Fas/FasL调控细胞凋亡途径与血液恶性肿瘤

Fas抗原(又称Fas受体、CD95或Apo-1)及其配基(FasL)分别隶属于肿瘤坏死因子(TNF)受体和TNF超家族成员。由Fas与FasL结合启动的凋亡信号传导是最终导致细胞凋亡和(或)细胞毒效应的重要途径。因此,对Fas/FasL途径的深入研究可为通过诱导细胞凋亡而治疗恶性肿瘤提供新的凋亡激发环节[1]。1　Fas/FasL途径的分子学特征Fas和FasL均主要以膜形式存在。Fas是富含胱氨酸的型跨膜糖蛋白,分子量约45Kd,不同程度地表达于各种组织细胞,其结构分为胞外、跨膜和胞内区。Fas胞外区与其配基特异性地以三聚体形式结合;胞内区为Fas传导凋亡信号所…     

Fas/FasL介导免疫细胞凋亡与肿瘤免疫逃逸

<正>通过Fas(Apo-1/Fas)受体和Fas配体(FasL)介导的细胞凋亡,被认为是机体保持自稳态的主要机制之一。肿瘤发生是机体自稳态破坏,细胞异常过度增生,逃避免疫监视的结果。近年研究发现,Fas/FasL与肿瘤发生、发展和预后有密切关系,根据对Fas/FasL介导细胞凋亡的认识,出现了一些关于肿瘤治疗的新思路。有关Fas/FasL与肿瘤的关系是近年研究的热点课题。现就Fas/FasL介导肿瘤免疫逃逸综述如下。     

Fas/FasL与肿瘤免疫

对Ｆａｓ ＦａｓＬ在肿瘤细胞中表达的研究 ,是探讨肿瘤发生和判断预后以及进行Ｆａｓ ＦａｓＬ途径治疗的重要基础。近年许多研究已经证实肿瘤细胞膜有Ｆａｓ和 (或 )ＦａｓＬ表达〔1、2〕 。过去认为ＦａｓＬ主要在激活的Ｔ细胞、自然杀伤细胞 (ＮＫ)和免疫特殊部位的组织如眼和睾丸中表达。在一些特殊组织如眼和睾丸中可防止致伤性免疫反应在其中发生 ,在对肿瘤细胞和其相应的免疫效应细胞间相互作用的研究中发现Ｆａｓ ＦａｓＬ存在于很多肿瘤的细胞膜表面 ,包括黑色素瘤、结肠癌、卵巢癌、食管癌、肺癌、脑神经胶质瘤、胃癌等〔3、4〕 …     

Fas／FasL诱导细胞凋亡

多细胞组织的内环境稳定性不仅受细胞增殖和分化调控，而且也受细胞衰亡的控制。细胞衰亡可分为两类：一类是坏死（necrosis），是由有害信号的极度刺激造成细胞损伤所引起的死亡，主要病理变化为核固缩、碎裂和溶解；另一类是凋亡（apoptosis），是由有害信号的温和刺激及某些生理刺激引起的细胞程序性死亡（Programmedcelldeath）。无论刺激信号是生理性的还是病理性的，任何诱导细胞自杀程序基因表达而致的细胞死亡均属凋亡。细胞凋亡的特征性形态改变有细胞团缩、染色质凝集及凋亡小体出现等。在细胞凋亡调控机制研究中，已证明某些原…     

Fas/FasL系统与肿瘤免疫逃逸

本世纪50～60年代,Ｂｕｒｎｅｔ和Ｔｈｏｍａｓ提出免疫监视(ｉｍｍｕｎｏｓｕｒｖｅｌｌａｎｃｅ)学说,认为机体免疫系统可以通过细胞免疫机制杀灭肿瘤细胞。此后,许多资料支持并丰富了这一学说。目前认为,Ｔ细胞、Ｂ细胞、ＮＫ细胞、巨噬细胞和多种细胞因子参与肿瘤杀伤过程。机体有一系列的免疫监视机制,但肿瘤仍能发生和持续发展,原因是肿瘤细胞存在多种免疫逃逸机制。近年研究显示,与凋亡有关的Ｆａｓ/ＦａｓＬ系统在免疫逃逸中有重要作用。本文就此方面研究进展作一综述。yh1　Ｆａｓ和ＦａｓＬＦａｓ和ＦａｓＬ相互作用是细胞凋亡的…     

