KiSS-1基因及其蛋白肽在妊娠滋养细胞疾病中的表达和意义

目的探讨KiSS-1基因及其蛋白在妊娠滋养细胞疾病中的表达及临床意义。方法用半定量RT-PCR和Westernblot方法检测30例正常早期妊娠绒毛组织、30例葡萄胎组织、9例侵蚀性葡萄胎组织和8例绒毛膜癌组织中KiSS-1mRNA及其蛋白metastin的表达。结果在正常妊娠早期绒毛组织、葡萄胎组织和侵蚀性葡萄胎组织中均有KiSS-1基因和蛋白的表达,而在绒毛膜癌组织中无KiSS-1基因和metastin的表达。葡萄胎组织的KiSS-1mRNA(0.433±0.193)和metastin表达(23.831±7.522)显著低于早期妊娠绒毛组织(P均<0.01),侵蚀性葡萄胎组织中KiSS-1mRNA和metastin表达水平更低(分别为0.113±0.121和10.814±3.431)。在绒毛膜癌组织中未检测到KiSS-1基因及其蛋白的表达。结论肿瘤转移抑制基因KiSS-1基因及其蛋白的表达变化与滋养细胞侵润活性呈负相关,是一种抑侵润基因,在滋养细胞侵润活性调控中起重要作用。     

Jagged1蛋白在早期自然流产患者绒毛组织中表达的研究

目的：探讨Jagged1蛋白在早期自然流产患者绒毛组织中的表达及其对妊娠结局的影响。方法采用实时荧光定量逆转录聚合酶链反应技术和免疫印迹法检测15例自然流产患者和20例正常早期妊娠妇女绒毛Jagged1 mRNA和蛋白的表达水平。结果自然流产组患者Jagged1mRNA表达水平（0．0623±0．0007）,低于正常早期妊娠妇女（0．0315±0．0065）,差异有统计学意义（P＜0．05）;Western－blot检测显示,早期自然流产患者Jagged1蛋白的表达水平低于正常早期妊娠妇女,但差异无统计学意义（P＞0．05）。结论 Jagged1蛋白在早期自然流产患者绒毛组织中表达呈下调趋势,可能与母胎界面血管发育及滋养细胞缺氧有关,从而导致自然流产。     

ET-1及受体在不明原因复发性流产绒毛中的表达及其对滋养细胞迁移的调节

目的 通过检测内皮素-1(endothelin-1, ET-1)及受体(endothelin receptors, ETR)在不明原因复发性流产(unexplained recurrent spontaneous abortion, URSA)绒毛组织中的表达,探讨其与URSA的关系。方法不明原因复发性流产患者30例(RSA组)及正常早孕人流妇女30例(正常组,即CTL组),采用实时荧光定量PCR(Real-Time PCR)及Western印迹法检测两组绒毛组织中ET-1、ETR-A、ETR-B mRNA及蛋白的表达。取体外培养的妊娠早期绒毛外滋养细胞Transwell迁移实验法检测ET-1、ETR-A阻断剂BQ-123及ETR-B阻断剂BQ-788受体对绒毛外滋养细胞迁移能力的影响。结果RSA组较正常组绒毛组织中ETR-B mRNA及蛋白表达降低,差异有统计学意义(P＜0.05),而ET-1、ETR-A mRNA及蛋白在二组绒毛组织中的表达差异无统计学意义(P＞0.05)。ET-1促进HTR-8细胞迁移,ETR-B阻断剂阻断ET-1的促迁移作用。结论 ET-1可能通过ETR-B受体促进妊娠早期绒毛外滋养细胞迁移,URSA患者较正常组绒毛中ETR-B mRNA及蛋白表达降低可能与URSA相关。     

