3种方式检测乙型肝炎病毒前S1抗原的比较研究

目的探讨3种方式检测乙型肝炎病毒前S1(PreS1)抗原的异同,为检测方法的合理选用提供依据。方法用全自动酶免分析仪、时间分辨荧光分析法、手工酶联免疫吸附测定(ELISA)3种方式对乙型肝炎患者血清进行PreS1抗原检测;选择PreS1抗原强阳性血清和弱阳性血清分别用3种方式检测15次,对重复性进行比较;升高和降低反应孵育温度±3℃检测,对阳性率进行比较。结果 3种方式阳性检出率分别为93.53%,92.81%,92.81%;重复性自动酶免分析仪检测强阳性和弱阳性标本的变异系数(CV)分别为3.62%和13.42%;时间分辨荧光分析法检测强阳性和弱阳性标本的CV分别为5.10%和7.92%,手工ELISA检测强阳性和弱阳性标本的CV分别为11.10%和29.88%。改变反应孵育温度3℃,全自动酶免分析仪测得的所有检测标本S/CO值下降,增大了假阴性的概率,手工ELISA和时间分辨荧光分析法所有检测标本的S/CO值升高,增大了假阳性几率。结论全自动酶免分析仪的检出率和重复性较好,时间分辨荧光分析法次之,手工方法较差。     

314例乙型肝炎患者乙型肝炎病毒前S1抗原检测分析

目的探讨乙型肝炎病毒(HBV)前S1抗原检测的临床价值。方法采用酶联免疫双抗体夹心一步法对314例乙型肝炎(简称乙肝)患者血清进行HBV"两对半"、HBV前S1抗原检测。结果前S1抗原在乙肝e抗原(HBeAg)阳性组的检出率为82.6%,显著高于HBeAg阴性组的检出率(36.7%),二者差异有统计学意义(P0.01)。结论前S1抗原测定可作为HBV感染、活动性复制、预后及药物疗效的有意义指标,在基层医院可作为常规项目开展。     

乙型肝炎病毒血清前S1抗原的检测及其临床意义

目的：了解前S1抗原和乙型肝炎病毒（HBV）血清标志物的关系。方法：采用ELISA法检测709例乙型肝炎病毒感染者血清中的前S1抗原和HBV血清标志物。结果：19例HBsAg（＋）、HBeAg（＋）标本中,有18例前S1抗原阳性,阳性率94.74%;261例HBsAg（＋）、HBeAg（＋）、抗HBc（＋）标本中,有224例前S1抗原阳性,阳性率85.82%;92例HB-sAg（＋）、抗HBc（＋）标本中,有62例前S1抗原阳性,阳性率67.39%;337例HBsAg（＋）、抗HBe（＋）、抗HBc（＋）标本中,有87例前S1抗原阳性,阳性率25.82%。结论：前S1抗原作为病毒复制的指标与HBeAg具有很好的一致性,又具有其独立的检测价值,可弥补HBV血清标志物检测的不足。     

时间分辨免疫荧光法检测乙型肝炎病毒血清标志物的研究

目的：探讨时间分辨免疫荧光法（TRFIA）检测乙型肝炎病毒（HBV）血清标志物的准确性及意义。方法选取2011年1月至2013年1月在该院就诊的乙型肝炎（乙肝）或疑似乙肝患者180例,分别采用TRFIA定量和酶联免疫吸附试验（ELISA）定性两种方法检测患者的临床血清标本的乙型肝炎病毒表面抗体（HBsAb）、乙型肝炎病毒表面抗原（HBsAg）、乙型肝炎病毒e抗原（HBeAg）、乙型肝炎病毒核心抗体（HBcAb）、乙型肝炎病毒e抗体（HBeAb）5个指标,将TRFIA设为治疗组,ELISA设为对照组,通过κ检验对两种方法间的一致程度进行评价。结果采用TRFIA检测HBV血清标志物HBsAg、HBsAb、HBeAg、HBeAb、HBcAb的阳性率分别为47．1％、41．1％、44．4％、58．9％、48．9％,采用ELISA检测的阳性率分别为48．3％、42．2％、42．2％、57．8％、52．2％,两组阳性率差异无统计学意义（P＞0．05）;两种方法检测5个指标的效率均表现高度的一致,其中HBsAb指标表现为极强的一致性,其他指标表现为高度一致。结论在检测HBV血清标志物方面,传统的ELISA可靠性也较高,与TRFIA一致性较高,都具有很高的应用价值。     