蛇麻酮通过Fas/FasL途径诱导人肝癌HepG2细胞凋亡机制研究

目的 探讨啤酒花 Humulus lupulus 中成分蛇麻酮 (lupulone, LP) 通过 Fas/FasL 途径诱导 HepG2 凋亡的机制。方法 体外培养人肝癌细胞株 HepG2 4、8、16 μg/mL 剂量的蛇麻酮作用 HepG2 细胞 24 h 后,采用活性检测试剂盒检测 caspase-8 相对活性,采用 Western blotting 技术检测 Fas、FasL、Caspase-3 蛋白表达情况。结果 LP 能显著提高 HepG2 细胞内 caspase-8 活性水平,并且具有剂量依赖性,其中 8、16 μg/mL LP 组与对照组比较有显著性差异 (P＜0.05)。此外,LP 能够上调 HepG2 细胞的 Fas/FasL 及 Caspase-3 蛋白表达水平,并且均具有剂量依赖性,其中 4 μg/mL 组与对照组比较均有显著性差异 (P＜0.05),8、16 μg/mL 组与对照组比较均有非常显著性差异 (P＜0.01)。结论 蛇麻酮可以通过激活 Fas/FasL,启动死亡受体途径诱导 HepG2 细胞凋亡。     

抗Fas核酶抑制小鼠T细胞凋亡

目的 研究抗Fas核酶对小鼠原代T细胞凋亡的抑制作用，探索增强T细胞抗凋亡能力的新途径。方法 设计并合成针对小鼠Fas基因的锤头状核酶，通过电穿孔转染法将其导入小鼠脾脏T细胞，通过RT-PCR、Westernblot检测细胞上Fas的表达，细胞经抗Fas的抗体(JO2)作用后。通过Caspase-3活性检测试剂盒测转染前后细胞Cagpase-3活性的变化。MTT法测细胞的增殖，Annexm-V凋亡检测试剂盒测细胞凋亡。结果 ①与对照组、空载体和突变核酶转染组相比，细胞表面的Fas水平明显降低；②与抗Fas的抗体9呼育后，与转染空载体和突变核酶的细胞相比，转染核酶的细胞Caspase-3活性明显降低；③经抗Fas抗体处理后，细胞的增殖活性明显增高；④与空载体和突变核酶转染组相比，转染核酶的细胞凋亡率明显降低。结论 小鼠活化T细胞上高表达Fas，抗Fas核酶能显著降低其Fas水平，使细胞免于Fas途径的凋亡，从而增强其抗凋亡能力。     

细胞凋亡相关基因Fas和FasL在大鼠苯巴比妥促肝癌过程中的表达研究

肿瘤发生是机体自稳态破坏,细胞异常过度增生,逃避免疫监视的结果。通过Fas(Apo-1)受体和Fas配体(FasL)介导的细胞凋亡,被认为是机体保持自稳态的重要机制之一。近年来的研究发现,Fas/FasL系统与肝癌的发生、发展和预后有密切关系。本实验研究了Fas及FasL在实验性大鼠肝癌促癌过程中的表达及作用。     

体外联合培养条件下小鼠睾丸足细胞诱导成熟T淋巴细胞凋亡

目的 :探讨体外联合培养条件下睾丸足细胞能否诱导 T淋巴细胞凋亡。方法 :用 TU NEL 标记、核酸电泳、电镜、流式细胞术检测对照组 (T淋巴细胞 )、A组 (T淋巴细胞 +培养睾丸足细胞 2 4h培养基上清 )、B组 (T淋巴细胞 +睾丸足细胞 )等 3组中小鼠成熟 T淋巴细胞的凋亡及其数量的变化。结果 :3组 T淋巴细胞在电镜下均可见细胞染色质浓集 ,核固缩裂解 ,凋亡小体形成 ;TUNEL 标记见部分细胞核染色呈深蓝色 ;核酸电泳出现典型 DNA梯状带 ;流式细胞术检测 A,B两组 T淋巴细胞凋亡量均明显高于对照组 (P<0 .0 1) ,B组 T淋巴细胞凋亡数量显著高于 A组 (P<0 .0 1)。 结论 :体外培养条件下小鼠睾丸足细胞能够诱导成熟 T淋巴细胞凋亡。     

Apoptosis of matured T lymphocytes induced by mouse sertoli cells in cocultures in vitro

Objective: To study whether mouse sertoli cells can induce the apoptosis of matured T lymphocytes in cocultures in vitro. Methods: With TUNEL, DNA electrophoresis, eleetro-mierography and flow cytometry, we examined the apoptosis and its rates of mouse matured T lymphocytes in control group (T lymphocytes only), group A (T lymphocytes culture medium of sertoli cells), group B (T lymphocytes sertoli cells). Results: Under electro-micrography, chromatin condensation, karyopyknosis, karyorhexis and apoptotic body were observed in some T lymphocytes in 3 groups; some nucleuses were stained dark blue with TUNEL; a typical DNA ladder was found with DNA electrophoresis. The apoptotic rates of T lymphocytes in group A and B were significantly higher than that in control group (P＜0.01). The apoptotic rate of T lymphocytes in group B was significantly higher than that in group A (P＜0.01). Conclusion: In coculture condition in vitro,mouse sertoli cells can induce the apoptosis of matured T lymphocytes.     

