缺血预处理对大鼠移植小肠基因表达谱的影响

目的:研究缺血预处理(IPC)后大鼠移植小肠基因表达谱的变化，探讨IPC保护移植物的机制。方法:大鼠随机分为假手术组（S组）、小肠移植组（SBT组）和缺血预处理后小肠移植组（ISBT组）。移植肠冷保存/再灌注1 h后，抽提各组小肠总RNA并纯化mRNA;逆转录合成cDNA荧光探针，与cDNA芯片杂交。洗片后扫描芯片荧光信号图像，将SBT组和S组杂交结果与ISBT组和S组杂交结果行生物信息学分析。结果:在4 096条基因中，正常小肠与ISBT组差异表达基因共有297条，已报道有GeneBank（基因库）登录号的基因84条。其中表达下调的基因共18条，表达上调基因共66条，这些差异表达基因与IPC保护效应有关。结论:IPC通过调节细胞黏附相关基因、细胞能量和物质代谢相关基因及细胞信号转导相关基因的表达，发挥移植物细胞保护效应。     

供体小肠缺血再灌注损伤中bcl-2基因mRNA表达水平的研究

目的探讨bcl-2基因对供体小肠缺血再灌注损伤的调控作用及机制。方法以大鼠模型模拟供体小肠热、冷缺血及再灌注损伤过程,采用逆转录-定量聚合酶链式反应（RT－Q－PCR）技术检测bcl-2基因mRNA转录水平。结果bcl-2基因mRNA转录水平在热缺血再灌注各组中无明显差异;冷缺血再灌注后24小时bcl-2基因mRNA转录水平明显降低。结论RT－Q－PCR是一种灵敏、准确、快速的检测mRNA转录水平的方法。热缺血再灌注损伤不引起bcl-2基因mRNA转录水平的改变;冷缺血再灌注24小时bcl-2基因mRNA转录水平明显降低并可促进细胞凋亡的发生。     

缺血预处理对大鼠移植小肠细胞外基质的保护作用

目的　研究缺血预处理 (IP )对大鼠移植小肠细胞外基质的早期保护作用。方法　SD大鼠随机分为假手术组 (S组 ,n =6) ,小肠移植组 (SBT组 ,n =12 ) ,缺血预处理加小肠移植组 (IPSBT ,n =12 )。建立大鼠异位节段小肠移植模型。各组移植肠冷保存 /再灌注 1h取材。检测层粘连蛋白(LN)的表达。电镜观察小肠上皮细胞基底膜结构的变化。结果　S组、SBT组和IPSBT组LN表达灰度值分别为 3 9.5 2± 2 .60 ,13 .5 3± 0 .44和 2 5 .40± 1.79,SBT组明显低于S组 (P <0 .0 5 ) ,而IPSBT组明显高于SBT组 (P <0 .0 5 )。电镜显示 ,S组小肠上皮基底膜呈线性均匀连续完整的结构 ;SBT组上皮基底膜断裂、甚至缺失 ;IPSBT组上皮基底膜破坏程度比SBT组为轻。结论　移植小肠细胞外基质是冷保存 /再灌注损伤靶点 ;IP对细胞外基质冷保存 /再灌注损伤有明显的保护作用。     

缺血预处理对大鼠移植小肠细胞外基质的保护作用

目的:研究缺血预处理（IP）对大鼠移植小肠细胞外基质的早期保护作用。方法:SD大鼠随机分为假手术组（S组，n=6），小肠移植组（SBT组，n=12），缺血预处理加小肠移植组（IPSBT，n=12）。建立大鼠异位节段小肠移植模型。各组移植肠冷保存/再灌注1h取材。检测层粘连蛋白（LN）的表达。电镜观察小肠上皮细胞基底膜结构的变化。 结果:S组、SBT组和IPSBT组LN表达灰度值分别为39.52±2.60,13.53±0.44和25.40±1.79,SBT组明显低于S组（P<0.05），而IPSBT组明显高于SBT组（P<0.05）。电镜显示，S组小肠上皮基底膜呈线性均匀连续完整的结构； SBT组上皮基底膜断裂、甚至缺失；IPSBT组上皮基底膜破坏程度比SBT组为轻。结论:移植小肠细胞外基质是冷保存/再灌注损伤靶点；IP对细胞外基质冷保存/再灌注损伤有明显的保护作用。     

