金雀异黄素衍生物的合成及潜在的雌激素受体调节活性

以金雀异黄素为母体,取代氨基烷氧基为侧链,设计、合成了20个金雀异黄素衍生物,其中16个未见文献报道,并检测了其对雌激素受体阳性的人乳腺癌细胞株MCF-7的体外活性,以研究其潜在的雌激素受体调节活性.结果表明,化合物4a、4b、4d、4e及4f对MCF-7细胞的增殖有显著的抑制作用,48 h和72 h的抑制率均大于40...     

应用基因芯片技术检测金雀异黄素对乳腺癌T47D细胞雌激素受体相关信号通路基因表达的影响

目的 采用乳腺癌和雌激素受体信号通路DNA oligo microarray功能基因芯片技术,观察金雀异黄素(genistein)对雌激素依赖性乳腺癌细胞T47D乳腺癌相关的基因表达及雌激素受体依赖性信号转导通路的影响.方法 0.001 μmol/L雌二醇、10 μmol/L金雀异黄素分别处理T47D细胞48 h,收集细胞并提取总mRNA,通过逆转录反应将mRNA标记,并与Oligo GEArray芯片杂交,芯片经计算机扫描图像采集得出差异表达基因.结果 细胞周期蛋白(cyclin)基因Cyclin E1,CyclinE2与Cyclin A2表达均显著上调;ERα基因,雌激素诱导的相关基因PGR,TFF1/pS2,BCL2,ERBB2,C3,CCND1,TEF3,IGFBP2,IGFBP5,GATA3等也分别不同程度的上调,并采用实时荧光定量RT-PCR检测金雀异黄素可诱导pS2 mRNA表达.结论 金雀异黄素激活人乳腺癌T47D细胞ERα受体表达,通过周期蛋白过表达而调节细胞周期蛋白依赖性激酶(CDK)的活性,加速S期进程,促进细胞的增殖,并且雌激素诱导基因的上调显示了金雀异黄素的植物雌激素作用.     

金雀异黄素对大鼠骨代谢的影响

目的 探讨金雀异黄素对大鼠骨代谢的影响。方法 取SD大鼠32只，随机分成4组，灌胃给药4周，测体重、血清碱性磷酸酶（AKP）、抗酒石酸酸性磷酸酶（ACP）活性和骨钙素（BGP）、雌二醇（E2）水平。结果 金雀异黄素40mg／kg可以增加大鼠体重、AKP活性和骨钙素水平；金雀异黄素20、30mg／kg对大鼠体重及AKP、ACP活性无明显影响。结论 金雀异黄素对骨代谢有一定的调节作用。     

金雀异黄素通过雌激素受体β增加人成骨细胞护骨素与破骨细胞分化因子表达比值

目的 探讨植物雌激素——金雀异黄素（genistein）对人成骨细胞（HOB）作用的分子机制。方法 采用细胞培养结合Western blot方法，观察不同浓度金雀异黄素对HOB细胞的护骨素（OPG）、破骨细胞分化因子（RANKL）、雌激素受体（ER-α，ER-β）蛋白质的影响。结果 ①中、大剂量金雀异黄素明显上调HOB细胞OPG蛋白质的表达、下调RANKL蛋白质的表达；雌激素受体拮抗剂ICI 182．780（10^-8mol／L）拮抗金雀异黄素（10^-8mol／L）的上述作用。②大剂量金雀异黄素刺激HOB细胞ER-β蛋白质的表达；各组ER-α蛋白质的表达量与对照组比较，差异无显著性意义（均P〉0．05）。③OPG／RANKL比值与金雀异黄素剂量成正相关关系（r=0．694，P〈0．05）。结论 金雀异黄素通过ER-β上调HOB细胞OPG表达、下调RANKL表达，该雌激素样效应可能是其抗骨质疏松作用的分子机制之一。     