Fas/FasL系统在人子宫内膜增生过长和子宫内膜癌中的表达

目的：探讨Fas和Fas配体（FasL）在人子宫内膜增生过长和子宫内膜癌发病中的作用．方法：采用免疫组化链霉菌抗生物素蛋白过氧化物酶染色法（SP法）检测加例子宫内膜增生过长的异位内膜与18例子宫内膜癌内膜中Fas和FasL蛋白的表达;采用原位杂交方法检测FasLmRNA水平．设正常子宫内膜25例为对照组．结果：Fas蛋白在正常子宫内膜的阳性表达率为68％,在子宫内膜增生过长与子宫内膜癌组的阳性表达率分别为58％和22％,差异具有统计学意义（P〈0．05）．FasL蛋白在子宫内膜增生过长与子宫内膜癌组中的阳性表达率分别为68％和94％,明显高于对照组32％,差异具有统计学意义（P〈0．05）．FasLmRNA的表达强度在子宫内膜增生过长与子宫内膜癌组亦明显高于对照组,差异具有统计学意义（P〈0．05）．结论：Fas与FasL蛋白表达失调,可能是子宫内膜增生过长的发病机制之一,对子宫内膜癌组织逃避免疫系统监视具有重要作用．     

Selective depletion of the allo-antigen specific T cells by Fas/FasL pathway by cytokine IFN-γ and IL-2

Summary To investigate the value of apoptosis of the allo-antigen specific T cells induced by Fas/FasL pathway in preventing graft-versus-host disease (GVHD), the CD34⁺ cells transfected with FasL or not, used as stimulus cells, were mixed with allo-antigen specific T lymphocytes in presence or absence of IFN-γ and IL-2. After 5 days, apoptosis of T cells was detected by TdT nick end mediated dUTP labeling (TUNEL) and flow cytometry (FCM). The affects of these two cytokines on CD34⁺ cells in the graft were also compared. The ratio of apoptosis of T cells was 12.1±1.5% when CD34⁺ cells transfected with FasL was used as stimulus cells, much higher than that of CD34⁺ cells non-transfected (3.2±1.1%,P<0.01). And in presence of IFN-γ or IL-2, the ratio reached 20.1±2.3%, 17.6±1.3% respectively (P<0.01). However, IFN-γ up-regulated Fas expression of CD34⁺ cells and increased the sensibility of CD34⁺ cells to soluble FasL(sFasL); IL-2 showed no such affect. It is possible to induce apoptosis of the allo-antigen specific T cells of grafts activated by allo-antigen by exogenous Fas ligand expressed on recipient cells and this might provide a new approach for preventing GVHD and IL-2 may be more suitable for clinical application. XIAO Juan, female, born in 1974, MD This project was supported by the grant from National Natural Science Foundation of China (No. 39770767).     

The effect of the Fas/FasL pathway during chemotherapeutic drug-induced apoptosis of leukameic cells

Chemotherapeutic drugskill tumor cellsnotonlyby direct acting on their respective targets,but alsoespecially by inducing cells apoptosis.The mecha-nism of chemotherapeutic drug- induced apoptosis re-mains to be fully elucidated.The Fas/Fas L pathwayis one of the essential ones for receptor/ligand sys-tems- mediated apoptosis.Recently several reportshave demonstrated thata variety of human leukaemiccell lines expressed Fas antigen and showed sensitivi-ty to apoptosis induced by Fas/Fas L pat…     

大鼠肝脏癌前病变肝细胞凋亡及Fas/FasL的表达

目的探讨肝脏癌前病变过程中肝细胞凋亡的变化及Fas和FasL的表达,以期为肝脏疾病防治提供实验依据。方法将大鼠随机分为对照组和模型组,模型组采用腹腔注射二乙基亚硝胺(DEN)制备大鼠肝脏癌前病变模型,生化检查血清谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)、γ-谷氨酰转肽酶(γ-GT)、α-L-岩藻糖苷酶(AFU)、甲胎蛋白(AFP)和癌胚抗原(CEA)。光镜下观察肝脏组织病理学改变;使用DNA电泳法检测肝细胞的凋亡情况;应用免疫组织化学法检测Fas和FasL的表达与分布。结果对照组大鼠光镜下肝组织结构正常,模型组大鼠肝细胞肿胀,肝小叶内可见灶性坏死伴炎性细胞浸润,同时逐渐出现纤维组织增生及肝细胞再生。模型组1～8周和9～12周大鼠血清ALT、AST、γ-GT和AFU活性均高于对照组,差别有统计学意义(P<0.01);模型组9～12周大鼠血清ALT、AST、γ-GT和AFU活性高于1～8周,差别有统计学意义(P<0.05),2组AFP和CEA均正常。对照组无细胞凋亡,模型组大鼠肝脏细胞呈明显的DNA梯状条带。对照组大鼠肝组织中未见Fas和FasL表达,模型组Fas和FasL主要表达在肝脏细胞胞浆。结论大鼠肝脏癌前病变时,肝细胞凋亡增加可能与凋亡相关基因Fas和FasL表达增加有关。肝脏癌前病变大鼠肝细胞凋亡增加,可能是肝损伤加重的原因。     

