Retinal pigment epithelial tear after intravitreous triamcinolone acetonide injection for fibrovascular pigment epithelial detachment

A 78-year-old woman was diagnosed with fibrovascular pigment epithelial detachment (PED) associated with age-related macular degeneration (AMD) affecting both eyes. Due to decreased vision in her left eye (20/2000) and disease progression, the patient received 4 mg of triamcinolone acetonide (TA) by intravitreal injection into her left eye. There were no immediate post-injection complications in the left eye. However, one week later, a retinal pigment epithelial (RPE) tear, temporal-inferior to the fovea in the left eye, was noted and confirmed by fundus photography, fluorescein angiography and optical coherence tomography. In contrast, there no similar RPE tear occurred in her right eye after treated several times by intravitreous bevacizumab injection. Not only anti-vascular endothelium growth factor agents, but also intravitreal TA when used to treat AMD with PED, would seem to induce a RPE tear in the absence of previous or concurrent adjuvant therapy. Further investigations are required to confirm the mechanism by which the RPE tear occurs.     

Retinal pigment epithelial change and partial lipodystrophy

Cuticular drusen and retinal pigment epithelial changes were found incidentally in a 27 year old Lebanese woman during assessment of partial lipodystrophy. Her vision was normal despite involvement of both maculae. The patient had hypocomplementaemia, but serum C3 nephritic factor was absent and renal function was normal. She had impaired glucose tolerance and a continuous infusion of glucose with model assessment (CIGMA) test revealed low normal tissue insulin sensitivity and high normal pancreatic beta cell function. Mild fasting hypertriglyceridaemia (2.0 mmol/l) may have been secondary to impaired insulin sensitivity. Endocrine function was otherwise normal apart from a completely absent growth hormone response to adequate hypoglycaemia. The simultaneous occurrence of partial lipodystrophy and retinal pigmentary epithelial and basement membrane changes appears to be a newly recognized syndrome.     

兔视网膜色素上皮细胞移植的实验研究

目的 用改良的二步酶法制备视网膜色素上皮（RPE）细胞悬液，不做玻璃体切割，直接进行视网膜下间隙的移植。方法 用酶I（含220kU/L)透明质酸酶和0.1%胰蛋白酶）分离视网膜神经上皮层与RPE之间的联系，再用酶Ⅱ（含0.25%胰蛋白酶）将RPE从玻璃膜上分离下来获得悬浮的RPE细胞，用特制的移植针头通过人为造成的局限性视网膜脱离区将其移植入受体视网膜下间隙。结果 术后2周供体RPE细胞呈单层排列于受体视网膜下间隙并存活，未见明显炎症反应。电镜观察术后5周供体RPE细胞位于受体Bruch膜上并与受体感光细胞外节盘膜形成镶嵌关系。结论 改良的内路法可以将供体RPE细胞成功移植在受体眼视网膜下间膜，并至少存活7周。     

玻璃体腔pegaptanib注射后发生视网膜色素上皮撕裂

目的:报道2例pegaptanib玻璃体腔注射后发生视网膜色素上皮撕裂的患者。迄今为止,这是第1篇对眼内抗血管内皮生长因子治疗后出现上述并发症的报道。设计:观察性病例报道。方法:2例患者表现为隐匿性脉络膜新生血管和浆液性色素上皮脱离,均由老年性黄斑变性所致。2例患者均接受玻璃体腔pegaptanib注射治疗。结果:1例患者于玻璃体腔注射后1周发生视网膜色素上皮撕裂。另1例患者于治疗后8周出现视网膜色素上皮撕裂。结论:虽然上述情况可能是由于患者的自然病程所致,但患者接受pegaptanib玻璃体腔注射后发生视力严重下降时应高度怀疑视网膜色素上…     

Immunocytochemical characteristics of cultured human retinal pigment epithelial cells

Rehnal Pigment epithelial cells (RPEC), as one ofthe most ~t cell layers in the eye, po~ a nof fUnctions cmcial in PreServing the integhty Of the visualsystem. The hantenance of healthy RPEC is critical fornOImal retinal funCtion, and the etiologies Of many retinaldisolders may have their Prifnaly origins in the pigment epitheliam. The PIDlilbmtion of RPEC in foe yi~s and onthe surfaCe Of retina is the pathological cause Of Pmlifelative yi~whnOPathy (PVR). On the other hand the a…     