肝肠联合移植对小肠移植物免疫保护作用的实验研究

目的研究肝肠联合移植中肝脏对小肠移植物的免疫保护作用。方法建立大鼠肝肠联合移植、单独小肠移植及单独肝移植模型 ,每组取 12只受体大鼠观察生存期 ,另取 6只大鼠分别于移植术后 5、7、14d收集小肠及肝脏移植物 ,进行组织病理学研究并利用半定量RT PCR方法检测移植物中IL 2、IL 4、穿孔素以及颗粒酶B的mRNA表达。结果联合移植组受体生存时间 (2 7 83±4 4 7)d较小肠移植组 (11 5 8± 3 2 6 )d明显延长 (t=7 19,P <0 0 1) ,与肝移植组 (2 8 92± 2 39)d相比 ,差异无显著性 (t=0 75 ,P >0 0 5 )。联合移植组小肠移植物排斥反应较小肠移植组明显减轻 ,穿孔素及颗粒酶B表达水平降低。结论肝 /肠联合移植可以为小肠移植物提供免疫保护。     

血红素氧合酶-1基因转染对移植小肠的保护作用

目的 观察重组腺相关病毒血红素氧合酶-1( HO-1)基因转染对移植小肠的保护作用。方法 建立大鼠同种异位小肠移植模型,实验分为2组:实验组(n=34):供体术前腹腔注射载有HO-1基因的腺相关病毒1.0×1012个/ml,对照组(n=34):供体术前腹腔注射腺相关病毒1.0×1012个/ml,在实验组和对照组中检测小肠移植术后小肠组织中HO-1的活性、HO-1 mRNA含量及细胞凋亡,免疫组织化学检测HO-1蛋白的表达,观察小肠组织病理学变化和受体生存时间。结果 实验组平均生存时间为(6.80±1.56)d,对照组平均生存时间为(5.80±1.28)d,两者之间差异无统计学意义(P＞0.05),小肠移植术后24、48 h和5d移植小肠实验组HO-1活性分别为2.11±0.04、1.90±0.04和1.56±0.05,均强于对照组(1.71±0.07、1.56±0.06和1.38±0.08,P＜0.05);各组移植肠缺血再灌注损伤程度以术后24h最重,实验组缺血再灌注损伤程度轻于对照组;术后24h和48 h实验组HO-1 mRNA表达水平分别为1.12±0.08和0.76 ±0.10,均高于对照组(0.69±0.05和0.38±0.08,P＜0.05),术后5 d HO-1 mRNA表达水平两组比较差异无统计学意义(P＞0.05);术后各时段移植小肠细胞凋亡数实验组低于对照组,差异有统计学意义(P＜0.05),生存时间差异无统计学意义(P＞0.05)。结论 HO-1基因转染可降低移植小肠缺血再灌注损伤程度。     

大黄对糖尿病肾病大鼠肾皮质基因表达谱的影响

目的：研究大黄对糖尿病肾病大鼠肾皮质基因表达谱的影响及分析大黄对糖尿病肾病在基因水平上的作用机制。方法：20只雄性SD大鼠随机分为4组：正常对照组、用STZ诱导的糖尿病肾病组、糖尿病肾病大鼠给予大黄提取物治疗的大黄治疗组和糖尿病肾病大鼠给予安慰剂的阴性对照组。从4组SD大鼠的肾皮质中抽提mRNA,分别用Cy3、Cy5荧光标记，经反转录分别合成正常对照组与糖尿病组、大黄治疗组和对照组动物来源的cDNA探针；同时将Cy2,Cy5荧光标记的cDNA探针等量地与BioDoor基因表达谱芯片杂交，结果与扫描仪扫描并用软件进行分析统计。结果：正常对照组与糖尿病肾病组之间差异表达的基因有335条，占芯片基因总数的8．4％，其中12条基因在糖尿病肾病时表达量明显下降，而323条基因在糖尿病肾病时表达量明显上升。大黄治疗组和阴性对照组之间差异表达的基因有128条，占芯片基因总数的3．3％，其中有8条基因在大黄治疗以后明显上升，而120条基因在大黄治疗以后明显下降。并且，在糖尿病肾病中部分基因的表达变化在大黄治疗后可被逆转。结论：大黄能上调或下调部分差异表达的基因，并在一定程度上能逆转STZ诱导的基因表达谱。     

