沉默食管癌ECA109细胞H2AX基因对裸鼠移植瘤放射敏感性的影响

目的 研究受照前后沉默H2AX基因对裸鼠移植瘤的影响.方法 将60只裸鼠按随机数字表法分为空白组、照射组、空载体组、空载体照射组、沉默(H2AX)组和沉默(H2AX)照射组,每组10只.于裸鼠皮下接种相应细胞,制备裸鼠模型.接种21 d后,给予6 MV X射线15 Gy单次照射,受照后48 h每组处死5只裸鼠,将肿瘤标本按Western blot、RT-PCR及流式细胞分析要求处理,检测蛋白水平、RNA水平及细胞周期的改变.结果 沉默组肿瘤体积为(42.76±4.40) mm³,明显小于空白组(73.18±8.80) mm³和空载体组(71.27±8.40) mm³(F=67.8,P<0.01).沉默组组织中H2AX蛋白表达(0.12±0.03)明显低于空白组(1.12±0.11)和空载体组(1.16±0.08,F=34.27, P<0.01).沉默组RNA水平(0.85±0.31)明显低于空白组(1.86±0.26)和空载体组(1.82±0.24,F=39.45, P<0.01).组织的免疫共沉淀显示,照射使γ-H2AX与MDC1、53BP1发生明显相互作用.沉默H2AX后,其相互作用减弱.受照后各组肿瘤体积在分组之间总体存在差异(F=13.56,P<0.01).沉默照射组凋亡率为(24.15±2.25)%,较照射组(13.26±1.54)%和空载体照射组(12.78±1.47)%明显增高(F=54.33,P<0.01).照射后引起G₂/M期阻滞,沉默照射组较照射组阻滞减轻(F=10.21,P<0.01).结论 体内研究显示沉默H2AX基因可以提高食管癌放射敏感性.     

干扰血管内皮生长因子表达联合γ射线对食管癌细胞移植瘤的影响

目的 研究反义cDNA干扰血管内皮生长因子(VEGF)表达联合γ射线对裸鼠移植瘤的影响,并观察各组裸鼠肿瘤病理组织学和细胞生物学特征的变化,为VEGF基因治疗联合放射治疗食管癌提供理论依据。方法 将32只Balb/c/nu裸鼠随机分为4组:对照组、单纯照射组、反义组和反义+照射组,使用已转染和未转染反义VEGFcDNA TE-1食管癌细胞株,分别建立裸鼠爪垫移植瘤模型, 瘤体直径0.8~1.0 cm,⁶⁰Co γ射线18 Gy单次照射单纯照射组与反义+照射组裸鼠移植瘤,对比观察各组移植瘤生长情况,检测移植瘤组织中VEGF mRNA和蛋白的表达,并分析肿瘤组织中细胞凋亡情况。结果 与未转染两组比较,转染两组瘤体生长速度慢,成瘤潜伏期延长(t=13.898, P<0.01)。反义组肿瘤体积为(1207.50±97.07)mm³,反义+照射组为(1057.5±91.50)mm³,两者差异无统计学意义(t=1.124,P>0.05),而此2组与对照组(5442.50±185.08)mm³ 和单纯照射组(2922.50±152.773)mm³ 体积间差异有统计学意义(t=9.475~21.238,P<0.01)。反义组与反义+照射组VEGF mRNA和蛋白表达较对照组和单纯照射组差异有统计学意义(F=387.394、13.519, P<0.01)。结论 抗VEGF治疗可有效地抑制裸鼠移植瘤的生长,但单纯抑制VEGF表达对增加裸鼠移植瘤放射治疗增敏效果有限,需进一步研究。     