MMP-25在早孕绒毛和蜕膜中的表达及意义的研究

目的研究基质金属蛋白酶-25 (matrix metalloproteinase-25，MMP-25)在正常早期妊娠和自然流产患者绒毛及蜕膜组织中的表达特点，探讨其在胚胎植入中的作用及其与自然流产的关系。方法采用半定量RT-PCR和免疫组化法检测60例正常早期妊娠和40例自然流产患者绒毛及蜕膜组织中MMP-25mRNA及蛋白的表达。结果① MMP-25mRNA在正常早期妊娠的绒毛及蜕膜组织中均有表达，且绒毛组织中MMP-25mRNA表达水平随妊娠周数的增加逐渐上升，各孕周组间相比差异有统计学意义(P＜0.05)。自然流产组绒毛及蜕膜组织中MMP-25mRNA的表达明显低于正常妊娠组(P＜0.05)。② 正常妊娠组的绒毛组织中，MMP-25主要定位于细胞滋养细胞和合体滋养细胞，并且随妊娠周数增加表达逐渐增强，与RT-PCR结果吻合；自然流产组仅在合体滋养细胞中有表达，两组平均光密度分别为0.21±0.02和0.13±0.04，差异有统计学意义(P＜0.05)。蜕膜组织中MMP-25主要在腺上皮细胞表达，自然流产组的表达微弱，两组平均光密度分别为0.25±0.13和0.21±0.12，差异有统计学意义(P＜0.05)。结论MMP-25表达变化与滋养细胞浸润能力相吻合，且蜕膜组织中呈阳性表达，推测其参与胚胎植入及胎盘形成过程中滋养细胞浸润活性调控及子宫内膜组织重构；自然流产患者MMP-25表达水平降低，造成滋养细胞浸润能力下降，可能与自然流产的发生有关。     

PPARγ在绒毛组织中的表达与早期自然流产的关系

目的：研究过氧化物酶体增殖物激活受体γ( PPARγ)蛋白在正常早孕及早期自然流产患者绒毛组织中的差异表达,探讨PPARγ与早期自然流产的关系。方法应用免疫组化PV两步法、Western blot法检测PPARγ蛋白在正常早孕妇女(对照组,n=40)和早期自然流产患者(实验组,n=40)绒毛组织中的表达。结果免疫组化显示PPARγ蛋白主要在两组绒毛组织中细胞滋养层细胞及绒毛外滋养层细胞中表达;Western blot法显示PPARγ蛋白在实验组绒毛组织中的表达较对照组高,差异有统计学意义(P<0．01)。结论 PPARγ对妊娠早期滋养细胞浸润起负性调节作用,PPARγ蛋白表达水平增高,可能与自然流产的发生有关。     

胎盘组织KiSS-1 mRNA及其蛋白肽metastin表达在子癎前期发病中的意义

目的:探讨胎盘组织中KiSS-1mRNA及其蛋白肽metastin表达在早发重度子癎前期发病中的作用。方法:采用RT-PCR、Western blot、免疫组化方法检测57例子癎前期患者(轻度15例和重度42例,其中早发重度12例,晚发重度30例)和30例正常晚期妊娠者胎盘组织中KiSS-1mRNA及其蛋白肽metastin的表达水平和定位。结果:胎盘组织中蛋白肽metastin主要表达在绒毛的合体滋养细胞和细胞滋养细胞。子癎前期组胎盘组织中KiSS-1mRNA及蛋白肽metastin表达分别为(1.73±0.24)和(78.41±7.96)μg/100μg总蛋白,显著高于正常晚期妊娠组(P均<0.01),以早发重度子癎前期组尤为显著。结论:子癎前期存在KiSS-1mRNA及其蛋白肽metastin表达增强,且早发重度子癎前期组表达显著增高,可能是早发重度子癎前期发病的主要原因之一。     

USP22基因在人早孕期母-胎界面的表达及意义

目的:检测早孕期绒毛及蜕膜组织中泛素特异性水解酶22(USP22)基因和蛋白水平表达,以探讨USP22在母-胎界面的生理性调节作用。方法:分别采用免疫组织化学方法、荧光实时定量PCR法、Western blot检测20例早孕期正常妊娠妇女及15例不明原因复发性流产患者绒毛、蜕膜组织中USP22的定位、mRNA及蛋白表达水平。结果:USP22在早孕期绒毛和蜕膜组织中均呈阳性表达。在蜕膜基质细胞,USP22主要定位于胞质,少部分定位于胞核;在绒毛滋养细胞,USP22主要表达于绒毛细胞滋养细胞的胞质和胞膜。实时荧光定量PCR及Western blot检测显示绒毛及蜕膜组织中均可见USP22mRNA及蛋白的表达;与正常妊娠组比较,复发性流产组绒毛USP22mRNA及蛋白表达水平显著降低(P<0.05),蜕膜组织中USP22mRNA及蛋白表达水平差异无统计学意义(P>0.05)。结论:USP22在人早孕期母-胎界面表达,并参与了正常早孕期绒毛滋养细胞侵袭的调控和正常妊娠的维持。母-胎界面USP22表达下降可能是导致自然流产发生的原因之一。     