问号钩端螺旋体诱导J774A.1细胞FasL/Fas表达上调及FasL/Fas相关细胞凋亡的研究

目的：了解FasL／Fas途径参与问号钩端螺旋体（简称钩体）诱导细胞凋亡及其FasL／Fas表达水平变化。方法：建立问号钩体黄疸出血群赖型56601株感染小鼠单核一巨噬细胞J774A．1模型。采用DAPI染色法观察问号钩体56601株感染细胞凋亡的形态学特征，流式细胞术定量检测感染细胞的凋亡率及FasL中和抗体对细胞凋亡的阻断作用。PE标记抗小鼠FasL或Fas单克隆抗体染色法，观察问号钩体56601株感染细胞FasL／Fas表达情况。采用流式细胞术定量检测感染细胞的FasL／Fas表达水平。结果：问号钩体56601株感染J774A．1细胞4h时，部分细胞出现染色质浓缩及边缘化现象；感染24h时上述病变现象更加明显且有部分细胞核裂解。问号钩体56601株感染J774A．1细胞4h和24h的凋亡率分别为53．6％和64．31％。FasL中和抗体预处理细胞后，问号钩体56601株感染细胞4h或24h的凋亡率分别为10．27％和15．90％。J774A．1细胞被问号钩体56601株感染后4和24h，FasL表达率分别从感染前的4．19％上升至21．69％和65．70％，Fas表达率分别从感染前的12．88％上升至91．96％和88．01％。结论：诱导细胞凋亡是问号钩体56601株损伤J774A．1细胞的重要机制。问号钩体可上调靶细胞FasI。／Fas表达水平；并通过FasL／Fas途径诱导J774A．1细胞凋亡。     

肝细胞癌患者血清可溶性Fas水平检测及其意义

目的:探讨肝细胞癌(HCC)息者血清可溶性Fas(sFas)受体与肝细胞癌之间的关系.方法:用双抗夹心ELISA法,检测45例HCC、30例肝硬化(LC)患者血清sFas水平.结果:HCC血清sFas浓度为16.5±3.1ng/L,明显高于LC 8.4±2.5 ng/L和正常对照组3.1±1.1ng/L(P＜0.01).结论:肝细胞癌患者血清中高水平的sFas受体,竞争性地与Fas受体的天然配体FasL(Fas Ligand)结合而抑制肝癌细胞凋亡,这可能是肝癌细胞逃避机体免疫监视得以生存和转移的重要机制之一.     

Selective Depletion of the Allo-Antigen Specific T Cells by Fas/FasL Pathway by Cytokine IFN-γ and IL-2

Severegraft versus hostdisease (GVHD)isthemajorcauseoffailureofallogeneichematopoieticstemcelltransplantation (allo HSCT) .Thedonormatu rateTlymphocytesareactivatedwhentheyrecognizeallo histocompatibilityantigenofrecipients ,anddi rectlyswitchongraft versus hostreactionandcausetargettissueinjury[1] .DepletionofTcellsingraftorinhibitionoftheirfunctioncoulddeceleratetheoccur renceanddevelopmentofGVHD[2 ] .However ,Tcellsareabletoresistinfection ,killtumorcellsandsecretecytokinessuchasIL 3…     

乳腺癌和乳腺不典型增生中细胞凋亡与Fas抗原的表达

[目的 ]探讨细胞凋亡与Fas抗原在乳腺癌发生中的作用 .[方法 ]应用免疫组织化学和DNA末端标记技术 ,原位观察了 2 9例乳腺癌 ,19例乳腺不典型增生中细胞凋亡与Fas抗原的表达 .[结果 ]乳腺不典型增生中细胞凋亡指数显著高于乳腺癌和正常组织 ;乳腺癌中细胞凋亡指数高于正常组织 .Fas抗原在乳腺癌、乳腺不典型增生中的阳性率分别为 4 1% ,53% .Fas抗原阳性组细胞凋亡指数高于阴性组 .[结论 ]细胞凋亡与Fas抗原表达异常在乳腺癌发生中起重要的作用 ,而且Fas抗原参与并引起细胞凋亡 .