阿托伐他汀对TNF-α和IL-1β诱导的大鼠主动脉内皮细胞PAPP-A表达的影响

目的: 研究阿托伐他汀对炎症因子肿瘤坏死因子 α(TNF-α)和白细胞介素-1β(IL-1β)诱导大鼠主动脉内皮细胞表达妊娠相关血浆蛋白A(PAPP-A)的影响。方法: 原代培养大鼠主动脉内皮细胞,选择生长良好的第3-4代细胞用于实验。实验分组:(1)空白对照组 :不加干预措施原培养液继续培养;(2)阿托伐他汀浓度组:加入浓度分别为 0.1、1、10 μmol/L的阿托伐他汀作用24 h;(3)阿托伐他汀时间组:加入浓度为10 μmol/L的阿托伐他汀分别作用6、12、24 h;(4)阿托伐他汀干预组:加入TNF-α(60 μg/L)或者IL-1β(20 μg/L)作用1 h后,再加入不同浓度的阿托伐他汀(0.1、1、10 μmol/L)进行培养,分别于作用6、12、24 h终止实验。MTT法观察药物对细胞增殖的影响, RT-PCR技术测定细胞中PAPP-A mRNA的表达, ELISA方法检测上清液中PAPP-A蛋白水平。结果: (1) 外源性加入阿托伐他汀及TNF-α或者IL-1β后,分别作用3、6、12、24、48 h,同对照组相比,细胞增殖能力无明显变化(P<0.05),说明干预药物本身对细胞没有毒性作用。(2)单独加入阿托伐他汀,细胞PAPP-A表达水平与空白对照组比较没有明显差异(P<0.05)。(3)炎症因子作用一段时间后再加入阿托伐他汀,PAPP-A mRNA和蛋白表达水平随着阿托伐他汀浓度和作用时间的增加而逐渐降低,有一定的浓度-时间依赖关系,与 TNF-α组和IL-1β组比较明显下降(P<0.05)。结论: 阿托伐他汀本身对细胞表达PAPP-A没有影响,但在一定程度上抑制TNF-α和IL-1β诱导的内皮细胞PAPP-A的表达,并有浓度-时间依赖关系。     

NK 细胞联合红花多糖对结肠癌细胞的杀伤作用及机制研究

目的:观察自然杀伤细胞(NK)联合红花多糖(SPS)杀伤结肠癌细胞的协同效应并初步探讨作用机制。方法:四甲基偶氮唑盐比色法(MTT)检测SPS对结肠癌细胞增殖的影响;钙黄绿素-AM释放法分析NK与SPS对结肠癌细胞的杀伤效率;ELISA及流式细胞术(FCM)分析TNF-α、IFN-γ及NKp46、MICA、MICB、ULBP1的表达水平。结果:SPS对结肠癌细胞的增殖抑制率与作用时间和浓度成正比,促NK细胞增殖的最高阈值浓度为0.625 mg/ml;NK与SPS联合组的杀伤效率及TNF-α/IFN-γ分泌显著高于NK组和SPS组(P0.05);各实验组NK细胞的NKp46、MICA、MICB、ULBP1表达均升高(P0.05)。结论:NK细胞与SPS对体外杀伤结肠癌细胞具有协同作用,其作用机制可能与SPS调控NK细胞TNF-α、IFN-γ分泌及活化性受体和活化性配体表达水平有关。     