RNA干扰抑制端粒酶反转录酶联合γ射线对人喉癌细胞的作用

目的 观察人端粒酶反转录酶特异性干扰载体(pshRNA-hTERT)联合放射线在细胞和动物模型水平上对人喉鳞癌Hep-2细胞株的生长抑制作用,研究抑制hTERT在放射增敏中的作用。方法 细胞水平:联合pshRNA-hTERT和γ射线作用于人喉癌细胞Hep-2,用TRAP-PCR-ELISA法检测端粒酶活性,彗星电泳检测DNA损伤;动物水平:建立Hep-2和Hep-2R移植瘤模型,瘤内注射pshRNA-hTERT并联合放射线观察对移植瘤的抑制作用,TUNEL法检测肿瘤细胞的凋亡,免疫组织化学法检测肿瘤内hTERT蛋白的表达。 结果 转染pshRNA-hTERT后Hep-2细胞hTERT的mRNA表达抑制率为60.78%;pshRNA-hTERT不仅能抑制Hep-2细胞的端粒酶活性,而且抑制照射后DNA损伤的修复;在移植瘤模型中,pshRNA-hTERT与放射线有协同抑制移植瘤生长的作用(Hep-2:EPO＝1.79;Hep-2R:EPO＝2.01)。结论 pshRNA-hTERT在细胞和动物实验水平均具有放射增敏作用,表明抑制端粒酶及其亚单位可以增加在体肿瘤的放射敏感性,这为喉癌的基因放疗研究提供了依据。     

HIF-1α基因沉默对人肺癌放射敏感性及移植瘤生长的影响

目的 探讨HIF-1α基因沉默对A549肺癌细胞放射敏感性及裸鼠移植瘤生长的影响。方法 采用克隆形成实验,评价A549/HIF-1α(-)细胞及A549细胞对X射线的敏感性。将A549/HIF-1α(-)细胞及A549细胞接种于BALB/C雄性裸小鼠,观察肿瘤生长情况。免疫组织化学法检测肿瘤内HIF-1α蛋白的表达及瘤内微血管密度。结果 HIF-1α基因沉默在常氧条件下放射增敏比 (SER) 为1.06,乏氧条件下为1.65。A549/HIF-1α(-)组移植瘤体积明显小于A549组,A549/HIF-1α(-)组肿瘤细胞HIF-1α蛋白表达显著下降, A549组肿瘤微血管密度为19.83±4.09,而A549/HIF-1α(-)组为11.61±3.04(F=15.57,P<0.05)。结论 HIF-1α基因沉默可以逆转乏氧诱导的A549肺癌细胞对X射线敏感性的降低,并延缓裸鼠移植瘤的生长,使HIF-1α蛋白表达下降和血管生成减少。     

双向调控Cox-2表达对人食管癌EC9706细胞裸鼠移植瘤放射敏感性的影响

目的 探讨上调和下调Cox-2基因表达对食管癌EC9706细胞裸鼠移植瘤放射敏感性的影响。方法 构建针对Cox-2基因的siRNA载体及Cox-2基因真核表达载体,通过脂质体转染技术将其转入食管癌EC9706细胞,G418筛选得到稳定转染细胞系。荧光定量RT-PCR和Western blot分别检测细胞中Cox-2 mRNA和Cox-2蛋白表达水平;裸鼠移植瘤实验检测上调和下调Cox-2表达联合X射线照射对食管癌的生长抑制作用。结果 Cox-2下调组食管癌EC9706细胞内Cox-2基因表达明显降低,Cox-2上调组明显升高。Cox-2下调组裸鼠移植瘤平均体积明显小于对照组(F=34.26,P<0.05);Cox-2上调组的瘤体平均体积大于对照组(F=26.38,P<0.05)。20 Gy γ射线照射后Cox-2下调组瘤体平均体积较照射前明显减小(F=16.35,P<0.05);而上调组裸鼠皮下种植瘤平均体积较照射前无明显变化。结论 下调Cox-2表达能抑制人食管癌EC9706细胞裸鼠移植瘤的生长,增强瘤体的放射敏感性,上调Cox-2表达则使肿瘤辐射抗拒。     

