红O染色检测BMSC成脂能力;Western blot法检测小鼠BMSC成骨相关蛋白RUNX2、碱性磷酸酶(ALP)及成脂相关蛋白过氧化物酶体增殖物激活受体γ(PPAR-γ)的表达。结果 TRAP染色、扫描电镜显示脾脏细胞可诱导分化为具有骨吸收能力的破骨细胞;与对照组相比,加入破骨细胞培养上清液,BMSC的增殖受到抑制,成骨分化增强,成脂分化减弱(P0.05)。结论破骨细胞骨吸收上清液具有使BMSC增殖能力降低,成骨分化增强,成脂分化减弱的作用。     

骨髓间充质干细胞对大鼠胶质瘤细胞增殖的影响

目的研究骨髓间充质干细胞（BMSC）对大鼠脑胶质瘤C6细胞增殖的影响,并且探讨其相关机制。方法提取SD大鼠BMSC,进行体外培养、扩增。应用MTt比色法检测不同浓度BMSC上清液对C6细胞系增殖的抑制作用。用Transwell小室将BMSC与C6细胞进行双层培养,以HE染色法检测C6细胞形态变化。用划痕实验检测细胞迁移情况。结果MTF结果显示BMSC上清液对C6细胞有抑制作用,120h后1：8、1：4、1：2的BMSC上清稀释液、BMSC上清原液培养组的生长抑率分别为17．1％、26．0％、39．9％、43．1％;与BMSC进行双层培养后的C6细胞其形态发生了明显改变,由圆形或多角形变为长梭形,细胞包体伸出长突起;划痕实验显示在36h时对照组迁移率为100％,划痕完全愈合,而BMSC上清组划痕未见全愈合,迁移率为82％。结论①BMSC上清液能抑制胶质瘤C6细胞的恶性增殖,而且抑制效应呈剂量依赖性;②BMSC对C6的运动和迁移产生了抑制作用,从而降低了其恶性侵袭程度。     

骨髓间充质干细胞对大鼠胶质瘤细胞增殖的影响

目的 研究骨髓间充质干细胞(BMSC)对大鼠脑胶质瘤C6细胞增殖的影响,并且探讨其相关机制.方法 提取SD大鼠BMSC,进行体外培养、扩增.应用MTF比色法检测不同浓度BMSC上清液对C6细胞系增殖的抑制作用.用Transwell小室将BMSC与C6细胞进行双层培养,以HE染色法检测C6细胞形态变化.用划痕实验检测细胞迁移情况.结果 MTF结果显示BMSC上清液对C6细胞有抑制作用,120 h后1∶8、1∶4、1∶2的BMSC上清稀释液、BMSC上清原液培养组的生长抑率分别为17.1%、26.0%、39.9%、43.1%;与BMSC进行双层培养后的C6细胞其形态发生了明显改变,由圆形或多角形变为长梭形,细胞包体伸出长突起;划痕实验显示在36 h时对照组迁移率为100%,划痕完全愈合,而BMSC上清组划痕未见全愈合,迁移率为82%.结论 ①BMSC上清液能抑制胶质瘤C6细胞的恶性增殖,而且抑制效应呈剂量依赖性;②BMSC对C6的运动和迁移产生了抑制作用,从而降低了其恶性侵袭程度.     

