基因表达谱芯片检测肺鳞癌与正常肺组织差异表达的基因

目的：用基因芯片技术探讨肺鳞癌异常基因的表达。方法：提取肺鳞癌组织及正常肺组织的RNA,分别用Cy5-dCTP或Cy3-dCTP标记,再与4096点基因芯片杂交,筛选肺鳞癌组织和正常肺组织表达差异的基因。结果：肺鳞癌组织与正常肺组织表达差异基因225条,其中癌组织中上调基因为116条．下调基因109条;差异极显著性基因37条,表达上调24条,下调13条。结论：多基因参与肺鳞癌发病,基因芯片技术是肺癌基因筛选的有效方法。     

EBVaGC肿瘤差异表达的基因表达谱芯片筛选

目的应用全基因组表达谱芯片技术,分析EB病毒(EBV)阳性胃癌细胞系与EBV阴性胃癌细胞系基因表达谱差异,筛选EBV相关胃癌(EBVaGC)相关基因。方法采用TRIzol一步法提取3种EBV阳性胃癌细胞系(GT38、PT、SNU-719)和3种EBV阴性胃癌细胞系(SGC7901、HGC-27、MKN-45)总RNA并纯化,逆转录合成cDNA,利用荧光染料(Cy3)标记aaUTP,转录合成标记的cRNA,与Agilent人类全基因组表达谱芯片杂交,扫描荧光信号图像,对芯片原始数据扣除本底和归一化处理,利用倍数差异和t检验计算筛选差异表达的基因,采用上海博豪生物在线分析系统进行基因的功能注释和关联分析,明确差异基因的生物学功能。将处理前后差异表达倍数>2.0或<0.5,且在不同样本间的具有统计学差异的基因判断为差异表达基因。选取特定的差异表达基因,应用实时荧光PCR技术验证芯片结果的可靠性。结果聚类热图及矩阵图分析显示,EBV阳性胃癌细胞系与阴性胃癌细胞系之间表达谱存在明显差异。EBV阳性胃癌细胞系与阴性胃癌细胞系之间有322条基因的表达有明显差异,其中与肿瘤相关的基因涉及转录翻译、信号转导、黏附、细胞增殖和凋亡以及免疫应答等多种生物学过程。选取6条差异基因进行验证,结果有3条基因表达上调,3条基因表达下调,表达趋势与芯片结果一致。结论 EBV阳性胃癌细胞系与阴性胃癌细胞系基因表达存在明显差异,提示EBV感染可影响胃癌细胞相关基因的表达,分析这些差异表达基因有助于阐明EBV感染在EBVaGC发生发展中的作用机制,为进一步筛选EBVaGC特异性肿瘤标记物以及进行生物治疗提供理论依据。     

bcl—2癌基因在肝肿瘤的表达

ｂｃｌ－２癌基因在肝肿瘤的表达王万忠王家耀杜德利为了探讨ｂｃｌ－２癌基因的表达与肝肿瘤发生的关系，我们采用免疫组织化学方法，对肝细胞癌、肝内胆管细胞癌、肝母细胞瘤和肝转移癌中ｂｃｌ－２癌基因的表达进行了定位观察。一、材料与方法１．标本与试剂：选用我院...     

喉癌基因的差异表达

目的从分子水平上探讨喉癌的发病机制.方法用微阵列(Microarray)技术分析了11 431个基因在喉癌组织和其临近的正常黏膜组织表达差异,用RT-PCR技术分析所得喉癌差异表达基因中一个基因在不同类型喉癌中的表达情况.结果喉癌组织和其临近的正常黏膜组织基因表达相差3倍以上者为35个,其中上调基因8个,下调基因27个;相差5倍以上者7个,皆为下调基因;上皮膜蛋白基因-1 (The epithelial membrane 1, EMP-1)是下调基因中一个基因,EMP-1在不同类型配对喉癌中皆呈低表达,明显低于相应的正常喉黏膜组织(P<0.05).结论喉癌的发生涉及多个基因参与,微阵列技术分析喉癌差异表达基因是可靠的方法.     