基因芯片在筛选胆管癌相关基因差异性表达的应用研究

目的　应用cDNA芯片技术进行肝外胆管癌相关基因表达谱差异分析 ,筛选胆管癌相关基因。方法　按一步法分别抽提 6例胆管癌和正常人胆管黏膜总RNA、纯化 ,逆转录合成掺入荧光分子的cDNA链探针 ,与 10 68条人PCR微矩阵芯片杂交 ,扫描芯片荧光信号图像 ,计算机分析比较二种组织基因表达谱差异。结果　胆管癌与正常胆管黏膜的基因表达谱分析 ,发现有 194条基因表达差异 ,6组标本 47条与肿瘤相关的基因一致向上或向下表达 ,2 3条表达上调 ,2 4条表达下调。结论　基因芯片能快速筛选胆管癌相关基因 ,分析这些差异表达的基因能够阐明胆管癌复杂的生物学特性与基因表达之间的内在联系 ,并识别肿瘤的标记物。     

TLR4表达在大鼠小肠缺血再灌注损伤中的改变及意义

目的:观察大鼠小肠缺血再灌注（I/R）损伤后小肠组织TLR4的表达及其与炎症因子水平变化的关系。方法:雄性SD大鼠90只,随机分为正常对照（N）组、假手术（S）组、小肠部分缺血/再灌注损伤（肠I/R）组。分别于缺血再灌注后6，12，24,48 h检测各组小肠组织TLR4mRNA的表达，门静脉血清中TNF-α和IL-6水平，并进行相关性分析。用免疫组化法观察TLR4在小肠组织中的表达和分布。结果:（1）肠I/R组TLR4mRNA表达上调,于I/R12 h最强,阳性细胞主要是小肠黏膜细胞;（2）I/R组门静脉血清中IL-6及TNF-α浓度与N组相比各时点均明显增高（P<0.01）;在I/R24 h后达到峰值，与S组比较差异亦有显著性 (P< 0.01);（3） 肠I/R组门静脉IL-6及TNF-α浓度的增高与小肠TLR4mRNA表达的上调呈正相关（r=0.752，r=0.812;均P<0.01）;（4）免疫组化法显示小肠黏膜细胞表面TLR4表达明显增强。结论:大鼠小肠I/R损伤后,小肠组织TLR4的表达上调可能是导致肠黏膜免疫屏障功能下降的机制之一，也可能是系统性炎症反应的始动环节。     

大鼠肝移植急性排斥反应时T淋巴细胞免疫相关基因表达的基因芯片研究

目的 从基因水平了解T淋巴细胞在急性排斥反应中作用的分子机制。方法 建立大鼠肝移植急性排斥反应模型，并设对照组，利用4096条大鼠cDNA克隆的基因芯片从来自排斥组和对照组的T淋巴细胞中抽提、纯化mRNA，逆转录成cDNA，荧光标记后与芯片杂交，扫描后筛选出差异表达的基因。结果 在4096个基因中共发现差异表达基因190条，其中10条差异表达明显、已知功能的免疫相关基因为：主要组织相容性复合物(3条)和CD3抗原(1条)相关基因；干扰素调节因子1、上皮生长因子受体、转化生长因子相关基因各1条；白细胞蛋白酶抑制因子、急性期蛋白抑制因子3相关基因各1条；补体因子1基因1条。结论 T淋巴细胞在肝移植术后急性排斥反应中的作用机制涉及多个基因；基因芯片技术是一种高效、稳定的方法。     

Beyond operational tolerance: effect of ischemic injury on development of chronic damage in renal grafts

BACKGROUND: The induction of operational tolerance is the holy grail of clinical transplantation. However, in animal models with operational tolerance, long- term grafts still develop chronic damage. The elucidation of the impact of allogenic versus nonallogeneic factors in such a model is important. This study examined the effect of a clinically relevant combination of warm ischemia and cold preservation in the absence of allogeneic response (isografts) and in the context of operational tolerance. METHODS: Dark Agouti (DA) rat kidneys were transplanted into DA recipients (isografts) or Albino Surgery recipients (allografts) tolerized by two transfusions of DA blood, under cover of cyclosporin A. Grafts were subjected to minimal cold preservation or to 30 mins warm ischemia followed by 24 hrs cold preservation. RESULTS: After an initial peak of renal dysfunction, serum creatinine concentration returned to normal in isografts and nonischemic allografts, but remained significantly elevated in ischemic allografts (P<0.0002) throughout 6 months follow-up. Both allograft groups developed proteinuria. At 6 months, ischemic isografts and nonischemic allografts demonstrated very mild tubular atrophy and interstitial fibrosis. Tubulointerstitial injury was significantly more severe in ischemic allografts (P<0.01 vs. nonischemic allografts) and was associated with increased infiltrating monocyte/macrophages and NK cells (P<0.05). Moderate glomerulosclerosis was a feature of both allograft groups (P<0.05). CONCLUSIONS: The modified allogeneic response in operationally tolerant recipients acts in synergy with ischemia/reperfusion injury in the development of chronic damage. Strategies to limit or modify the initial ischemia/reperfusion injury may ameliorate chronic tubulointerstitial damage. Progressive glomerular damage and proteinuria in allografts may require other pharmacological intervention.     