基质金属蛋白酶抑制基因RECK在早孕自然流产绒毛组织中的表达及意义

目的观察早期自然流产患者绒毛组织中RECK基因（基质金属蛋白酶（MMP）抑制基因）的表达及其与MMP-2、-9之间的关系。方法采用半定量RT-PCR和Western blotting法检测20例早期自然流产患者和20例正常早期妊娠绒毛组织中RECK、MMP-2和MMP-9基因的表达情况。结果①早期自然流产患者绒毛组织中MMP-2及MMP-9的mRNA表达水平低于正常早期妊娠者,差异有统计学意义（P〈0.05）;RECKmRNA的表达高于正常早期妊娠者,差异有统计学意义（P〈0.05）。②自然流产患者绒毛组织中MMP-2、MMP-9蛋白表达低于正常早期妊娠者,差异有统计学意义（P〈0.05）;RECK蛋白表达高于正常早期妊娠者,差异有统计学意义（P〈0.05）。③RECK蛋白与MMP-2、MMP-9蛋白之间存在明显的负相关。结论RECK表达的增加进而抑制MMP-2、MMP-9的活化,致使滋养细胞侵袭能力下降,可能与孕早期自然流产的发生有关。     

巨噬细胞移动抑制因子表达与复发性自然流产关系

目的探讨巨噬细胞移动抑制因子(MIF)在早期妊娠妇女血清和妊娠组织中的表达及其与复发性自然流产(RSA)的关系。方法采用免疫组化链霉菌抗生物素蛋白-过氧化物酶连接(SP)方法,检测35例RSA病人、45例人工流产的正常妊娠妇女(对照组)早期妊娠绒毛和蛻膜组织中MIF的定位与蛋白表达,采用RT-PCR技术检测绒毛和蛻膜组织MIF mRNA表达水平,采用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测血清MIF水平。结果两组孕妇绒毛滋养层细胞和蜕膜细胞中均有MIF表达,RSA组绒毛滋养层细胞胞质和蜕膜细胞胞质中MIF表达呈淡棕色,而对照组中呈深棕色。RSA组绒毛滋养层细胞胞质和蜕膜组织MIF蛋白和MIF mRNA表达均明显低于对照组,差异有显著性(t=7.089~40.610,P<0.01)。RSA组血清MIF水平明显低于对照组,差异有显著意义(t=8.903,P<0.01)。早期妊娠血清MIF水平与绒毛和蛻膜组织中的MIF mRNA表达水平呈正相关(r=0.873、0.657,P<0.01);与MIF蛋白表达水平也呈正相关(r=0.794、0.616,P<0.01)。结论 MIF mRNA及其蛋白在RSA病人绒毛及蜕膜组织中低表达可能参与了RSA的发病,早期妊娠血清MIF水平下降对RSA的发生有一定的预测作用。     

Survivin mRNA在妊娠滋养细胞疾病中的表达及其意义

目的 探讨Survivin mRNA在妊娠滋养细胞肿疾病生发展中的作用。方法 应用原位杂交技术检测85例妊娠滋养细胞疾病中凋亡抑制蛋白Survivin mRNA的表达。结果 绒癌组的平均光密度（OD）值显著高于正常早期绒毛组织组、完全性葡萄胎组及侵袭性葡萄胎组。侵袭性葡萄胎组的OD值显著高于正常早期绒毛组织组及完全性葡萄胎。完全性葡萄胎组与正常早期绒毛组织组相比差异无显著性，随分化程度的逐渐降低OD值升高。结论 Survivin mRNA在绒癌及侵袭性葡萄胎组中过度表达。推测Survivin参与妊娠滋养细胞疾病的发生、发展以及与妊娠滋养细胞疾病的预后不良、复发密切相关。是一个具有潜在价值的妊娠滋养细胞疾病标志物。     