毛蕊异黄酮抑制胃癌干细胞样细胞的增殖、迁移与侵袭并诱导凋亡

目的：探索毛蕊异黄酮对胃癌干细胞样细胞增殖、迁移、侵袭和凋亡的影响及其分子机制。方法：用肿瘤干细胞成球培养法从胃癌AGS细胞中获得AGS干细胞样细胞（AGS-CSC）。分别应用0、30、60和120μmol/L的毛蕊异黄酮处理AGS-CSC后，采用集落形成实验和CCK-8分析法测量细胞增殖情况；划痕愈合实验和Transwell迁移实验检测细胞迁移；Transwell侵袭实验检测细胞侵袭；TUNEL染色和Annexin V-FITC/PI流式细胞术检测细胞凋亡；JC-1染色评估细胞线粒体膜电位情况；Western blot检测线粒体凋亡通路相关蛋白的表达情况。结果：毛蕊异黄酮可剂量依赖性抑制AGS-CSC细胞增殖、迁移和侵袭，降低线粒体膜电位，并增加凋亡水平。Western blot结果显示，毛蕊异黄酮以剂量依赖性上调促凋亡蛋白Bax的表达，同时下调抗凋亡蛋白Bcl-2的表达，促进细胞色素C的释放，并增加cleaved caspase-3和-9的表达水平。结论：毛蕊异黄酮能抑制胃癌干细胞增殖、迁移与侵袭，并能激活线粒体凋亡途径。     

氧化苦参碱通过下调HOTAIR表达抑制卵巢癌SKOV3细胞增殖及机制

目的研究氧化苦参碱(oxymatrine,OMT)对卵巢癌SKOV3细胞增殖的影响及其可能机制。方法培养SKOV3细胞,应用不同浓度OMT作用不同时间后,应用CCK-8检测细胞增殖的变化;应用Real-Time PCR法检测OMT作用不同时间后,HOTAIR在SKOV3细胞中的表达的变换;应用Lipofect Amine 2000,将HOTAIR过表达慢病毒载体以及其阴性对照转染至SKOV3细胞后,给予OMT,应用CCK-8法检测SKOV3细胞增殖变化,应用Western Blot检测SKOV3细胞Bcl-2以及Bax的蛋白表达含量变化,计算Bcl-2/Bax的比值。结果 OMT明显抑制了SKOV3细胞增殖,并呈时间和剂量依赖;OMT明显降低了HOTAIR在SKOV3细胞中的表达水平,表现为剂量相关;转染HOTAIR过表达慢病毒载体后,OMT抑制增殖的作用被阻断,SKOV3细胞的增殖能力基本恢复,SKOV3细胞中Bcl-2/Bax的比值基本恢复。结论 HOTAIR参与了OMT抑制SKOV3细胞增殖调控过程,其机制可能与调控凋亡相关蛋白Bcl-2和Bax表达相关。     

Lunasin对实验性类风湿关节炎大鼠滑膜成纤维细胞增殖与凋亡的影响

目的探讨大豆多肽Lunasin对实验性类风湿关节炎(rheumatoid arthritis,RA)大鼠滑膜成纤维细胞(synovialfibroblasts,SFs)增殖与凋亡的影响及可能的作用机制。方法采用弗氏完全佐剂(freund’s complete adjuvant,FCA)注入大鼠足跖皮内建立大鼠RA模型,造模成功后从大鼠关节滑膜组织中分离纯化出SFs,然后与不同浓度的Lunasin(0、50、100、200μmol/L)分别孵育24、48和72 h,MTT法检测SFs增殖;RT-PCR、Western blot检测Caspase3、Bax、Bcl-2基因及蛋白的表达。结果Lunasin可显著抑制体外培养的滑膜成纤维细胞增殖,增加Caspase3、Bax的表达,抑制Bcl-2基因和蛋白的表达,并呈现一定的时间和剂量依赖关系。结论 Lunasin对RA的治疗作用可能与其抑制SFs增殖和促进凋亡有关。     

