对中国人群中Ⅲ／2a型HCV高变区1序列变异规律的横？…

目的 研究中国丙型肝炎患者Ⅲ／２ａ型丙型肝炎病毒（ＨＣＶ）包膜蛋白Ｅ２／ＮＳ１高变区１（ＨＶＲ１）序列变异的规律及意义。方法 应用逆转录巢式ＰＣＲ技术,从３８例Ⅲ／２ａ型ＨＣＶ感染患者血清中,扩增ＨＣＶ部分包膜区基因片断（ｎｔ１４０～１５８２,ＨＣＶ－Ｊ６）,纯化后直接采用双脱氧链末端终止法进行序列分析。结果 本组Ⅲ／２ａ型ＨＣＶ ＨＶＲ１位于氨基酸（ａａ）３８４～４０８位,与有关文献报道的结果（     

丙型肝炎病毒血清学分型与基因分型研究

为了解某农村单采浆供血员人群所感染丙型肝炎病毒（ＨＣＶ）的血清型和基因型构成，并对两种分型方法进行比较，本工作以ＨＣＶＣ区型特异性多肽对抗－ＨＣＶ进行血清学分型，对已确定血清型的血清进行５′非编码区（ＮＣＲ）逆转录套式聚合酶链反应（ＲＴ－ｎＰＣＲ）和限制性片段长度多态性（ＲＦＬＰ）分析以确定基因型，并对６份扩增产物进行序列测定。结果显示１４０份抗－ＨＣＶ阳性血清中，血清Ⅰ型和Ⅱ型分别为４４份（３１．４３％）和１２份（８．５７％），余８４份未能分型。４４株已知血清型的ＨＣＶ中，１ｂ、２ａ和３ｂ等３种基因型分别为３４株（７７．２７％）、９株（２０．４５％）和１株（２．２７％）。两种分型方法一致率为９３．１８％（４１／４４）。对６株ＨＣＶ５′ＮＣＲ的序列分析证实了ＲＦＬＰ分型的正确性。结论认为该人群ＨＣＶ感染以血清Ⅰ型或基因１ｂ型为主；Ｃ区型特异性多肽血清学分型法与ＲＦＬＰ基因分型法符合率高，具有一定应用价值。     

丙型肝炎病毒包膜糖蛋白高变区1多抗原肽设计及？…

目的 应用多抗原肽（ＭＡＰ）研究丙型肝炎病毒包膜糖蛋白高变区１（ＨＶＲ１）的抗原性。方法 根据已经获得的ＨＣＶ－ＢＪ株Ｅ２／ＮＳ１区氨基酸序列,参照国内外得所报道的ＨＶ ＨＶＲ１序列及抗原性参数,设计并合成含ＨＣＶ ＨＶＲ１３９０－４１１ａａ序列２２个氨基酸的线性表位多肽（以ＬＰ表示）及ＭＡＰ（对称８分枝）,分别以ＬＰ和ＭＡＰ免疫Ｂａｌｂ／Ｃ小鼠及家兔,比较其免疫原性。结果 ＭＡＰ免疫原性明显强于     

丙型肝炎病毒1b型NS5 A区基因结构变异与α干扰？…

目的 观察丙型肝炎患者丙型肝炎病毒（ＨＣＶ）１ｂ型基因组部分ＮＳ５ Ａ区核苷酸,氨基酸的变异情况并探讨其与α干扰素疗效的相关性。方法 患者干扰素治疗前,中,后留血标本,用聚合酶链反应（ＰＣＲ）扩增ＨＣＶ病毒ＮＳ５ Ａ区部分基因片段并用直接测序法测序。与ＨＣＶ－Ｊ株及ＨＣＶ－河北株（ＨＣＶ－ＨＢ）比较核苷酸及氨基酸序列的同源性,根据α干扰素疗效分析ＨＣＶ１ｂ是否存在干扰素敏感决定区。     