Ku80对人食管癌细胞放射敏感性及细胞周期的影响

目的 利用shRNA抑制Ku80蛋白的表达来研究Ku80在食管癌治疗中的作用。方法采用RNA干扰技术,构建shRNA-Ku80载体。用Western blot和RT-PCR方法证实RNA干扰的有效性和可行性。用克隆形成实验来研究shRNA抑制Ku80表达对γ线的敏感性。用流式分析法来研究shRNA抑制Ku80表达对细胞周期的影响。结果 成功构建了shRNA-Ku80载体。shRNA抑制Ku80表达增强食管癌细胞对γ线的敏感性。shRNA K3和H2使细胞周期阻滞于G₂/M期(61.8%与28.6%;64.3%与28.6%)。结论 shRNA抑制Ku80表达在食管癌治疗中有作用,有望成为肿瘤治疗的新靶点。     

靶向survivin基因shRNA抑制宫颈癌裸鼠移植瘤生长的研究

组化结果 显示,HeLa-s2组裸鼠survivin蛋白表达、FVlR.g表达显著降低,MVD值降至23.38±3.14;TUNEL染色结果 显示,HeLa-s2组裸鼠细胞凋亡明显增多,AI值达22.73%±1.37%.HeLa-NC组、HeLa-U6 neo组各指标检测结果 与HeLa组相比均无明显差异(P>0.05).结论 靶向survivin基因shRNA可通过下调移植瘤组织survivin蛋白表达降低其MVD,从而抑制移植瘤生长并促进其凋亡.     

人Rb94基因联合γ射线照射对K150细胞 生长影响的体外研究

目的 探讨外源性Rb94基因联合γ射线照射对食管癌细胞株K150生长的抑制作用,为临床上进行Rb94基因-放射治疗肿瘤奠定实验基础。方法 将重组腺病毒 Ad-Rb94于体外转染K150细胞,转染后进行6 Gy¹³⁷Csγ射线照射,数字随机表法分为空白对照组、Ad-LacZ对照组、Ad-Rb94组、照射组和Ad-Rb94联合照射组,观察K150细胞的生长曲线、细胞周期、细胞凋亡和Rb94基因表达的变化。结果 Ad-Rb94组、照射组和联合照射组对K150细胞生长均具有抑制作用,联合照射组的抑制效应最强(45.49%),明显高于Ad-Rb94组(20.26%)和照射组(35.11%)(χ²=14.25, P <0.05)。联合照射组K150细胞出现明显的G₁期阻滞和细胞凋亡,G₁期细胞和凋亡细胞所占比例最高,分别达到73.4%和15.7%。联合照射组K150细胞中Rb94基因表达量最多,分别是Ad-Rb94组和空白对照组的1.87倍和2.92倍。结论 Rb94基因联合γ射线照射对食管癌细胞的抑瘤作用具有协同效应,有效地抑制肿瘤细胞的生长。     

慢病毒载体介导RNA干扰沉默Livin基因对大肠癌裸鼠移植瘤放射敏感性的影响

目的 探讨慢病毒载体介导RNA干扰沉默Livin基因表达,对大肠癌HT-29细胞裸鼠移植瘤生长及放射敏感性的影响。 方法 选取36只BALB/c(nu/nu)裸鼠,按随机区组法分为空白对照组、阴性对照组及实验组,将HT-29细胞接种于裸鼠,建立皮下移植瘤裸鼠模型,观察裸鼠体重及瘤体积的变化。RT-PCR、免疫组织化学分析Livin mRNA及蛋白表达的变化,原位末端标记法(TUNEL)法检测细胞凋亡的变化;瘤内注射生理盐水、空载慢病毒和干扰慢病毒,同时均给予10 Gy 6 MV X射线照射,绘制裸鼠体重和移植瘤生长曲线。结果 实验组体积抑瘤率为(50.04±0.07)%,瘤体重量明显减轻(F=4.85,P<0.05), 瘤重抑瘤率为(50.27±0.17)%。实验组Livin mRNA表达水平为(17.75±0.08)%,明显低于空白对照组的(67.60±0.05)%和阴性对照组的(68.54±0.03)% (F=89.97, P<0.01)。实验组Livin蛋白表达水平为(36.00±3.40)%,明显低于空白对照组的(85.00±3.15)%和阴性对照组的(80.33±3.08)%(F=107.32,P<0.01)。实验组凋亡率为(23.67±2.25)%,明显高于空白对照组的(5.00±1.50)%和阴性对照组的(8.33±1.82)%(F=56.94,P<0.01)。与射线联合时,裸鼠移植瘤体积在分组之间总体存在差异(F=10.70,P<0.01),实验组肿瘤体积变化小于阴性对照组和空白对照组(F=7.01~9.32,P<0.01)。结论 慢病毒载体介导RNA干扰沉默Livin基因表达能抑制大肠癌HT-29细胞裸鼠移植瘤的生长,并增加移植瘤对放疗的敏感性。     