金雀异黄素对过氧化氢作用的人晶状体上皮细胞氧化损伤的影响

研究表明老年性白内障的发生与氧化损伤有密切关系,晶状体中超氧化物歧化酶( superoxide dismutase,SOD)、过氧化氢酶(catalase,CAT)、谷胱甘肽(glutathione,GSH)等抗氧化物的活性(含量)下降可致晶状体抗氧化能力降低,导致白内障发生[1-2].研究表明,雌激素能够减轻晶状体氧化损伤程度,在白内障的发生发展过程中起一定的防护作用[3-4].但是,长期使用雌激素替代疗法(hormone replacement therapy,HRT)有引起子宫内膜癌、乳腺癌和阴道出血的风险,因此HRT常常由于不良反应较多而使其应用受到限制.近年的实验研究表明,富含植物雌激素的植物,如大豆等具有类雌激素样活性,可以替代雌激素并防止雌激素不良反应的发生.     

金雀异黄素对成骨细胞增殖和分化的影响

目的 观察金雀异黄素对正常妇女成骨细胞增殖和分化的影响.方法 采用四甲基偶氮唑蓝法,检测应用不同浓度金雀异黄素刺激成骨细胞增殖的情况,半定量RT-PCR及免疫组化法测定c-fos、c-jun基因及蛋白表达.结果 以浓度为0 mol/L的金雀异黄素为对照,10-10、10-8、10-6mol/L金雀异黄素增加人成骨细胞增殖达9.6%、14.4%、23.0%;金雀异黄素促进成骨细胞c-fos、c-jun基因及其蛋白的表达,表达呈剂量依赖性.结论 金雀异黄素可刺激成骨细胞增殖,增加c-fos、c-jun基因及其蛋白的表达.     

金雀异黄素对心血管保护作用的研究进展

金雀异黄素是植物性雌激素的代表物,其结构与雌二醇相似,具有弱雌激素作用.目前研究表明金雀异黄素具有抗动脉粥样硬化、抑制血小板激活和聚集、降低血压的作用,它在女性心血管疾病的一级和二级预防中具有比较明确的作用.文章综述了近年来有关金雀异黄素对心血管保护作用的研究进展.     

金雀异黄素对人乳癌细胞MCF-7增殖和凋亡的影响

目的：采用离体细胞培养的方法，研究大豆异黄酮的主要成分金雀异黄素(GEN)对人乳腺癌MCF-7细胞的增殖抑制作用及其作用机理。方法：MCF-7细胞接受不同浓度的GEN处理，MTT比色法测定GEN抑制MCF-7细胞的量效关系；细胞分裂指数试验用于评价GEN对该细胞的恶性增殖的抑制作用；细胞形态学观察及原位细胞凋亡检测法(TUNEL)用于检测细胞凋亡。结果：GEN的IC30与IC50分别为17．5μmol／L及32．0μmol／L，GEN对MCF-7具有明显的抑制作用，且该抑制作用呈剂量反应关系；各剂量GEN均可抑制MCF-7细胞分裂并且呈剂效关系；细胞形态学观察及TUNEL检测发现GEN处理48h及96h后有明显的凋亡细胞出现，并呈现剂效关系，而本次实验未发现其时效关系。结论：GEN可抑制离体培养MCF-7细胞的增殖，其作用机理可能与GEN诱导细胞凋亡的途径有关。     

金雀异黄素对糖尿病大鼠肾脏AGEs和氧化应激的影响

目的 探讨糖基化产物(AGEs)、氧化应激与糖尿病肾病(DN)的关系和金雀异黄素(Gen)改善肾功能的保护机制. 方法 采用腹腔注射链脲佐菌素建立糖尿病大鼠模型,观察Gen对糖尿病大鼠血糖、肾功能、AGEs、超氧化物歧化酶(SOD) 等的影响.结果 实验8周后,糖尿病大鼠空腹血糖、尿蛋白、血肌酐、尿素氮及AGEs、丙二醛(MDA)含量明显增高,而体重、肌酐清除率、肾组织SOD活力显著下降;Gen能降低糖尿病大鼠的血糖、尿蛋白、血肌酐、尿素氮、MDA、AGEs含量,增加糖尿病大鼠的肌酐清除率、 SOD、总抗氧化能力. 结论 AGEs增多和氧化应激增强与DN的发生密切相关,Gen能降低糖尿病大鼠的血糖水平、抑制肾脏的氧化应激、阻碍糖基化反应,减轻或延缓DN的发生.     