丙型肝炎病毒E2／NS1区基因cDNA的克隆及序列分析

从北京地区１份丙型肝炎病毒（ＨＣＶ）感染者血清中提取ＲＮＡ，经逆转录和套式聚合酶链反应扩增ＨＣＶＥ２／ＮＳ１区基因约９３０ｂｐ，将其插入至ｐＧＥＭ－Ｔ质粒载体中，利用双脱氧链末端终止法测出该基因５’端４３１ｂｐ的核苷酸序列，将此序列与其它９个ＨＣＶ分离株的相应序列进行比较分析，结果表明，此序列与ＨＣＶⅡ型序列同源性较高，核苷酸水平同源性在８０％以上。由其编码的ＨＣＶ外膜蛋白Ｎ端存在两个高变部位（ＨＶＲ），在ＨＶＲ内、外具有几个保守氨基酸残基和氨基酸区域，它们与外膜蛋白空间构型的维持有关。     

CLONING AND SEQUENCE CHARACTERIZATION OF THE RE-ARRANDED VH GENE FROM HYBRIDOMA CELLS SECRETING ANTI-HUMAN C1-INHIBITOR McAb

由分泌抗人Ｃ１－ＩＮＨＭｃＡｂ的杂交瘤Ｆ７细胞株提取总ＲＮＡ，合成与ＶＨ基因ＦＲ１和ＦＲ４互补的通用引物，以ＲＮＡ反转录合成的第一链ｃＤＮＡ为模板，ＰＣＲ法克隆出Ｆ７ＶＨ基因的ＤＮＡ片段。将分离获得的目的ＤＮＡ片段亚克隆入ｐＵＣ１８／１９测序载体，从两头进行双脱氧核苷酸随机终止法的ＤＮＡ序列测定。结果显示：ＶＨ基因是由３３３个碱基组成，编码１１１个氨基酸残基。通过国际联机检索进行ＥＭＢＬ和Ｋａｂａｔ基因库扫描发现，Ｆ７ＶＨＤＮＡ仅与Ｉｇ同源，符合小鼠Ｉｇ的ＶＨ基因特征；同源性为６０％～８５％，应归属于Ｉｇ的ＶＨ基因。根据Ｋａｂａｔ分类方法，Ｆ７ＶＨ基因推导的氨基酸顺序属于小鼠Ｉｇ的ＶＨ基因的Ⅱ（Ａ）亚组，是由ＶＨ－Ｄ－ＪＨ３重排产生；其框架区的９和６７位点为脯氨酸（Ｐｒｏ）和赖氨酸（Ｌｙｓ）（非芳香族氨氨酸），符合Ⅱ（Ａ）亚组框架残基结构模式；其ＣＤＲ３区含有７个氨氨酸残基，表明Ｃ１－ＩＮＨ抗原表面结构并不复杂；ＦＲ２和ＦＲ３的２２和８９位点为半胱氨酸残基（Ｃｙｓ），与ＶＨ片段二硫键形成有关。成功获得Ｆ７ＶＨ基因为进一步构建和表达单链Ｆｖ（ｓｃＦｖ）抗体打下良好的基础。     

丙型肝炎病毒非结构基因5b(NS 5b)区一级结构的变异

目的　分析中国丙型肝炎病毒非结构基因５ ｂ 区核苷酸序列变异。方法　以逆转录套式聚合酶链反应（ＲＴｎｅｓｔｅｄＰＣＲ） 从４９ 例中国病人的血清中获得互补的ＤＮＡ片段,产物克隆后测序。结果　３３ 株系基因Ⅱ１ ｂ 型,１６ 株系Ⅲ２ ａ 型,中国ＨＣＶ株型与日本ＨＣＶ株型同属１ 个基因亚型,但在一些核苷酸保守位点上有一定的差异,对３３ 株Ⅱ１ ｂ 型和１６ 株Ⅲ２ ａ 型间的同源性进行比较,发现１６ 株Ⅲ２ ａ 型的同源性低于３３ 株Ⅱ１ ｂ 型的同源性。首次在ＨＣＶＮＳ５ ｂ 区发现１ 个新的３ 个核苷酸的缺失突变及１ 个移码突变。结论　同一基因亚型之内不同ＨＣＶ株的核苷酸序列可能具有一定的地理分布特征,每个地区有一定的流行株。     