沉默Rev1基因对人结肠癌细胞放射敏感性的影响

目的 探讨沉默Rev1基因对人高分化结肠癌细胞THC8307 X射线照射后增殖、凋亡的影响。方法 利用RNA干扰技术将Rev1基因的特异性片段转染THC8307细胞,用实时荧光定量PCR和Western blot检测转染后细胞中目的基因的表达;实验分空白对照组、阴性对照组、Rev1 siRNA组。分别给予0、6 Gy X射线照射,运用四甲基偶氮唑盐（MTT）法检测不同时段（0、24、48、72、96 h）细胞增殖情况,并绘制增殖曲线;流式细胞仪（FCM）检测不同剂量X射线处理后的细胞凋亡;Western blot检测各组PCNA、γ-H2AX、P53、Bax、Bcl-2蛋白的表达。结果 与空白对照组相比,6 Gy X射线照射后,沉默Rev1基因组细胞增殖速率明显降低（t=7.53,P<0.05）,凋亡明显增加（t=6.23,P<0.05）,增殖细胞抗原（PCNA）表达下降（t=4.39,P<0.05）,γ-H2AX表达升高（t=5.48,P<0.05）,P53表达升高（t=5.09,P<0.05）、Bax表达升高（t=3.32,P<0.05）、Bcl-2表达降低（t=6.13,P<0.05）。结论 沉默Rev1基因,抑制了X射线作用下的结肠癌细胞THC8307的增殖,促进了凋亡,增加了其对X射线的放射敏感性。     

D-Ala对转染DAAO基因的K562e细胞移植瘤的杀伤效应

以高致瘤性K562e细胞和表达DAAO基因的KDfGC细胞建立裸鼠移植瘤模型，D－丙氨酸（D－Ala)腹腔注射，持续3周，观察D－Ala对移植瘤的治疗作用以及肿瘤，裸鼠重要脏器的病理变化，结果显示，经D－Ala治疗，转基因肿瘤抑制率为53．8％，未转基因肿瘤抑制率为0．3％，治疗组KDfGC细胞瘤体出现围绕血管分布的坏死，心，肝，肾治疗组与对照组均无明显病理改变，说明在体内DAAO的K562e能被D－Ala有效杀伤，并对重要脏器无明显损伤。     

咖啡酸苯乙酯对人大肠癌HCT116细胞裸鼠皮下移植瘤生长的影响

目的观察咖啡酸苯乙酯（CAPE）对人大肠癌裸鼠皮下移植瘤生长的影响。方法以大肠癌细胞株HCT116为研究对象,对20只BAL13／c裸鼠建立人大肠癌皮下移植瘤模型,随机分为对照组和治疗组各10只。治疗组以CAPE5mg／d,观察两组第7、14、21、28天皮下移植瘤生长情况及裸鼠体重的变化;治疗结束时取肿瘤组织及心、肝、肺、肾、肠等行病理组织学检查,TUNEL法检测肿瘤细胞凋亡。结果CAPE对HCT116裸鼠移植瘤的生长有明显抑制作用,与对照组相比,瘤体重量明显降低、体积减小（P〈0．01）,坏死面积显著增加,凋亡指数明显升高,但对裸鼠体重无明显影响,心、肝、肺、肾、肠等组织未见明显病理学改变。结论CAPE具有抑制人大肠癌裸鼠皮下移植瘤生长的作用,可能与其诱导细胞凋亡有关。     