金雀异黄素对肾癌细胞系GRC-1细胞生物学行为的影响

目的：观察酪氨酸蛋白激酶抑制剂金雀异黄素（genistein)对GRC－1细胞的体外生物学行为的影响，探讨蛋白酪氨酸激酶（PTK）抑制效应用于肿瘤治疗的可能。方法：将细胞用金雀异黄素处理后，分别用MTT法、激光共聚焦显微镜、电子显微镜观察金雀异黄素对肿瘤细胞的体外生物学行为的影响。结果：金雀异黄素可显著抑制GRC－1细胞的增殖，使肿瘤细胞增殖停滞在G1期和G2期，并明显改变细胞的外在形态和细胞内波形蛋白的排列方式。结论：酪氨酸蛋白激酶抑制剂genisein可抑制肾肿瘤细胞的增殖（P＜0．01），并改变其细胞骨架的排布方式。酪氨酸激酶抑制剂有望开发成为有效的抗恶性肾肿瘤的药物。     

金雀异黄素抗癌作用分子机制研究进展

金雀异黄素又称5、7、4＇-三羟异黄酮或染料木素,是大豆异黄酮的主要活性成分,为一种天然的植物雌激素.体内体外实验及流行病学均显示,金雀异黄素对多种肿瘤均有抑制作用,如乳腺癌、前列腺癌、肾癌、胃癌、结直肠癌、膀胱癌、肺癌、子宫癌、皮肤癌、白血病、淋巴瘤、神经母细胞瘤以及头颈癌等.     

金雀异黄素对高糖培养下大鼠系膜细胞增殖及凋亡的影响

目的:探讨金雀异黄素对体外高糖条件下大鼠系膜细胞(MC)增殖及凋亡的影响.方法:对照组:低糖DMEM培养液(不含金雀异黄素),实验组:高糖DMEM培养液(含0,1,5,10,30,50 μmol/L金雀异黄素),各组分别培养12,24,36,48 h.氮蓝四唑盐(MTT)法检测MC的增殖情况,DNA琼脂糖电泳、末端转移酶介导的dUTP缺口末端标记(TUNEL)法、流式细胞术3种方法检测细胞凋亡情况.结果:10,30,50μmol/L金雀异黄素作用24 h可明显诱导细胞凋亡(P＜0.05),而0,1,5 μmol/L作用不显著.随着金雀异黄素浓度的增加,凋亡比例增加;同一浓度的金雀异黄素随着作用时间的延长,凋亡比例亦增加.结论:一定浓度的金雀异黄素在体外高糖培养条件下,可抑制大鼠MC增殖,促进其凋亡,且与其浓度和作用时间有关.     

金雀异黄素对缺氧诱导的人ARPE-19细胞VEGF表达的抑制作用

目的:研究长期缺氧对体外培养的人ARPE鄄19细胞血管内皮生长因子(VEGF)表达的诱导作用,以及金雀异黄素(genistein,Gen)对其表达的影响初步研究。方法:使用半定量RT鄄PCR和酶联免疫吸附试验(ELISA)检测ARPE鄄19细胞中VEGFmRNA和蛋白的表达,分析不同浓度Gen以及PD98059、TyrphostinA25对ARPE鄄19细胞缺氧24h诱导的VEGF表达的影响。结果:①正常对照组有少量VEGF表达,缺氧24h可明显提高ARPE鄄19细胞VEGFmRNA和蛋白的表达,分别为9.566±1.528和2.636±0.499倍;②Gen可明显抑制缺氧诱导ARPE鄄19细胞中VEGFmRNA和蛋白的表达,且呈浓度依赖性(P<0.05);③PD98059、TyrphostinA25也可抑制低氧诱导的VEGF的产生,但抑制作用没有Gen(200μmol/L组)明显。结论:Gen可抑制长期缺氧诱导的ARPE鄄19细胞VEGF表达,并可能是通过抑制p42/p44MAPK途径和HIF鄄1途径共同抑制VEGF的产生,提示Gen对视网膜新生血管的形成具有预防和潜在的临床治疗价值。     