9.1C3单克隆抗体轻,重链可变区基因克隆及序列分析

９．１Ｃ３分子是一种参与ＮＫ、巨噬细胞及ＬＡＫ细胞杀伤过程的重要细胞表面分子，主要表达于外周血单个核细胞表面。本文运用分子生物学技术，从分泌９．１Ｃ３ＭＣＡｂ的杂交瘤细胞中提取总ＲＮＡ，经反转录、ＰＣＲ分另１１分离了９．１Ｃ３ＭｃＡｂ轻链可变区（ＶＬ）基因及重链可变区（ＶＨ）基因，并用全自动荧光ＤＮＡ序列分析仪对９．１Ｃ３ＶＨ、ＶＬ基因序列进行了分析。结果表明：９．１Ｃ３ＶＨ基因为３５１ｂＰ，编码１１７ａａ残基，９．１３ＶＬ为３２４ｂＰ，编码１０８ａａ残基；从推导出的氨基酸序列分析证实９．１Ｃ３ＶＨ、ＶＬ序列均符合小鼠ｌｇ可变区的氨基酸序列特征；根据Ｋａｂｂａｔ分类体系，９．１Ｃ３ＶＨ隶属Ｉｇ重链第Ⅱ（Ｃ）亚组，９．１Ｃ３ＶＬ隶属小鼠ＩｇＫ链第Ⅴ亚组。９．１Ｃ３ＶＨ、ＶＬ基因的克隆成功为其单链抗体的构建、表达奠定了良好的物质基础。     

MCP-1 mcAb和Losartan拮抗Ang Ⅱ介导的VSMCs的增殖与迁移效应的实验研究

目的探讨单核细胞趋化蛋白－１单克隆抗体（ＭＣＰ－１－ｍｅＡｂ）或Ｌｏｓａｒｔａｎ 拮抗血管紧张素Ⅱ（ＡｕｇⅡ）介导的血管平滑肌细胞（ＶＳＭＣｓ）增殖与迁移效应的可能性，为防治动脉硬化提供一定的理论依据。方法采用改良的Ｂｏｙｄｅｎ小室法检测 ＶＳＭＣｓ的迁移效应；以 ＭＴＴ法、~３Ｈ－ＴａＲ掺入法、~３Ｈ－脯氨酸标记法和ＶＳＭＣｓ计数评价ＶＳＭＣｓ的增殖效应。将培养ＶＳＭＣｓ分为 ５组； ２％胎牛血清（ ２％ＦＣＳ）组、 ＡｕｇⅡ组（其浓度为 １０－１０～１０－６ｍｏｌ／Ｌ）、Ｌｏｓａｒｔａｎ组（其浓度为 １０－７～１０－５ｍｏｌ／Ｌ）、ＭＣＰ－ｌｍｃＡｂ组（终浓度为 １０μｇ／ｍｌ）和阳性对照组（含５％的酵母多糖活化血清）。结果（１） ＡｕｇⅡ具有剂量依赖性的促进 ＶＳＭＣｓ的增殖与迁移效应；（２） ＭＣＰ－１ｍｃＡｂ或 Ｌｏｓａｒ－ｔａｎ能有效地拮抗ＡｕｇⅡ介导的ＶＳＭＣｓ增殖与迁移效应。结论 ＭＣＰ－１ｍｃＡｂ或Ｌｏｓａｒｔａｎ对动脉硬化性疾病可能具有较大的应用前景。     

合肥地区输血后慢性肝炎HCV基因分型研究

目的：探讨合肥地区输血后慢性肝炎ＨＣＶ感染的基因型。方法：用逆转录聚合酶链反应（ＲＴＰＣＲ）检测ＨＣＶＲＮＡ,对ＨＣＶＲＮＡ阳性标本用型特异引物ＰＣＲ进行ＨＣＶ分型。结果：６３ 例患者中检出ＨＣＶ　ＲＮＡ５４ 例,阳性率为８５．７％ ;其中Ⅱ型４６ 例（８５．２％）,Ⅲ型６ 例（１１．１％）,Ⅱ／Ⅲ型２ 例（３．７％）。结论：提示合肥地区ＨＣＶ感染大多数属Ⅱ型。     