NK细胞联合当归多糖对结肠癌细胞的体外协同杀伤作用及机制研究

目的探讨NK细胞联合当归多糖(ASP)对结肠癌细胞的体外协同杀伤作用及机制。方法分离人脐带血单个核细胞,体外采用灭活K562细胞联合细胞因子扩增获得高纯度NK细胞,设置control组、不同浓度ASP组、NK Cell组、NK Cell+ASP组、NK+SW480组、ASP+SW480组;MTT法检测不同质量浓度ASP对结肠癌细胞、NK细胞增殖的影响,酶联免疫吸附法(ELISA)检测NK细胞培养上清液中TNF-α、IFN-γ水平,钙黄素-AM释放法检测NK细胞联合ASP对结肠癌细胞的杀伤作用,流式细胞仪检测MICA、MICB、uLBP1表达率。结果与control组比较,各浓度ASP组在24 h、48 h、72 h的NK细胞数均显著升高(P0.05),ASP质量浓度为200.00 mg/ml时,NK细胞数目最高;与control组比较,各浓度ASP组在24 h、48 h、72 h对结肠癌细胞的抑制率呈剂量性增加(P0.05);与NK Cell组比较,NK Cell+ASP组TNF-α、IFN-γ的水平显著提高(P0.05);ASP和NK细胞对结肠癌细胞均有杀伤作用,与单独的NK细胞和单独ASP相比,NK细胞联合ASP对SW480细胞具有更强的杀伤作用(P0.05);与SW480组比较,ASP+SW480组SW480细胞中MICA、MICB、uLBP1的表达率显著提高(P0.05)。结论 NK细胞联合ASP体外协同杀伤结肠癌细胞,其协同作用可能与ASP促进NK细胞分泌TNF-α、IFN-γ增强其杀伤能力,促进肿瘤细胞高表达MICA、MICB、uLBP1相关。     

阿托伐他汀通过下调NLRP1炎性体表达抑制IL-1β和IL-18的释放

 目的:探讨核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白1(NLRP1)炎性体在阿托伐他汀抑制THP-1巨噬细胞白细胞介素-1β(IL-1β)和白细胞介素-18(IL-18)分泌中的作用。方法:用10 μg/L脂多糖诱导THP-1巨噬细胞分泌IL-1β和IL-18,以不同浓度阿托伐他汀(1、10和20 μmol/L)孵育细胞24 h,或以10 μmol/L阿托伐他汀处理细胞不同时间(12、24和48 h),或转染NLRP1 siRNA以沉默细胞内NLRP1的表达。采用RT-PCR检测细胞内NLRP1炎性体mRNA的表达,Western blot检测细胞内NLRP1炎性体蛋白的表达,ELISA检测细胞上清液中IL-1β和IL-18的含量。结果:阿托伐他汀可抑制THP-1巨噬细胞NLRP1炎性体mRNA和蛋白的表达,且这种效应呈浓度和时间依赖性。转染NLRP1 siRNA后,THP-1巨噬细胞NLRP1的蛋白表达明显下降,且阿托伐他汀对IL-1β和IL-18分泌的抑制作用明显增强。结论:阿托伐他汀通过抑制NLRP1炎性体表达减少巨噬细胞IL-1β和IL-18的释放,发挥抗炎作用,进而延缓动脉粥样硬化进展。     

miR-183靶向CX3CL1基因调控肝癌细胞MICA/B表达和增加NK细胞对肝癌细胞杀伤作用

目的探讨miR-183对肝癌细胞MHC-Ⅰ类相关蛋白A/B(MICA/B)表达和自然杀伤(NK)细胞杀伤作用影响及其分子机制。方法实验设置miR-con组、miR-183组、anti-miR-con组、anti-miR-183组、pcDNA组、pcDNA-CX3CL1组、antimiR-183+si-con组、anti-miR-183+CX3CL1组、对照(NC)组。实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测miR-183和CX3CL1 m RNA表达水平;蛋白质印迹(Western blot)法检测CX3CL1、MICA和MICB蛋白表达;流式细胞术检测肝癌细胞表面MICA/B的表达;NK细胞与肝癌细胞共培养后,细胞计数试剂盒8(CCK-8)法检测NK细胞对肝癌细胞的杀伤作用;酶联免疫吸附法(ELISA)法检测肝癌细胞与NK细胞共培养后培养液中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和干扰素γ(IFN-γ)水平;荧光素酶报告实验检测miR-183和CX3CL1的靶向关系。结果肝癌组织和肝癌细胞中miR-183高表达,CX3CL1、MICA和MICB低表达。干扰miR-183表达和过表达CX3CL1,肝癌细胞中MICA、MICB阳性表达率显著升高,与NK细胞共培养后TNF-α和IFN-γ水平显著升高,NK细胞对肝癌细胞的杀伤率显著升高(P<0.05)。miR-183靶向调控CX3CL1,沉默CX3CL1逆转了干扰miR-183对肝癌细胞MICA/B表达和NK细胞杀伤作用的影响。结论抑制表达miR-183可增加肝癌细胞MICA/B表达,增加NK细胞对肝癌细胞的杀伤作用,其机制可能与CX3CL1有关。     