金雀异黄素对血管平滑肌细胞中活性氧生成的影响

目的: 探讨金雀异黄素对氧化型低密度脂蛋白(oxidized low density lipoprotein, ox-LDL)诱导的血管平滑肌细胞中活性氧(reactive oxygen species, ROS)生成的影响. 方法: 以体外培养的人脐静脉平滑肌细胞(human umbilical vein smooth muscle cell, hUVSMC)为对象,用50 mg/L的ox-LDL作用细胞2 h,并加入不同浓度金雀异黄素(10, 30, 90 μmol/L)对其进行干预,应用流式细胞技术和荧光分光光度法分别检测细胞内总ROS水平.结果: hUVSMC经ox-LDL刺激2 h后,细胞内ROS水平明显升高(P<0.01);金雀异黄素(10 μmol/L)降低ox-LDL诱导的细胞内ROS的增加;金雀异黄素(30, 90 μmol/L)则进一步提高细胞内ROS水平.结论: 金雀异黄素(10 μmol/L)可清除细胞内ROS,而金雀异黄素(30, 90 μmol/L)则增加细胞内ROS的生成.     

异黄酮类植物雌激素通过雌激素受体对靶基因的转录调节作用

目的:观察异黄酮类植物雌激素染料木素和大豆苷元通过雌激素受体(estrogen receptor,ER)对靶基因的转录调节作用。方法:采用磷酸钙瞬时转染的方法,利用转染雌激素受体表达质粒的Hela细胞,观察染料木素和大豆苷元对雌激素反应元件(estrogen response element,ERE)报告基因的转录激活作用;此外还观察ER拮抗剂ICI 182780对这两种植物雌激素转录激活作用的影响。结果:染料木素和大豆苷元均可通过ER的两种亚型ERα和ERβ激活ERE报告基因的转录,且这种转录激活作用能被ICI 182780所阻断。结论:染料木素和大豆苷元均能产生类雌激素样作用,通过ERα和ERβ激活ER靶基因的转录。     

金雀异黄素对人乳腺癌细胞体外增殖作用机制的研究

目的研究金雀异黄素（Genistein,Gen）对人乳腺癌细胞株MCF-7凋亡的影响及凋亡相关基因表达的调控。方法选用人乳腺癌细胞株MCF-7体外培养,MTT法检测Gen对乳腺癌生长活力的影响,流式细胞仪检测细胞周期及凋亡率,Giemsa染色观察细胞形态学改变,免疫组化检测凋亡相关基因Bax和癌基因erbB-2蛋白表达水平的改变。结果金雀异黄素对MCF-7细胞体外生长具有明显的抑制作用。Giemsa染色显示,金雀异黄素处理的MCF-7细胞呈明显的凋亡形态改变,细胞固缩、发泡,染色质凝集呈块状,并沿核周分布。流式细胞仪检测在G。峰前可见凋亡峰,且随用药时间的延长,凋亡比率递增。蛋白水平检测表明金雀异黄素促进MCF-7细胞Bax表达升高,抑制erbB-2蛋白的表达。结论金雀异黄素通过诱导细胞凋亡或阻滞细胞于Gz～M期,从而抑制乳腺癌细胞的体外增殖,并主要是通过调节Bax和erbB-2蛋白的表达实现的。     

金雀异黄素对氧化损伤的人晶状体上皮细胞凋亡的防护作用

目的：探讨金雀异黄素（Gen）对氧化损伤的人晶状体上皮细胞（HLEC）凋亡有无抑制作用。方法：本研究在终浓度3×10^-4mol/L H2O2培养液中复制HLEC凋亡模型,并以雌二醇（E2）作为阳性对照,采用流式细胞仪（FCM）检测HLEC凋亡率和线粒体膜电位（ΔΨM）的变化。结果：FCM结果显示：H2O2组HLEC凋亡率显著高于空白对照组;E2和Gen组凋亡率均低于H2O2组（P〈0.01）。H2O2组线粒体膜电位比对照组显著下降;E2组和Gen组的线粒体膜电位均比H2O2组升高（P〈0.01）。结论：Gen可减轻实验性氧化损伤的HLEC凋亡程度。     

