云南省宾川县恙虫病立克次体血清学分型研究

采用免疫荧光方法对宾川县恙虫病立克次体流行病株鼠免疫血清及病人血清进行分型，结果９株流行毒株中４株为Ｋａｒｐ型、３株为Ｇｉｌｌｉａｍ型、２株不能分型；１４８份阳性血清中Ｋａｒｐ型９４份、Ｇｉｌｌｉａｎ型３４份、Ｋａｒｐ＋Ｇｉｌｌｉａｍ两型混合感染１６份、Ｋａｔｏ型３份、Ｋａｒｐ＋Ｋａｔｏ两型混合感染１份，表明当地恙虫病立克次体流行型别对Ｋａｒｐ型为主，次为Ｇｉｌｌｉａｍ型，同时亦有少量的Ｋａｔｏ型     

应用NPCR发现我国Kawasaki型恙虫病立克次体

本文报告用恙虫病立克次体表面蛋白５６ＫＤａ型特异抗原基因编码区的引物，采用嵌合式聚合酶链反应鉴定江苏地区的２株恙虫病立克次体。结果该２株恙虫病立克次体与ＧｉｌｌｉａｍＫａｒｐ，Ｋａｔｏ和Ｋｕｒｏｋｉ型特异引物无任何ＤＮＡ扩增带，而与日本Ｋａｗａｓａｋｉ株型特异引物扩增后有５２３ｂｐ的ＤＮＡ扩增带，表明我国存在Ｋａｗａｓａｋｉ型恙虫病立克次体。     

应用广谱引物PCR法检测立克次体的研究

本文选用普氏立克次体柠檬酸合成酶基因做为靶序列合成一对引物（ＲＰＣＳ８７７ｐ和ＲＰＣＳ１２５８ｎ）。用该对引物对不同种类立克次体（包括：加拿大；普氏；莫氏；Ｑ热；恙虫病Ｇｉｌｌｉａｍ株、Ｋａｔｏ株、Ｋａｒｐ株；澳大利亚；立氏；康氏；小蛛；西伯利亚２４６、西伯利亚２３２；精河；内０１；内Ｗ８８；黑８４；黑０５４）及大肠杆菌ＨＢ１０１，ＤＮＡ进行扩增。同时，选用三种不同方法处理模板进行扩增结果的比较。结果表明：该引物可扩增除恙虫病以外的所有立克次体，而大肠杆菌、λＤＮＡ不能被扩增。采用简单煮沸法处理模板，对含立克次体的材料进行扩增是可行的。     

云南省大理州恙虫病病人血清分型

采用免疫荧光方法，对云南省大理州９９份恙虫病病人血清进行分型，结果１２０份为Ｋａｒｐ型（占６０．３％），４０份为Ｇｉｌｉａｍ型（占２０．１％），３１份为Ｋａｒｐ＋Ｇｉｌｌｉａｍ两型混合感染（占１５．６％），３份为Ｋａｔｏ型，３份为Ｋａｒｐ＋Ｋａｔｏ＋Ｇｉｌｌｉａｍ三型混合感染，２份为Ｋａｒｐ＋Ｋａｔｏ两型混合感染。表明当地恙虫病流行型别以Ｋａｒｐ型为主，次为Ｇｉｌｌｉａｍ型和Ｋａｒｐ＋Ｇｉｌｌｉａ     

我国恙虫病立克次体(恙虫病东方体)分型研究近况

恙虫病立克次体 (Ｒｉｃｋｅｔｔｓｉａｔｓｕｔｓｕｇａｍｕｓｈｉ,Ｒｔ)是恙虫病病原体 ,自从 1931年定名以来 ,陆续发现Ｒｔ流行株 ,得到国际公认的有Ｇｉｌｌｉａｍ ,Ｋａｒｐ ,Ｋａｔｏ ,ＴＡ6 78,ＴＡ6 86 ,ＴＡ716 ,ＴＡ76 3和Ｈ18778个血清型[1] ,而Ｇｉｌｌｉａｍ、Ｋａｒｐ、Ｋａｔｏ三型作为国际标准参照株。 80年代初 ,日本[2 ] 又分离到Ｋａｗａｓａｋｉ、Ｋｕｒｏｋｉ和Ｓｈｉｍｏｋｏｓｈｉ三型。在病原体的研究中 ,流行病学专家关注的问题 ,也就是病原体的分型 ,病原体的分型方法可分为表型分型和基因分型。有关Ｒｔ分型研…     