白藜芦醇对γδT细胞杀伤结肠癌SW-1116细胞的影响及机制研究

目的 观察白藜芦醇作用前后γδT细胞对结肠癌SW-1116细胞杀伤活性的变化,并探讨其发生的机制。方法 异戊烯焦磷酸法体外扩增人外周血γδT细胞,不同浓度的白藜芦醇作用于γδT细胞和结肠癌SW-1116细胞,四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测白藜芦醇对γδT细胞及结肠癌细胞的生长的影响;流式细胞术(FCM)检测白藜芦醇作用前后γδT细胞穿孔素、颗粒酶B、CD107a的表达;乳酸脱氢酶( LDH)释放法检测白藜芦醇对γδT细胞杀伤结肠癌SW-1l16细胞活性的影响。Western blot检测药物作用前后γδT细胞细胞外信号调节激酶(ERK1/2)蛋白的活性的变化。结果 白藜芦醇在0.39 ～3.125μmol/L时对γδT细胞的生长具有促进作用,对结肠癌SW-1116细胞作用不明显;经白藜芦醇诱导后γδT细胞的穿孔素、颗粒酶B、CD107a的表达显著高于对照组(P＜0.05);对结肠癌SW-1116细胞的杀伤活性也显著高于未诱导组(P＜0.05);经浓度为0.1～10 μmol/L白藜芦醇作用的γδT细胞的p-ERK1/2表达较对照组增加(P＜0.05)。结论 白藜芦醇能够促进γδT细胞的增殖,并增强其对结肠癌SW-1116细胞的杀伤能力,其机制可能与上调γδT细胞表面的穿孔素、颗粒酶B、CD107a的表达及活化细胞外信号调节激酶等有关。     

白藜芦醇增强人NK细胞杀伤肺癌细胞株A-549的体外研究

研究白藜芦醇对人NK细胞体外增殖及杀伤肺癌细胞A-549的影响。用SCGM培养基体外扩增人NK细胞,10 d后用不同浓度的白藜芦醇作用于NK细胞48 h后,MTT法测生长曲线,流式细胞仪检测NK细胞表面穿孔素、颗粒酶B及CD107a的表达;LDH法检测NK细胞对肺癌细胞株A-549的杀伤活性。结果发现,培养10 d后NK细胞纯度达到68%左右,不同浓度白藜芦醇处理NK细胞48 h后,白藜芦醇在浓度0.05-12.5μmol/L可以促进NK细胞的生长,并增加NK细胞表面颗粒酶B、穿孔素及CD107a的表达,对肺癌A-549细胞的杀伤活性在白藜芦醇浓度为0.75μmol/L显著高于对照组。以上实验结果提示,白藜芦醇在一定浓度下能促进NK细胞的生长,且增加对肺癌细胞株A-549的杀伤活性。     

下调ADAM17促进奥利沙铂耐药结肠癌细胞对NK细胞杀伤敏感的机制研究北大核心CSCD

目的:探讨ADAM17促进奥利沙铂(L-OHP)耐药结肠癌细胞对NK细胞杀伤敏感的作用机制。方法:免疫组化检测ADAM17在L-OHP敏感及L-OHP耐药结肠癌患者肿瘤组织中的表达;qRT-PCR与Western blot检测ADAM17在L-OHP耐药组织及细胞中的表达;MTT法检测HCT116细胞与HCT116/L-OHP细胞的L-OHP药物敏感性;qRT-PCR与Western blot检测HCT116细胞与HCT116/L-OHP细胞中ADAM17表达。小干扰RNA内源性敲低HCT116/L-OHP细胞中的ADAM17、MICA与MICB,qRT-PCR与Western blot检测ADAM17、MICA与MICB表达,流式细胞术检测MICA与MICB表达,乳酸脱氢酶释放法检测NK92细胞对HCT116/L-OHP细胞的杀伤活性。结果:ADAM17在L-OHP耐药患者组织及细胞中高表达。与HCT116细胞相比,L-OHP处理可提高HCT116/L-OHP细胞的IC50,促进ADAM17表达(P<0.05)。与si-NC组相比,si-ADAM17组HCT116/L-OHP细胞中ADAM17表达降低,MICA与MICB表达升高,NK92细胞杀伤率升高。与si-ADAM7组相比,si-ADAM7+si-MICA组MICA表达降低(P<0.05),si-ADAM7+si-MICB组MICB表达降低(P<0.05),NK92细胞杀伤率降低(P<0.05)。结论:下调ADAM17通过促进MICA与MICB表达增强NK92细胞对HCT116/L-OHP细胞的杀伤活性。     