猪视网膜色素上皮细胞的体外培养

目的：将猪视网膜色素上皮(RPE)细胞进行体外培养，为研究RPE细胞的功能及治疗有关眼底疾病提供细胞来源。方法：采用胰酶2次消化法分离猪RPE细胞，15％DMEM培养液培养，每天倒置显微镜观察细胞生长情况，并作流式细胞仪分析培养细胞的细胞周期。以免疫组织化学法鉴定培养细胞的来源。结果：离体培养细胞初期呈圆形，富含黑色素，12～24h贴壁呈圆形、梭形及不规则形。传代后细胞渐趋透明。免疫组化证实RPE细胞均为鼠抗人角蛋白染色阳性。细胞周期分析提示体外培养的RPE细胞保持正常的繁殖能力。结论：培养的细胞可作为体外猪RPE细胞的来源。     

腺相关病毒介导色素上皮衍生因子转染人虹膜色素上皮细胞的体外研究

目的探讨以腺相关病毒(AAV)为载体,对体外培养的人虹膜色素上皮(IPE)细胞进行色素上皮衍生因子(PEDF)转染,获得高效表达PEDF转基因细胞的可行性。方法构建携带PEDF基因的重组AAV载体AAV-PEDF,体外培养人IPE,用1×106pfu的AAV-PEDF按感染复数(MO I)为0、2、10和20分别感染体外培养的IPE细胞;荧光显微镜下观察细胞绿色荧光蛋白表达情况;流式细胞术检测细胞转染效率;RT-PCR和W estern b lotting法鉴定PEDF在IPE细胞中的表达。结果 AAV-PEDF转染后,IPE细胞生长正常,用荧光显微镜、RT-PCR和W estern b lotting均检测到PEDF表达。在MO I为20时,细胞感染阳性率达64.22%。结论 AAV-PEDF能有效地转染体外培养的IPE细胞并有效表达PEDF。     

原代人视网膜色素上皮细胞的冻存和复苏培养

目的 :观察对原代人视网膜色素上皮 (retinalpig mentepithelium ,RPE )细胞进行冻存和复苏培养的效果 .方法 :将 6只尸供眼 ,常规酶消化法分离、纯化的人原代RPE细胞 ,分为两组 ,实验组为即刻进行常规梯度降温液氮冷冻保存 ,1wk后行常规复苏培养 ;对照组为细胞直接进行后续实验 .台盼蓝拒染观察细胞存活率及生长状态 ;计算细胞贴壁率 ;初步计算克隆形成率 .结果 :RPE细胞存活率分别为试验组 (90± 7) % ,对照组 (87± 1 5 ) % ,两组相比无显著性差异(P >0 .0 5 ) ;两组接种细胞贴壁率从 2 4h开始分别为 (5 .0±3.1 ) %～ (6 1 .0± 7.3) %和 (1 5 .0± 6 .3) %～ (6 0 .0± 3.3) % ;培养 4 8h之前 ,两组之间存在统计学差异 (P <0 .0 5 ) ,4 8h之后组间无显著性差异 (P >0 .0 5 ) ;培养 5 ,7和 1 0d初步克隆形成率两组分别为 (1± 0 ) % ,(1± 1 ) % ,(3± 1 ) %和 (1±0 ) % ,(3± 1 ) % ,(2± 1 ) % ,组间无显著性差异 (P >0 .0 5 ,n=3) .冻存后复苏培养的RPE细胞生长状态良好 ,增生活跃 ,与对照组类似 .结论 :对原代人RPE细胞进行冻存 ,复苏培养的RPE细胞活性、存活能力、单细胞分裂增生能力不受影响 .     

Long-term studies on allotransplantation of rabbit retinal pigment epithelial cells double-labelled with 5-bromodeoxyuridine and natural pigment

Ｒｅｔｉｎａｌｐｉｇｍｅｎｔｅｐｉｔｈｅｌｉｕｍ（ＲＰＥ）ｄｙｓｆｕｎｃｔｉｏｎ,ａｔｒｏｐｈｙａｎｄｄｅｇｅｎｅｒａｔｉｏｎｈａｖｅｂｅｅｎｉｍｐｌｉｃａｔｅｄａｓｔｈｅｃａｕｓｅｏｆｍａｎｙｒｅｔｉｎａｌｄｉｓｅａｓｅｓｉｎｃｌｕｄｉｎｇａｇｅ?..     