Expression and role of adrenomedullin and its receptor in patients with chronic obstructive pulmonary disease

Objective To investigate the expression and role of adrenomedullin (ADM) and adrenomedullin receptor (ADMR) in patients with chronic obstructive pulmonary disease (COPD).Methods Small pulmonary artery remodeling was observed using morphometric analysis. The expression of ADM and ADMR mRNA in lung tissue was calculated by in situ hybridization in 9 COPD cases. Cardiac catheterization was performed in 22 COPD cases to monitor changes of hemodynamic parameters and patients were divided into two groups based on mean pulmonary artery pressure (mPAP). The cases without pulmonary hypertension (PH) were placed in Group A (n=12) and those with PH were placed in Group B (n=10). The levels of pulmonary arterial plasma ADM were measured by radioimmunoassay. Blood gas analysis was also conducted.Results The ratio of vascular wall thickness to external diameter (MT%) and the ratio of vascular wall area to total area (MA%) were higher in patients with COPD (P&lt;0.01). In situ hybridization showed that ADM mRNA and ADMR mRNA were expressed in the pulmonary artery walls of control subjects . The expression levels were significantly higher in those of COPD sufferers（P&lt;0.01）. Statistically positive relationships were visible between ADM and ADMR, and the plasma ADM level of Group B was significantly higher than that of Group A (P&lt;0.05). The plasma ADM level had a significantly positive correlation to mPAP and pulmonary vascular resistance (PVR), while being negatively correlated to levels of PaO2.Conclusion ADM may play an extremely protective role as a local autocrine/paracrine factor in COPD.     

妊娠高血压综合征患者脐血肾上腺髓质素和内皮素的测定及其在脐带血管的表达

目的：探讨脐带血和脐带血管肾上腺髓质素（ADM）和内皮素1（ET-1）在妊娠高血压综合征（简称妊高征）中的作用。方法：应用放射免疫法测定30例妊高征患者和12例正常妊娠晚期孕妇（简称正常晚孕组）脐静脉血浆ADM和ET-1水平,用免疫组化法检测ADM和ET-1蛋白在40例妊高征患者和12例正常妊娠晚期孕妇脐带血管中的表达。结果：①妊高征患者脐静脉血浆ADM水平高于正常晚孕妇女,且随着病情加重逐渐增高,中、重度妊高征患者与正常晚孕组比较差异也具有显著性(P<0.05)。妊高征患者脐静脉血浆ET-1水平略有升高,与正常晚孕组比较,差异无显著性(P>0.05);②正常晚孕组脐带血管内皮细胞和平滑肌细胞有ADM的表达,妊高征组随着病情加重,ADM表达增强;正常晚孕妇女ET-1在脐带血管的内皮细胞表达,妊高征组随着病情加重,ET-1表达减弱。 结论：脐血和脐带血管ADM和ET-1表达改变可能与妊高征胎儿胎盘之间血液循环调控有关。     

正常妊娠妇女和妊娠高血压综合征患者血浆中肾上腺髓质素的测定

目的：探讨血浆肾上腺髓质素（ADM）与生理妊娠及妊娠高血压综合征(妊高征)之间的关系。方法：应用放射免疫法测定10例正常非孕妇女、36例正常妊娠妇女（早、中、晚期各12例）和30例妊高征患者（轻、中、重度各10例）血浆ADM浓度,所得数据行统计学分析。结果：正常妊娠各阶段ADM水平均高于非妊娠妇女(P<0.05),妊高征组血浆ADM高于正常晚期妊娠组(P<0.01),轻、中、重度妊高征患者血浆ADM水平之间比较差异有显著性(P<0.05)。妊高征患者的平均动脉压与ADM水平呈正相关（r=0.822,P<0.01),低体重儿发生与妊高征的严重程度有关。结论：ADM参与维持人类正常妊娠。在妊高征发病机制中,ADM可能是代偿性升高。     

Expression and role of adrenomedullm and its receptor in patients with chronic obstructive pulmonary disease