南澎列岛恙虫病东方体分离株的基因分型

目的 用分子生物学技术鉴定南澎裂岛恙虫病东方体及其分型。方法 以巢式聚合酶链反应（NPCR）检测南澎列岛恙虫病东方体8个分离株的56kD蛋白基因片段,阳性产物进行限制性片段长度多态性分析（RFLP）。选择其中4株的PCR产物克隆进pGEM－T载体并且测序,测序结果在国际互联网作多序列比较和进化树分析。结果 7株分离株扩增出500bp目的片段,RFLP分析表明南澎列岛存在三种不同的恙虫病东方体。从4个样品获得7个克隆,序列分析证实2个克隆（DY1,DY21）与Yonchon同源性99％,3个克隆（DY22,NY12,NS2）与Karp株同源性92％,2个克隆（NY11,NS1）与Kato株同源性98％。南澎列岛存在Karp,Kato,Yonchon三种类型的恙虫病东方体。     

恙虫病立克次体Karp株Sta56部分基因片段的扩增、克隆及鉴定

目的为了进一步完善恙虫病立克次体的株型鉴定技术,并且为临床提供诊断试剂。方法本文采用ＮＰＣＲ技术,参考并自行设计两对寡核苷酸引物（Ｐ１、Ｐ２、Ｐ３、Ｐ４）,从恙虫病立克次体Ｋａｒｐ株基因组ＤＮＡ中特异扩增出编码Ｓｔａ５６抗原的部分基因片段,经纯化后用ＢａｍＨⅠ和ＨｉｎｄⅢ双酶切后,克隆到质粒ＰＵＣ１８中,转化大肠杆菌ＴＧ１,经ＰＣＲ和双酶切鉴定。结果与结论构建了重组质粒ＰＵＣ１８－ＲＫ,从而为该基因片段的表达奠定了基础。     

聚合酶链反应用于恙虫病立克次体检测和分型的研究

本文报道聚合酶链反应用于恙虫病立克次本（Ｒｔ）检测和分型研究结果，以构建的Ｒｔ外膜主要蛋白５６ｋＤａ型特异抗原（ｔｓａ５６ｋＤａ）基因编码区的群型特异引物，采用１步法ＰＣＲ分别为Ｇｉｌｌｉａｎ，Ｋａｒｐ，Ｋａｔｏ，Ｋａｗａｓａｋｉ和Ｋｕｒｏｋｉ５株标准株Ｒｔ江苏地区５份Ｒｔ阳性标本，斑点热和莫氏立次体以及５份正常输血员全血标本进行检测和分型，研究结果证明所构建的Ｒｔ群，型引物具有Ｒｔ的特异性，型特     

套式PCR用于恙虫病的早期诊断及恙螨幼虫体内立克次体的检测

从恙虫病立克次体（Ｒｔ）Ｋａｒｐ株的群特异性抗原基因序列设计两对引物建立套式ＰＣＲ检测现场鼠体采集的恙螨幼虫体内及恙虫病现症病人外周血单核细胞内的ＲｔＤＮＡ。除一份已用过药病人标本外，其余９份均可检见８８ｂｐＤＮＡ扩增产物；检测结果表明：现场鼠体采集的地里纤恙螨（Ｌｅｐｔｏｔｒｏｍｂｉｄｉｕｍｄｅｌｉｅｎｓｅ）幼虫的Ｒｔ携带率是１３．３％，证实套式ＰＣＲ可用于急性期恙虫病的诊断和媒介恙螨流行病学的调查。     