时间分辨荧光免疫法检测乙型肝炎病毒标志物

目的探讨时间分辨荧光免疫分析技术（TRFIA）检测乙型肝炎病毒（HBV）5项血清学指标的临床应用价值。方法用酶联免疫吸附试验（ELISA）和TRFIA同时测定188例患者HBV血清标志物5项指标。结果两种方法测定乙型肝炎表面抗原（HBsAg）、乙型肝炎表面抗体（抗-HBs）、乙型肝炎e抗原（HBeAg）、乙型肝炎e抗体（抗-HBe）、乙型肝炎核心抗体（抗-HBc）结果符合率分别为94．7％、96．8％、95．7％、89．4％和90．4％,经成组卡方检验,两种检测方法结果相关性良好（P〈0．01）,经配对卡方检验,两种方法检测HBsAg、抗-HBs、HBeAg结果差异无统计学意义（P〉0．05）,检测抗-HBe、抗-HBc结果差异有统计学意义（P〈0．05）。TRFIA法阳性率高于ELISA法。结论TRFIA法是一种灵敏、特异、准确的定量检测方法,对评估HBV感染后病情转归及抗病毒治疗的疗效具有重要的临床意义。     

346例乙型肝炎病毒前S1抗原检测结果分析

目前,临床上开展的乙型肝炎病毒(HBV)检测项目有HBV血清标志物(HBsAg,抗-HBS,HBeAg,抗-HBe,抗-HBc)定性、定量检测和乙肝病毒脱氧核糖核酸(HBV-DNA)定量检测.HBV-DNA定量检测通常被当作HBV感染和复制的金指标.随着对HBV研究的深入,HBV前S1抗原作为一项新的HBV血清学检测指标已逐步应用于乙型肝炎的实验室诊断和疗效观察.为了解HBV前S1抗原和HBV血清标志物之间的关系,作者对346例HBV HBsAg(+)血清同时检测HBV前S1抗原.     

两种乙型肝炎病毒前S1抗原试剂盒检测结果的可比性

目的：评价两种乙型肝炎病毒（HBV）前 S1抗原试剂盒检测结果的可比性。方法对860例襄阳市中医医院住院、门诊患者 HBsAg 阳性者同时用两个公司的酶联免疫吸附测定（ELISA）试剂盒进行前 S1抗原的检测，用另一公司的荧光定量PCR 试剂盒检测 HBV-DNA。结果在860例确认 HBsAg 阳性患者中，复星长征试剂盒检测的阳性例数为357例，阳性率为41．5％；英科新创试剂盒检测的阳性例数为787例，阳性率为91．5％；HBV-DNA 检测的阳性例数为323例，阳性率为38．0％。若以 HBV-DNA 作为参考方法，复星长征试剂盒假阳性数为52例，假阳性率为3．5％；英科新创试剂盒假阳性数为464例，假阳性率为53．5％。结论两种 HBV 前 S1抗原试剂盒检测结果的可比性较差，在临床检验中选用试剂盒需慎重。     

时间分辨免疫荧光检测乙肝病毒前S1抗原临床应用

目的乙型肝炎病毒PreS1抗原时间分辨免疫荧光分析方法临床应用研究。方法应用双抗体夹心免疫荧光分析方法,用抗PreS1单克隆抗体和抗-HBs作为固相抗体和铕标记抗体,若样本中存在PreS1抗原,则形成抗体-抗原-铕标记抗体复合物,加增强液解离铕离子,采用时间分辨荧光测量技术,对样本中乙型肝炎病毒PreS1抗原进行检测。结果自制TRFIA试剂与ELISA试剂对300例乙型肝炎患者血清标本中PreS1抗原的检测,TRFIA方法更灵敏,有9例标本ELISA方法结果为阴性,而用TRFIA方法可检测到PreS1抗原。对这9例标本进行HBV DNA定量检测,有6例标本HBV DNA拷贝数均>106;高、中、低三个浓度,TRFIA方法批内和批间精密度测试,CV均小于10%;TRFIA方法从低值到高值,从批内至批间CV均优于ELISA方法;对于强阳性标本,从原倍到1∶16倍稀释,ELISA方法都无法区分阳性程度的强弱,而TRFIA方法结果从高到低有显著性区别。对于弱阳性标本用ELISA方法检测不到时,TRFIA方法仍可检出,一强阳性标本,ELISA方法在1∶8192倍稀释时结果为阴性,而TRFIA方法在1∶16384倍稀释时仍可检出PreS1抗原。结论TRFIA方法与ELISA方法相比,测量范围、精密度和灵敏度有较大提高。     