三氧化二砷对肝癌细胞生长抑制作用差异性探讨

目的:观察三氧化二砷对肝癌SMMC-7721和BEL-7402细胞生长抑制作用差异性并且探讨其可能的作用机理。方法: 应用细胞培养和台盼蓝拒染法观察不同时间和不同浓度的三氧化二砷对肝癌细胞SMMC-7721和BEL-7402细胞生长的抑制作用,比较生长抑制率的差异并用谷胱甘肽检测试剂盒测定两种肝癌细胞内谷胱甘肽(GSH)的含量。结果: 三氧化二砷浓度为0.50 μmol/L、作用时间为24 h可显著抑制肝癌细胞系BEL-7402的生长,抑制作用呈时间、剂量依赖性;对SMMC-7721细胞,三氧化二砷浓度为2.00 μmol/L、作用时间为24 h才出现抑制细胞生长作用,二者的生长抑制率存在显著差异,0.25-2.00 μmol/L As₂O₃作用72 h后,BEL-7402细胞的生长抑制率均高于SMMC-7721细胞(P＜0.05)。检测SMMC-7721和BEL-7402细胞内GSH含量分别为(50.8±5.2)μmol/g protein和(18.7±1.4)μmol/g protein,存在明显差异。 结论:三氧化二砷抑制肝癌细胞SMMC-7721和BEL-7402的生长存在显著的差异;BEL-7402细胞对三氧化二砷非常敏感性,可能与其细胞内谷胱甘肽含量较低,细胞的氧化还原解毒系统不足有关。     

香烟提取物损伤人脐静脉血管内皮细胞及阿托伐他汀的干预

背景：吸烟是诸多血管缺血性疾病如动脉硬化闭塞、血栓闭塞性脉管炎等疾病的重要危险因素,但其确切机制尚不清楚。 目的：探讨香烟提取物对人脐静脉内皮细胞的影响以及阿托伐他汀对该作用的干预。 方法：将体外培养的人脐静脉内皮细胞分为3组,分别以含体积分数10%胎牛血清的DMEM培养基对照组、体积分数10%胎牛血清+10%香烟提取物的DMEM培养基、含体积分数10%胎牛血清+10%香烟提取物+10 μmol/L阿托伐他汀的DMEM培养基培养。 结果与结论：香烟提取物组人脐静脉内皮细胞形态较对照组不规则,存活率、细胞上清液中的一氧化氮水平和细胞一氧化氮合酶活性降低(P < 0.05);香烟提取物+阿托伐他汀组使人脐静脉内皮细胞形态改善,存活率、细胞上清液中的一氧化氮水平和细胞一氧化氮合酶活性升高(P < 0.05)。说明阿托伐他汀能拮抗香烟提取物对血管内皮细胞的损伤作用,其机制可能与内皮细胞的生长、一氧化氮合成酶活性及一氧化氮释放有关。     

WAS-like蛋白在肠癌组织中低表达并抑制人结肠癌细胞的干性

目的 探讨WAS-like蛋白(WASL)在肠癌的表达情况,以及对肠癌细胞干性的影响.方法 运用UALCAN数据库预测WASL蛋白的表达量与肠癌组织中的表达及其与肠癌患者的性别、临床分期、淋巴结转移的关系;组织免疫荧光和细胞免疫荧光染色验证WASL在肠癌组织和细胞中的表达.Western blotting检测人正常结直...     

重组可溶性MHC Ⅰ类相关蛋白A对NK细胞生物学活性的影响

目的:研究体外重组可溶性MHC Ⅰ类相关蛋白A(sMICA)对NK细胞杀伤靶细胞活性、分泌IFN-γ、增殖和凋亡的影响.方法:将重组sMICA蛋白与人外周血NK细胞相互作用过夜后,流式细胞仪检测NK细胞杀伤K562靶细胞的能力;ELISA检测培养上清IFN-γ浓度;MTS/PMS法检测sMICA对NK细胞增殖的影响;给NK细胞标记Annexin V和碘化丙啶检测凋亡情况.结果:可溶性MICA抑制NK细胞杀伤K562细胞的活性,下调IFN-γ的分泌,却对NK细胞的增殖和凋亡没有影响.结论:肿瘤细胞表面脱落的sMICA抗原可通过抑制NK细胞活性而逃逸机体的免疫监视功能.     