抑癌基因P53在肺癌中表达的意义

应用免疫组织化学技术－ＳＰ法，检测１０６例原发性肺癌组织和３７例癌旁组织中Ｐ５３蛋白的表达，肺癌组织Ｐ５３蛋白阳性表达率为５２．８％，其中鳞癌，腺癌和小细胞癌Ｐ５３阳性率分别为５２．８％，４７．１％和６３．２％，而癌旁组织未见Ｐ５３蛋白表达，Ｐ５３表达与组织学分型，病理分及临床ＰＴＮＭ分期无关。     

肺癌组织凋亡相关基因的表达意义

目的:探讨肺癌组织中凋亡相关基因Fas,Bax,p53,Bcl-2蛋白的表达意义,为进行肺癌的分子生物学研究提供理论依据. 方法:应用原位末端DNA片段标记法(TUNEL),结合免疫组化技术对57例肺癌切除标本进行Fas,Bax,p53及Bcl-2蛋白检测. 结果:在肺癌组织中凋亡相关基因阳性率分别为:Fas 28%,Bax 70%,p53 69%,Bcl-2 33%,各基因在肺癌不同病理类型中表达率亦不同,且肺癌的淋巴结转移与调亡相关基因表达无明显关系(P＜0.05). 其中,p53,Fas随肺癌病理分期的升高而增加,Bcl-2则随病理分期的升高而减少,而Bax则与病理分期无明显关系(P＜0.05). 结论:肺癌组织有调亡相关基因表达,其表达程度与肺癌的病理类型有关,p53, Fas表达可能与不良预后有关.     

用荧光差异显示法分离新的肝细胞癌相关基因

目的 :寻找新的肝细胞癌 (hepatocellularcarcinoma ,HCC)相关基因。方法 :应用荧光 差异显示 (fluorescentdifferentialdisplay)技术分析人HCC、配对非癌肝、胎肝、正常肝等组织之间的基因差异表达 ,差异表达cDNA片段 ,经测序后 ,再用RNA狭缝杂交对部分差异片段在上述 4种组织中的表达进行验证。结果 :共得到差异表达cDNA片段 110条。经狭缝杂交筛选 ,获得了 4条阳性片段 ,未知cDNA片段L2和与人醛缩酶B 99.5 %同源的cDNA片段L7在部分HCC中特异性低表达 ,未知cDNA片段LC2 7和与人Nip3基因 99.4%同源的cDNA片段LC2 0在部分HCC中特异性高表达。结论 :确认了 4条HCC相关基因。其中L2和人醛缩酶B基因可能为阻抑HCC发生、发展的基因 ,而人Nip3基因和LC2 7可能为促进HCC发生、发展的基因。L2和LC2 7为目前未知的新基因。     

人宫颈癌组织中c—myc基因的表达

目的 研究人宫颈癌组织中ｃ－ｍｙｃ基因的表达。方法 应用Ｄｉｇ标记ｃＤＮＡ探讨，ＤＮＡ－ｍＲＮＡ原位杂交技术检测３７例人宫颈鳞状细胞癌内癌基因ｃ－ｍｙｃ ｍＲＮＡ。结果 ３７例中１６例有ｃ－ｍｙｃ ｍＲＮＡ表达，检出率为４３．２４％，ｃ－ｍｙｃ ｍＲＮＡ主要分布在癌细胞胞浆内。结论 ｃ－ｍｙｃ癌基因表达在宫颈癌发生中可能起作用，宫颈癌的发生可能还有更多的癌基因参与。     

抑癌基因WAF1在喉癌组织中的表达及意义

目的：探讨喉癌组织中抑癌基因（ＷＡＦ１）的表达及其意义。方法：采用Ｗｅｓｔｅｒｎ印迹杂交法。结果：正常喉粘膜组织中有不同程度的ＷＡＦ１基因蛋白ｐ２１的表达。６４例中有４７例Ｗｅｓｔｅｒｎ印迹杂交出条带,阳性表达率为７３．４％。喉癌组织中ｐ２１也有表达,６４例中有３３例,表达率为５１．５％。喉癌ｐ２１阳性表达的３３例患者中１４例ｐ５３表达阴性,但ｐ２１无表达的３１例患者中仍有１３例患者ｐ５３表达阳性     