乙型肝炎病毒脱氧核糖核酸定量与乙型肝炎病毒血清免疫学标志相关性的研究

荧光定量聚合酶链反应(FQPCR)的特点是敏感性、特异性好。许多研究证明，乙型肝炎病毒脱氧核糖核酸(HBV-DNA)定量检测是衡量乙型肝炎传染性的最精确指标．是确定HBV感染不同复制状态的非常有价值的检测手段。有关FQ-PCR法进行HBV-DNA定量与HBV血清免疫学标志相关性研究较少见报道。我们用FQPCR检测了635例患者     

乙型肝炎病毒前S1抗原检测的临床意义

探讨乙型肝炎病毒前S1抗原（HBV preS1-Ag）与乙型肝炎病毒（HBV）的感染、复制关系,阐述检测乙型肝炎病毒前S1抗原（HBV preS1-Ag）对乙型肝炎的实验室诊断和疗效观察的临床意义。     

乙型肝炎病毒表面抗原确认试验的临床应用

目的对珠海丽珠试剂公司研发的乙型肝炎病毒表面抗原（HBsAg）确认试剂盒（中和试验法）进行初步临床试验,评价其应用价值。方法血清样本来源于本院门诊患者（包括体检者）,经上海科华公司生产的HBsAg酶联免疫吸附试验（ELISA）试剂盒测定．结果呈阳性者。确认试验方法参照丽珠公司提供的说明书进行。结果133例样本中确认为阳性者99例（74．43％）,其中有4例常规确认试验结果为“不确定”,经延长时间的确认试验,均确认为阳性。其余34例样本在确认试验中对照孔的结果为阴性,经科华试剂复测,结果亦均为阴性。此34例科华试剂初筛为阳性的样本,其吸光度（A）值均≤0．500。结论丽珠公司的HBsAg确认试剂盒适用于临床榆验。国产HBsAg ELISA试剂测定结果为弱阳性的样本应进行复检,以排除假阳性;如采用确认试验,则可保证真阳性样本的真实性。     

乙型肝炎病毒合成e基因在毕赤酵母中的表达及产物免疫学特性

目的 合成适合酵母表达的乙型肝炎病毒（HBV）e抗原基因，在毕赤酵母中表达出高免疫反应性和特异性的重组乙型肝炎病毒e抗原（HBeAg）。方法 采取基因搭桥法及Taq酶聚合反应，选用酵母菌偏爱的同义密码子替换野生型e基因的部分密码子，制备合成e基因，插入pPICZαA酵母菌表达载体。携带有合成e基因的pPICZαA转化毕赤酵母菌株GS115，经甲醇诱导表达HBeAg。结果 酶切电泳及DNA测序证实合成的e基因已正确克隆到表达载体中；聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS—PAGE）、immunoblt及ELISA显示HBeAg在毕赤酵母中高效分泌表达，表达量约为63mg／L，培养上清液ELISA测定效价1：81920，最大吸光度值达2．8；重组HBeAg与乙型肝炎病毒核心抗体间无交叉反应。结论 毕赤酵母表达系统高效分泌表达出与乙型肝炎病毒核心抗原间无交叉抗原性、具有良好免疫反应性的HBeAg。     

乙型肝炎病毒感染者前S1抗原检测的临床意义

目的分析乙型肝炎病毒（HBV）前S1抗原（PreS1Ag）与其他HBV标志物的关系,并探讨其相应的临床意义。方法采用酶联免疫吸附试验（ELISA）和聚合酶链反应（PCR）方法对218例乙型肝炎（下称乙肝）患者和30例健康者进行HBV血清标志物、HBVPreS1Ag和HBVDNA检测。结果在所检人群中PreS1Ag和HBVDNA的检出率分别为62．5％和63．7％。在乙肝e抗原（HBeAg）阳性组和阴性组中PreS1Ag阳性率为87．2％和59．8％,HBVDNA阳性率为95．7％和57．1％。PreS1Ag和HBVDNA的阳性率相似。结论PreS1Ag是HBV感染、复制的指标,与HBV血清标志物联合检测可为乙肝的诊断和治疗提供可靠依据。     