金雀异黄素诱导培养人视网膜色素上皮细胞凋亡

目的 :探讨金雀异黄素对培养人视网膜色素上皮细胞 (hRPE)的促凋亡作用 .方法 :将不同浓度的金雀异黄素作用于培养人视网膜色素上皮细胞 ,通过TUNEL染色和光、电镜的形态学观察 ,观察金雀异黄素对培养hRPE凋亡的诱导作用 .结果 :不同浓度的金雀异黄素可以诱导RPE凋亡 ,5 0mg·L-1 金雀异黄素作用 2 4h即有TUNEL阳性的凋亡细胞出现 ,作用时间在 2 4 ,4 8和 72h ,其凋亡细胞百分数的中位数分别为 7.6 % ,9.8%和 1 3.7% ;当金雀异黄素浓度为 75和1 0 0mg·L-1 时 ,以上 3个时间点凋亡细胞百分数的中位数分别为 1 0 .3% ,1 6 .4 %和 2 3.4 % ;1 5 .4 % ,2 1 .2 %和 35 .8% .透射电镜观察 ,5 0mg·L-1 浓度作用于细胞 ,胞核内染色体出现边集 ,表现凋亡的早期征象 ;75mg·L-1 作用呈现典型的凋亡特征 ;1 0 0mg·L-1 作用于细胞 ,除凋亡细胞外 ,部分细胞出现胞质的进行性溶解 ,有胞膜破坏现象 ,坏死细胞比例增多 .结论 :金雀异黄素可诱导RPE凋亡的发生 ,并有剂量和时间效应关系 .1 0 0mg·L-1 金雀异黄素使RPE坏死     

胎兔视网膜色素上皮移植的初步研究

目的:观察受体Bruch膜和视网膜色素上皮(retrial pigment epithelial,RPE)受损情况下供体RPE细胞的增殖、分化和凋亡状况。方法:制备有色素胎兔RPE细胞悬液,移植至破坏了Bruch膜和RPE细胞的12只成年新西兰大白兔的视网膜下腔。左眼作为实验组,右眼作为对照,于术后3、7和14d, 采用Ki-67免疫组化和TUNEL染色,并提取RPE细胞DNA作琼脂糖凝胶电泳,观察Ki-67阳性RPE细胞及移植的RPE细胞和受体ONL细胞的凋亡百分率,行统计学分析。结果:术后随着时间的延长,实验组或对照组Ki-67阳性RPE细胞数显著增加(P<0.05);术后14 d实验组或对照组的TUNEL染色ONL核阳性百分率较术后3 d显著减少(P<0.05);术后实验组TUNEL染色阳性和细胞核深染的RPE细胞无显著增加(P>0.05);细胞核深染的RPE细胞百分率明显高于TUNEL阳性的细胞(P<0.01)。对照组未见TUNEL阳性的RPE细胞。术后14d,移植的RPE细胞DNA电泳出现典型的凋亡带。结论:在受体Bruch 膜、RPE受损状态下,供体的RPE细胞具有良好的增殖和分化能力。     

紫杉醇抑制原代培养人视网膜色素上皮细胞增殖的实验研究

目的研究紫杉醇（Taxol）对体外原代培养人视网膜色素上皮（human Retinal Pigment Epithelium,hRPE）细胞增殖的抑制作用及机制。方法体外分离、原代培养hRPE细胞,采用免疫细胞化学方法对其进行鉴定。不同浓度紫杉醇（0、0.005、0.05、0.5、5mg/L）处理hRPE细胞一定时间,采用形态学观察、细胞生长曲线及MTT法检测药物对hRPE细胞的生长抑制效应,流式细胞术检测药物对hRPE细胞的细胞周期阻滞作用及凋亡诱导作用。结果原代培养的hRPE细胞胞浆富含色素,随传代次数增加,黑色素颗粒逐渐减少直至消失。用抗人细胞角蛋白抗体进行免疫细胞化学鉴定hRPE细胞呈特异的阳性反应。细胞生长曲线及MTT法显示：紫杉醇作用于hRPE细胞24h和72h,其抑制细胞生长增殖的IC50值分别为5.24和3.24mg/L。流式细胞分析术检测结果显示：0.5mg/L紫衫醇作用细胞48h即可显著延迟hRPE细胞G2/M期进展并诱导凋亡（P〈0.05）。透射电镜观察显示：0.5mg/L紫杉醇作用后细胞表面微绒毛减少,电子密度增加,细胞器减少,异染色质聚集成团、边聚等。结论紫杉醇通过阻滞G2/M期进展和诱导凋亡显著抑制hRPE细胞生长增殖。     