Darbufelone对胃癌SGC-7901细胞裸鼠移植瘤生长的影响

目的观察5-脂氧合酶/环氧合酶-2双重抑制剂Darbufelone对胃癌SGC7901细胞裸鼠皮下移植瘤生长的影响,并探讨其机制。方法建立裸鼠皮下实体瘤模型,随机分为Darbufelone治疗组及对照组(n=7),Darbufelone治疗组给予Darbufelone,45mg/(kg·d),连续灌服4周,对照组给予等量生理盐水。测定移植瘤体积及质量并计算抑瘤率。采用RT-PCR及免疫组织化学法检测肿瘤组织中COX-2、5-LOX、PCNA、Bcl-2及Caspase-3的表达。结果 Darbufelone对裸鼠移植瘤的生长有明显抑制作用,与对照组相比,Darbufelone治疗组体重及移植瘤体积均明显减低(P<0.05),抑瘤率为58.42%,且未见不良反应。Darbufelone治疗组COX-2、5-LOX、PCNA、Bc1-2的mRNA及蛋白表达均明显下降,Caspase-3 mRNA及蛋白表达则显著增加(P<0.05)。结论 Darbufelone可抑制体内胃癌生长,其机制与抑制肿瘤细胞增殖及诱导凋亡有关。     

丙泊酚对奥沙利铂抗人胃癌BALB/c小鼠移植瘤作用的影响

目的 探讨丙泊酚对奥沙利铂在人胃癌BALB/c小鼠移植瘤模型中抗肿瘤作用的影响.方法 建立人胃癌MGC 803细胞BALB/c小鼠皮下移植瘤模型,随机分为对照组(n=6)、丙泊酚组(n=6,5 mg/kg丙泊酚)、奥沙利铂组(n=6,6 mg/kg奥沙利铂)与丙泊酚+奥沙利铂组(n=6,5 mg/kg丙泊酚+6 mg/...     

白细胞介素21基因联合不同剂量γ射线照射对乳腺癌细胞生长的影响

目的 研究人白细胞介素21基因重组腺病毒载体(Ad-IL-21)联合不同剂量γ射线照射对人乳腺癌细胞体外生长的抑制作用.方法 采用随机数字表法设立空白对照组、β-半乳糖苷酶基因重组腺病毒载体(Ad-LacZ)对照组、Ad- IL-21组、γ射线照射组和Ad- IL-21联合γ射线照射组(联合照射组),将Ad-IL-21于体外转染人乳腺癌MCF-7细胞,转染6h后进行0～10 Gy 137Cs γ射线照射,用噻唑蓝法检测MCF-7细胞的生长抑制率.结果 Ad-IL-21转染MCF-7细胞后,MCF-7细胞生长受到的抑制效应显著高于Ad-lacZ组(F=26.34,P＜0.05),单独照射组和联合照射组的抑制率均显著高于Ad-IL-21组(F=23.51,F=27.55,P均＜0.05),随着照射剂量的增大,细胞抑制率逐渐增高.同一照射剂量中,联合照射组对MCF-7细胞的抑制作用均显著高于γ射线照射组,联合照射组抑制率最高,与Ad-IL-21组和γ射线照射组比较,差异具有统计学意义(F=35.68,F=38.67,P均＜0.05).结论 IL-21基因联合γ射线照射对乳腺癌细胞的抑瘤作用具有协同效应,有效地抑制肿瘤细胞的生长.     

三氧化二砷对鼻咽癌BALB/c小鼠移植瘤的放射增敏作用

目的通过动物移植瘤模型探讨三氧化二砷对鼻咽癌的放射增敏作用。方法将荷SCNE-1鼻咽癌的BALB／c小鼠随机分为对照组和综合组，对照组给予单纯放射治疗，不给予药物处理，下设空白对照、2、4和6Gy4个不同的放射剂量亚组；综合组所有动物均行药物治疗，下设药物对照组(单纯用药，不照射)、2、4和6Gy4个不同的放射剂量亚组，综合组于肿瘤成活后连续6d经腹腔注射三氧化二砷，药物剂量为4mg/kg鼠重；第7天移植瘤局部给予140kV深部x射线一次性照射。每组(或亚组)各4只小鼠。结果对照组中2、4和6Gy亚组移植瘤体积达到照射前4倍的时间(TCT4)较空白对照组分别延长了1．7、7．8和11．8d；综合组移植瘤TCT4较药物对照组分别延迟了2．2、13．2和24．2d。生长延迟4、8和10d时的肿瘤生长延迟增敏比分别为1．55、1．71和1．77。结论三氧化二砷在BALB／c小鼠体内对鼻咽癌移植瘤有放射增敏作用。     