乙型肝炎病毒S基因在毕赤酵母中的表达及在乙型肝炎病毒表面抗体检测中的应用

目的　构建含有乙型肝炎病毒S基因的表达载体 ,在毕赤酵母中表达出高免疫反应性的重组乙型肝炎表面抗原 (HBsAg)S蛋白 ,用以制备乙型肝炎表面抗体 (HBsAb)酶免试剂盒。 方法采用聚合酶链反应从含乙型肝炎病毒全基因序列 (adw)的质粒PHBV1中扩增出S基因 ,并将其插入pPICZB质粒。携带有S片段的pPICZB质粒转化毕赤酵母菌株KM71H ,甲醇诱导重组酵母细胞表达S蛋白。表达产物包被聚丙乙烯反应板 ,用酶联免疫吸附实验 (ELISA)检测HBsAb。结果　酶切电泳及DNA测序证实乙型肝炎病毒S基因已正确克隆到表达载体中 ;聚丙烯酰胺凝胶电泳显示HBsAg在毕赤酵母中表达 ;表达量约占总蛋白的 2 5 %～ 35 %。表达产物用ELISA测定效价达 1∶2 5 6 0 0 ;Westernblot显示与正常人血清无交叉反应 ;用纯化产物作为包被抗原对卫生部临床检验中心HBsAb质控物及血清标本进行检测 ,灵敏度达 10mIu/ml,特异性达 10 0 % ,重复性及线性良好 ,与国产商品试剂检测结果一致。结论　毕赤酵母表达系统高效表达出具有良好免疫反应性和特异性的HBsAg,可用于基因工程原材料的HBsAb酶免试剂盒的研制     

酶免法检测乙肝表面抗原实验精密度研究

目的探讨酶免法检测HBsAg实验精密度的影响因素及实验精密度对检验结果的影响。方法检测卫生部临检中心0.5ng/ml质控血清,计算精密度;比较手工操作与全自动酶免分析仪法检测的精密度;检测不同效价的阳性血清,比较精密度,并作统计学分析。结果临界值附近的标本可能引起误判,手工操作与全自动酶免分析仪法检测实验精密度差异有统计学意义（t=4.72,P〈0.01）。结论实验精密度的高低对酶免法检测HBsAg实验存在影响,检验结果的判定应设置灰区并进行复检或进一步检测。     

临产妇前S1抗原与乙型肝炎“两对半”联合检测的意义

目的探讨临产妇前S1抗原和乙型肝炎“两对半”组合模式的关系及其临床意义。方法用酶联免疫吸附试验（ELISA）法检测394例临产妇血清乙型肝炎病毒前S1抗原（PreS1）、乙型肝炎病毒表面抗原（HBsAg）、乙型肝炎病毒表面抗体（抗-HBs）、乙型肝炎病毒e抗原（HBeAg）、乙型肝炎病毒e抗体（抗-HBe）和乙型肝炎病毒核心抗体（抗-HBc）6种免疫指标的表达。结果HBsAg阳性血清141例，PreS1 99例（70.2％）。其中HBeAg阳性44例，PreS1检出39例（88.6％）；HBeAg阴性97例，PreS1检出60例（61．9％），两者比较差异有统计学意义（χ^2=10，38，P〈0．005）。HBsAg阴性血清中未检出PreS1。结论PreS1与HBeAg具有较好的相关性，是乙型肝炎病毒复制的可靠指标之一，与乙型肝炎“两对半”联合检测可更准确反映乙型肝炎病毒感染复制状况。     

献血者肝炎病毒感染状况分析

目的分析献血者肝炎病毒感染现状。方法应用固相酶联免疫吸附试验（ELISA）分别检测16578例献血者血清中的HBsAg、抗-HCV。结果献血者HBsAg、HCV感染率分别为7．80％、1．40％,总感染率为9．20％;男性组与女性组的总感染率分别为6．65％和2．52％,两组间差异有统计学意义（P〈O．01）。结论男性组比女性组有更高的肝炎病毒感染率。     

G145R变异重组HBsAg ELISA检测质控参照品制备的初步研究

目的：实验性制备G145R变异重组乙型肝炎表面抗原（rHBsAg）质控参照品。方法：收集合G145R变异rHBsAg的细胞培养上清，采用50％饱和硫酸铵盐析．根据其在D12-ELISA中的检测信号，以卫生部颁布的HBsAg ELISA质控血清精确标定盐析物中靶物质的含量，适量稀释分装。置-20℃冻存。采用不同方法对制备物的特异性与稳定性进行考核．并将其试用于对几种市售试剂盒检测变异能力的评价。结果：制备物中靶物质含量在0．50～32.00ng／mL wcHBsAg之间，在D12-ELISA检测中其信号的线性关系与质控血清有很好的一致性；反复冻融对其稳定性无显著影响：采用不同市售ELISA试剂检测时其反应信号强度各不相同。结论：本研究制备的G145R变异rHBsAg ELISA质控参照品具有较高的稳定性、特异性与实用性；其研制为乙肝病毒免疫逃逸现象在基础、临床、诊断试剂研发，以及流行病学调查等方面研究的开展提供了重要的物质基础。