活体染料标记原代IPEC眼内移植的研究

目的 探讨应用活体染料羧基荧光素乙酰乙酸(CFDA-SE)标记原代的兔自体虹膜色素上皮细胞(iris pigment epithelial cell,IPEC),并移植于视网膜神经上皮层下的可行性.方法 取原代兔眼自体虹膜色素上皮细胞消化分离,经CFDA-SE染色后移植到视网膜神经上皮层下.术后不同时间应用彩色眼底照相、激光扫描检眼镜(SLO)、光学相干断层扫描(OCT)进行活体观察,不同时间点对移植眼进行切片并常规染色及免疫组化,用光学显微镜对移植细胞进行观察和评价.结果 自体移植术后观察显示移植区界限清晰;SLO可观察到移植区内荧光分布;OCT和HE染色均显示移植区神经上皮层下有移植物堆积,并随时间推移逐渐变平.免疫组化显示移植区ZO-1、Actin呈棕色点,有规律地间断分布在Bruch膜上,IPEC嵌插在原始的视网膜色素上皮细胞(retinal pigment epithelial cell,RPEC)间,且形成完整的单层.结论 CFDA-SE作为活体染料标记自体IPEC进行移植时,是一种快捷、稳定、安全的活体细胞染料,可作为理想的标记物应用.     

培养人视网膜色素上皮细胞的免疫细胞化学特征

目的：观察体外培养人视网膜色素上皮细胞（ＲＰＥ）免疫组化特征．方法：取第１代、第３￣６代ＲＰＥ,以间接免疫荧光方法比较角蛋白、波形蛋白、肌动蛋白、ＶⅢ因子和ＧＦＡＰ,ＨＡＭ４５等６种蛋白表达的特征．结果：与对照组相比,传代培养的人ＲＰＥ角蛋白、波形蛋白表达呈阳性;随传代次数增多,角蛋白表达强度无明显变化,波形蛋白表达逐渐增强;肌动蛋白、ＶⅢ因子、神经纤维酸性蛋白（ＧＦＡＰ）、ＨＭＢ４５呈阴性．结论     

Retinal pigment epithelial cells: biological property and application in Parkinson’s disease

Parkinson＇s disease is a neurodegenerative disorder mainly caused by degeneration of the dopaminergic neurons in the substantia nigral pars compacta （SNpc）. The typical motor symptoms of this disease are tremor, akinesia, and rigidity, which are mostly caused by dysfunction of the nigro-striatal pathway. Dopaminergic neurons in the SNpc project long axons to caudate nucleus and the putamen, and secrete dopamine.     

一种体外培养兔眼色素上皮细胞的新方法

目的 建立一种体外培养的兔眼视网膜色素上皮(retinal pigment epithelium,RPE)细胞的新方法.方法 采用Dispase对兔眼RPE细胞进行原代培养,免疫组化通过MNF116和s-100鉴定细胞纯度.将细胞接种于铺有laminin的Transwell滤膜上,观察到细胞融合后对膜切面行透射电子显微镜观察;并通过细胞ZO-1免疫荧光化学法了解紧密连接的形成情况.结果 成功培养了原代兔眼RPE细胞并且无其它细胞污染.透射电镜可见细胞表面有大量微绒毛并形成紧密连接.ZO-1免疫荧光化学结果可见细胞形态基本呈多边形,紧密连接基本形成.结论 兔眼RPE细胞能够用Dispase成功分离并培养.     