输血后丙型肝炎与抗丙型肝炎病毒（HCV）阳性献血？…

采用丙型肝炎病毒（ＨＣＶ）５’－非编码区（５’－ＮＣＲ）和Ｃ区具有型特异性的引物建立的逆转录－聚合酶链反应方法检测了２５例丙型肝炎（ＨＣ）和２６例抗－ＨＣＶ阳性献血员的ＨＣＶ ＲＮＡ及基因型。结果２５例ＨＣ患者ＨＣＶ ＲＮＡ阳性率为１００．０％，２６例抗－ＨＣＶ阳性献血员ＨＣＶ ＲＮＡ阳性率为８４．５％，（２２／２６）。２５例ＨＣ中Ｉ、Ⅱ和混合型（Ｉ＋Ⅱ、Ⅱ＋Ⅲ、Ｉ＋Ⅲ、Ｉ＋Ⅱ＋Ⅲ）分别占８．０％     

血清学标志阴性的非甲～戊型肝炎的病原学研究

目的对血清学标志阴性的非甲～戊型肝炎进行病原学研究。方法用ＨＢＶＰＣＲ、ＨＣＶＲＴ－ＰＣＲ和ＨＥＶＲＴ－ＰＣＲ分别检测血清学标志阴性的非甲～戊型肝炎患者血清，并对其部分阳性产物进行克隆测序。结果８７例非甲～戊型肝炎血清ＨＢＶＤＮＡ均为阴性，９例（１０．３％）为ＨＣＶＲＮＡ阳性，部分经测序证实为ＨＣＶ１ｂ亚型；余７８例为ＨＢＶＤＮＡ和ＨＣＶＲＮＡ均阴性。该７８例中，１４例因无血清未作ＨＥＶＲＮＡ检测，余６４例中４９例（７６．６％）为ＨＥＶＲＮＡ阴性，１５例（２３．４％）为ＨＥＶＲＮＡ阳性。经序列分析显示，其中９例为典型的中国ＨＥＶ株基因序列，６例变异较大，与典型的中国株基因序列的同源性仅为８０％左右。４９例ＨＢＶＤＮＡ、ＨＣＶＲＮＡ和ＨＥＶＲＮＡ均阴性的血清中１６例（３２．６％）ＨＧＶＲＮＡ阳性。由此可见，该８７例中至少有９例为ＨＣＶ感染，１５例为ＨＥＶ感染，１６例为ＨＧＶ感染。结论对血清学标志阴性的非甲～戊型肝炎的病人应该用ＰＣＲ法进行病原学分型，以明确其诊断     

丙型肝炎病毒非结构基因5b的变异及与干扰素治疗的关系

以聚合酶链反应直接序列分析方法测定了４例无症状慢性丙型肝炎病毒（ＨＣＶ）感染者，与９例接受干扰素治疗的慢性丙型肝炎患者血清中ＨＣＶ非结构基因５ｂ（ＮＳ５ｂ）ｃＤＮＡ的序列。发现，与已发表的Ⅱ／１ｂ型ＨＣＶ序列相比，无症状慢性ＨＣＶ感染者的ＨＣＶ在核苷酸水平的同源性高于干扰素治疗有效的慢性丙型肝炎患者（９５．６５％±２．６１％比９４．３５％±２．２９％），后者又高于干扰素治疗无效的慢性丙型肝炎患者（９２．７０％±１．９０％）。还发现在干扰素治疗后，治疗无效者血清中ＨＣＶＮＳ５ｂｃＤＮＡ序列发生明显变化，在所测定的３８０个核苷酸中有９～４８个发生碱基替换，从而导致所编码的氨基酸中有６～２０个发生突变。结果提示，ＨＣＶＮＳ５ｂ基因变异与病情及干扰素治疗有一定关系。变异较大者常出现明显的临床表现，且干扰素治疗可能趋势于失败。     