Objective To investigate the expression and role of adrenomedullin (ADM) and adrenomedullin receptor (ADMR) in patients with chronic obstructive pulmonary disease (COPD).Methods Small pulmonary artery remodeling was observed using morphometric analysis. The expression of ADM and ADMR mRNA in lung tissue was calculated by in situ hybridization in 9 COPD cases. Cardiac catheterization was performed in 22 COPD cases to monitor changes of hemodynamic parameters and patients were divided into two groups based on mean pulmonary artery pressure (mPAP). The cases without pulmonary hypertension (PH) were placed in Group A (n =12) and those with PH were placed in Group B (n =10). The levels of pulmonary arterial plasma ADM were measured by radioimmunoassay. Blood gas analysis was also conducted.Results The ratio of vascular wall thickness to external diameter (MT%) and the ratio of vascular wall area to total area (MA%) were higher in patients with COPD ( P < 0. 01). In situ hybridization showed that ADM mRNA and     

ADM基因在正常孕妇与子痫前期孕妇妊娠晚期胎盘组织表达的研究

目的ADM在调节母亲血管对妊娠过程和胎儿的适应性及胚胎循环等方面发挥着绝对重要的作用,为阐明ADM基因在正常孕妇与子痫前期胎盘组织的表达差异,以探索ADM及其信号通路的改变在致子痫前期发生的分子病理机制中的重要性。方法取妊娠晚期正常孕妇(≥39周,n=7)和子痫前期孕妇胎盘组(≥35周,n=10),分别采用NorthernBlotting方法和免疫组化技术比较正常孕妇与子痫前期孕妇胎盘组织中ADM基因在mRNA和蛋白质水平表达的差异。结果与正常孕妇相比,子痫前期孕妇胎盘组织中ADM基因mRNA的表达降低了(36.2±6.3)%。采用t-检验进行统计表明二者差异显著(P<0.05);且子痫前期孕妇胎盘组织中ADM蛋白的表达也明显减少。结论子痫前期孕妇妊娠晚期胎盘组织ADM基因的表达明显降低,这可能是子痫前期患者发病的可能机制之一。     

肾上腺髓质素及受体在肾上腺和嗜铬细胞瘤中的表达

目的研究肾上腺髓质素(ADM)及其特异性受体-受体活性调节蛋白2/降钙素受体样受体(RAMP2/CRLR)mRNA在正常肾上腺髓质和嗜铬细胞瘤组织中的表达.方法提取8例正常肾上腺髓质和18例嗜铬细胞瘤组织总RNA,行逆转录-聚合酶链反应,以扩增的ADM、RAMP2、CRLR条带灰度与内参照GAPDH条带灰度比值进行半定量分析.结果正常肾上腺髓质和嗜铬细胞瘤组织中均可见ADM及其特异性受体RAMP2/CRLR mRNA的表达,其ADM/GAPDH分别为0.48±0.09和0.75±0.24,RAMP2/GAPDH分别为0.79±0.12和1.29±0.30,CRLR/GAPDH分别为0.40±0.08和0.87±0.22,嗜铬细胞瘤组织中ADM及其特异性受体RAMP2/CRLR mRNA的表达显著高于正常肾上腺髓质(P＜0.05).结论ADM可能通过自分泌或旁分泌方式作用于肾上腺局部,在嗜铬细胞瘤的发生发展中起一定的作用.     

SOCS3在早期流产患者蜕膜及绒毛组织中的表达

目的探讨细胞因子信号转导负调控因子3(SOCS3)在早期流产患者蜕膜及绒毛膜绒毛组织中的表达。方法选择早期流产患者40例为早期流产组,以同期非意愿条件下行人流术的正常妊娠妇女40例为正常对照组,采用免疫组化SP法和逆转录-聚合酶链反应法(RT-PCR)检测两组妊娠蜕膜及绒毛组织SOCS3蛋白及mRNA的表达水平,进行半定量分析。结果①早期流产患者组年龄、孕周与正常对照组年龄、孕周之间比较,差异无统计学意义;②SOCS3在两组蜕膜及绒毛组织中均有表达,早期流产组的蜕膜及绒毛组织中SOCS3蛋白表达量明显低于正常对照组;SOCS3 mRNA在早期流产组的蜕膜及绒毛组织中表达量明显低于正常对照组,差异均有统计学意义(P<0.01)。结论SOCS3蛋白及mRNA在早期流产组表达降低,可能与早期妊娠流产有关;SOCS3可能对早期妊娠的维持起保护作用。     