富血小板凝胶上清对施万细胞活性的影响

目的:观察富血小板凝胶上清(PRP-r)对大鼠施万细胞(SCs)增殖和分泌神经再生相关活性物质的影响。方法:实验分为PRP-r组和control组。利用大鼠腹主动脉血制备富血小板血浆(PRP),用CaCl₂激活PRP得到PRP-r。CCK-8检测RSC96的增殖能力,ELISA检测RSC96培养上清中神经生长因子(NGF)、脑源性神经营养因子(BDNF)和胶质细胞源性神经营养因子(GDNF)水平,Western Blot检测RSC96细胞中神经细胞黏附分子(NCAM)、p75神经营养因子受体(p75NTR)、胶质纤维酸性蛋白(GFAP)和S100钙结合蛋白B(S100B)的表达。结果:RSC96的增殖能力在PRP-r作用下显著提高,与对照组相比,培养上清中NGF、BDNF、GDNF水平增加,细胞中NCAM、p75NTR、GFAP、S100B蛋白表达上调。结论:PRP-r可以促进RSC96细胞增殖,促进神经营养因子分泌及相关蛋白的表达。     

芹菜素对人肺癌A549细胞凋亡及相关蛋白Bax、Bcl-2表达的影响

目的研究芹菜素对人肺癌 A549细胞增殖抑制和凋亡诱导作用与 Bax、Bcl-2蛋白表达的影响。方法10~80μmol/L 不同浓度芹菜素作用 A549细胞,采用 MTT 法检测芹菜素对 A549细胞增殖抑制作用;Hoechst 33258细胞核染色法观察芹菜素诱导细胞凋亡形态学的变化;流式细胞仪 AnnexinV- FITC/PI 双染色法检测细胞凋亡率;Western blot 法检测凋亡相关蛋白 Bax 和 Bcl-2表达的变化。结果 MTT 法显示,芹菜素对 A549细胞有显著的增殖抑制作用（P <0.01）,且具浓度和时间依赖性;荧光显微镜下观察到芹菜素处理组细胞出现典型的凋亡形态学改变：细胞核固缩、染色质凝集和核碎片化等;流式细胞仪分析结果显示,芹菜素呈浓度依赖性诱导 A549细胞凋亡;Western blot结果显示,促凋亡蛋白 Bax 随着芹菜素浓度升高表达增加,抗凋亡蛋白 Bcl-2随着芹菜素浓度升高表达减少。结论芹菜素具有抑制人肺癌 A549细胞增殖,诱导其凋亡的作用,其机制可能与上调 Bax 蛋白表达和下调 Bcl-2蛋白表达有关。     

三七总皂苷对神经胶质瘤细胞增殖、迁移及凋亡的影响

目的:探讨三七总皂苷(Panax notoginseng saponins,PNS)对神经胶质瘤U251和U87细胞增殖、迁移和凋亡的影响及其作用机制。方法:将U251和U87细胞各分为两组:对照(control)组和三七总皂苷(PNS)组。CCK-8检测细胞增殖水平;划痕实验检测细胞迁移能力;流式细胞仪检测细胞凋亡水平;Western Blot检测Caspase-3、Bax、Bcl-2、p-AKT、AKT、p-mTOR和mTOR的蛋白表达水平。结果:U251和U87细胞中的检测结果一致。与control组相比,PNS组的细胞增殖能力和迁移能力均显著下降(P0.05);细胞凋亡率显著升高(P0.05);Bcl-2的蛋白表达水平显著下调(P0.05),而Bax和Caspase-3的表达水平显著上调(P0.05);p-Akt和p-mTOR的蛋白表达水平下降,且差异具有显著性(P0.05)。结论:PNS能够抑制U251和U87细胞的增殖和迁移,促进细胞凋亡,这可能与PI3K-Akt-mTOR信号通路的抑制有关。     