大鼠肝缺血再灌注肺损伤早期肺组织差异表达基因的筛选

目的 筛选肝缺血再灌注肺损伤大鼠早期肺组织差异表达的基因并作初步功能分析.方法 在大鼠全肝缺血再灌注肺损伤模型基础上,将12只雄性成熟SD大鼠随机分为2组,采用含22 012个基因的大鼠全基因组寡核苷酸基因芯片,检测损伤组大鼠肺组织差异表达的基因并进行初步功能分析.差异基因又通过RT-PCR验证分别检测了基因PGLYRP1、MMP14、CYP1A1、IL-1B、SLPI与芯片结果的一致性.结果 大鼠全肝缺血30 min再灌注60 min肺损伤模型肺组织存在80个差异表达的基因,其中上调基因48个(21个功能已知)、下调基因32个(9个功能已知).通过对任意选取的基因进行RT-PCR验证发现与芯片结果的一致性较好,基因芯片结果可靠.其中上调基因包括IL-1α、IL-1β、SLPI、MMP9、MMP14、MMP15、TIMPI、PIK3RL、MAPK、NF-KB、JNK等;下调基因包括CYP1A1、NQO1、GSTA3、RETNLA等.大鼠肝缺血再灌注肺损伤早期肺组织异常表达的基因涉及到炎症反应、细胞代谢、转录因子、信号传导、离子通道或受体、细胞骨架等几方面.结论 基因芯片技术是一种全新的检测手段,可筛选出肝缺血再灌注肺损伤后肺组织差异表达的基因并可指导进一步的治疗.     

Preservation injury and acute rejection of rat intestinal grafts: Protection afforded by pyruvate

Pyruvate has been shown to prevent intestinal mucosal injury after ischemia-reperfusion. The aim of the present study was to determine whether pyruvate can (1) prevent postreperfusion mucosal injury occurring after intestinal preservation and subsequent transplantation and (2) exert a protective effect on the intestinal graft mucosa during acute rejection. Preservation mucosal injury was evaluated, after 2 hours of reperfusion, by comparing grafts transplanted in a rat syngeneic combination (ACI to ACI) after 2 hours of cold preservation using pyruvate (n = 6) or placebo (n = 6). Mucosal parameters obtained during acute rejection (allogeneic combination: ACI to Lewis) were compared between placebo-treated (n =6) and pyruvate-treated (n = 6) animals. Tissue injury was evaluated by histopathologic examination, oxygen free radical production by luminol-enhanced chemiluminescence, and degree of neutrophil infiltration by myeloperoxidase staining. After reperfusion of the preserved grafts and during acute rejection, mucosal oxygen free radical levels and the number of infiltrating neutrophils were significantly (P <0.05) increased in the untreated grafts, whereas there was a statistically significant inhibition of these parameters in those treated with pyruvate. Mucosal injury, seen after reperfusion of the preserved grafts, was prevented by pyruvate. The histopathologic abnormalities observed in the untreated grafts during rejection were also significantly reduced by pyruvate. Treatment with pyruvate before cold preservation of intestinal grafts, in this rat model, reduced reperfusion mucosal injury, neutrophil infiltration, and oxygen free radical production. Oxygen free radicals were produced in the mucosa of the graft during acute rejection and their production was reduced by pyruvate, which exerted a protective effect on the rejecting allograft mucosa.     