PKM2基因沉默对人肺癌A549细胞放射敏感性的影响

目的 探讨通过siRNA干扰技术沉默丙酮酸激酶同工酶M2(pyruvate kinase M2,PKM2)基因表达对人肺癌A549细胞放射敏感性的影响。方法 以人肺癌A549细胞为研究对象,根据PKM2 mRNA编码序列设计并合成干扰siRNA序列,瞬时转染A549细胞。用RT-PCR和Western blot法分别从mRNA水平和蛋白水平检测PKM2基因的表达。设PKM2 siRNA干扰组,阴性对照组、空白对照组。各组细胞分别接受不同剂量6 MV X射线照射,通过集落形成实验检测细胞放射敏感性,流式细胞仪检测各组细胞周期及凋亡率。每组实验重复3次。结果 RT-PCR和Western blot显示,PKM2 siRNA干扰组较空白对照组的PKM2 mRNA和蛋白表达都明显下降(t=20.91、47.00,P<0.01),抑制率分别为(70.27±1.38)%和(70.42±1.18)%;集落形成实验显示,PKM2 siRNA干扰+IR组A549细胞 D₀、D_q、N和SF₂值均低于空白对照+IR组(t=43.82、28.44、15.60、29.63,P<0.01),放射增敏比(SER)为1.27。流式细胞仪分析显示,PKM2 siRNA干扰组G₂/M期细胞的百分率明显高于空白对照组(t=8.35,P<0.01),经10 Gy X射线照射,G₂/M期细胞比例也明显升高(t=27.87,P<0.01)。两者联合使用后G₂/M期阻滞更加明显。siRNA干扰组细胞凋亡率较空白对照组无显著升高,空白对照+IR组较空白对照组凋亡率明显升高(t=23.99,P<0.01);PKM2 SiRNA干扰+IR组较空白对照+IR组和PKM2 siRNA干扰组差异均有统计学意义(t=9.42、65.21,P<0.01)。结论 特异性沉默PKM2基因表达能够增加A549细胞的放射敏感性,推测其机制可能与改变细胞周期分布及使射线诱导细胞凋亡的作用增强有关。     

沙利度胺联合照射对人食管癌裸鼠移植瘤生长和肿瘤血管生成的影响

目的 观察沙利度胺（thalidomide,TLD）联合照射对人食管癌裸鼠移植瘤生长及血管生成的影响。方法 建立人食管鳞癌裸鼠移植瘤模型,将24只荷瘤裸鼠标号,按随机数字表随机分为健康对照组、TLD组、20 Gy组、20 Gy+TLD组,每组6只。计算肿瘤抑制率,并用免疫组织化学法检测移植瘤瘤组织血管内皮细胞生长因子（VEGF）、乏氧诱导因子-1α（HIF-1α）、微血管密度（MVD）的表达水平。结果 20 Gy+TLD组荷瘤鼠瘤体积及瘤重均小于20 Gy组,差异具有统计学意义（t=3.68、4.60,P<0.05）。20 Gy+TLD组的抑瘤率高于其他各实验组,达到60.61%。与20 Gy组相比较,20 Gy+TLD组中裸鼠移植瘤组织中VEGF、HIF-1α蛋白表达均有所降低（t=11.82、6.63,P<0.01）;20 Gy组MVD值高于20 Gy+TLD组（t=5.92,P<0.01）。结论 沙利度胺联合照射对移植瘤的抑瘤作用较单独照射增强,可能是沙利度胺通过调控VEGF的表达,从而影响了食管癌组织的放疗敏感性。