抗HSVgc单克隆抗体V_2基因的扩增、克隆及序列测定

本文从分泌具有高中和活性和高保护作用的抗ＨＳＶ－１／ＨＳＶ－２型共同性糖蛋白Ｃ的鼠源性单克隆抗体（ＭｃＡｂ）的杂交瘤细胞１Ａ１２中提取胞浆总ＲＮＡ，以Ｏｌｉｇｏ（ｄＴ）１５为引物逆转录合成ｃＤＮＡ，用一对鼠抗体Ｋ链通用引物进行ＰＣＲ，扩增出１Ａ１２ＶＬ基因，并克隆入ｐＵＣ１８质粒中。序列分析结果表明，１Ａ１２ＶＬ基因由３３０ｂｐ组成，编码１１０个氨基酸，隶属小鼠轻链ｋ链４组。     

广西不同人群庚型肝炎病毒感染状况的调查

目的 了解庚型肝炎病毒（ＨＧＶ）感染在广西柳州地区不同人群中的感染状况，并比较静脉毒瘾者与健康体检者ＨＧＶ，乙型肝炎病毒（ＨＢＶ）、丙型肝炎病毒（ＨＣＶ）与ＨＧＶ共同感染的特点，方法 应用酶联免疫法（ＥＬＡ）检测抗－ＨＧＶ，抗－ＨＣＶ，ＨＢＶＭ（ＨＢｓＡｇ，ＨＢｓＡｂ，ＨＢｅＡｇ，ＨＢｅＡｂ，ＨＢｃＡｂ），并对抗－ＨＧＶ阳性者随机抽取２０例（１９％）进一步用逆转录套式ＰＣＲ（ＰＴ－ｎＰＣＲ）法检测     

丙型肝炎病毒基因型与血清HCV RNA含量关系及与干扰素应答的研究

目的探讨丙型肝炎病毒（ＨＣＶ）基因型与血清ＨＣＶＲＮＡ含量的关系及其对干扰素应答的影响。方法应用定量荧光ＰＣＲ（Ａｍｐｌｉｓｅｎｓｏｒ－ＰＣＲ）技术检测了１３５例不同基因型ＨＣＶ感染的慢性丙型肝炎患者血清ＨＣＶＲＮＡ含量，另对其中７７例进行干扰素治疗并随访１２个月以上。结果ＨＣＶ－Ⅱ型感染血清ＨＣＶＲＮＡ水平（１０７．８±３．４拷贝／ｍｌ）显著高于ＨＣＶ－Ⅲ型感染（１０６．３±２．５拷贝／ｍｌ）（Ｐ＜０．０１），Ⅲ型感染的应答率（７／１３，５３．８％）显著高于Ⅱ型感染（２０／６４，３１．３％）（Ｐ＜０．０５）。应答组治疗前血清ＨＣＶＲＮＡ含量（１０６．８±２．７拷贝／ｍｌ）显著低于无应答组（１０８．３±３．２拷贝／ｍｌ）（Ｐ＜０．０１）。ＨＣＶＲＮＡ含量低于１０６．５拷贝／ｍｌ者，无论何种型别ＨＣＶ感染均应答较好，而ＨＣＶＲＮＡ高于１０８．０拷贝／ｍｌ者则应答极差。结论ＨＣＶ基因型及病毒血症水平是预测干扰素疗效的重要因素，且后者比前者意义更大。Ⅱ型感染病毒血症水平较高可能是影响其疗效的原因之一。     