应用微矩阵表达谱基因芯片检测食管癌的基因改变

目的：应用微矩阵表达谱基因芯片研究食管癌的基因变化。方法：按一步法抽提三例食管癌及其对照癌旁组织的总RNA，分别逆转录成荧光分子掺入的探针，混合后杂交基因芯片（14114种基因）。经严格洗片后用扫描仪扫描芯片荧光信号图像，计算机分析后比较两种组织中差异表达的基因。结果：在所检测的3例临床标本中，共有的差异表达基因31条，上调基因10条，下调基因21条，有多类基因，有与信号转导有关、与细胞周期调控有关、与癌基因同源的基因等等。结论：食管癌和对照癌旁组织间存在差异表达的基因。     

大鼠移植小肠急性排斥反应期组织病理学研究

目的　探讨大鼠异位小肠移植急性排斥反应期移植小肠病理学特点及意义。方法　实验分 4组 ,每组 6只。A组为非手术对照组 ;B组为异系移植组 ;C组为同系移植组 ;D组为异系移植加环孢霉素A治疗组。术后 3 ,5 ,7,10d取移植小肠进行病理学检查 ,测量黏膜厚度 ,绒毛高度和隐窝深度 ;并检测 3 ,5 ,7d移植小肠黏膜细胞凋亡。结果　A组小肠黏膜正常 ;B组移植小肠炎性细胞浸润、黏膜结构破坏程度和黏膜细胞凋亡数目明显高于C ,D组 ,随移植时间的延长黏膜细胞凋亡数目增加 ,黏膜结构破坏程度加重 ;C组移植小肠黏膜结构损伤程度较B组轻 ;D组仅有少量炎性细胞浸润 ,间质轻度水肿 ,未见黏膜结构破坏。结论　炎性细胞浸润、黏膜细胞凋亡和黏膜结构破坏是移植小肠急性排斥反应损伤病理学变化的主要特点。动态观察移植小肠病理学变化和细胞凋亡 ,对诊断小肠移植急性排斥反应和估计损伤程度有一定的价值。     

基因表达谱芯片在筛选直肠癌转移相关基因中的应用

目的探讨直肠癌发生淋巴结转移过程中相关基因群的表达和初步功能。方法按一步法抽提人直肠癌原发灶和转移淋巴结组织的RNA,将2000条人类基因PCR产物按微矩阵排列于化学涂层的载玻片上,制成基因芯片;将等量的直肠癌原发灶和转移淋巴结组织总RNA分别逆转录合成荧光分子掺入的cDNA-链做探针,混合后与上述基因芯片杂交,经严格洗片后扫描芯片荧光信号图像,计算机分析后比较两种组织中差异表达的基因。结果在2000条基因中,直肠癌原发灶与转移淋巴结组织间存在差异表达的基因共43条(2.1%),其中上调11条(0.5%),下调32条(1.6%)。表达异常的基因与细胞周期调节、细胞骨架与运动、细胞凋亡、细胞内信号传递、DNA的合成与修复、DNA的结合与转录、蛋白质的翻译合成及免疫功能相关。结论微矩阵基因芯片在筛选直肠癌转移时,相关基因的改变具有快速、高通量、高敏度等特点,直肠癌转移相关基因差异表达谱的分析为预防和控制直肠癌的转移提供了新的思路与线索。     

Protection against ischemia/reperfusion injury by the cavitary two-layer method in canine small intestinal transplantation with reduction of reactive oxygen species

BACKGROUND: Ischemia and reperfusion (I/R) injury is a major determinant of early graft dysfunction and long-term graft survival in small intestinal transplantation. The cavitary two-layer method (TLM) has been reported to be superior to the University of Wisconsin cold storage method (UWM) in long-term preservation of canine small intestine. This study was designed to evaluate the protective effect of the cavitary TLM against I/R injury in canine small intestinal transplantation. METHODS: Intestinal grafts harvested from beagles were allotransplanted after 24-hour preservation by UWM (group 1) or the cavitary TLM (group 2). The graft in the controls (group 3) was immediately allotransplanted without preservation. I/R injury was assessed by functional success rates, biochemical assay, graft adenosine triphosphate (ATP) and lipid peroxidation (LPO) concentrations, and histopathologic examination including TUNEL staining for apoptosis. RESULTS: In group 1, ATP recovery was delayed after reperfusion, and most recipients died with hemorrhage of the grafts and lungs. In group 2, graft ATP concentrations recovered rapidly, and I/R injury was prevented with reduced LPO production, resulting in good outcome. CONCLUSIONS: The cavitary TLM protected intestinal grafts against I/R injury evidenced by maintenance of graft ATP levels and reduction of LPO production compared with UWM in canine small intestinal transplantation.