低氧增强骨髓间充质干细胞对缺氧诱导心肌细胞凋亡的可能性

背景：骨髓间充质干细胞移植入缺血心肌后存活率低,而低氧有可能增强骨髓间充质干细胞的增殖,促进其存活。 目的：体外模拟心肌细胞缺血微环境,探索低氧预处理后,骨髓间充质干细胞对持续缺氧诱导的心肌细胞凋亡的保护作用。 方法：取第4代SD大鼠骨髓间充质干细胞用于制备条件培养液。取胚胎大鼠心肌细胞株,随机分成4组：对照组：心肌细胞正常培养组;模型组：心肌细胞单纯缺氧;骨髓间充质干细胞组：心肌细胞与骨髓间充质干细胞条件培养液共缺氧;低氧组：心肌细胞与骨髓间充质干细胞低氧条件培养液共缺氧。MTT检测各组细胞活力变化,Annexin V-FITC双染标记心肌细胞凋亡,免疫组化检测各组Bax和Bcl-2蛋白的表达。 结果与结论：免疫组化显示,低氧组的Bcl-2表达较其他各组增强,而Bax的表达比模型组和骨髓间充质干细胞组减弱,Bcl-2/Bax比值最大。与对照组和骨髓间充质干细胞组相比,低氧组的细胞活力高(P < 0.05),凋亡率降低(P < 0.05)。提示低氧可能是通过增强旁分泌机制,从而对Bax和Bcl-2进行调节,对心肌细胞凋亡有保护效应。     

白藜芦醇抑制叔丁基过氧化物诱导的外周血内皮祖细胞损伤

目的:观察白藜芦醇对叔丁基过氧化物诱导的人外周血内皮祖细胞(EPC)凋亡的影响,探讨其可能机制。方法:密度梯度离心法获取人外周血单个核细胞,培养4 d后,收集贴壁细胞。实验分为对照组、叔丁基过氧化物诱导组和白藜芦醇+叔丁基过氧化物组。采用二苯基四氮唑溴盐(MTT)比色法和5-溴脱氧尿嘧啶核苷(Brd U)ELISA法检测EPC增殖能力;采用改良Boyden小室法检测EPC增殖及迁移能力;Annexin V-FITC/PI染色及流式细胞术检测EPC凋亡率;比色法检测caspase-3活性;荧光探针H_2DCF-DA法检测细胞内活性氧簇(ROS)水平;Western blot检测cleaved caspase-3、Bax及Bcl-2蛋白的表达。结果:白藜芦醇能抑制叔丁基过氧化物诱导的EPC凋亡,并增加EPC增殖及迁移能力;白藜芦醇降低EPC细胞内ROS水平,抑制caspase-3的活性及cleaved caspase-3的蛋白水平,同时能促进Bcl-2及抑制Bax蛋白表达。结论:白藜芦醇对叔丁基过氧化物诱导的EPC凋亡有抑制作用,其机制可能与抗氧化应激有关。     

骨髓基质干细胞抑制大鼠肝纤维化细胞生长的实验研究

目的 探讨骨髓基质干细胞(BMSCs)对大鼠肝纤维化细胞(CFSCs)生长的抑制作用.方法 采用不同培养时间BMSCs的培养上清培养大鼠正常肝细胞系(BRL)以及CFSCs,MTT法检测CFSCs的增殖情况;Transwell建立BMSCs与CFSCs的双层共培养体系,经TUNEL法检测与BMSCs按不同比例进行培养后的CFSCs凋亡情况.结果 BMSCs培养上清作用于CFSCs后,其增殖能力明显低于对照组,有统计学意义(P＜0.05),并表现出剂量依赖性,而对BRL没有作用.CFSCs与BMSCs按不同比例共培养后,随着BMSCs比例的增加,CFSCs调亡率上升.结论 BMSCs能够不可逆的抑制CFSCs生长而不影响正常的肝细胞,这种生长抑制是通过诱导CFSCs的凋亡发生的.     