马钱子碱通过抑制IL-6/STAT3信号通路诱导结肠癌SW480细胞凋亡

目的:探讨马钱子碱(brucine)在体外对人结肠癌SW480细胞生长和凋亡的影响及可能的分子机制。方法:实验以人结肠癌细胞系SW480细胞为研究对象,分为空白对照组、brucine(1μmol/L)处理组、IL-6(100μg/L)处理组和brucine(1μmol/L)与IL-6(100μg/L)联用组,用CCK-8法检测细胞活力抑制率;流式细胞术Annexin V/PI双染法检测细胞凋亡;Western blot法检测凋亡相关蛋白表达。细胞免疫荧光检测相关蛋白表达定位和强度。结果:Brucine处理组和brucine与IL-6联用组都能抑制结肠癌细胞的活力,brucine浓度相同时,联用组抑制率小于brucine处理组(P0.05)。与空白对照组相比,单用brucine处理组凋亡细胞明显增多(P0.05)。与单用brucine相比,brucine与IL-6联用组凋亡细胞明显减少(P0.05)。与对照组相比,brucine能降低p-STAT3蛋白水平。与空白对照组相比,单用brucine组p-STAT3的蛋白减少,抗凋亡蛋白Bcl-2表达减少,促凋亡蛋白Bax和执行凋亡的cleaved PARP明显增多;与空白对照组相比,单用IL-6处理组的p-STAT3明显增多(P0.05);而与单用brucine相比,brucine与IL-6联合应用组的p-STAT3蛋白增多,抗凋亡蛋白Bcl-2表达增多,促凋亡蛋白Bax和执行凋亡的cleaved PARP均相对减少(P0.05)。结论:体外细胞实验中brucine可能通过调节IL-6/STAT3通路,抑制结肠癌SW480细胞中STAT3的磷酸化激活,从而发挥抗肿瘤作用。     

Curcumin induces apoptosis in HCT-116 human colon cancer cells in a p21-independent manner

Several micronutrients present in fruits and vegetables exhibit anticancer activity as a result of their actions on molecular targets involved in carcinogenesis and tumor progression. Curcumin, a phenolic phytochemical derived from the rhizome of Curcuma longa, exhibits both cancer-preventative activity and growth inhibitory effects on neoplastic cells. Several studies report that curcumin inhibits cancer cell proliferation and induces apoptosis in cancer cells through p21-mediated cell cycle arrest. Cancer cells that are deficient in p21 are also reported to be more prone to undergo apoptosis in response to a variety of cytotoxic agents. In this study, we determined whether curcumin-induced cytotoxicity in cultures of HCT-116 human colon cancer cells was dependent on p21 status. Curcumin killed wild-type HCT-116 cells in a dose- and time-dependent manner, as measured in an MTT cell viability assay. Moreover, an equivalent cytotoxic effect by curcumin was observed in both p21^+/+ and p21^−/−HCT-116 cells, indicating that curcumin-induced cytotoxicity was p21-independent. Primary cultures of human dermal fibroblasts were less sensitive than HCT-116 colon cancer cells to lower doses of curcumin, suggesting a degree of selectivity for neoplastic cells. Western blot analysis showed that cell death in curcumin-treated cultures of p21^+/+ and p21^−/− HCT-116 cells was associated with a reduction in pro-caspase-3 and PARP-1 cleavage, which are indicative of apoptosis. We conclude that curcumin-induced apoptosis in HCT-116 colon cancer cells does not depend on p21 status.     