多西他赛对人视网膜色素上皮细胞增殖的抑制作用

目的 研究多西他赛（docetaxel, DTX）对体外培养的人视网膜色素上皮（human retinal pigment epithelium, hRPE）细胞增殖的抑制和凋亡。方法 选择不同浓度（0、10、20、40、80μg/mL）的DTX作用于hRPE细胞一定时间,MTT法检测DTX对hRPE细胞的生长抑制,荧光染色显微镜观察凋亡细胞,流式细胞术检测DTX对hRPE细胞周期的影响。结果 DTX对人hRPE细胞有生长抑制作用,随着DTX浓度的增加,对hRPE细胞的增殖抑制作用明显增强（P<0.05）,当DTX浓度为80μg/mL作用于hRPE细胞48 h时,细胞增殖抑制达93%。20μg/mL DTX作用的hRPE细胞中细胞核或细胞质内出现致密浓染的颗粒状或条索状荧光的凋亡细胞,随着浓度的增加,凋亡细胞数亦增加。流式细胞仪检测显示,加入DTX的hRPE细胞各周期比例发生改变,G₀/G₁期、S期细胞比例逐渐减少,G₂/M期细胞增加,不同浓度组与阴性对照组比较差异有统计学意义（P<0.01）,80μg/mL...     

Central areolar choroidal and retinal pigment epithelial dystrophy: a family report

Central areolar choroidal and retinal pigment epithelial dystrophy (CACD) is a rare hereditary macular disease characterized by a bilateral, symmetric, and well-circumscribed solitary area in the macula with choroidal and retinal pigment epithelial atrophy. We report a family of CACD confirmed by both clinical presentation and hereditary pattern. Three members of the family were examined. They had noticed gradual visual deterioration with poor color discrimination since the fourth to fifth decades. All of them showed a bilaterally symmetric bull's-eye pattern of macular dystrophy with a sharp border of underlying large or middle choroidal vessels, which was unassociated with any surrounding lesions. Fluorescein angiography revealed a transmission window defect due to retinal pigment epithelial atrophy with remaining choriocapillaris intermingled with a hypofluorescent area of choriocapillaris atrophy. Electroretinography revealed a mild reduction in the photopic amplitude, while the scotopic response was normal. A normal electro-oculography was also noted. The family history indicated autosomal dominant inheritance. The loss of visual acuity was caused by progressive atrophy of both the retinal pigment epithelium and the choriocapillaris. It is important to detect CACD in the early stages, because this diagnosis can exert a considerable influence on a patient's subsequent life.     

碱性成纤维细胞生长因子基因转染对虹膜色素上皮细胞增殖及细胞周期的影响

目的:了解重组腺相关病毒(rAAV)载体介导碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)基因转染对体外培养的虹膜色素上皮细胞(IPE)增殖及细胞周期的影响.方法:在体外培养的IPE细胞中加入转染rAAV-bFGF基因细胞和未转染细胞的培养液上清,继续培养4 h或1 d后分别应用MTT法和流式细胞仪检测IPE细胞的生长状况.结果:MTT法结果显示,加入rAAV-bFGF基因转染组培养液上清的IPE细胞D值为0.338±0.047,对照组为0.277±0.064,2组相比,t=3.745,P<0.05.流式细胞仪检测结果显示:加入rAAV-bFGF基因转染组培养液上清的S期IPE细胞为(21.19±1.93)%,与对照组(16.47±2.37)%相比.t=-3.448,P<0.05.结论:转染rAAV-bFGF的IPE细胞分泌的bFGF具有生物活性,这为rAAV-bFGF转染IPE细胞移植治疗视网膜色素变性提供了理论支持.     

缺氧和高浓度葡萄糖对体外培养人视网膜色素上皮衍生因子表达的影响

目的　探讨缺氧和高糖对体外培养的人视网膜色素上皮 (RPE)细胞血管内皮生长因子(VEGF)和色素上皮衍生因子 (PEDF)的影响。方法　我们通过实验性研究在氧正常或缺氧 (1%O2 )加或不加高浓度葡萄糖的条件下 ,培养的人RPE细胞 ,通过反转录PCR和实时定量分析检测PEDF和VEGF的表达 ,使用Western印迹分析检测PEDF和VEGF蛋白水平。结果　缺氧情况下 ,VEGF表达和蛋白水平增加 (P =0 .0 0 1) ;缺氧加 2 5mmol/L葡萄糖后增加更加明显 (P <0 .0 0 1)。缺氧情况下PEDF表达水平与正常氧环境比较无统计学意义 (P =0 .2 5 1) ;但加葡萄糖后PEDFmRNA表达水平低于正常对照。结论　体外培养的人RPE细胞在缺氧条件下PEDF表达降低不明显 ,这提示缺氧间接影响体外RPE细胞的PEDF下调 ,高葡萄糖直接下调PEDF的表达 ,同时增加VEGF的表达 ,这可能支持体内高血糖是糖尿病最危险的“糖毒性”观点。