鼻咽癌变过程中基因表达的cDNA阵列研究

目的 :比较研究鼻咽癌变过程中不同阶段鼻咽上皮组织基因表达谱的差异 ,观察鼻咽癌发生中多个基因的作用 ,寻找与鼻咽癌变相关的基因。方法 :用二亚硝基哌嗪 (N ,N’Dinitrosopiperazine ,DNP)诱导大鼠鼻咽癌 ,获取癌变过程中单纯增生、异型增生和癌组织 ,提取总RNA后逆转录标记成cDNA探针 ,与 5 88个基因的AtlasTM RatcDNAExpressionArray杂交 ,灰度扫描杂交信号及统计分析差异。结果 :在鼻咽癌组织中 ,PDGFB ,M6 P IGFR2 ,ErbB3EGF等瘤基因抑瘤基因、CCNE ,CCND3等细胞周期调节基因以及NF κB ,JNK转录因子和细胞信号转导等基因表达升高。鼻咽异型增生组织表达升高的基因较癌组织少 ,有prothymosin alpha,Cu ZnSOD1 ,MAPK1 等基因表达升高 ,但较鼻咽单纯性增生组织高表达基因多 ;鼻咽上皮组织单纯性增生仅有个别基因表达升高 ,大部分基因表达与正常鼻咽组织基因表达无明显差异。结论 :多个基因的表达变化在鼻咽癌变过程中起作用 ,随癌变进程基因逐步高表达     

p16基因产物在肺癌中的表达研究

目的 探讨Ｐ１６基因产物在肺癌中的表达及其临床意义。方法 应用免疫组化ＳＰ法检测８２例肺癌组织中Ｐ１６基因表达并结合肺癌的临床病理学特征及预后情况进行分析,４０例癌变的临床病理学特征及预后情况进行分析,４０例癌旁正常肺组织作对照。结果 肺癌组织中Ｐ１６基因产物阳性表达率为５７．３％,癌旁正常肺组织学９２．５％。肺癌组织中存在明显的Ｐ１６基因表达缺失。肺癌组织中Ｐ１６基因表达水平与肺癌的细胞分化程度     

重组胸腺素α1的克隆、表达与纯化

目的利用基因工程方法表达重组胸腺素α1 (Tα1),并进行纯化、鉴定. 方法使用大肠杆菌偏爱密码子,人工合成Ref蛋白(T7噬菌体蛋白)和Tα1的融合基因,并克隆在表达载体pBV220中,转化E.coliDH5α,温度诱导表达,表达的重组蛋白Ref- Tα1经CM-Sepharose FF阳离子柱进行纯化,Western-blot进行鉴定. 结果获得了纯化的重组蛋白Ref-Tα1,相对分子质量约为15 000. 结论用融合基因的方法表达小分子多肽是一种可行的方法,Ref- Tα1的成功表达为进一步研究其生物学活性奠定了基础.     

Id1基因在多种肺癌中的表达

目的：研究探索分化抑制因子（inhibitors of differentiation,Id）在多种肺癌细胞中的表达及意义。方法：随机选取北京大学深圳医院2009年1月至2010年12月30例肺癌及同样例数正常组织,采取免疫组化s-p法检测Id1在不同组织的表达状况。结果：在多种肺癌组织中,Id1均表现为过度表达,与正常肺组织表达情况比较差异有统计学意义（P〈0．01）;在不同病理表现（腺癌、鳞癌、腺鳞癌）、性别、及年龄中表达差异无统计学意义（P〉0．05）;在肺癌淋巴结转移组中Id1。表达明显高于无淋巴结转移组（P〈0．05）.结论：Id1基因作为癌基因在肺癌的发生发展中发挥作用,与肺癌淋巴结转移密切相关,可能为多种肺癌诊断及预后的标志物.     