蟾蜍灵对结肠癌SW-480细胞polo-like kinase-1表达及细胞凋亡的影响

目的：观察蟾蜍灵对人结肠癌细胞系增殖的抑制作用，并探讨其作用机理。 方法： 采用不同浓度的蟾蜍灵作用结肠癌SW-480细胞后，采用MTT法检测细胞的恶性增殖，分别采用琼脂糖凝胶电泳和流式细胞仪检测凋亡情况，分别采用Western blotting、Northern blotting分别检测polo-like kinase-1 (PLK1)蛋白、mRNA水平。 结果： 蟾蜍灵能抑制结肠癌细胞的恶性增殖，且与浓度相关。蟾蜍灵能诱导结肠癌细胞凋亡，且呈浓度依赖性。流式细胞仪检测发现，蟾蜍灵将细胞阻滞在G2/M期。蟾蜍灵能下调结肠癌PLK1蛋白、mRNA水平，且呈药物浓度和作用时间依赖性。 结论： 蟾蜍灵有效地抑制结肠癌SW-480细胞增殖，其机制可能与其下调PLK1表达，从而诱导凋亡有关。     

The effect of aspirin on human's gammadeltaT cells killing digestive system tumor cell lines

AIM: To explore the effect of aspirin on human's gammadeltaT cells killing digestive system tumor cell lines. METHODS: Use the isopentenyl pyrophosphate method to amplify human peripheral blood gammadeltaT cells in vitro. Various concentrations of aspirin were used to induce gammadeltaT cells and digestive system tumor cells SGC-7901, SW-1990, SW-480, SW-1116, LOVO cells lines, LDH assays was used to measure the cytotoxic activity of gammadeltaT cells, flow cytometry analysis the apoptosis percentage of before and after induced gammadeltaT cells and SGC-7901, SW-1990, SW-480, SW-1116, LOVO cell lines. RESULTS: gammadeltaT cells were cultivated for ten days which proliferation ratio increase from 4.21% to 70.35%. When gammadeltaT cells induced via aspirin concentrations rang from 0.4 mmol/L to 0.8 mmol/L which cytotoxic activity on the five kinds of tumor cell lines was the highest, if aspirin's concentration surpassing 3.2 mmol/L, cytotoxic activity of gammadeltaT cells present decrease tendency. SGC-7901, SW-1990, SW-480, SW-1116, LOVO cells lines were induced by different concentrations of aspirin for 24 hours, just SW-480, SW-1116 and LOVO were enhanced as far as the cytotoxic activity of gammadeltaT cells on these cell lines was concerned, other groups and control group have no notable changed. The apoptosis percentage of gammadeltaT cells(52.71%) were induced by aspirin which concentration was 3.2 mmol/L, which was strikingly higher than SGC-7901, SW-1990, SW-480, SW-1116, LOVO cells lines, (respectively 7.88%, 8.89%, 6.21%, 4.47% and 3.67%). CONCLUSION: When aspirin's concentration for clinical routine used can enhance the effect of gammadeltaT cells killing the tumor cells, if surpassing this concentration can obvious inhibited the proliferation capacity and cytotoxic activity of gammadeltaT cells and augment apoptosis ratio, however, it is not obvious for digestive tract tumor lines.     

胆红素和内毒素联合作用对NRK52E细胞缝隙连接功能的影响

目的: 观察胆红素(BR)和内毒素(LPS)联合作用对肾小管上皮细胞(NRK52E)生长及细胞间缝隙连接(GJ)的影响。方法: 体外培养NRK52E细胞,不同浓度的BR和LPS联合干预,用MTT测量细胞生长;观察它们对生长融合细胞(有GJ形成)和生长未融合细胞(无GJ形成)集落形成的影响;采用细胞荧光免疫示踪法分析细胞间GJ的功能。结果: BR 从17.1 μmol/L增加至 513 μmol/L,可浓度依赖性地增加细胞生长;当BR浓度继续增加时,细胞生长逐渐降低。LPS(10-1 000 μg/L)能浓度依赖性地降低NRK52E细胞生长。 BR和LPS 联合作用下,513 μmol/L BR增加100 μg/L LPS作用下的细胞生长(P<0.05),而684 μmol/L BR降低100 μg/L LPS的细胞生长(P<0.05);513 μmol/L BR能增加100 μg/L LPS作用下GJ传递数目(P<0.05),684 μmol/L BR降低100 μg/L LPS作用下的GJ传递数目。 结论: BR和LPS联合作用时,513 μmol/L BR降低LPS的细胞毒性,684 μmol/L BR增加LPS的细胞毒性,其改变可能是通过细胞间缝隙连接发挥作用的。