应用PCR／RFLP对辽宁、吉林地区恙虫病东方体分离株的基因型分析

目的 鉴定辽宁、吉林地区恙虫病东方体分离株的基因型。方法 采用ＰＣＲ／ＲＦＬＰ技术对辽宁、吉林地区恙虫病东方体分离株的ｓｔａ５６目的基因进行分析研究,并与国际参考株进行比较。结果 辽宁、吉林地区６株分离株的ＰＣＲ特异性产物经Ｈｉｎｆ Ⅰ、ＨｈａⅠ、ＲｓａⅠ酶切后呈现２种不同的ＲＦＬＰ图谱：ＨＣＡａ９２０２株、ＨＣＡｐ９２０３株及ＨＣＭ９５０１株与Ｇｉｌｌｉａｍ参考株具有相似的酶切图谱,但缺乏Ｈｉｎ     

西沙群岛恙螨所携恙虫病东方体的序列分析

目的　用分子生物学技术鉴定西沙群岛恙虫病东方体的基因序列 ,探讨南海岛屿恙虫病疫源地的形成。方法　以巢式聚合酶链反应 (NPCR)检测西沙群岛恙螨所携恙虫病东方体的 5 6kDa蛋白基因片段 ,继而将NPCR产物克隆进pGEM-T载体并且测序 ,测序结果在国际互联网作多序列比较和进化树分析。结果　从西沙群岛收集的恙螨扩增出 5 0 7bp目的片段 ,序列分析证实与Karp株同源性 85 % ,与Gilliam株同源性 6 8% ,与Yonchon株同源性 6 7% ,与Kato株同源性 6 5 %。结论　西沙群岛的恙螨携带恙虫病东方体以Karp型为主。     

我国南亚热带地区(南澳县)恙虫病疫源地的证实

目的　我国广东省南澳县恙虫病发病率近年明显增高 ,而国内关于此疫源地的记录极少。本研究对该地区恙虫病疫源地进行全面研究。方法　疫源地流行病学调查 ,病原分离鉴定与分子生物学研究 ,预防措施的制定。结果　该地区为南亚热带岛屿疫源地 ,主要宿主为褐家鼠 ,主要媒介为地里纤恙螨 ,褐家鼠与地里纤恙螨的季节消长与发病均一致。从宿主与媒介分离到恙虫病立克次体经鉴定为 Karp株。分子生物学结果与鉴定结果基本一致同时还证明存在 Kato株与韩国地方株(Yonchon)。血清流行病学调查表明该地区居民与部队人群均存在恙虫病立克次体抗体。在流行季节前应用综合预防措施当年无病例发生。结论　我国南澳县是恙虫病疫源地     

山西恙虫病立克次体分型及其56—kD蛋白基因序列分析

作者在我国新发现的山西恙虫病疫区病人血液中分离出3株恙虫病立克次体，SXh951，Sxh952，Sxh953。为明确其分类地位．对其进行了血清型，基因型和56－kD蛋白基因的部分序列分析。用免疫荧光抗体染色法将病人血清抗体与Karp,Gilliam．Kato株抗原反应．结果显示山西株与Gilliam型一致；用来自56－kD蛋白基因的引物扩增后，分别用限制性核酸内切酶Hinfl，HaeⅢ．Hhal消化DNA片段的多态性（PCR／RFLP）显示山西3株基因型一致，但均与Karp，Kato，Gilliam株的电泳图谱不同，显示为一独有的PCR／RFLP基因型；对Sxh951株56-kD蛋白基因片段扩增产物（1．2kb）进行DNA序列分析后．根据所推导氨基酸序列，比较Sxh951株与三个标准株氨基酸序列的同源性，发现Sxh951株与Karp、Kato和Gilliam株均有明显差异。对此，本实验室正在进一步研究，以便进一步确定其分类地位。     

Characterization of Orientia tsutsugamushi strains isolated in Shandong Province, China by immunofluorescence and restriction fragment length polymorphism (RFLP) analyses