骨髓基质细胞衰老对造血细胞衰老的影响

目的探讨骨髓基质细胞(BMSCs)衰老对骨髓造血细胞衰老的影响及其可能的机制。方法贴壁培养大鼠骨髓基质细胞,传代BMSCs至P3代时分组。对照组:常规培养;衰老组:常规培养基础上加入D-半乳糖(D-Gal)诱导BMSCs衰老,两组细胞分别培养48h。收集培养上清液,ELISA法检测细胞因子:粒细胞巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)、干细胞因子(SCF)、白细胞介素(IL)-6、IL-1β,IL-2和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)含量,CCK-8检测细胞增殖能力,衰老相关β-半乳糖苷酶(SA-β-Gal)染色检测BMSCs衰老。分离提取正常骨髓单个核细胞(BMMNCs),在衰老组与对照组BMMSCs上种植正常BMMNCs共培养24h,收集上层悬浮BMMNCs。CCK-8法测定细胞增殖能力;多向造血祖细胞集落(CFU-Mix)半固体培养法检测细胞增殖及分化能力;SA-β-Gal染色观察衰老细胞百分率;流式细胞术分析细胞周期与细胞凋亡;DCFH-DA荧光染色检测细胞活性氧簇(ROS)水平;酶学法检测细胞内丙二醛(MDA)含量和总超氧化物歧化酶(SOD)活性。结果衰老组BMSCs增殖能力显著下降,SA-β-Gal染色阳性细胞百分率增加,细胞分泌GM-CSF、SCF、IL-6、IL-1β水平明显降低,IL-2、TNF-α水平显著升高。与衰老BMSCs共培养后,BMMNCs的增殖能力显著下降,SA-β-Gal染色阳性细胞百分率显著上升,BMMNCs形成CFUMix集落数量明显降低,细胞周期呈现阻滞且细胞凋亡率上升,细胞内ROS、MDA含量上升,SOD含量下降。结论本实验中D-Gal成功复制了BMSCs衰老,衰老的BMSCs可诱导骨髓造血细胞衰老,其机制可能与BMSCs导致造血细胞氧化损伤有关。     

不同来源骨髓间充质干细胞对CD34+细胞增殖的影响**

背景：作者前期研究显示,银屑病患者与正常人骨髓间充质干细胞的生物学特性、免疫学反应及抗原提呈功能有明显差异,而与流产胎儿骨髓间充质干细胞无明显差异。 目的：观察不同来源骨髓间充质干细胞对正常人骨髓CD34+细胞增殖的影响。 方法：密度梯度离心法分离银屑病患者和流产胎儿骨髓单一核细胞并培养、传代,传至第2代72 h后收集培养上清液,流式细胞仪鉴定骨髓CD34+细胞及骨髓间充质干细胞纯度。倒置显微镜下观察培养细胞的生长状态,细胞磁珠分选仪分选出的正常人骨髓CD34+细胞加入骨髓间充质干细胞培养上清液培养24 h 后,四甲基偶氮唑盐比色法检测骨髓CD34+细胞的增殖活性。 结果与结论：CD34+细胞加入银屑病患者和流产胎儿骨髓间充质干细胞培养上清培养24 h后,细胞形态无差别。银屑病患者和流产胎儿骨髓间充质干细胞培养上清液对正常人骨髓CD34+细胞增殖的影响差异无显著性意义(P > 0.05)。     

肝纤维化大鼠血清体外诱导骨髓间充质干细胞向肝细胞的分化

背景：近年来临床运用骨髓间充质干细胞移植治疗晚期肝纤维化取得了较好疗效,但由于肝源稀少,骨髓干细胞体外分化为成熟肝细胞的技术仍然不成熟。 目的：探讨骨髓间充质干细胞体外诱导其分化为肝细胞的可行性。 方法：构建大鼠肝纤维化模型,分离、纯化并鉴定大鼠骨髓间充质干细胞,制备正常及肝纤维化大鼠血清,取第3代骨髓间充质干细胞分组培养,分别加入以下培养基：DMEM+体积分数10%胎牛血清;肝细胞生长培养基(HGM)+体积分数5%胎牛血清;HGM+5%正常大鼠血清;HGM+5%肝纤维化大鼠血清;HGM+5%肝纤维化大鼠血清+25 μg肝细胞生长因子。观察各组细胞形态变化,MTT法测定细胞生长曲线,采用Realtime-PCR检测甲胎蛋白和细胞角蛋白18的表达,溴甲酚绿法检测上清液中白蛋白水平,ELISA法检测培养上清液中转化生长因子β1表达。 结果与结论：正常大鼠血清能促进骨髓间充质干细胞的增殖;肝纤维化大鼠血清对骨髓间充质干细胞促增殖作用最好,且能有效诱导其向肝细胞分化,联合使用肝细胞生长培养基能提高分化率。     