早期流产患者绒毛中抑制素A、激活素A的表达及其意义

目的:了解抑制素A、激活素A在早孕、先兆流产绒毛中的定位及表达水平;探讨抑制素A、正常妊娠活素A在维持正常早期妊娠中的作用。方法:选取60例(停经天数<60 d)早期妊娠妇女作为研究对象,其中行负压吸宫术者30例为对照组;行吸宫术的先兆流产妇女30例为先兆流产组,留取绒毛组织,应用免疫组织化学技术和计算机图像分析系统检测抑制素A、激活素A在不同早孕流产绒毛组织中的表达。结果:抑制素A、激活素A在对照组、先兆流产组绒毛的合体滋养细胞、细胞滋养细胞、毛细血管内皮细胞的胞浆呈不同程度的阳性染色。通过定量分析,抑制素A、激活素A在先兆流产组绒毛的表达低于对照组,差异有显著性(P<0.05)。结论:胎盘组织分泌的抑制素A、激活素A对于正常妊娠的维持起重要作用;抑制素A、激活素A表达水平的降低在流产发生过程中具有重要作用。     

钙化大鼠心血管组织肾上腺髓质素及其受体系统的变化

目的:探讨钙化大鼠心血管组织肾上腺髓质素(adrenomedullin, ADM)生成和ADM及其受体系统--降钙素受体样受体(calcitonin receptor-like receptor, CRLR)与受体活性修饰蛋白(receptor activity modifying protein, RAMPs)基因表达的改变及其病理意义.方法:放射免疫法测定血浆、心肌和血管组织ADM含量;半定量RT-PCR方法测定心肌和血管ADM、降钙素受体样受体(CRLR)和RAMP2/3 mRNA水平.结果:与对照组大鼠比较,钙化大鼠心肌和主动脉钙含量分别高342 %和606 %(P<0.01);心肌和主动脉碱性磷酸酶活性分别高66.5 % (P<0.05)和82.7 % (P<0.01).钙化组大鼠血浆、心肌和血管ADM含量分别较对照组高58 %(P<0.01),14.3 %(P<0.01)和27.8 %(P<0.05);心肌ADM、CRLR和RAMP2 的mRNA水平较对照组分别高 90.6 %,157.5 %和119.6 %(均P<0.01), 而RAMP3 mRNA水平较对照组低14.1 %(P<0.01);血管组织ADM、CRLR、RAMP2 和RAMP3 的mRNA水平较对照组分别高37.7 %(P<0.01),41.4 %(P<0.01), 60.1 %(P<0.05)和13 %(P< 0.01).心血管组织中ADM与其受体系统mRNA变化水平有一定的相关性.结论:钙化大鼠心血管组织ADM生成增加,ADM、CRLR和RAMP2/3基因表达亦有不同程度的变化,提示ADM 及其受体系统可能参与心血管钙化的调节过程.     

趋化因子CXCL12、CCL2、RANTES与早期流产的相关性

目的 探讨绒毛和蜕膜组织基质细胞衍生因子( CXCL12)、单核细胞趋化蛋白-1(CCL2)、正常T细胞活化后表达和分泌的调节蛋白(RANTES)与早期流产的关系.方法选取天津医科大学第二医院2008至2009年收治的26例反复自然流产患者(自然流产组)、30例药物流产患者(药物流产组)和30例正常早孕妇女(对照组)绒毛和蜕膜组织,应用实时荧光RT-PCR方法检测3种趋化因子CXCL12、CCL2、RANTES-mRNA的表达.结果 早孕绒毛、蜕膜组织中均有趋化因子CXCL12、CCL2、RANTES-mRNA表达;CXCL12-mRNA的相对表达量自然流产和药物流产组绒毛(0.46±0.15,0.59±0.22)、蜕膜组织(0.35±0.13,0.42±0.17)均较对照组(1.79±0.82,0.81±0.21)显著降低(P＜0.01),CCL2、RANTES-mRNA的表达均较对照组显著升高(P＜0.01).结论 趋化因子CXCL12、CCL2、RANTES表达于早孕母胎界面绒毛和蜕膜组织中;绒毛、蜕膜组织CXCL12-mRNA低表达,CCL2、RANTES-mRNA高表达与早期流产的发生机制有关.