In order to identify the characteristics of the Sta56 gene of the 23 isolates of Orientia (O.) tsutsugamushi isolated in Shandong Province, indirect immunofluorescence assay (IFA) was used to identify the gene type of 23 strains O. tsutsugamushi isolated from scrub typhus patients, chigger mites, and rodents. Restriction fragment length polymorphism (RFLP) analysis was also used to analyze the restriction profiles of the Sta56 gene PCR amplification products of the 23 isolated strains of the O. tsutsugamushi; the results were compared with those acquired by nested PCR. By IFA, 21 of the 23 isolates belonged to the Gilliam type, and 2 to the Karp type. Using RFLP analysis, 21 strains had similar restriction profiles to the Japan Kawasaki strain, but they had no restriction site Hha I, and thus had some difference in gene sequence compared with the Japan Kawasaki strain. The other 2 strains had similar restriction profiles to Karp. These results were identical to that acquired by nested-PCR. In Shandong Province, the gene types of epidemic O. tsutsugamushi strains were similar to the Japan Kawasaki type, but had some differences in gene sequence. In addition, Karp also existed.     

广东省重要岛屿恙虫病东方体血清流行病学调查

目的在广东省5岛屿开展恙虫病东方体血清流行病学调查并进行血清分型,为制定恙虫病防治策略提供依据。方法1998年5月～2003年8月在广东省南澎列岛、南澳岛、万山群岛、硇洲岛和雷州半岛等岛屿采集驻岛官兵、居民及啮齿动物血清,采用免疫荧光法检测抗体并进行血清学分型。结果687份人血清中抗恙虫病抗体阳性95份,阳性率13.83%,其中岛屿居民抗体阳性率为26.91%,军人为3.63%,差异有统计学意义(P<0.05)。检测508份鼠血清,抗恙虫病东方体抗体阳性率为57.87%,其中褐家鼠为有时鼠种。恙虫病东方体血清型以Karp株为主,占50.90%。结论广东省5岛屿均为恙虫病疫源地,恙虫病东方体血清型以Karp株为主。     

恙虫病东方体CMY株sta56基因片段序列分析

目的　了解恙虫病东方体 Ｃ Ｍ Ｙ 株与其它株的关系。方法　测定 Ｃ Ｍ Ｙ 株 ｓｔａ５６ 基因片段的核苷酸序列并与其它株相应序列进行比较。结果　在测定的３２４ｂｐ 序列中, Ｇ Ｃ 含量为４３５ ％ ; 与 Ｋａｒｐ 、 Ｇｉｌｌｉａｍ 、 Ｋａｔｏ 、ｋｕｒｏｋｉ、 Ｋａｗａｓａｋｉ 及 Ｓｈｉｍｏｋｏｓｈｉ 株相应序列的同源性分别为９１０ ％ 、８７３ ％ 、８７０ ％ 、８７３ ％ 、８６１ ％ 及７３８ ％ 。结论　 Ｃ Ｍ Ｙ 株与已报道的恙虫病东方体菌株不同, 与 Ｋａｒｐ 株有很高的同源性。     

Sequence analysis of Orientia tsutsugamushi DNA from mites collected in the Xisa archipelago,China

The genotype of Orientia tsutsugamushi DNA from mites in the Xisa archipelago of China were identified. A natural focus of tsutsugamushi disease in the archipelago was found. The DNA sequence that codes for the 56 kDa protein of O. tsutsugamushi was amplified by nested polymerase chain reaction (N-PCR). The purified positive products were cloned into a pGEM-T vector and sequenced. The DNA sequence was compared with various sequences on the internet for sequence homology. A 507 bp DNA fragment encoding the 56 kDa protein was amplified from the samples. The sequence homology was 85% (Karp strain), 68% (Gilliam strain), 65% (Kato strain), and 67% (Yonchon strain). Orientia tsutsugamushi is carried by the mites of the Xisa archipelago; the main genotype is the Karp strain.     

恙虫病东方体黑龙江分离株的PCR分型

目的　鉴定恙虫病东方体黑龙江分离株的基因型。方法　采用PCR技术对分离自黑龙江省密山地区的 6株恙虫病东方体sta5 6kD目的基因进行分析研究 ,并与国际参考株进行比较。结果　MSAa930 1株、MSAa930 3株、MSAa930 4株及MSAp930 5株属于Gilliam型 ;MSAa930 6株属于Karp型 ;MSAp930 2株属于Kato型。 结论　黑龙江密山地区恙虫病东方体存在Gilliam、Karp和Kato 3种型别。