Bovine lactoferrin protects RSC96 Schwann cells from tumor necrosis factor-alpha-induced growth arrest via extracellular-signal-regulated kinase 1/2

Bovine lactoferrin (bLF) is a member of the transferrin protein family that is abundant in bovine milk. Recent studies have shown that bLF plays roles in the regulation of cell growth. However, the biological function of bLF in the peripheral nervous system is still unclear. In this study, the immortalized rat Schwann cells (RSC96) were exposed to bLF at concentrations ranging from 10 to 800 microg/ml for 48 h and compared with control group. The bromodeoxyuridine BrdU cell viability assay was used to examine the effect of bLF on cell viability of RSC96 Schwann cells. Cell-counting test was used to assay the growth rate of RSC96 cells after exposure to bLF, and immunoblot analysis was used to test the signaling pathway controlled by bLF in the RSC96 cells. It was found that the viability of the RSC96 cells was increased by more than 25% when treated with 50 microg/ml bLF and the cell number of RSC96 cells was increased by more than threefold when treated with 800 microg/ml bLF. Our results showed that bLF could significantly improve viability and number of RSC96 Schwann cells. Also, bLF could significantly increase the phosphorylation state of extracellular-signal regulated kinase 1/2 (ERK1/2) that could be specifically inhibited by PD98059. Furthermore, bLF could not only protect RSC96 cells from tumor necrosis factor-alpha (TNF-alpha) -induced growth arrest but could also restore proliferation rate in TNF-alpha-treated RSC96 cells. In conclusion, bLF plays a crucial role in the proliferation of RSC96 Schwann cells and the protection of RSC96 Schwann cells from TNF-alpha-induced growth arrest via ERK1/2 protein.     

氧体积分数变化与大鼠骨髓间充质干细胞的增殖及迁移*

背景：研究表明,细胞分化程度低的骨髓间充质干细胞移植在缺血环境的转归对疗效有很大影响。 目的：探讨氧体积分数改变对大鼠骨髓间充质干细胞增殖和归巢能力的影响。 方法：分离SD大鼠骨髓间充质干细胞,分别在低氧(体积分数1%O2)和常氧(体积分数20%O2)条件下培养0~7 d。细胞Transwell小室迁移实验分组为4组：体积分数1%O2培养1%O2迁移组、体积分数20%O2培养1%O2迁移组、体积分数1%O2培养20%O2迁移组和体积分数20%O2培养20%O2迁移组,比较不同氧体积分数变化条件下迁移细胞数。观察不同氧体积分数变化对间充质干细胞表达整合素β1和细胞间黏附分子1的影响,实验分为4组：恒定体积分数20%O2培养;恒定体积分数1% O2培养;体积分数20%O2培养后1%O2继续培养6 h;体积分数1%O2培养后20%O2继续培养6 h。 结果与结论：骨髓间充质干细胞在体积分数1%O2环境下增殖能力及迁移能力均增强,在体积分数20%O2环境下增殖能力及迁移能力减弱(P < 0.05);整合素β1表达水平在体积分数1%O2环境下增强(P < 0.05)。提示大鼠骨髓间充质干细胞移植在低氧(体积分数1%O2)下增殖和迁移能力增强。关键词：低氧;骨髓间充质干细胞;移植;整合素β1;迁移 doi:10.3969/j.issn.1673-8225.2012.19.005