HIV-1 HXB2株Tat蛋白在大肠杆菌中的分段表达及免疫原性分析

目的研究对人类免疫缺陷病毒Ⅰ型HXB2株调控蛋白Tat原核表达产生影响的区域和Tat蛋白重要的抗原表位。方法用PCR方法获得Tat(1-48aa)、Tat(22-72aa)和Tat(38-101aa)DNA片段,构建其原核表达质粒pET32a-Tat(1-48aa)、pET32a-Tat(22-72aa)和pET32a-Tat(38-101aa),并转入E.coliBL21(DE3)中进行诱导表达及纯化,SDS-PAGE鉴定表达及纯化产物。采用间接ELISA方法用兔抗pET32a-Tat抗血清对三种肽段进行免疫原性分析。结果成功构建了pET32a-Tat(1-48aa)、pET32a-Tat(22-72aa)和pET32a-Tat(38-101aa)质粒,分别表达出相对分子质量(Mr)为23×103、23×103和25×103的融合肽段,其浓度分别为4.26、3.35和5.11mg/ml。间接ELISA结果表明三种融合肽段与兔抗pET32a-Tat抗血清均呈特异性结合反应,其抗体滴度分别为1:128000、1:32000、1:64000,而抗血清与pET32a蛋白仅有较弱结合。结论半胱氨酸富集区(22-37位氨基酸)对Tat蛋白的原核表达有较显著影响;Tat蛋白的N端区、碱性区和C端区是其重要的抗原表位,其中N端区的免疫原性最强。     

重组Endocan转染MDCK细胞对其表达骨桥蛋白的影响

目的构建Endocan真核表达载体pcDNA3.1-En-docan,转染犬肾小管上皮细胞MDCK,观察其在MDCK中的表达并初步分析其对骨桥蛋白(OPN)表达的影响。方法应用PCR从pET28-Endocan中扩增出Endocan cDNA全长序列,酶切后导入pcDNA 3.1/myc-his A多克隆位点,构建真核表达载体pcDNA3.1-Endocan;瞬时转染MDCK细胞,Western blot检测Endocan和OPN表达。结果经双酶切鉴定及测序分析表明Endocan已经克隆到pcDNA 3.1/myc-his A中。Western blot结果表明转染成功,Endocan表达量增加,且OPN随其而增加。结论Endocan可促进MDCK表达OPN。     

光气吸入对大鼠肺组织基因表达谱的影响

目的:研究光气吸入染毒前后大鼠肺组织基因表达的差异,探讨光气肺损伤作用相关的基因谱.方法:提取正常对照组和光气染毒组肺组织的总RNA,并以此为模板制备荧光标记的cRNA靶物,经杂交、洗涤后,通过扫描荧光强度和计算机软件分析,寻找染毒前后上调和下调的差异表达基因.结果:在大鼠20500个靶基因中,初步筛选出801条差异表达基因,表达上调的有557条,下调的有254条.根据基因的生物学功能,差异表达基因被分为9类:G1自由基\电子传递相关;G2应激炎症相关;G3物质代谢相关;G4细胞增殖\分化\凋亡相关;G5基因表达调控相关;G6受体和信号转导相关;G7蛋白质修饰\分解相关;G8细胞骨架\运动相关;G9离子通道与物质转运相关等.结论:光气可以引起肺组织基因的多发性改变,其差异表达基因的功能分类为进一步探讨光气中毒发生、发展的机制和有效救治提供新的线索和思路.     

Gene Expression Profile of Pulmonary Tissues in Different Phases of Lung Ischemia-reperfusion Injury in Rats

In order to provide us new clues to induce some endogenous protective molecular mechanisms, the changes in gene expression profile induced by ischemia-reperfusion in pulmonary tissues of rats were investigated and the dynamic mechanism of pulmonary ischemia-reperfusion injury was elucidated. Thirty male Wistar rats were randomly divided into 6 groups： 5 ischemia-reperfusion （I/R） groups （I/R 0-h, I/R 1-h, I/R 3-h, I/R 6-h, I/R 24-h） and control group （n=5 in each）. An in situ ischemia-reperfusion lung injury rat model was established by occluded hilus of lung. The RatRef-12 Expression Beadchip （22 226 gene probes per array） was used to analyze the pattern of gene expression in all groups. The results showed that 648, 340, 711, 1279 and 641 genes were differentially expressed in I/R 0-, 1-, 3-, 6- and 24-h groups respectively. The differentially expressed genes were classified as following 7 functional categories： cytokine, adhesion molecule, growth factor and apoptosis-related factor, oxidation and antioxidation molecule, metabolic enzyme, ion channel and aquaporin, signal transduction molecule. It was suggested that gene chip technology was an effective and quick method for screening differentially expressed genes. Many differentially expressed genes with different functions interacted each other to result in pulmonary ischemia-reperfusion injury.