金雀异黄素对人肝癌SMMC-7721细胞生长抑制和凋亡的影响

目的：探讨金雀异黄素（Gen）对人肝癌SMMC-7721细胞生长的抑制作用及凋亡调控的影响,明确Gen抗肿瘤的可能机制。方法： SMMC-7721细胞按Gen浓度分为5、10和20 mg·L^-13个处理组和对照组（未加Gen）,给药24和48 h后,透射电镜观察细胞超微结构变化,MTT法检测细胞增殖抑制率,流式细胞仪（FCM）分析细胞时相,免疫组化法检测细胞内Caspases-3蛋白的表达水平。结果：Gen处理组细胞核内异染色质呈块状凝集,胞质内线粒体肿胀空化,随着Gen浓度增加,细胞核呈固缩状,核内异染色质趋边凝集,细胞质空化明显,对照组无改变;MTT法检测显示,随着Gen浓度增加,作用时间从24到48 h的延长,SMMC-7721细胞增殖抑制率升高,呈时间和剂量依赖性（P<0.01）。流式细胞术显示,随着Gen浓度增加,停滞在G₂/M期细胞数增加（P<0.01）,S期细胞减少（P<0.01）,G₀G₁期细胞减少（P<0.01）。免疫组化结果显示,随着Gen浓度增加,Caspases-3蛋白表达增强,呈剂量依赖性（P<0.01）。结论：Gen对人肝癌SMMC-7721细胞的生长具有明显抑制作用,上调Caspases-3蛋白表达和诱导细胞凋亡可能是其作用机制之一。     

金雀异黄素抑制大鼠膀胱肿瘤作用的实验研究

目的探讨金雀异黄素对N-甲基亚硝基脲(MNU)诱导的SD大鼠膀胱肿瘤的抑制作用。方法将60只大鼠随机分成3组,用MNU诱导成膀胱肿瘤,实验1组和实验2组分别经腹腔注射金雀异黄素0.5、1.0mg/kg,每两日1次;对照组用同样的方式注射生理盐水。利用统计方法和病理分级来分析金雀异黄素对MNU诱导的SD大鼠膀胱肿瘤的抑制作用。结果实验1组和实验2组与对照组比较,在体质量减少值、肿瘤个数、抑瘤率等方面,差异有统计学意义(P<0.05);实验1组和实验2组的癌变率相比,差异有统计学意义(P<0.05)。结论金雀异黄素对大鼠膀胱肿瘤有抑制作用,剂量越大,对肿瘤癌变抑制作用越强。     

金雀异黄素对雌性小鼠卵母细胞成熟及其受精能力的影响

目的:探讨金雀异黄素(Gen)对小鼠卵母细胞成熟的影响.方法:用不同浓度的Gen给小鼠腹腔注射后,检测Gen对卵母细胞生发泡破裂(GVBD)、第一极体(PB1)释放、体外受精和胚胎发育等的影响;用含不同浓度的Gen的培养液培养小鼠未成熟卵母细胞,观察卵母细胞GVBD、PB1释放的发生率;结果:腹腔注射Gen可以增加小鼠子宫湿重,增加小鼠的超排卵数(除高剂量组外)、影响卵母细胞体内成熟过程中的GVBD和第一极体的释放(Gen-0.5组除外),高剂量组小鼠成熟卵母细胞的受精能力和胚胎发育能力均下降.Gen以剂量依赖的方式抑制体外培养小鼠未成熟卵母细胞的GVBD和PB1的释放.结论:Gen能够可逆性地抑制小鼠未成熟卵母细胞的成熟,高剂量的Gen可能影响卵母细胞减数分裂过程,降低卵母细胞的受精能力,提示育龄妇女摄人过量Gen及其化合物可能会导致生育能力降低,甚至造成不育或不孕.