抗HSV糖蛋白单克隆抗体可变区基因的克隆和序列测定

选用具有动物体内高保护作用的抗ＨＳＶ－１／ＨＳＶ－２型共同性糖蛋白Ｃ（ｇＣ）单克隆抗体１Ａ１２，从其杂交瘤细胞中提取总ＲＮＡ，以Ｏｌｉｇｏ（ｄＴ）１５为引物反转录合成ｃＤＮＡ，用一对鼠抗体通用ＶＨ引物和一对Ｖ引物进行ＰＣＲ，扩增出１Ａ１２ＶＨ和１Ａ１２ＶＬ基因，并分别克隆入ｐＵＣ１８质粒中，序列分析结果表明，１Ａ１２ＶＨ基因由３３６ｂｐ组成，编码１１２个氨基酸，隶属于小鼠重链第３组亚组（Ｄ）；１Ａ     

丙型肝炎病毒基因组5‘非编码区酶切分型研究

对１０５例ＨＣＶＲＮＡ阳性标本用Ｓａｕ３ＡⅠ和ＨａｅⅢ两种酶对其５’ＮＣ区扩增产物进行酶切。结果呈现４种酶切类型。对不同酶切类型的扩增产物进行序列分析，结果显示，不同酶切类型的扩增产物都源于ＨＣＶ，核酸序列中的酶切点与酶切结果完全吻合。对文献中已经确定基因型的３３株ＨＣＶ作了比较，分析了酶切类型与基因型的关系。发现对ＨＣＶ５’ＮＣ区－２９７至－４１片段ＰＣＲ扩增产物用这两种酶分别酶切，可以把ＨＣＶ按Ｃｈａｎ氏分型（１９９２）分为１、２、３三组。本文１０５例标本，１组（包括Ⅰ、Ⅱ型）占８２．９％，２组（包括Ⅲ、Ⅳ型）占１５．２％，１、２组混合占１．９％，未发现３组。其中以１组（Ⅱ型）为最多，但不超过６９．５％。     

丙型肝炎病毒RNA基因型与肝病临床转归的初步观察

丙型肝炎病毒ＲＮＡ基因型与肝病临床转归的初步观察李岱王宇基于不同的丙型肝炎病毒（ＨＣＶ）克隆间核苷酸序列同源性的差异，全世界ＨＣＶ基因型至少有１０余种之多，广泛分布的有五个基因型：Ⅰ／Ｉａ、Ⅱ／Ｉｂ、Ⅲ／２ａ、Ⅳ／２ｂ和Ⅴ／３ａ型，我国至今为止除了Ⅱ...     

云南苯丙氨酸羟化酶基因点突变及外显子5内新突变Y166X(C→G)的鉴定

目的研究云南苯丙氨酸羟化酶基因点突变分布概况,以提高该地区苯丙酮尿症（ＰＫＵ）的基因诊断率。方法应用ＰＣＲ－ＡＳＯ探针斑点杂交,ＰＣＲ－ＳＳＣＰ、ＡＳＰＣＲ和ＤＮＡ直接测序等技术,对１３／１４名云南籍ＰＫＵ患儿的苯丙氨酸羟化酶（ＰＡＨ）基因外显子４、５、６、７、１０、１１和１２进行了鉴定分析。结果共检出５种错义突变：Ｒ２４３Ｑ（５／２６）、Ｙ２０４Ｃ（３／２８）、Ｒ４１３Ｐ（２／２８）、Ｔ４１８Ｐ（１／２８）及Ｇ２４７Ｖ（１／２６）,３种无义突变Ｙ１６６Ｘ（Ｃ→Ｇ）（２／２６）、Ｗ３２６Ｘ（１／２８）及Ｙ３５６Ｘ（２／２６）和１种静止突变Ｖ３９９Ｖ（２／２６）。经检索国际ＰＡＨ基因突变数据库,其中Ｙ１６６Ｘ（Ｃ→Ｇ）为首次发现的新突变。结论云南藉ＰＫＵ与中国北方人群有相类似的最常见的ＰＡＨ基因突变类型（Ｒ２４３Ｑ、Ｙ２０４Ｃ、Ｙ３５６Ｘ、Ｖ３９９Ｖ和Ｒ４１３Ｐ）,但与南方人群ＰＡＨ基因突变特点则不同。该发现有助于提高云南ＰＫＵ的基因诊断率,并对我国ＰＡＨ基因突变不同地区及人群的分布、起源研究有参考价值。